(2) BAN MO TA SANG CHE THUOC BANG DOC QUYEN SANG CHE (19) Cong hda xa hoi chi nghia Vietnam (VN) (11) (PEI 1-001: cuc s6 HOU TRI TUE 5395 (51)? CO7D 413/14, A61K 31/538, AGIP (13) B 25/04 (21) 1-2013-01175 (22) 13.10.2011 (86) PCT/KR2011/007635 13.10.2011 (87) WO2012/050380 19.04.2012 (30) 10-2010-0099910 13.10.2010 KR (45) 25.05.2016 338 (43) 25.07.2013 304 (73) DAEWOONG PHARMACEUTICAL CO., LTD. (KR) 223-23, Sangdaewon-dong, Chungwon-gu, Sungnam-si, Gyeonggi-do 462-120, Republic of Korea (72) KIM, Ji Duck (KR), YOON, Hong Chul (KR), KIM, In Woo (KR), CHO, Min Jae (KR), LEE, In Young (KR), LEE, Sang Ho (KR), PARK, Eun Kyung (KR), LIM, Kwon Jo (KR), NAM, Sang Hyun (KR) (74) Van phong luat su Pham va Lién danh (PHAM & ASSOCIATES) (54) HOP CHAT DAN XUAT PYRIDYL BENZOXAZIN VA DUGC PHAM CHUA NO (57) Sang ché dé cap dén hop chat benzoxazin benzimidazol, c6 cong thiic hod hoc 1, ¢6 chtfc nang lam chat déi khéng thu thé vaniloit-1, va duge phém chita n6. Hop chat benzoxazin benzimidazol c6 thé duge ding dé phdng nga hoac diéu tri benh Hien quan dén hoat tinh déi khéng cia thy thé vaniloit-1 ma khong gay ra ching than nhiét cao. Cong thitc hod hoc 115395 Linh vue ky thugt duge dé cap Sang ché 48 cap dén hop chit dan xudt pyridyl benzoxazin 1a chat déi khang khéng thu thé vaniloit-1 khéng gay ra chimg than nhiét cao, duge phdm chia host chat 1a hop chat nay, Tinh trang ky thuat cia sang ché Thy thé vaniloit, mét thy thé cla hop chat capsaixin (trans-8-metyl-N- vanillyl-6-nonenamit), 4& duge téch dong vao nim 1997 va duge Caterina va cée dong tac gid goi la thy thé vaniloit kiéu phy 1 (dudi day duge goi la "TRPV1") (Caterina et al., Nature, 389, 816(1997)). Nim wén céc soi day than kinh khng cé bao myelin nhé (spi C) va cling nim trén cée soi déy thin kinh cé bao myelin lon (soi A), TRPVI 1a kénh ion déng vai tr quan trong trong qué trinh cém nhan tac nhén kieh thich dau bing cach dua dng cation manh nhu céc ion canxi va natri vio cdc dau mut day thin kinh khi duge hoat héa dé dap Iai tc nbn kich thich bén ngoai hoge bén trong. Céc tée nhin kich thich bén ngoai cé khé nang hogt héa TRPV1 da biét bao gém nhiét va axit cing nhw céc hop chat vaniloit (Tominaga et al., Neuron, 21, 531(1998)). Mat khéc, céc te mhdn kich thich bén trong hoat héa TRPY1 la céc chit trao 46i leukotrien nhu axit 12-hydroperoxyeicosa tetraenoic (12- HPETE) (Hwang at al., PNAS, 97, 3655(2000)), va din xudt axit arachidonic nh anandamit (Premkumar et al., Nature, 408, 985(2000)). Dua trén céc hoat tink sinh ly hoc nay, TRPV1 44 duge phat trién nghién ci lam cht kiém sodt ting thé déng vai tro then chét trong viée chuyén cdc téc nhan kich thich bén ngoai khac nhau vao té bio day than kinh. Theo théng bao, chugt nhit bj bat hoat TRPV 1 phan img nhu chuét obit binh thudng véi cdc t4c nhan kich thich 1n6i chung, nhung thé hign mic giém manh chtmg dau khi phan tng v6i nbiét hod chimg tng cam gidc dau véi nhiét (Caterina et al., Science, 288, 306(2000)). TRPV1 duge biéu hign chit yéu trong cdc noron cam giéc so cp (Caterina et al., Nature, 389, 816(1997)), chju tréch nhiém kiém soét cde chic nang cia da, xuong, va cae co quan bén trong nhu bang quang, dudng tiéu héa, phdi, va v.v.. Ngoai ra, TRPV1 cing duge phan phéi trong cdc noron khéc & hé than kinh trung. uong, thin, dg day, va té bao T (Nozawa et al., Neuroscience Letter, 2001, 309, 33; Yiangou et al., Lancet (North America Edition), 357, 1338(2001); Birder et al., PNAS, 98, 13396(2001)) va trong toan b6 co thé, va déng vai tr quan trong trong15395, qué trinh phan chia té bao va kiém soét tin higu té bao. Ngoai ra, cdc chimg va bénh lin quan dén co ché kiém soét hoat tinh cha TRPVI bao gém chimg dau cép tinh, chimg dau man tinh, chimg dau than kinh, chimg dau h4u phdu, chimg dau nia dau, bénh dau khép, bénh than kink, tén thuong norton, bénh than kinh do bénh dai théo duimg gay, r6i loan thin kinh, bénh viém da than kinh, bénh d§t quy, bénh ting nhay cém bang quang, hoi chimg réi loan tigu ha, céc r6i logn hé hp nhu bénh hen, bénh phdi te nghén man, bénh kich tng 6 da, mat, va mang nhdy, bénb ngtta, chimg sét, bénh viém thye quan hdi hm, bénh loét da day té tring, bénh viém rugt, va chimg s6n tiéu cdp ky (Céng bd don yéu cdu cdp patent Han Quéc s6 2004-0034804), bénh béo phi Pharmacol. Rev., 38, 179(1986)), va bénh gléc6m (W007/090134). La hop chat c6 kha ning diéu bién hoat tinh TRPV1, cae cht chi van nhu hop chat capsaixin (DA-5018) va resiniferatoxin duge sir dung lim thuée gi&m dau ho§e ding trong nghién ciru lam sing (Szallasi, J. Med chem., 47, 2717(2004)), trong khi cae chét di khang TRPV1 khdéc nhau bao gdm capsazepine va iodoresiniferatoxin duge ding trong nghién citu tién lam sang (WO02/008221, W003/062209, W004/055003, WO04/055004, WO04/002983, WO02/016317, WO04/035549, WO04/014871, WO03/099284, WO03/022809, W002/090326, W002/072536, WO03/068749, WO04/033435, WO02/076946, WO03/055484, WO003/014064, WO03/080578, W003/097586, WO03/070247, W003/029199, W005/002551, WO05/007648, WO0S/016890, WO0S/047279, WO06/006740, W006/006741, WO06/063178, WO06/124753, WO06/063178, WO07/067619, W007/067757, WO07/073303, WO08/006481, WO08/007211, va WO08/018827). Ban chit ky thudt cua sang ché Do 46, mvc dich cia sing ché 1a 48 xudt pyridyl benzoxazin thé hién hoat Khang thy thé vaniloit-1 (TRPV1) khéng tgo ra tac dung phy lam thay d6i nhiét d6 cua co thé, M6t mue dich khae cla sing ché 1a dé xudt due phdm chiza hoat chat 14 hop chat pyridyl benzoxazin. Theo mot khia canh, sing ché dé xudt hop chat c6 céng thite hod hoc 1 sau hoe cde mudi duge dung cla n6. Céng thie hoa hge 115395 Re Ro Ry. Soe ‘f Re i ll [> : Rs. N No oA trong dé: R, la hydro hode C).3 hydroxyalkyl; R, li hydro hode halogen; Rj la hydro hode halogen; va Ry la hydro, halogen, C) alkyl, C1 haloalkyl hoe Cy. haloalkoxy; va Rs ld Cy alkyl. ‘Tét hon la, R; 14 hydro hoc hydroxymety] Theo mét phuong 4n duge uu tién, méi R va Rs 14 hydro; Ry 1a Cy alkyl hoe C) ; haloalkoxy. Theo mot phuong én duge wu tién Khde, Ry 18 hydro; mi R; va Ry halogen. Theo mét phurong an duoc uu tién khde ntta, Ry la halogen, Rs 1a hydro, va Ry 1a halogen, C) haloalkyl hoe Cy. haloalkoxy. Ngoai ra, tt hon 1a, Re Ia hydro, Br hoe Cl. ‘Theo mét phurong dn duge wu tign khéc ntta, Rs la hydro, F hog Cl. Theo mt phuong én duge uu titn khée ntta, Ryla Br, Cl, C(CH,)s, CF hod OCKs. Theo mt phuong an duge wu tién khée nifa, Rs lé metyl. Cae vi du cu thé vé cdc hop chat dai dién 06 céng thire hod hoc 1 bao gém: 8-(6-tert-butyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2-y1)-3,4- dihydro-2H-benzo[b][1,4}oxazin, (S)-(4-(5-metoxypyridin-2-yl)-8-(6-(triflometyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)- 3,4-dihydro-2H-benzo[b]{1,4]oxazin-3-yl)metanol, (S}(8-(5,6-diclo-11-benzo{d]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2-yl)-3,4- dihydro-2H-benzo(b][1,4Joxazin-3-yI)metanol,15395 (S}-4-(5-metoxypyridin-2-yl)-8-(6-(triflometoxy)-1H-benzo{d]imidazol-2- ‘yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3-yl)metanol, (S)-(8-(4-bromo-6-(triflometoxy)-1H-benzo[d]imidazol-2-y1)-4-(5- metoxypyridin-2-y1)-3,4-dihydro-2H-benzo{b]{1,4Joxazin-3-yl)metanol, (S)(8-(6-clo-5-flo-1H-benz0f dJimidazo!-2-y1)-4-(5-metoxypyridin-2-y1)-3,4- dihydro-2H-benzo[b]{1,4]oxazin-3-yI)metanol, (S}-@-(4-bromo-6-(triflomery!)-1H-benzo[d]imidazol-2-y1)-4-(5- metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihrydro-2H-benzo[b] 1,4 Joxazin-3-yl)metanol, (S}(8-(4-clo-6-(triflomeryl)-1H-benzo[d]imidazol-2-y!)-4-(5-metoxypyridin- 2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3-yl)metanol, (S}8-(4,6-dibromo-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2-y1)- 3,4-dihydro-2H-benzo{b][1,4Joxazin-3-yl)metanol Ngoai ra, su hé bién hoa cla hop chit c6 céng thite 1 6 thé thuc hién bing cach chuyén nguyén ti hydro &-vj tri sd 1 va 3 ca céng thie 1, nhu sau: ‘Nhu di néu trén, hgp chit 06 céng thite 1 6 thé & dang muéi, cu thé 18 cée muéi duge dung, Cac mudi duge dung thich hgp dé sir dung trong sang ché nay 1a céc mudi thuéng duoc sit dung trong linh vyc, nhu mudi cOng axit, va bao gdm cic mudi duge boc 16 trong tai ligu (J. Pharm. Sci., 66, 1(1977)). Vi dy vé cde mudi cOng axit dugc dung thich hop dé sir dung trong sing ché nay bao gém cdc mudi cia cde axit v6 co, nhw axit clohydric, exit bromhydric, axit phosphoric, axit orthophosphoric, axit sulfuric, va v.v.; va céc mudi cla cde axit hitu co, nhu axit metansulfonic, axit benzensulfonic, axit toluensulfonic, axit axetic, axit propionic, axit lactic, axit xitric, axit fiumaric, axit malic, axit sucxinic, axit salixylic, axit maleic, axit glyxerophosphoric, axit axetylsalixylic, va v.v.. Ngoai ra, cdc niudi kim loai duge dung cé thé duge digu ché bing cach sir dung cdc bazo theo phuong phap théng thudng. Cac mudi kim loai kiém hoe cdc mudi kim loai kiém thd, 6 thé duoc diéu ché, vi dy, bing céch hoa tan cdc hop chat c6 céng thtte 1 trong mét lugng du dung dich hydroxit kim loai kiém hoc hydroxit kim loai kiém thé, loc loai 'b6 c4c mudi cla hop chét khéng tan, va lam bay hoi va lam khé phan dich loc. Vé15395 yan dé nay, cdc mudi natri, kali hoe canxi 14 cae mudi kim logi duge dung thich hop. Ngoai ra, cdc mudi bac twong tmg véi cde mudi kim loai 06 thé dug diéu ché bang cach cho kim loai kiém hode kim loai kiém thé phan tng véi céc mudi bac thich hop (vi dy, nitrat) Cac hop chat cé céng thite 1 theo sang ché bao gim mudi duge dung cing nhut solvat va hydrat c6 thé diéu ché duge tir céc mudi nay, va chat ding phan lap thé. Solvat, hydrat va chét déng phan lp thé c6 thé duge diéu ché tir hop chat cd cong thife 1 theo phuong phép thong thudng. Cac hop chat co cng thite 1 cé thé duge diéu ché & dang két tinh hodc khéng két tinh, Néu 6 dang két tinb, cde hop chat nay cé thé tay ¥ duge hydrat hoa hoe solvat héa. Cac hgp chét chia cde Iueng nude khée nhau cting nhur céc hydrat ty Iwong c6 céng thite 1 nam trong pham vi cia sang ché nay. Cac solvat c6 céng thie 1 theo sang ché bao gém cd solvat ty Iugng va khong ty lxong. Ngoai ra, sang ché dé xudt duge phdm dé sir dung trong viée phong ngira hoe diéu tri cdc chi dinh lién quan dén tinh d6i khang v6i thu thé vaniloit-1, chita hop chit cé céng thite 1, hofc mudi duoc dung, hydrat, solvat hodc chat déng phan cla nd, M6 ta chi tiét cde phwong 4n the hign sing ché Khi duoc str dung trong bin mé td nay, thuat ngit “bénh lign quan dén hoat tinh déi khang cia thu thé vaniloit-1” chi bénh cdp tinh hofe man tinh can diéu trj dé ire ché hoat tinh cba thu thé vaniloit-1 va bénh duge néu lam vi dy bao gdm chimg dau nhu chimg dau cp tinh, chimg dau man tinh, chtmg dau than kinh, chimg dau hau phau; chimg dau nia diu, bénh dau khép; bénh than kinh; tén thuong noron; bénh than kinh do bénh dai th4o duéng gay ra; chimg bénh than kinh; bénh viém da than kinh; bénh dt quy; bénh tang nhay cém bang quang; béoh béo phi; héi chimg 16i loan tiéu héa; cdc r6i loan h6 hép nhu chimg ho, bénh hen, va bénh phdi thc nghén man; bénh glécém; bénh béng; bénk vay nén; bénh ngira; chimg nén; bénh kkich img ¢ da, mit, va ming nay; va ce bénh viém nhu bénh viém thye quan héi Ihru, bénh loét da day 14 trang, va bénh viém rust. Duge phim theo sang ché ndi chung duge bao ché dé ding qua dudng miéng hoe ngoai duong tiéu héa theo thyc hanh duge chudn, VA cde duge phim nay od15395 thé chita céc hoat chat trén, két hop vdi chét phy gia nhu chét mang, t4 duge, hodc chat pha loging duge dung. Céc vi du minh hoa, nhumg khéng mang tinh gisi han vé chat mang bao gdm nue muéi sinh ly, polyetylen glycol, etanol, diu thyc vat, va isopropylmyristat. Cac vi dy minh hoa, nhmg khéng mang tinh giéi han vé chat pha loang bao gdm lactoza, dextroza, sucroza, manitol, sorbitol, xenluloza, vahhoac glyxin. Vi dy, cde hop chat 6 céng thir 1, hofc mudi durge dung, hydrat, solvat, hoe chat déng phan cla nd, cé thé duoe hoa tan trong dau, propylenglycol, ho&e cdc dung méi khéc, thudng duge sir dung dé diéu ché ché phim dé tiém. Dé ding tai ché, cde hop chit theo sing ché, ho&c mudi duge dung, hydrat, solvat, hofe chat dong phan cia né cé thé duye bao ché thanh thuéc mo hoiec kem. Dui day, vige mé ta cdc phuong php bao ché va ta duge sé duge minh hoa, nhung viée mé 1 nay khng duge dur dink lam gidi han sang ché. Mac dit cac hop chat cé céng thir 1 theo sing ché holc mudi duge dung, hydrat, solvat ho&c chat ding phan cia nd, ban thin ching 1a cdc chat déi khang TRPVI, khéng logi trix kha nding Ja céc dang edi bién cia nd trong méi trudng noi bao hodc cdc chat chuyén hoa cia né téc dong nhu céc yéu t6 co ban higu qua chiu tréch nhiém vé host tinh chita ben. Cac dang ligu duoc dung cia cdc hop chat c6 céng thie 1 theo séng ché bao gdm cée mudi duge dung hoge solvat cla hgp chat theo sang ché don 1é hoe két hop v6i cdc hoat chét khéc duge di kém hode két hop thich hop vao ds. Dé bao ché ché phim dé tiém, cae hop chat c6 céng thite 1 theo sing ché ho&c mudi duoc dung, hydrat, solvat ho&e chét déng phan cé thé duge hoa tan, to huyén phi hode nh hod trong dung mdi nude nhw nude musi sinh ly, dextroza 5%, v.y., hode dung méi khéng phai nude, nhu glyxerit ciia axit béo ting hop, este cua axit béo cao, propylen glycol, v.v. Ché ph4m theo sing ché cé thé chita cdc cht phy gia théng thuéng nur chat hoa tan, chat ding trong, chat tao huyén phi, chat nhi héa, chat én dinh, va chat bao quan. Tuy thuge vio tinh trang va can nfng ofa bénh nhdn, mac d6 nghiém trong cla bénh, dang liéu, va duéng ding va thdi gian ding, liu ding cia cde hop chat cd cOng thite 1 theo sing ché hofe mudi duge dung, hydrat, solvat, hodc chat déng phan cia n6, cé thé duge chon thich hop bdi ngudi cé hiéu biét trung binh vé Tinh ‘vue nay. Dé tri liu higu qua, céc hop chat c6 c6ng thite 1 theo sang ché ho&c mudi duge dung, hydrat, solvat, hoc chét déng phan cia né duge ding véi ligu long nam trong khoang tir 0,0001 dén 100mg/kg can nang mbi ngay va tét hon 1a véi liéu lugng nim trong khoang tir 0,001 dén 100mg/kg edn nang mdi ngay. Viée ding 615395 thé duge tién hanh qua dudng miéng hoac ngoai dung tigu héa mét Jan hodc nhiéy lan theo c4ch chia trong ngiy. ‘Theo phuong phap ding nay, duce pham nay c6 thé chtta hgp cht ¢6 cong thie 1 theo sng ché, hodc mudi duge dung, hydrat, solvat, hoae chat déng phan cila né vi hrong nam trong khoang tir 0,001 dén 99% kh6i hong, va tét hon 1 véi lugng nam trong Khong tir 0,01 dén 60% khéi lugng. Duge phdm theo sang ché 06 thé duoc ding qua cdc duong khée nhau cho déng vat cd vi nhw chuét nhét, chuét céng, vat nudi, ngudi, v.v.. Tat ca cae dang ding c6 thé mong muén, bao gdm, vi dy, ding qua dubng miéng, ding qua true trang, ho§c tiém trong tinh mach, trong co, duéi da, trong ni mac ti cung hofe trong nao that. Theo mét khia canh khéc, sang ché dé xuat phuong phap diéu ché hop chat 6 céng thtte hod hoc 1, nhw duge minh hoa trong so d phan img 1 hod 2 sau, So dd phan tmg 1 sau duge sit dung dé diéu ché cée hop chat duge biéu dién di céng thie hoa hoc 1 trong dé R, 1a hydro (Hop chat 12). So dé ae img] ® trong 46, Ro, Rs, Ry va Rs lan luot nhu duoc xéc dinh trén day. © bude 1, nhu thy trén so dé phan img 1, hop chat ¢6 céng thite 2 duge cho phan img trong dung méi hiu co vidi sy c6 mat cla HCI dé thu duge hgp chat 615395 céng thie 3. O bude nay, dung méi hiru co cé thé la metanol hodc etanol va phan img nay 6 thé duge tién hanh trong khoang tir 16 dén 24 gid két hop lam néng hdi hu. © bude 2, hgp chat cé cOng thitc 3 duge khir thanh hgp chat c6 cOng thie 4 véi sur cé mat cla cht xtie tae Pd/C trong dung méi hiru co trong thiét bi phan img hydro, Phan img khir nay c6 thé duge tién hanh & nhiét 46 phong trong khoang tir 2 dén 5 git trong metanol hodc etanol lam dung méi trong Kkhi chat xiic tac c6 thé dugc str dung véi luong nim tong khong tr $ dén 10% khéi hong tinh theo ting khéi hrong cia hop chat c6 cing thite 3. O bude 3, hop chat cé céng thite 4 phan img voi dibromoetan trong diéu kién bazo dé thu duge hop chat ¢6 céng thite 5. Béi véi phan img nay, dibromoetan 5 thé duge sit dung véi lugng nim trong khodng tir 1,1 dén 1,2 mol mdi mol hgp chat €6 cOng thite 4 véi su 06 mgt cla bazo KyCO3, Phin img nay c6 thé duge thu hién trong khodng tir 2 dén 3 gid két hop Jam néng héi Luu. 6 bude 4, hyp chat c6 céng thie 5 duge thiy phan thinh hgp chat cd cong, thie 6 véi su cé mat cia lithi hydroxit monohydrat. Vé vn dé nay, viée thay phan 6 thé duge tién hanh 6 rihigt 46 phong trong khodng tir 6 dén 8 gid v6i vige sir dung tir2 dén 3 mol lithi hydroxit monohydrat trén méi mol hop chat c céng thite 5. © bude 5, hop chat c6 céng thite 6 duge ngung ty voi hgp chat 6 céng thite 7 va O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N’,N’-tetrametyluronihexaflophosphat trong dung méi tong digu kién bazo dé thu duge hop chat amit, tiép theo vong hod thanh hop chat c6 cng thite 8 véi sy co mit cila axit axetic ma khéng can tinh ché. Hop chit c6 céng thie 7 c6 thé duge téng hop bing cdch sir dung phuong phép thong, thudng hoc hop chat thuong mai c6 thé duge sit dung. Hop chat nay duge str dung véi lugng 1 mol trén méi mol hgp chat c6 cng thite 6. Diisopropylamin c6 téc dung 1am bazo trong khi dimetylformamit c6 thé ding lam dung méi. Viée ngumg tu 6 thé duge thuc hign nhiét 4 phong trong khoang tir 16 dén 24 gid va vong hod & nhiét d6 nim trong khodng tir 70 dén 75°C trong khoang tir 2 dén 4 gid. Quay tré lai bude 6, hop chat 06 c6ng thite 8 phan img véi hyp chat 06 céng, thite 9 véi su cé mat cia chit xite tac va phdi ti trong dung méi hi co trong diéu ign bazo dé téng hop hop chat cd cOng thite 1a. Hop chat c6 céng thire 9 6 thé thu duge bing cach téng hop héa hoc hoic c6 thé duge mua. Hop chat nay duge sit dung véi lugng 1 mol trén mai mol hgp chat 06 céng thire 8. Dé str dung trong phan img nay, Pd(OAc): cb thé duge goi y thich hop lam chat xiie téo, 2,2- bis(4iphenylphosphino)-1,1’-binaphtyl lam phéi tit, CsyCO; lam bazo va toluen hode15395 1,4-dioxan lam dung mdi hitu co. Phan img nay co thé duge tién hanh & nhiét 46 nam trong khoang rir 90 dén 110°C trong khoang tir 12 dén 18 gid (Mark M. Hooper et. al., Jounal of Organic Chemistry, 68, 2861(2003)). So dé phan img 2 sau ding dé diéu ché cde hop chat duge biéu dién béi cong thie hod hoe 1 trong d6 R; 1a C).s hydroxyalkyl (Hop chét o6 c6ng thite 1b), So dé phan tmg 2 f or tO - nO ” a Soa ws ® rag trong 46, Ro, Rs, Ry va Rs lan lugt nhu 44 mé ta trén day, n 1a sé nguyén nim trong Khoang tir 1 dén 3 6 bude a, nhu duge thé hién trén so dé phan img 2, hop chat c6 céng thite 10 dugc cho phan tng trong dung mdi hiru co véi sy co mat cila clometoxyetoxymetan trong diéu kién bazo dé thu durgc hop chat c6 céng thite 12. Cu thé, bude nay c6 thé duge tién hanh & nhigt 45 phong trong 2 gid trong dung méi dimetylformamit voi K,CO; ding lam bazo. 6 cde bude b va b’, cde hop chat c6 céng thire 10 va 12 ln lugt duge khir thanh cde hop chat 06 céng thire 11 va 13, theo quy trinh tong tw nh quy trinh & bude 2 trong so dé phan ung 1. © cdc bude ¢ va c’, cde hop chat c6 céng thite 11 va 13 phan img voi hop chat c6 cng thite 9 véi sy cd mat cia chit xc téc va phéi tir trong dung méi httu co trong diéu kién bazo dé ln lugt ting hop cdc hyp cht cé céng thure 14 va 15. Dé str dung trong phan img nay, Pd(OAc), 06 thé duge goi ¥ thich hop lam chat xtc tac, -10-15395 2,2'-bis(diphenylphosphino)-1,1°-binaphty! lam ph6i tit, CsyCOs lam bazo va toluen hodc 1,4-dioxan lam dung méi hiu co, Méi hop chat c6 cOng thite 11 va 13 cé thé duge sir dung v6i lugng nam trong kho’ng tr 1 dén 1,2 mo! trén méi mol hop chdt 6 céng thite 9. Phan img nay cé thé duoc tién hanh 6 nhiét 46 nim trong khoang tr 90 dén 110°C trong khoang ti 12 dén 18 gid, © bude d, hop chat 6 céng thite 14 duge thiy phan thanh hyp cht cd cong thite 15 véi sur cé mat cla HCI trong dung méi hi co. Viée thy phan nay cé thé duge tién hanh & nhiét 43 phdng trong 24 gid va metanol cé thé duge sir dung lam dung mi. Quay tré lai buée e, hop chat c6 cng thite 15 phan img voi hop chat c6 cing, thire 16 trong dung méi htu co trong diéu kién bazo dé thu duge hop chat 6 cong thite 17. Hop chat c6 cong thite 16 cé thé thu duge bang c4ch ting hgp héa hoc hoae hop cht thuong mai cé thé duge str dung. Hop chat nay cé thé duge sir dung v6i Iugng nim trong khoang tir 1 dén 1,2 mol trén mdi mol hop chit o6 céng thite 15. Phan img nay c6 thé duge tién hanh 6 nhiét dé phong nim trong khoang ti 12 dén 16 gid trong dung m6i ¢imetylformamit trong khi KzCO3 duge sir dung lam bazo. 6 bude f, hgp chit c6 céng thiie 17 duge cho trai qua phan img ndi phan tir & nhiét 46 100°C trong 2 dén 5 gid trong dung mi hitu co trong diéu kién baze dé thy duge hop cht cé céng thire 18. Dé sit dung trong phan img nay, K,CO 06 thé duoc goi ¥ thich hop lam bazo va dimetylformamit lam dung méi hitu co. O bude g, hop chit c6 cng thirc 18 duge thiy phn & nhigt 46 60°C trong 3 gid thanh hop chat ¢6 céng thie 19 véi sy cd mat cia natri hydroxit trong dung moi hiu co. Metanol cé thé 18 dung méi thich hep. Cuéi cing & bude h, hgp chat c6 cng thie 19 duoc ngung tu voi hop chat 6 cOng thie 7 theo cach giéng nhu & bude 5 cia so dd phan img 1 dé thu duge hop chit amit, hop chat nay sau dé duge déng yong thanh hgp chat cb cOng thie 1b. Higu qua e6 loi ‘Thé hién hoat tinh te ché tuyét voi déi véi thy thé vaniloit-1 ma khdng gay ra su thay déi vé nhiét 46 cia co thé, cdc hgp chat 6 cong thie hod hoc | theo sang ché c6 thé htru ich 48 phong ngia ho¥e diéu tri bénh lién quan dén hoat tinh di khang cia thu thé vaniloit-1. Vi dy thye hign sang ché Céc vi du sau duge dua ra dé minh hoa va gitip hiéu 15 hon sang ché nay nhung khong duge coi la gidi han pham vi cia sing ché. “lle15395 Vidu 1 : Didu ché 8-(6-tert-butyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2- yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin Bude 1: Didu ché este ety! cia axit 2-hydroxy-3-nitrobenzoic BO sung timg giot 2ml dung dich HC! d4m dic vao dung dich chita 10,0g axit 2-hydroxy-3-nitrobenzoic (SSmmol) trong 100ml etanol, tiép theo khudy trong 24 git trong diéu kigén hdi luv. Dé ngudi hén hop nay xudng nhiét 46 phdng, cd dc trong chin khéng, va pha loang bang etyl axetat. Rira dung dich pha loang nay bing dung dich nude natri bicacbonat bao hoa va dung dich nuée NaCl bao héa, !am kho bing magie sulfat va c6 trong chin khéng. Tinh ché sin phdm c6 dic bing cach sir dung s&c ky c6t (dung méi khai trién: etylaxeta/hexan=1/4) dé thu duge 10,0g hop chat néu & dé muc nay (hiéu sudt 86%). Bude 2: Diéu ché este etyl cia axit 3-amino-2-hydroxybenzoic BS sung 0,84g PA/C 5% vio dung dich chia 8,4g este ety! cia axit 2- hydroxy-3-nitrobenzoic (40mmol) é buée 1 trong 100ml metanol, sau 46, nap day hi hydro vao thiét bj phan tg, tiép theo khudy & nhiét 4§ phong trong 5 gid. BO sung 0,5g amoniformat vao hdn hop phén (mg truée khi nap lai khi hydro va khudy lai 6 nhiét 46 phong trong 24 gid. Loai bd chat xtic tae bing loc xelit, tiép theo co dac trong chan khéng dé thu duge 7,2g hop cht néu ¢ dé muc nay (higu suat 99%). Buéc 3: Diéu ché este etyl cla axit 3,4-dihydro-2H-benzo{b][1 ,4Joxazin-8- cacboxylic Bé sung 5,5g K,COs (40mmol) vao dung dich chita 3,6g este etyl (20mmol) & bude 2 rong 30m! dimetylformamit, tiép theo khudy ¢ nhiét d§ phong trong 10 phat. Bé sung timg giot 1,9ml dibromoetan (22mmol) vao hén hop phan img, sau 6 khudy trong 3 gid trong diéu kign hdi hu. Dé ngudi hn hop phan img xudng nhiét d6 phong, c6 dic trong chin khéng, pha loang bang etylaxetat, va mia bang dung. dich natri bicacbonat bao hda va dung dich NaC! bao hda. Lam kh6 c&m thu duge bing magie sulfat va cd dic trong chan khéng dé thu durge 3,7g hop chat néu & dé mue nay (higu sudt 89%). Bude 4: Diéu ché axit 3,4-dihydro-2H-benzo[b][].4]oxazin-8-cacboxylic Bé sung 0,85g lithi hydroxit monohydrat (20mmol) vao dung dich cht 2,1g -12-15395 este etyl cla axit 3,4-dihydro-2H-benzo[b]f1,4Joxazin-8-carboxylic (10mmol) & bu6e 3 trong hén hop chita tetrahydrofuran 10ml va nude cét 10ml, tiép theo khudy 6 nhigt 46 phong trong 8 gid. Sau khi 6 hn hop phan tmg trong chan khGng, pha loang hn hop phan img nay bing etylaxetat, rita bang dung dich HC! 1N va dung dich NaC! bao hoa, va lam khé bing magic sulfat. Cé dac trong chan khéng va tinh trong etylaxetavhexan dé thu duge 1,6g hop chat néu & d2 muc nay (higu sudt 89%). Bude 5: Digu ché 4-(5-tert-buryl-LH-benzo[d)imidazol-2-yl)benzen amin BO sung 3,3g 4-tert-butylbenzen-1,2-diamin (20mmol), diisopropyletylamin Tm! (40mmol) va 11g O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-NN,N' N'-tetrametyluroni hexaflophosphat 30mmol) vio dung dich chia 3,6g axit 3,4-dihydro-2H- benzo[b]{1.4]Joxazin-8-cacboxylic (20mmol) & bude 4 trong S0ml dimetylformamit, tiép theo khudy & nhiét 46 phong trong 3 gid. Pha loang hon hgp phan img nay bang etylaxetat, riza bang dung dich natri bicacbonat bao hda va dung dich NaCl bao hoa, va lim kh6 bling magie sulfat true khi c6 dic trong chin khéng. Sau d6, hoa tan cin thu duge trong axit axetic/toluen (43ml/Sml), khudy & nhiét d5 70°C tong 4 gid, 48 ngudi xudng nhiét 46 phong, va c6 dic trong chin khéng, Hod tan sin phim 06 ec trong etylaxetat, rira bang dung dich natri bicacbonat bao héa va dung dich NaCl bdo hoa, va lim khé bing magie sulfat truée khi c6 dac trong chan khong. Tinh ché bing sic ky c6t (dung méi khai trién: etylaxetat/hexan=1/1) thu duge 5,2¢ hop chat néu & dé mye nay (higu sudt 85%). Buée 6: Diéu ché 8-(6-tert-butyl-1H-benzofd]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2- y))-3,4-dihydro-2H-benzo[b][I,4Joxazin BE sung 1,5g 2-clo-S-metoxy pyridin (10mmol), 0,1g Pd(OAc)2 (0,Smmol) va 0,5g 2,2’-bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphtyl (0,8mmol) va 4,6g Cs,CO; (14mmol) vao 3,lg dung dich chia 4-(5-tert-butyl-1H-benzo[d]imidazol-2- yi)benzen amin (10mmol) trong 10m! toluen, tip theo khudy 6 nhiét 46 90°C trong 12 gid. Dé nguéi hén hop phan tmg xudng nhiét 46 phong, cd dic dudi ap suat giém, va pha lofing bing etylaxetat, Sau 46, rita san phim tao thanh bang dung dich natri bicacbonat bao hda va dung dich NaCl bao hia, lim kh6 bing magi sulfat va 8 di trong chin khOng. Tinh ché cfn bing sic kj c6t (dung méi khai tién’ etylaxetat/hexan=2/3) dé thu duge 3,5g hop chat néu 6 dé mye nay (higu suét 85%). " NMR(MeOD-d4) 8 : 8,04(4,1H, J=3,0Hz), 7,79(dd, 2H, J=7,8, 1,5Hz), -13-15395 7,67(4, 1H, J=1,7H2), 7,56(d, IH, J-8,6Hz), 7,38(m, 2H), 7.25(d, 1H, J=9,0Hz), 7,17(4d, 1H, J-8,1, 1,4Hz), 6,95(t, 1H, J*8,0Hz), 4,52(t, 2H, J=4,4Hz), 3,99(t, 2H, J=4,48z), 3,86(s, 3H), 1,41 (s, 9H) Vii dy 2: Digu ché (S)(4-(5-metoxypyridin-2-yl)-8-(6-(triflometyl)-1H- benz0[d]imidazol-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3-yl)metanol Bude 1: Didu ché este metyl ca axit 2-((2-metoxyetoxy)metoxy)-3-nitrobenzoic BS sung 7,6g K2CO; (55mmol) va 6,3ml clometoxyetoxymetan (5Smmol) vaio dung dich chiza 9,9g este metyl cla axit 2-hydroxy-3-nitrobenzoie (SOmmol) trong 100ml dimetylformamit, tiép theo khudy o nhiét 46 phong trong 2 gid. Cé dic hén hop phan img thu duge trong chan khong, pha loding bang etylaxetat va ria bing nue ct va dung dich NaCl bao hda. Lam khé can bing magie sulfat va c6 dic dudi ap sudt giam dé thu duge 14,0g hop chat néu ¢ dé muc nay (higu sudt 98%). Bude 2: Dieu ché este metyl cia axit 3-amino-2-((2-metoxyetoxy)metoxy)benzoic Bé sung 0,5g Pd/C 5% vao dung djch chita 5,0g este metyl cia axit 2-((2- metoxyetoxy)metoxy)-3-nitrobenzoic (17,Smmol) 6 bute 1 trong 50ml metanol, va nap dy khf hydro vao thiét bi phan img, sau 46, khudy hon hop phan img nay 6 nhigt 49 phong trong 24 git. Loai bé chit xtic tac bang loc xelit trade khi c5 déc hn hop phan tmg trong chan khéng. Tinh ché bing sic ky o6t (dung moi Khai trién: etylaxetat/hexan=1/1) thu duge 4,2g hop chat néu 6 dé muc nay (higu sudt 95%). Buéc 3: Diéu ché metyl 2-[(2-metoxyetoxy)metoxy]-3-(3-metoxypyridin-2- ylamino)benzoat Bé sung 0.70g 2-clo-S-metoxypyridin (4,9mmol), 0,llg Pd(OAc), (0,49mmol), 3,85g 2,2’-bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphtyl 0,31g (0,49mmol) va Cs,CO; (9,8mmol) vao dung dich chita 1,25g este metyl cla axit 3-amino-2-((2- metoxyetoxy)metoxy)benzoic (4,9mmol) 5 bude 2 trong 10ml 1,4-dioxan, tiép theo Khudy nhigt 49 90°C trong 12 gid. Dé ngudi hén hop phan img xudng nhiét 46 phong, c6 dic duéi 4p sudt gidm, pha lo’ing bing etylaxetat, va nia bang dung dich natri bicacbonat bao hoa va dung dich NaCl bao héa. Sau khi lam kh6 bing magie sulfat va 66 dac trong chan khéng, tinh ché bing séc ky c6t (dung mdi khai triéa: etylaxetat/hexan=1/2) thu duge 1,2g hop chat néu 6 dé myc nay (higu sudt 68%). -14-15395 Bude 4: Didu ché metyl-2-hydroxy-3-(5-metoxypyridin-2-ylamino)benzoat BG sung 2ml dung dich HC! 6N vo dung dich chira 1,0g metyl 2-((2- metoxyetoxy)metoxy]-3-(5-metoxypyridin-2-ylamino)benzoat (2,8mmol) & buée 3 ‘theo khudy & nhiét dé 40°C trong 30 phat. Dé ngudi hin hep phan img xudng nhiét 46 phong, c6 dic trong chan khéng, pha loang bing etylaxetat, nla bing nude odt, va dung dich NaCI bao hda. Sau khi lam khé bing magie sulfat va 6 dac trong chan khng, tinh ché bing sic ky cOt (dung méi khai trién: etylaxetavhexan=1/2) thu duge 0,70g hop chit néu & d8 muc nay (hiéu sudt 90%). Buéc 5: Biéu ché — (R)-metyl-3-(5-metoxypyridin-2-ylamino)-2-(oxiran-2- ylmetoxy)benzoat Bé sung 1,0g (R)-glyxidyl nosylat (4mmol) va 0,5¢ KxCO; (3,6mmol) vao dung dich chia 0,91g metyl-2-hydroxy-3-(5-metoxypyridin-2-ylamino)benzoat (3,3mmol) 6 bude 4 trong 10ml dimetylformamit, tiép theo khudy & nhiét 46 phong trong 12 gid. C6 dic hén hgp phan img nay trong chan khong, pha lofing bing etylaxetat, va rita bing nude ct va dung dich NaCl bao héa. Sau khi lam khé bing magie sulfat va c6 dic trong chin khéng, tinh ché bing sdc ky c6t (dung m6i khai trign: etylaxetat/hexan=1/2) thu duge 0,95g hop chat néu & 4é muc nay (higu sudt 87%). Bude 6: Dieu ché (S)-metyl-3-(hydroxymetyl)-4-(5-metoxypyridin-2-yl)-3,4- dihydro-2H-benzo[b} [1, 4Joxazin-8-cacboxylat Bé sung 0,28g KyCOs (2,0mmol) vao dung dich chtra 0,53g (R)-metyl-3-(5- metoxypyridin-2-ylamino)-2-(oxiran-2-ylmetoxy)benzoat (1,6mmol) & bude 5 trong Sm] dimetylformamit, tiép theo khudy @ nhiét 49 100°C trong $ git. Dé ngudi hn hop phan tng xudng nhiét 49 phong, c6 dic tong chin khéng, pha long bang etylaxetat, va rita bing nude ct va dung dich NaCl bao hoa. Sau khi lam khé bing magie sulfat va c6 dic tong chan khéng, tinh ché bing sac ky cOt (dung méi khai trién: etylaxetat/hexan=1/1) thu duge 0,50g hop cht néu 6 d8 muc nay (hiéu sudt 94%). Buéc 7: Diéu ché axit (S)-3-(hy¢roxymetyl)-4-(5-metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro- 2H-benzo[b] [1,4]oxazin-8-cacboxylic BO sung timg gigt 10ml dung dich NaC] 4N vao dung dich chiza 3,6g (S)- -15-15395, metyl-3-(hydroxymetyl)-4-(S-metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H- benzo[b][1,4]Joxazin-8-carboxylat (11mmol) 6 bute 6 trong 40ml metanol. H8i ru hn hop phan (mg & nhiét d6 60°C trong 3 gid két hop khudy va sau d6 dé ngudi xudng nhiét 49 phong. Trung hda bing 40m! dung dich HC1 1N thu duge hop chit néu & dé mue nay duéi dang két bia. Loc két tha nay, ria bing nude cét va cé dace trong chn khéng, San phém: 2,6g hop chét néu 6 dé muc nay (higu sudt 75%). Budo 8: Diu ché—_ (S)-(4-(5-metoxypyridin-2-y!)-8-(6-(tciflometyl)-IH- benzo{d}imidazol-2-y!)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-yl)metanol Bé sung 1,9g 4-(tiflometyl)benzen-1,2-diamin (11mmol), 3,5ml Giisopropyletylamin (20mmol) va 5,7g O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,NN’.N’- tetrametyluroni hexaflophosphat (15mmol) vio dung dich chita 3,2g axit (S)-3- (hydroxymetyl)-4-(5-metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-8- carboxylic (10mmol) & bude 7 trong 50ml dimetylformamit, tiép theo khudy & nhigt 46 phong trong 3 gi. Pha long hin hgp phin img nay bing etylaxetat, rita bing dung dich natri bicacbonat bao héa va dung dich NaCl bao héa, lam kh6 bling magie sulfat ya c6 dic trong chan khéng. Hoa tan sin phim cé trong axit axetic/toluen (90m1/10ml), dun néng & nhiét d6 75°C trong 4 gid két hop khudy, dé ngudi xudng nhigt 46 phéng va c6 dic trong chin khéng. Hoa tan sin phim cé dic trong etylaxetat, riza bling dung djch natri bicacbonat bao hda va dung dich NaCl bio hda, lam kh6 bing magie sulfat, va cé dic dudi 4p sudt giam. Tinh ché bing sic ky cét (dung méi khai trién: etylaxetavhexan=2/3) thu duge 4,1g hgp chét néu & dé muc nay (hiéu sudt 82%). 1H NMR(MeOD-<4) 8 : 8,05(4,1H, J=2,8Hz), 7,95(s, 1H), 7,79(dd, 2H, J=7,7, 1,5Hz), 7,54(d, 1H, J=8,4H2), 7,40(dd, 1H, J=8,9, 3,0Hz), 7,34, 1H, J=8,9Hz), 7,17(dd, 1H, J=8,1, 1,42), 6,97(t, TH, J=8,0Hz), 4,85(4, 1H, J=10,9Hz), 4,314, 1H), 4,26(4d, 1H, J=10,9, 2,612), 3,89-3,84(m, 4H), 3,68(dd, 1H, J=10,9, 8,0Hz) Vi dy 3: Didu ché ($)-(8-(5,6-diclo-1H-benzo[djimidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin- 2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b)[I,4}oxazin-3-yl)metanol Lap lai quy trinh twong ny nhu & bude 8 cla vi du 2, ngogi tr sir dung 4,5- diclobenzen-1,2-diamin thay cho 4-(triflometyl)benzen-1,2-diamin, diéu ché duge 4,0g hop chat néu 6 dé muc nay (higu sudt 87%). 4H NMR(MeOD-d4) 5 : 8,05(4,1H, J=2,8Hz), 7,77(m, 3H), 7,41(dd, 1H, -16-15395 J-9,0, 2,9Hz), 7,34(d, 1H, J8,9Hz), 7,16(dd, 1H, J=8,1, 1,3Hz), 6,96(1, 1H, J=7,9Hz), 4,84(d, TH, J=10,9Hz), 4,31(m, 1H), 4,26(dd, 1H, J=10,8, 2,5Hz), 3,88- 3,80(m, 4H), 3,67(dd, 1H, J=10,9, 8,0Hz) Vi du 4: Dig ché (S)-(4-(5-metoxypyridin-2-yl)-8-(6-(triflometoxy)-1H- benzo[d]imidazol-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3-yl)metanol Lap Iai quy trinh twong ty nhu & bude 8 cla vi du 2, ngoai tr sir dung 4- (tiflometoxy)benzen-1,2-diamin thay cho 4-(tiflometyl)benzen-I,2-diamin, diéu ché duge 4,3g hop chat néu & 48 muc nay (higu sudt 91%). ‘HH NMR(MeOD-d4) 5 : 8,06(4,1H, J=2,9Hz), 7,77(4d, UH, J=7,8, 1,5Hz), 7,69(d, 1H, J=8,8Hz), 7,55(s, 1H), 7,42(dd, 1H, J=9,0, 3,0Hz), 7,17(m, 2H), 6,97(4, 1H, J=8,0HZ), 4,84(dd, 1H, J=10,9, 1,4Hz), 4,31(@m, 1H), 4,26(dd, 1H, J=10,9, 2,6Hz), 3,90-3,84(m, 4H), 3,68(dd, 1H, =10,9, 8,1Hz) Vi du 5: Diu ché (S)-(8-(4-bromo-6-(triflometoxy)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4- (S-metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3-yl)metanol Lap Jai quy trinh twong ty nhu 6 buée 8 cila vi dy 2, ngoai trir sir dung 3- bromo-5-(triflometoxy)benzen-1,2-diamin thay cho 4-(triflometyl)benzen-1,2- diamin, diéu ché dugc 5,2g hop chat néu 6 4 muc nay (higu suat 94%). ‘H NMR(McOD-d4) 6 : 8,05(4,1H, J=2,8Hz), 7,86(brs, 1H), 7,55(s, 1H), 7,42(dd, 2H, 39,0, 2,9Hz), 7,34(4, 1H, J=8,9Hz), 7,18(dd, 1H, J=8,1, 1,4Hz), 6,97(t, 1H, J+8,0H2), 4,82(4, 1H, J+10,7Hz), 4,34(m, UH), 4,26(dd, LH, J=10,9, 2,642), 3,93-3,84(m, 4H), 3,68(dd, 1H, J=10,9, 8,0Hz) Vii dy 6: Digu ché (S)-(8-(6-clo-5-flo-1 H-benzo(d}imidazol-2-y!)-4-(5- metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-yl)metanol Lap lai quy trinh tong ty nhur 6 bude 8 cia vi du 2, ngogi tri str dung 4-clo- 5-flobenzen-1,2-diamin thay cho 4-(triflometyl)benzen-1,2-diamin, diéu ché duge 3,9g hop chat néu 6 dé muc nay (higu swat 88%). "H NMR(MeOD-d4) 5 : 8,06(4,1H, J=2,9H2), 7,75(dd, 1H, J-7,8, 1,442), 7,70(, LH, J=6,7H2), 7,47(d,1H, J=9,4Hz), 7,42(dd, 1H, J=9,0, 3,0Hz), 7,35(4,1H, J-8,9Hz), 7,16(dd, 1H, J=8,1, 1,5Hz), 6,96(t, 1H, J-8,0Hz), 4,84(4d, 1H, J=10,9, Ae15395 1,4Hz), 4,31(m, 1H), 4,26(dd, 1H, J=10,9, 2,6Hz), 3,90-3,84(m, 4H), 3,68(dd, 1H, J=10,9, 8,1Hz) Vi du 7: Diéu ché (S)-(8-(4-bromo-6-(triflometyl)-1Z-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5- metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-yl)metanol Lap lai quy trinh twong ty nhu & bude 8 cda vi du 2, ngoai try sir dung 3- bromo-5-(triflometylbenzen-1,2-diamin thay cho 4-(triflometyl)benzen-1,2-diamin, diéu ché duge 4,0g hgp chit néu & dé myc nay (higu sudt 75%). ‘WH NMR(MeOD-d4) 6 : 8,05(4,1H, J=2,8Hz), 7,93(s, 1H), 7,71(s, 11), 7,42(dd, 2H, J=9,0, 2,912), 7,34(4, LH, J=8,9H2), 7,18(dd, 1H, J=8,1, 1,4H2), 6,97(4, 1H, J-8,0Hz), 4,82(¢, UH, J=10,7Hz), 4,34(m, 1H), 4,26(4d, 1H, J=10,9, 2,6H2), 3,93-3,84(m, 4H), 3,68(dd, 1H, J=10.9, 8,0Hz2) Vi du &: Diéu ché (S)-(8-(4-clo-6-(triflometyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5- metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b] [1,4]oxazin-3-yl)metanol Lap lai quy tinh twong ty nhur & bude 8 cia vi du 2, ngoai tri sir dung 3-clo- S-(triflometyl)benzen-1,2-diamin thay cho 4-(triflometyl)benzen-1,2-diamin, diéu ché duge 4,3g hop chat néu 6 dé mye nay (higu sudt 88%). 'H NMR(McOD-d4) 5 : 8,05(d,1H, I=2,8Hz), 7,90(s, 2H), 7,67(m, 1H), 7,42(dd, 1H, J=9,0, 2,9H2), 7,34(4, 1H, J=8,9H2), 7,18(dd, 1H, J=8,1, 1,442), 6,976, 1H, J=8,0Hz), 4,82(d, 1H, J=10,7H2), 4,34(m, 1H), 4,26(dd, TH, J=10,9, 2,6Hz), 3,93-3,84(m, 4H), 3,68(4d, 1H, J=10,9, 8,0H2) Vi du 9: Didu ché (S)-(8-(4,6-dibromo-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5- metoxypyridin-2-yl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3-yl)metanol Lap lei quy trinh tuong ny nhu 6 buée 8 cia vi dy 2, ngoai trix chia sir dung 3,5-dibromobenzen-1,2-diamin thay cho 4-(triflometyl)benzen-1,2-diamin, diéu ché duge 4,6g hop chat néu 6 48 myc nay (higu sudt 84%). ‘H NMR(MeOD-d4) 6 : 8,05(d,1H, J=2,8Hz), 7,80(m, 2H), 7,58(m, 1H), 7,42(dd, 1H, J=9,0, 2,9Hz), 7,34(4, 1H, J-8,9Hz), 7,18(dd, 1H, J=8,1, 1,4Hz), 6,97, 1H, J+8,0Hz), 4,82(4, 1H, J=10,7Hz), 4,34(m, 1H), 4,26(dd, 1H, J=10,9, 2,682), 3,93-3,84(m, 4H), 3,68(dd, 1H, J=10,9, 8,0H2)15395 ‘Vi du thir nghiém 1: Tac dung te ché dong canxi qua thy thé vaniloit Bé khing dinh hoat tinh d6i khang cia céc hgp cht theo sng ché, tae dung ite ché dong canxi clia cdc hop chdt duoc danh gid nhu sau. 1. Nudi cdy t8 bao Dong té bio hVR-1-HEK293 1a té bao thfn phéi cha ngudi (human embryonic kidney - HEK) ching 293 Tet-on durge bién nap bing gen vaniloit-1 cla ngudi (pTRE2hyg-hVR-1 7,8kb). Dang 18 bao nay cé iéu bién sy biéu hién cla TRPV1, tuy thuéc vio viéc doxyxycline, mt ddn xuat cia tetraxycline, cé mat hay khong. Dé lam 16 tc dung we ché dong canxi, TRPV1 duge biéu hién béi dong té bao hVR-1-HEK293 nuéi cdy trong méi trrdmg chita doxyxyeline trong 2 ngay. Cu thé, cdc t8 bao hVR-1-HEK293 duge nudi cy trong binh T75 dén mite 40. hop dong 1a 80%, duge téch ra khdi binh nay bing céch xir ly bing dung dich trypsin, va sau dé gom lai bing cach ly tim. Cac té bao duge tao huyén phi trong méi trudng chia 1yg/ml doxyxycline, va huyén phd thu duge duge pha loang dén néng 46 2~4*10° t8 bao/ml. 100p] hén dich té bao duge dat trong méi 18 cla dia mau den cb 96 15. Té bao duge nudi cdy trong td cha CO, 5% & nhiét 4} 37°C wong 2 ngay, va duge sir dung cho quy trinh tiép theo. 2. Chuan bi céc mau hgp chat Cac hop chat, digu ché duge trong cde vi dy ti 1 dén 9 cia sang ché, duge ‘hoa tan trong dimetyl sulfoxit (DMSO) dé thu duge cée mAu hop chat. 3. Do dong canxi Cac 18 bao chuln bi duge & myc 1) néu trén duge nudi cdy & nhiét 49 37°C trong 90 phut trong dung dich chita Fluo-3/AM, thuée nhuém huynh quang, la chat chi thj canxi, duoc tham vao 18 bao. Sau 46, té bao duge rita ba lin bing D-PBS (dung dich mudi dém phosphat cia Dulbecco) chita 10mM HEPES (axit 4-(2- hydroxyetyl)-1-piperazin ctansulfonic) 4é loai b thuée nhuém huynh quang du. 193pl D-PBS dugc bé sung vao méi 16, tigp theo bé sung céc hop chat véi cde néng 46 khée nhau (nim trong khoang tir 0,015 dén 2000nM). Dé kich thich dong canxi qua thu thé vaniloit, cdc té bao nay duge xr ly bang 1M capsaixin, Tée dung tre -19-15395 ché cla cde hop chat ¢ céc néng 46 khdc nhau (nim trong khodng tir 0,015 dén 2000nM) déi véi dong canxi ndi bao duge do bang cach sit dung huynh quang ké. Cae long tuong duong ota hop chét (R)-1-(2-bromophenyl)-3-(1-5- (triflometyl)pyridin-2-yl)pyrolidin-3-yl)ure (cling duge goi 14 SB-705498) dupe sir dung lam nhém di chimg. Sé ligu thu duge duge nh§p vao céng thie Hill e6 céng thite 1 duéi day va cdc trj sé duge phan tich: Cong thite 1 Dong canxi ngi bao = (cudng dO huynh quang cia nhém thir nghiém - cudng 46 huynh quang nén) / (cudng 46 huynh quang cia déi chimg duong tinh - cvémg 46 huynh quang nén) x 100 Céc hoat tinh tre ché duge dinh gid tir cdc tri sé dong canxi néi bao thu durge theo cdc tiéu chudn sau. Céc két qua duoc dua ra trong bang 1 sau. =: ICyp > 1000nM5 + : ICgq = 501 ~ 1000nM; ++ : 1C3p = 101 ~ 500nM; H+ : 1Csq = 20 ~ L00nM; H+: IC5o < 200M Bang 1 [Vidu LA. Vide LA it JH 2 an 3 JH 4 ae iS [H+ 6 an 7 be 8 JH 9 ie LA: Hoat tinh te ché Nhu duge thé hién trong bang 1, cdc hgp chét theo sang ché thé hién ICsp nim trong khoang ti 10nM dén 100nM. Ngugc lai, nhém déi chung dugc ding SB- 705498 thé hién ICs) nim trong khoang tr 100nM dén 150nM. Cac két qua nay chimg 16 rling cdc hop chat theo sng ché c6 hoat tinh te ché dong canxi tuyét voi. ‘Vi du thir nghiém 2: Téc dng én chimg dau Dé danh gid tc dong dén chimg dau cla cc hop chdt diéu ché duge trong cde vi du tir 1 dén 9, cdc hanh vi nhu van xodn hoe lan 16n cia oo thé do chimg dau duoc kiém tra bing thir nghiém Jan I6n gay ra béi phenyl-p-quinon (PBQ) bing cach -20-15395” sit dung chugt nhit. Chuét nbét duc ICR § tuan tudi duge sir dung lam dong vat thir nghiém va PBQ (0,02%), lam chat kich thich héa hgc. Huyén phi chita 20mg hgp chat theo sing ché va ta duge nhu Na-CMC (natri carboxymety! xenluloza) trong 10m! nude mu6i duge sir dung lam hop chat thir nghiém. Hop chat thir nghiém duge cho chudt ding qua duimg migng va sau 1 git, PBQ duge ding trong mang bung véi iong 10ml trén méi kg thé trong. $6 lan lan lon cita timg chudt duge do trong 10 phit bit dau tir 5 phut sau khi ding, va t4c dung giam dau duge kiém tra bing cach tinh sé Jan gidm hon so véi nhém di chimg chi duoc ding t4 duge va tinh % mite 46 ite ché theo céng thie 2 sau. Ngoai ra, cde lung tuong duong cla SB-705498 duoc ding lim hop chat a6i chimg dé so sinh tac déng dén chimg dau gitta SB-705498 va hop chat theo sang ché. Cong thite 2 % mite 46 tte ché = (s6 Jan Jan 16n cia nhém déi chimg - s6 lan lan Jn cha nhém thir nghiém) / sé lan fan 16n cia nhém d6i chimg x 100 Hoat tinh te ché duge danh gid tir % mute 46 tte ché thu duge, theo céc théng 36 sau. +: <20%; ++ : 20~50%; HH : 51-80%; HHH : >80% Bang 2 Vidy LA. )Vi dy ILA. it H+ 2 haa 3 f+ 4 J+ IS H+ 6 hana \7 + 8 J 9 ie MLA sHoat tinh te chi ‘Tir bing 2 cé thé thay dugc, voi hu hét cdc hop chit theo sang ché thé hién mic 49 tc ché nim trong khoang tir 30% dén 80%. Nguge lai, nhém hop chat 481 chimg thé hién <20%(+). Cac két qua nay chimg td ring cac hyp chit theo sang ché 6 tic dung giam dau tuyét voi. Vi dy thir nghiém 3: Thir nghiém vé su thay d4i nhiét 46 cia co thé -21-15395 Biét ring m6t sé chat d6i khang TRPV1 c6 téc dung phu lam ting nhiét 46 co thé (Gawa et al, 2008, Pain, 136, 202-210), nén da tién hanh danh gid cdc thay adi vé nhiét d6 cia co thé sau khi dang cdc hop chit diéu ché duge trong cdc vi dy theo sing ché. Chuét céng SD 7 tuan tudi (chuét céng Sprague-Dawley) duge sit dung cho dénh gia nay. Mi hop chat cla cdc vi du duge ding qua duéng miéng mét Hn véi ligu Iugng 10m\/kg bang cach ép budc. Trude khi ding, céc hop chat nay duge tao huyén phi, cing véi ta duge Na-CMC (natri carboxymetyl xenluloza), trong 10m! nuée mudi. Nhiét d6 tye trang eta chudt cing duge do ] gid va ngay tite thi (0 gid) tnude khi ding, va & céc thei diém 30 phiit, 1 gid, 2 gid, 4 gid, 6 gid va 8 gid sau khi ding bang cach sit dung nhiét ké (Shibaura Electronic Corporation, TD-300). S6 ligu duge biéu thi duéi dang tri sé trung binh 4S.E.M. Sé ligu théng ké duoc phan tich bing ANOVA mét chiéu, va ¥ nghia théng ké duge phan tich so sinh véi 44i chimg duge diéu tri bang t4 duge bing cach sir dung thir nghiém t cia Dunnett. Cac két qua duge tom tit tong bing 3 sau. Déng thoi, hop chat N-(4-(6-(4- (triflomety!)pheny!)pyridin-4-yloxy)benzo[d]thiazol-2-yl)axetamit (duéi day duge goi 18 “AMG-517”) duge sir dung véi ligu lugng 3me/kg, lam di chimg duong tinh, Bang 3 Vida [Mic d6 thay 45i nhiét d6 cothé [Vidy [Mic 46 thay d0i nhiét d9 co thé 1 7 2 + 3 +7 q aT 5 + é ae 7 fe 8 i 9 = |Vige danh gia duge tien hanh theo cde thong $6 sau: +/-2 <0,5°C; +: 0,5~1,0°C; HL, 191,5°C; +44: >1,5°C Néu duge ding véi cdc luong htu higu dé diéu tri bénh, tir cdc sé ligu cha bang 3 thy r6 ring cdc hop chat theo sing ché khong gay ra su thay déi vé nhiét 46 cua co thé. Nguoc Igi, di chtmg duong tinh duge ding AMG-517 vi liéu rong 3mg/kg la ligu lugng tham chi thép hon so véi liéu higng cla hgp chat theo séng ché, duce phat hién 1a lam tang nhiét d6 cta co thé lén 1,06°C. Sé ligu nay chtmg 10 ring cdc hop chét theo sang ché la an toan d6i vdi co thé, -22-15395 Mic di theo sang ché, cée phwong 4n thye hién duge uu tién due m6 ti nhim myc dich minh hoa, ngudi cé hiéu biét trung binh vé tinh vue nay nay can phai hiéu ring céc cai bin, bd sung va thay thé khéc nhau c6 thé duge thc hign, ma kh6ng chéch khéi pham vi va ¥ tuéng cita sang ché nhu néu trong céc diém yéu cau bao ho kém theo, -23-15395 YEU CAU BAO HO 1. Hop chat, c6 céng thite hoa hoc 1 sau, ho&e mudi due dung cla né: Céng thére hod hoe 1 Ry. — i Re S : Rs N No: a trong d6: R, la hydro hodc C).3 bydroxyalkyl; R; la hydro hoac haloge Rj 18 hydro hode halogen; Rg la hydro, halogen, Cy. alkyl, C). haloalkyl hoe C;,5 haloalkoxy; va Rs la C14 alkyl. 2. Hop chat hofe mudi duge dung cia no theo diém 1, trong do R, 1a hydro hod hydroxymetyl. 3. Hop chit hode mudi duge dung cia né theo diém 1, trong dé: mi R2 va Ry 1a hydro; va Rg 18 C4 alkyl hoe Cy. haloalkoxy. 4, Hop chat hoc mu6i duge dung cia né theo diém 1, trong 46: Rj la hydro; va méi Rs va Ry [a halogen. 5. Hop chat ho&e mudi duge dung cia né theo diém 1, trong 46: R; la halogen, R; la hydro, va Ry 18 halogen, C;.3 haloalky! hoe C; 3 haloalkoxy. 24.15395 6. Hop chat hodc mudi duge dung cia né theo diém 1, trong dé Ry la hydro, Br hoae cL 7. Hop chat ho&e mudi duge dung cita né theo diém 1, trong d6 Ry 1a hydro, F ho&e cl 8. Hop chat hoac mudi duge dung cila né theo diém 1, trong d6 Ry a Br, Cl, C(CHs)s, CF; ho&e OCF, 9. Hop chit hose mudi dugc dung cia né theo diém 1, trong dé Rs li metyl. 10. Hop chit theo diém 1, hoc mudi duoc dung cila né, trong 46 hop chat nay duge chon tir nhém bao gim: 8-(6-tert-buty!-1H-benzod]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2-y1)-3,4-dihydro- 2H-benzo[b][1,4Joxazin, (S)-(4-(5-metoxypyridin-2-yl)-8-(6-(triflomety!)-1H-benzo[d}imidazol-2-y1)-3,4- dihydro-2H-benzofb][1,4Joxazin-3-yl)metanol, (S)-(8-(5,6-diclo-1H-benzo[d}imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2-yl)-3 ,4-dihydro- 2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-ylmetanol, (8)-(4-(5-metoxypyridin-2-yl)-8-(6-(triflometoxy)-1H-benzo[djimidazol-2-yl)-3,4- dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-yl)metanol, (8)-(8-(4-bromo-6-(triflometoxy)-1H-benzof d]imidazol yl}-3,4-dihydro-2H-benzo[b]{1,4Joxazin-3-yl)metanol, (S)-(8-(6-clo-5-flo-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-4-(5-metoxypytidin-2-yl)-3,4- dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-yl)metanol, (S)(8-(4-bromo-6-(triflometyl}-1H-benzo | dJimidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2- yl-3,4-dihydro-2H-benzo[b][I,4Joxazin-3-yl)metanol, (S)-(8-(4-clo-6-(triflometyl)-1H-benzo[dJimidazol-2-yl)-4-(5-metoxypyridin-2-yl)- 3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4Joxazin-3-yl)metanol, vi (S)-(8-(4,6-dibromo-1H-benzo{dJimidazol-2-y!)-4-(S-metoxypyridin-2-y1)-3,4- dihydro-2H-benzo[b]{1,4Joxazin-3-yI)metanol. -yl)-4-(5-metoxypyridin- 11. Duge phdm, dé phong hodc diéu tri bénh lién quan dén hoat tinh déi khéng cla thy thé vaniloit-1, chira hoat chét la hop chdt ho&c muéi duge dung cita nd theo diém 1, trong d6 bénh lién quan dén hoat tinh d6i khéng cia thy thé vaniloit-1 duge chon -25-15395 td nhém bao gém ching dau cép tinh, chimg dau man tinh, chimg dau thin kinh, chimg dau hau phdu, chimg dau mira dau, bénh dau khép, bénh than kinh, tn thuong day thin kin, bénh thin kinh do bénh déi théo duémg gay ra, chtmg bénh than kin, bénh viém da than kinh, bénh dt quy, bénh ting nhay cdm bang quang, bénh béo phi, hi chimg rdi loan tiéu héa, bénh ho, bénh hen, bénh phdi tic nghén man, bénh glécém, bénh bing, bénh vay nén, bénh ngiza, chtmg n6n, bénh kich img 6 da, mat ho&e mang nhiy, bénh viém thue quan héi lu, bénh loét da day t4 wang, bénh viém, va td hop cia cdc bénh nay. 12. Duge phim, chira hop chét ho&c musi durge dung cia né theo diém 1 va chét mang duge dung. -26-