ISOLASI DNA LEUKOSIT MENGGUNAKAN METODE SALTING OUT

ISOLATION OF LEUKOCYTES USING SALTING OUT METHOD

Salfi Anjani*, Reynaldi Zulfikar, Novita Sanjaya, Iffi Rizkiya, Nurullita Qisti, Chloe Jasmine,
Apriani Mutmainah, Risqa Auliya
Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
*Corresponding author: salfianjani31@gmail.com

Abstrak
Leukosit merupakan bagian darah yang memiliki inti sel yang dapat diambil materi genetiknya
berupa DNA. Isolasi DNA leukosit digunakan metode salting out. Metode salting out dilakukan
dengan penambahan garam konsentrasi tinggi yang akan menurunkan kelarutan protein. Isolasi
DNA leukosit dilakukan dengan cara pelisisan membran sel, ekstraksi dan pengendapan DNA,
pemurnian DNA serta pengawetan DNA. DNA yang telah diisolasi dilakukan uji kualitatif
menggunakan elekroforesis horizontal dengan gel agarosa 1% dan uji kuantitatif menggunakan
Spektrofotometer UV-Vis. Hasil uji kualitatif menunjukkan perbedaan migrasi fragmen DNA pada
sampel DNA yang diberi perlakuan RNAse dan proteinase K, RNAse, proteinase K, dan tanpa
perlakuan. Uji kuantitatif DNA menunjukkan hasil kemurnian tertinggi didapatkan pada sampel 1,
yaitu sebesar 1,85 dan hasil kemurnian terendah didapatkan pada sampel 4, yaitu sebesar 1,70.
Kata kunci: Isolasi DNA; Leukosit; Salting out; Uji Kualitatif; Uji Kuantitatif

Abstract
Leukocytes are a part of the blood that has a cell nucleus whose genetic material can be taken in the form of
DNA. Isolation of leukocyte DNA is used the salting-out method. The salting out method is done by adding
high concentration salt which will reduce protein solubility. Isolation of leukocyte DNA is done by stripping
membranes, DNA extraction and DNA deposition, DNA purification and DNA preservation. The isolated
DNA was carried out by qualitative testing using horizontal electrophoresis with 1% agaros gel and
quantitative tests using a UV-Vis spectrophotometer. The qualitative test results showed differences in DNA
fragments in DNA samples treated with RNAse and Proteinase k, RNAse, Proteinase K, and without
treatment. The quantitative DNA test showed the highest purity results obtained in sample 1, which was
equal to 1.85 and the lowest purity results were obtained in sample 3, which was equal to 1.70.
Keywords: DNA isolation; Leukocytes; Qualitative test; Quantitative test; Salting out

PENDAHULUAN (oksigen, nitrogen dan karbon dioksida).

DNA adalah polimer asam nukleat yang
tersusun secara sistematis dan merupakan
pembawa informasi genetik yang diturunkan
pada keturunannya. Isolasi DNA merupakan
tahap awal yang harus dikerjakan dalam
rekayasa genetika sebelum melangkah ke
tahap selanjutnya. Isolasi DNA dijadikan
sebagai tahap yang mutlak dalam serangkaian
penelitian di bidang biologi molekuler yang
bertujuan untuk mendapatkan DNA murni
(Wilson et al, 2010).
DNA manusia dapat diisolasi melalui
darah. Darah manusia terdiri atas plasma
darah, globulus lemak, substansi kimia
(karbohidrat, protein dan hormon), dan gas
Plasma darah terdiri atas eritrosit (sel darah
merah), leukosit (sel darah putih) dan
trombosit (platelet). Menurut Dellman dan
Brown, (1989) terdapat perbedaan antara sel
darah putih dengan sel darah merah. Sel darah
putih memiliki bentuk yang khas terdiri dari
nukleus, sitoplasma, organel dan bersifat
mampu bergerak pada keadaan tertentu.
Sedangkan sel darah merah tidak berinti,
berbentuk cawan bikonkaf dan bersifat pasif.
Komponen darah yang diisolasi yaitu sel
darah putih. Sel darah putih dijadikan pilihan
karena memiliki nukleus, dimana terdapat
DNA di dalamnya.
1
 Isolasi DNA dengan metode salting out
merupakan teknik konvensional dimana
protein diendapkan menggunakan garam
konsentrasi tinggi dengan asumsi bahwa
garam dengan konsentrasi tinggi akan
mengurangi kelarutan protein sehingga
protein akan mengendap (Rapley et al, 2008).
Isolasi DNA memiliki beberapa
tahapan, yaitu: (1)Isolasi sel; (2)Lisis
membran sel; (3)Ekstraksi dalam larutan;
(4)Purifikasi; dan (5)Presipitasi. Prinsip-
prinsip dalam melakukan isolasi DNA ada 2,
yaitu sentrifugasi dan presipitasi. Prinsip
utama sentrifugasi adalah memisahkan
substansi berdasarkan berat jenis molekul
dengan cara memberikan gaya sentrifugal
sehingga substansi yang lebih berat akan
berada di dasar, sedangkan substansi yang
lebih ringan akan terletak di atas. (Rapley et
al, 2008).
Uji kuantitatif DNA merupakan analisis
untuk menentukan DNA yang terdapat dalam
suatu zat atau komponen zat yang sebelumnya
telah diketahui keberadaan DNA plasmidnya
dalam larutan sampel dengan cara uji
kualitatif (Larasati dalam Hapsari, 2012).
Pengujian dilakukan dengan Spektrofotometri
UV-Vis. Alat ini menggunakan dua buah
sumber cahaya berbeda yaitu dari Sumber
cahaya UV dan sumber cahaya tampak. Sinar
UV mempunyai panjang gelombang 190-380
nm (Riyadi dalam Hapsari, 2012).
DNA yang mengandung basa-basa
purin dan pirimidin dapat menyerap cahaya
UV. Pita ganda DNA dapat menyerap cahaya
UV pada 260 nm, sedangkan kontaminan
protein atau phenol dapat menyerap cahaya
pada 280 nm. Dengan adanya perbedaan
penyerapan cahaya UV ini sehingga
kemurnian DNA dapat diukur dengan
menghitung nilai absorbansi 260 nm dibagi
dengan nilai absorbansi 280, dan nilai
kemurnian DNA berkisar antara 1,8-2
(Fatchiyah et al, 2011).
Elektroforesis adalah suatu teknik
pemisahan molekul seluler berdasarkan
ukurannya dengan menggunakan medan
listrik yang dialirkan pada suatu medium yang
mengandung sampel yang akan dipisahkan.
Teknik ini bisa digunakan dengan
memanfaatkan muatan listrik yang ada pada
makromolekul (Yuwono, 2005).
Pengujian kualitatif DNA digunakan
metode standar untuk identifikasi, pemisahan
dan purifikasi fragmen DNA adalah
menggunakan elektroforesis gel agarosa.
Migrasi elektroforesis DNA melalui gel
agarosa, arus listrik, dan suhu. Molekul DNA
yang bermuatan negatif saat elektroforesis
pada gel agarosa berbanding terbalik dengan
konsentrasi gelnya. Migrasi struktur yang
kecil akan lebih cepat dibandingkan struktur
molekul yang besar dalam proses melewati
pori-pori gel (Fatchiyah et al, 2011). Tujuan
dari praktikum ini adalah agar praktikan
mampu melakukan uji kuantitaif DNA dengan
menggunakan spektrofotometer uv-vis dan
mampu melakukan uji kualitataif DNA
dengan metode elektroforesis gel agarose.
MATERIAL DAN METODE
Penelitian dilakukan di Laboratorium
Mikrobiologi, Pusat Laboratorium Terpadu,
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta pada bulan
Oktober 2018. Alat yang digunakan pada
praktikum Isolasi DNA leukosit yaitu
microtube, mikropipet, sentrifuge, vortex,
inkubator, freezer, elektroforesis gel agarose,
spektrofotometer uv-vis, kuvet dan
transiluminator UV. Bahan yang digunakan
yaitu sampel darah, RBC lysis solution,
larutan pelisis sel, RNase A, proteinase K,
NH4COOH, etanol dingin, etanol 70%, buffer
TE, agarose 1%, buffer TAE, Peq Green,
DNA Ladder, Sampel DNA, Running Buffer,
dan Loading Dye.
Isolasi DNA Leukosit
Cara kerja pada praktikum Isolasi
DNA darah yaitu pertama 1ml darah
dimasukan kedalam tabung EDTA-vacutainer,
kemudian dipindahkan ke tabung sentrifuge
dan ditambahkan 3ml RBC lysis solution,
sampel di sentrifuge 1500 x g pada suhu
ruang selama 10 menit, lalu supernatan
dibuang, jika pelet masih berwarna merah
maka diulangi pemberian RBC lysis solution,
setelah pelet berwarna putih ditambahkan
187,5µL larutan pelisis sel, kemudian
dihomogenkan dengan cara pipeting, sampel
diberi perlakuan RNase A 10mg/L +
proteinase K 40µL 30 menit pada suhu 60oC,
RNase A 10mg/L, Proteinase K 40µL 30
menit pada suhu 60oC, dan tanpa perlakuan
2
apapun, lalu ditambahkan larutan NH4COOH
125µL dan di vortex. Sampel disentrifugasi
dengan kecepatan 10.000 x g pada suhu 4 oC
selama 15 menit, kemudian akan
menghasilkan presipitat berwarna cokelat
muda, jika belum maka ditambahkan larutan
presipitasi protein, supernatan (yang
mengandung DNA) dipindahkan ke tabung
yang berisi 1,5 ml etanol absolut, kemudian
tabung dikocok perlahan sampai terlihat
benang DNA berwarna putih, sampel
dipindahkan ke tabung baru dengan
menggunakan mikropipet, kemudian
disentrifuge dengan kecepatan 10.000 x g
pada suhu 4 oC selama 10 menit, supernatan
dibuang dan pelet ditambah etanol 70%, lalu
di sentrifuge dengan kecepatan 10.000 x g
pada suhu 4 oC selama 15 menit, supernatan
dibuang dan dikering anginkan, DNA di
rehidrasi dengan buffer TE 30µL dan
diinkubasi pada suhu 37 oC selama 2 jam,
sampel disimpan pada suhu -20 oC.
Uji Kualitatif DNA
Pada metode elektroforesis gel agarose hal
yang pertama kali dilakukan yaitu adalah
proses pembuatan gel agarose 1% dengan
melarutkan 0,25gr gel agarose ke dalam 25ml
larutan buffer TAE, larutan agarose kemudian
dimasukan ke microwave dan ditetesi peq
green, kemudian larutan gel dituang ke dalam
cetakan dan dipasangkan sisir pembentuk
sumuran, bila gel sudah membeku dilepaskan
sisir sumuran, lalu gel diletakkan pada tanki
elektroforesis dengan sumuran terletak pada
kutub negatif, dituangkan buffer TAE sampai
menutupi permukaan dari gel agarose, sampel
yang telah dicampur dengan loading dye
kemudian di pipet ke dalam masing-masing
sumuran dan dipastikan agar sampel berada di
dalam sumuran. Setelah memasukkan sampel
kemudian dimasukkan pula marker DNA
ladder, dihubungkan tanki elektroforesis
dengan power supply dan dijalankan alat pada
100V selama 30 menit. Setelah selesai
diangkat wadah pencetak dan gel didorong
keluar dari wadah pencetak, lalu gel
diletakkan diatas transiluminator UV untuk
mendeteksi pita-pita DNA.
Uji Kuantitatif DNA
Spektrofotometer disiapkan dengan
panjang gelombang 260nm, kemudian alat di
setting untuk mendeteksi kuvet blanko dan
sampel, setelah alat dijalankan kemudian
dibaca nilai absorbansi dari masing-masing
sampel, kemudian dihitung nilai kemurnian
DNA dengan menggunakan rumus
perhitungan kemurnian DNA.
HASIL
Uji kualitatif dilakukan dengan
menggunakan metode Elektroforesis gel
agarose dan sampel yang digunakan yaitu
DNA hasil isolasi. Pada sumuran pertama
berisi marker Gene Ruller 1kb DNA Ladder
(Thermo Scientific) yang digunakan sebagai
acuan untuk mengukur panjang dari pita yang
dihasilkan oleh sampel. Pada sumuran kedua
berisi sampel DNA yang diberi perlakuan
proteinase K + RNAse A, pita yang
dihasilkan memiliki panjang melebihi marker
DNA ladder sehingga tidak dapat diketahui
berapa panjang dari pita tersebut. Pada
sumuran ketiga berisi sampel DNA yang
diberi perlakuan RNAse A, pita yang
dihasilkan memiliki panjang yang melibihi
marker DNA ladder sehingga tidak dapat
diketahui berapa panjang dari pita tersebut.
Pada sumuran keempat berisi sampel DNA
yang diberi perlakuan proteinase K, pita yang
dihasilkan memiliki panjang yang melebihi
marker DNA ladder sehingga tidak dapat
diketahui berapa panjang dari pita tersebut.
Pada sumuran kelima berisi sampel DNA
yang tanpa diberi perlakuan apapun, pita yang
dihasilkan memiliki panjang melebihi marker
DNA ladder sehingga tidak dapat diketahui
berapa panjang dari pita tersebut. Dan pada
sumur keenam berisi marker Gene Ruller 1kb
DNA Ladder (Thermo Scientific).
Jika diurutkan panjang fragmen DNA
dari yang terbesar ke yang terkecil
berdasarkan hasil uji kualitatif yaitu pada
sampel DNA dengan perlakuan proteinase K
+ RNAse A, sampel DNA dengan perlakuan
RNAse A, sampel DNA dengan perlakuan
proteinase K, dan DNA tanpa perlakuan
apapun. Hal ini menunjukkan pemberian
proteinase K dan RNAse A dapat
memurnikan fragmen DNA jika dibandingkan
dengan yang tanpa diberi perlakuan apapun.
3

Gambar 1. Hasil migrasi fragmen DNA
darah
Tabel 1. Keterangan perlakuan pada tiap
sumuran
Sumuran
(kiri ke Keterangan Perlakuan
kanan)
1 M (Marker)
2 Proteinase K + RNAse A
3 RNAse A
4 Proteinase K
5 -
6 M (Marker)
Uji kuantitatif dilakukan
menggunakan Spektrofotometer UV-VIS
untuk mengukur nilai kemurnian dan
konsentrasi dari sampel DNA hasil isolasi.
Sampel yang diberi perlakuan proteinase K +
RNAse A memiliki nilai kemurnian 1,857 dan
konsentrasi 4350 µg/L. Sampel yang diberi
perlakuan RNAse A memiliki nilai kemurnian
1,796 dan konsentrasi 4850 µg/L. Sampel
yang diberi perlakuan proteinase K memiliki
nilai kemurnian 1,706 dan konsentrasi 4350
µg/L. Dan sampel yang tidak diberi perlakuan
apapun memiliki nilai kemurnian 1,766 dan
konsentrasi 4150 µg/L.
Tabel 2. Hasil uji kuantitatif DNA darah
Konsentrasi
No Sampel Kemurnian Keterangan
µg/L
Proteinase
1 Leukosit 1,857 4350 K dan
RNAse A
2 Leukosit 1,796 4850 RNAse A
Proteinase
3 Leukosit 1,706 4350
K
4 Leukosit 1,766 4150 -
PEMBAHASAN
Isolasi DNA Leukosit
Isolasi DNA Leukosit yang dilakukan
pada praktikum kali ini menggunakan metode
salting out, yaitu memisahkan protein plasma
dari protein intraselular dan protein membran
maupun dari bagian sel lain dengan teknik
sentrifugasi serta pengendapan protein dengan
larutan garam konsentrasi tinggi. Isolasi DNA
pada manusia dapat diambil dari darah.
komponen dari darah salah satunya adalah
leukosit yang memiliki inti sel (nukleus) yang
terdapat DNA didalamnya (Kimball, 2005).
Tiga tahapan utama isolasi DNA yaitu,
pelisisan sel, ekstraksi dan pemurnian
(purifikasi).
Tahap pelisisan sel pada praktikum
isolasi DNA leukosit kali ini dilakukan
menggunakan larutan pelisis sel darah merah
(RBC lysis solution) yang memiliki fungsi
memecah sel darah merah (eritrosit) agar
terpisah dari komponen lain (Pratiwi, 2008).
Ketika pelet yang dihasilkan masih berwarna
merah maka proses pemberian RBC lysis
solution terus diulangi, karena hal tersebut
menandakan masih adanya sel darah merah.
Kemudian menggunakan larutan pelisis sel
yang memiliki fungsi masing-masing dari
komposisinya yaitu Tris-HCL (sebagai
buffer), EDTA (merusak sel dengan cara
mengikat Mg2+), serta SDS 0.5% (memiliki
sifat amfipatik yang dapat merusak dinding
sel) (Tenriulo, 2001 ; Gaffar, 2007).
4
 Tahap kedua yaitu proses ekstraksi,
yang bertujuan untuk mengendapkan protein
histon sehinga memisahkan untai DNA yang
menggulung (coiling) dan berikatan dengan
protein histon yang membuat DNA menjadi
terlihat mengambang seperti benang-benang
putih pada supernatan (Kimball,2005;
Lewisto, 2002; LPCH 2005). Proses ekstraksi
ini menggunakan proteinase K dan RNAse A.
Proteinase K merupakan enzim yang
berfungsi untuk mendenaturasi protein,
sehingga setelah disentrifugasi akan
membentuk 2 fase (fase organik pada lapisan
bawah dan fase aqueous pada lapisan atas.
DNA dan RNA berada pada fase aqueous.
RNAse A merupakan enzim yang digunakan
untuk menghancurkan RNA yang berperan
sebagai kontaminan selain protein dan fenol
(Clark, 2009). Perlakuan yang berbeda
berlaku saat sampel diberikan proteinase K
dan RNAse A. Saat diberikan proteinase K,
sampel harus diinkubasi selama 30 menit pada
suhu 60°C. Sedangkan RNAse A selama 15
menit pada suhu 37°C. Hal tersebut untuk
mengoptimalkan kerja enzim yang bekerja
pada suhu tertentu. Setelah diberikan enzim-
enzim tersebut, sampel ditambahkan
NH4COOH (ammonium format) yang
merupakan garam tinggi yang mengurangi
kelarutan protein (salting out) sehingga terjadi
presipitasi protein. Sampel disentrifugasi,
maka presipitat protein akan terbentuk pada
dasar tube berwarna coklat muda. Supernatan
yang didapat dipindah ke tube yang berisi
etanol absolut atau isopropanol, kemudian
akan terlihat benang-benang DNA. Menurut
Hidayati (2016) penggunaan etanol dingin
akan menurunkan aktivitas molekul air
sehingga memudahkan presipitasi DNA.
Setelah itu disentrifugasi, maka DNA akan
menggumpal dan mengendap pada dasar tube
(pelet).
Tahap ketiga yaitu proses pemurnian
(purifikasi) DNA. Pemurnian DNA
menggunakan etanol 70% yang berfungsi
sebagai fase pencucian DNA untuk
menghilangkan residu yang masih tersisa
setelah presipitasi. Setelah dicuci dengan
etanol 70% kemudian etanol 70% dibuang
dan DNA yang berada dalam bentuk pelet
dikeringanginkan. Menurut Surzycki (2000)
cara tersebut untuk menghilangkan residu
etanol karena etanol mudah menguap. Tahap
selanjutnya adalah rehidrasi DNA dalam
Buffer TE pada suhu -20°C yang berfungsi
untuk menjaga DNA agar tidak rusak dan
dapat disimpan selama berminggu-minggu
(Verkuil et al, 2008).
Uji Kualitatif DNA Leukosit
Uji kualitatif DNA leukosit pada
percobaan ini dilakukan dengan menggunakan
metode elektroforesis horizontal gel agarosa.
Menurut Hapsari (2012), proses elektroforesis
diawali dengan memasukkan sampel DNA ke
sumuran gel yang ditempatkan di dalam
larutan penyangga dan dialirkan listrik dengan
kutub yang terpisah antara sisi satu dengan
yang lainnya. Molekul DNA yang bermuatan
negatif pada rangka gula fosfat akan
bermigrasi menuju elektroda positif.
Pada proses elektroforesis digunakan
beberapa bahan seperti buffer TAE, Peq
Green, dan loading dye. Buffer TAE (Tris-
HCl, Asam asetat, EDTA) berfungsi sebagai
penyangga dan media penghantar listrik yang
baik. Muatan listrik yang berada pada larutan
TAE akan membawa fragmen-fragmen DNA
bergerak melalui matriks-matriks pada gel
agarosa. DNA dengan fragmen pendek akan
bermigrasi lebih jauh dibanding DNA dengan
fragmen panjang (Ardhana, 2011). Peq Green
berperan sebagai zat pewarna dsDNA, ssDNA
dan RNA. Pewarna Peq Green akan
menyisip diantara basa nitrogen (pada ikatan
hidrogen) sehingga memendarkan DNA jika
dilihat dibawah sinar UV (Brown, 2002).
Loading dye berfungsi untuk menambah
densitas DNA, sehingga DNA akan berada di
dasar sumuran. Loading dye ini mengandung
pewarna bromphenol blue untuk
memudahkan meletakkan sampel DNA
kedalam sumur. Selain itu, loading dye dapat
bergerak ke arah anoda dengan laju yang
dapat diperkirakan (Hapsari, 2012).
Sumuran pertama pada hasil
elektroforesis di atas berupa marker atau
DNA Ladder. Menurut Martin (1996), Marker
adalah segmen DNA yang spesifik dan telah
diketahui ukurannya. Marker berfungsi untuk
mengetahui ukuran DNA hasil amplifikasi.
Berat molekul suatu fragmen DNA dapat
diperkirakan dengan membandingkan laju
5
migrasinya dengan laju migrasi fragmen DNA
marker (Nugroho dan Rahayu, 2016).
Pada sumuran kedua adalah sampel
DNA yang diberi perlakuan penambahan
enzim Proteinase K dan RNAse A.
Penambahan Proteinase K bertujuan untuk
mereduksi protein dan reagen pelisis supaya
komponen DNA dalam sitoplasma sel bisa
keluar dan dapat diisolasi (Faatih, 2009).
Fungsi RNAse A adalah mendegradasi RNA
yang mengotori DNA (Utami et al, 2012).
Sumuran ketiga merupakan sampel DNA
yang diberi perlakuan penambahan enzim
RNAse A saja. Sumuran keempat adalah
sampel DNA yang diberi perlakuan
penambahan enzim Proteinase K saja.
Sedangkan sumuran kelima adalah sampel
DNA yang tidak diberi perlakuan apapun.
Berdasarkan hasil pengukuran dengan
gene ruler 1 Kb, terukur ukuran fragmen
DNA pada keempat sumuran adalah >10 Kb.
Menurut Fabre et al (2017) ukuran DNA
leukosit adalah sekitar 20 kbp. Hal ini sesuai
dengan hasil praktikum uji kualitatif dimana
molekul DNA leukosit 20 Kbp >10 Kbp. Pada
hasil visualisasi pita DNA terlihat miring,
menurut Electrophoresis trouble shoot hal
tersebut dikarenakan gel yang tidak
sepenuhnya terendam kedalam buffer, posisi
yang tidak benar, atau karena terdapatnya
gelembung pada sumur atau gel.
Uji Kuantitatif DNA Leukosit
Uji kuantitatif DNA leukosit pada
percobaan ini dilakukan dengan menggunakan
alat spektrofotometer uv-vis dengan
mengukur nilai absorbansi sampel yang
nantinya akan didapatkan hasil berupa nilai
kemurnian dan konsentrasi sampel.
Menurut Sambrook et al, (1989)
sampel DNA dikatakan murni jika nilai
absorbansi 260nm terhadap nilai absorbansi
280nm berada di range antara 1,8 - 2,0. Jika
nilai kemurnian <1,8 maka DNA dikatakan
masih mengandung protein. Sedangkan jika
nilai kemurnian >2,0 maka DNA masih
mengandung RNA. Berdasarkan dari hasil uji
kuantitatif, pada sampel 1 nilai kemurniannya
adalah 1,857 yang berarti kemurnian >1,8.
Hal ini disebabkan karena pemberian
perlakuan penambahan proteinase K dan
RNAse A yang bertujuan untuk
mengendapkan protein dan mendegradasi
RNA sehingga didapatkan nilai kemurnian
yang bagus.
Pada sampel 2 yang diberi perlakuan
penambahan RNAse A saja didapat nilai
kemurniannya sebesar 1,796. Selisih sedikit
dengan nilai kemurnian yang harus dicapai
yaitu 1,8. Karena berada dibawah 1,8 maka
isolat DNA terindikasi masih mengandung
kontaminan protein. Hal ini sesuai dengan
perlakuan yang ditambahkan yaitu enzim
RNAse A. Isolat DNA bebas dari kontaminan
RNAse tetapi masih terkontaminasi protein.
Nilai kemurnian sampel 3 yang diberi
perlakuan enzim proteinase K saja yaitu
sebesar 1,706 dan berada <1,8. Hal ini
mengartikan bahwa masih terdapatnya
kontaminan protein pada isolat DNA.
Pada sampel 4 yang tanpa diberi
perlakuan apapun nilai kemurniannya adalah
1,766 yang berarti kemurnian <1,8. Hal ini
jelas disebabkan karena pada sampel 4 tidak
ada penambahan Proteinase K sehingga masih
terdapat kontaminan seperti protein yang
mengkontaminasi DNA.
Menurut Komalasari (2009) banyak
sedikitnya DNA yang dihasilkan dipengaruhi
oleh beberapa faktor saat proses ekstraksi
DNA dan penambahan lisis buffer. Pada saat
ekstraksi, kecekatan termasuk faktor yang
paling berpengaruh karena pada tahap lisis sel
dan presipitasi pengambilan supernatan
dilakukan per sampel sehingga pada beberapa
sampel telah terjadi pengendapan.
SIMPULAN DAN SARAN
Setelah dilakukan uji kualitatif pada
dna leukosit dapat diketahui bahwa pada
sampel hasil isolasi yang dibandingkan
dengan marker DNA ladder 1kb diketahui
bahwa band yang muncul pada sampel berada
pada range > 10.000bp. Hal ini disebabkan
karena memang range DNA leukosit yaitu
sekitar 20kbp. Sedangkan pada hasil uji
kuantitatif diketahui bahwa kemurnian DNA
terbesar didapatkan pada sampel 1 yang diberi
penambahan proteinase K dan RNAse A,
sedangkan kemurnian terkecil yaitu pada
sampel 4 yang tanpa diberi penambahan
apapun.
REFERENSI
6
Ardhana, P. (2011). Unjuk Kerja Aplikasi
Sistem Pendinginan pada Alat
Elektroforesis Termoelektrik. Skripsi.
Departemen Teknik Mesin, Fakultas
Teknik UI.
Clark, D.P dan N.J. Pazdernik. 2009.
Biotechnology Applying the Genetic
Revolution. New York: Academic Press.
Dellman, H. D dan E. M. Brown.
(1989). Buku Teks Veteriner I.
Terjemahan : R.Hartanto, Universitas
Indonesia Press. Jakarta.
Faatih, M. (2009). Isolasi dan digesti DNA
kromosom. Jurnal Penelitian Sains &
Teknologi, 10 (1): 61-67.
Fabre, A.L., Colotte,M., Luis,A., Tuffet, S.,
Bonnet,S.,and Henerberg,P .(2017).
High DNA stability in white blood cells
and buffy coat lysates stored at ambient
temperature under anoxic and
anhydrous atmosphere. PLOS One.
12(11).
Fatchiyah, Arumingtyas E.L., Widyarti, S.,
dan Permana, S. (2011). Teknik
Analisis Biologi Molekuler. Malang:
Jurusan Biologi Universitas Brawijaya.
Hapsari, Rizqi .(2012). Uji Kuantitatif Dan
Kualitatif DNS Pule Pandak (Rauvolfia
serpentina L.). Skripsi. Program
Sarjana. Universitas Sebelas Maret.
Surakarta.
Hidayati dan Aulawi, T. (2016). Uji Kualitatif
dan Kuantitatif Hasil Isolasi DNA
Berasal Dari Darah, Feces dan Urine
Pada Ternak Sapi, Kerbau dan
Kambing. Skripsi. Fakultas pertanian
dan peternakan UIN Sultan Syarif
Kasim Riau.
Kimball, J.W. 2005. Biologi Jilid 3 Edisi
Kelima. Jakarta : Erlangga.
Martin, R., (1996), Gel Electrophoresis:
Nucleid Acids. Bios Scientific Publisher.
Nugroho, E.d., Rahayu, D.A. (2016).
Penentuan Praktikum Bioteknologi.
Yogyakarta: Deepublish.
Pratiwi, E.B. 2008. Sintesis dan Pengklonan
Fragmen Gen tat ( Transaktivator)
HIV-1 ke dalam Vektor Ekpresi
Prokariot pQE-80L. Depok: UI Press.
Rapley, R. Et al. (2008). The Manipulation of
Nucleic Acids: Basic Tools and
Techiques in Molecular Biomethods
Handbook Second Edition. NJ, USA:
Humana Press.
Surzycki, S. (2000). Basic techniques in
molecular biology. Germany: Springer-
Verlag Berlin Heidenberg.
Tenriulo, A. E dan Suryati, A. Parenrengi.
2001. Ekstrak DNA Rumput Laut
Kppaphycus alvarezii dengan Metode
Fenol Kloroform. Makassar: Jurusan
Kimia, Fakultas MIPA, Universitas
Hasanuddin. Vol. 2 no. 2 ISSN 1411-
2132.
Utami, Annisa dkk. 2012. Variasi Metode
Isolasi DNA Daun Temulawak
(Curcuma xanthorrizha roxb.). Bogor:
FMIPA IPB Departemen Pusat Studi
Biofarmaka.
Verkuil, E. v. P., Alex van B., & John P. H.
(2008). Principles and technical
aspects of PCR amplification. 
Wilson, Keith and John. (2010). Biochemistry
and Molecular Biology. England:
Cambridge University.
Yuwono, Triwibowo. (2005). Biologi
Molekuler. Yogkarta: Penerbit Erlangga