Antecedents històrics del descobriment de l’ADN

El descobriment de l'àcid desoxiribonucleic (ADN) va canviar per sempre la comprensió

de la genètica, l'estudi sobre com es transmet l'herència física i fisiològica de generació
en generació. La molècula d'ADN va ser identificada per primera vegada en la segona
meitat del segle XIX. Un segle després, a mitjan segle XX, va començar l'edat d'or dels
descobriments genètics, quan es va definir l'estructura i el funcionament del codi
genètic.

1869: Friedrich Miescher,

l'ADN va ser aïllat per primera vegada en 1869 pel biòleg suís Johan Friedrich
Miescher. Mentre estudiava la composició química de les cèl·lules blanques de la sang,
va observar que dins de les cèl·lules hi havia una substància aïllada rica en fosfats, lliure
de sofre i resistent a la proteasa, cosa que no es va correspondre amb l'estructura típica
dels lípids o proteïnes. Miescher va batejar aquesta nova molècula com a nucleina, ja
que era en el nucli de totes les cèl·lules estudiades.

1891: Albrecht Kossel,

El metge alemany Albert Kossel va descobrir l'existència d'hidrats de carboni i

compostos nitrogenats o bases que va anomenar "adenina", "guanina", "citosina" i
"timina" dins de la molècula d'ADN. Aquest descobriment li va valer el Premi Nobel de
medicina el 1910.

1929: Phoebus Levene

Levene va detectar la presència d'un grup fosfat i un tipus de sacàrid anomenat ribosa,
dos components essencials en la formació de DNA. Posteriorment, el bioquímic va
descobrir que el grup fosfat, les bases nitrogenades i el sacàrid s’unien per formar
nucleòtids.
1920 - 1950: Estructura de nucleòtids. 1944: Ostwald Avery, Maclyn McCarty –
Durant els anys següents es van realitzar diversos experiments que van concloure que
l'ADN era la molècula responsable de l'herència: els estudis del microbiòleg Frederick
Griffith, els descobriments d'Oswald Avery en 1944, i els experiments d'Alfred Hershey
i Martha Persecució en 1952.
1950: Edwin Chargaff –
Estableix les Regles de Chargaff
Al principi, es creia que els àcids nucleics eren la repetició monòtona d'un
tetranucleòtid, de manera que no tenien prou variabilitat com per ser la molècula
biològica que emmagatzemava la informació. No obstant això, Chargaff (1950) va
mostrar que les proporcions de les bases del nitrogen eren diferents en diferents
organismes, encara que es seguien algunes regles. Aquestes regles de Chargaff
s'apliquen en organismes a on material hereditari del qual es desdob es una doble
l'hèlix de AND I són els següents:
  La proporció de la Adenina (A) és igual a la de Timina (T). A-T. La relació entre
adenina i timina és igual a la unitat (A/T 1).
 La proporció de guanina (G) és igual a la de la citosina (C). G. C. La relació entre
Guanina i Citosina és igual a la unitat (G/C-1).
 La proporció de bases púriques (A + G) és igual a la de les bases pirimidíniques
(T + C). (A + G) (T + C). La ràtio entre (A + G) i (T + C) és igual a la unitat (A +
G)/(T + C)-1.
 No obstant això, la proporció entre (A + T) i (G + C) era característica de cada
organisme, podent adoptar diferents valors segons les espècies estudiades.
Aquest resultat indicava que els àcids nucleics no eren la repetició monòtona
d'un tetranucleòtid. Hi havia variabilitat en la composició de les bases de
nitrogen.
1953: Jim Watson i Francis Crick
L'avanç més important en aquest camp va arribar a 1953, quan el físic Francis Crick i
el biòleg James Watson van demostrar l'estructura de doble hèlix de l'ADN. Van rebre
el Premi Nobel de medicina el 1962, amb el físic Maurice Wilkins. No obstant això, la
seva troballa no hauria estat possible sense el treball de la química Rosalind Franklin,
responsable de la famosa fotografia 51 que revela la forma helicoïdal de la molècula
d'ADN. Wilkins, que va compartir un laboratori amb ella, va prendre la fotografia sense
el seu permís i gràcies a això van fer el gran descobriment.

1956: Arthur Kornberg (PN 1959) y Severo Ochoa (PN 1959)

Ochoa i Kornberg es van interessar pel mecanisme de síntesi d'àcids nucleics a partir
de la publicació de Watson i Crick en 1953 del model de doble hèlix d'ADN, que va
suggerir com es podria dur a terme aquesta síntesi. En pocs anys, després d'un treball
dur, Severo i Arthur es van aïllar independentment (encara que Kornberg va fer una
estada al laboratori d'Ochoa per aprendre les tècniques d'anàlisi enzimàtica i, en certa
manera, pot considerar-se el seu "deixeble") dos enzims que podria explicar els
mecanismes moleculars de la síntesi de DNA i ARN.
Kornberg va aïllar específicament dels bacteris omnipresents en l'intestí humà,
Escherichia coli, l'enzim ADN polimerasa que, in vitro i sobre l'ADN obtingut de
diferents organismes, va ser capaç de sintetitzar cadenes d'ADN complementàries
incorporant novament els 4 desoxiribonucleòtids (adenina, timina, citosina, guanina)
que formen part d'aquestes molècules. Ochoa, per la seva banda, l’aïllà d'un altre
bacteri, Azotobacter vinelandii, la polinucleòtid fosforilasa que també in vitro i a partir
dels 4 ribonucleòtids (A, C, G i uracil en lloc de timina) de l'ARN, era capaç de sintetitzar
cadenes d’aquesta macromolècula, i suggeria que podria ser l'enzim que copiava la
informació que porta ADN a ARN in vivo.
Més endavant es va veure que la polimerasa de Kornberg era la polimerasa I que actua
als bacteris per reparar i processar el DNA i que la polimerasa III és la responsable de
la síntesis. Per altre banda, es va descobrir que l’enzim aïllada per Ochoa en realitat
degrada l’ARN i en tot cas afageis de forma específica alguns ribonucleòtids al final de
la cadena.
1957: Alexander Todd (PN 1957),
El seu treball principal va ser l'estudi i síntesi de nucleòtids, dels quals va descobrir que
poden actuar com a coenzims. En 1949 va sintetitzar l'ATP (adenosina Trifosfat), que
és un derivat de nucleòtids i constitueix la principal reserva energètica del cos; després
el FAD (flavina-adenina dinucleòtid) i més tard trifosfat d'uridina. Les seves
contribucions en nucleòtids li van valer el Premi Nobel de Química 1957. Aquests
inputs facilitarien posteriorment el descobriment de l'ADN com a molècula
transmissora de l'herència.

1961-65: M. Niremberg, J. Matthei, Gorind Khorana (PN1969), Severo Ochoa (PN

1959),vàren desenvolupar el codi genètic.
En 1961 Marshall W Nirenberg i Johann H Matthaei van desxifrar la primera lletra del
codi; es va trobar que la seqüència d'ARN UUU codifica l'aminoàcid fenilalanina.
Posteriorment, Har Gobind Khorana va demostrar que la seqüència repetitiva de
nucleòtids UCUCUCUCUCUC codifica la seqüència d'aminoàcids Serina-leucina-Serina-
leucina. En 1965, principalment gràcies a l'obra de Nirenberg i Khorana, el codi genètic
s'havia desxifrat completament. Es va trobar que cada grup de tres nucleòtids
(coneguts com a codons) corresponia a un aminoàcid, i que l'ordre dels codons
determina l'ordre dels aminoàcids en la proteïna resultant (i per tant les seves
propietats químiques i biològiques).
1972: Paul Berg, (PN 1980), estableix les bases de la tecnologia de recombinació
del DNA
L'experiment de gen-splicing fet el 1971 per Berg implicava empalmar una mica de
l'ADN del virus bacterià conegut com Lambda a l'ADN del virus SV40, l'amfitrió natural
del qual és el mico. L'ADN d'ambdós virus es produeix en bucles tancats. En el primer
pas de l'experiment de Berg, els bucles van ser tallats en un sol lloc per un enzim, EcoRI.
Seguidament, perquè els extrems d'aquestes molècules ara-lineals es tornin a ajuntar,
van ser modificats per dos altres enzims utilitzant un procediment desenvolupat pels
col·legues de Stanford. Llavors els dos tipus d'ADN es barrejaven junts on es reunien
en bucles de tal manera que els nous bucles combinaven ADN des de cada font.
L'experiment de Berg va resultar en el primer ADN recombinant (rDNA) fet per l'home
Va rebre per aquest treball elPremi Nobel 1980 de Química, compartit amb Walter
Gilbert i Frederick Sanger,
1975/77: Walter Gilbert, Frederick Sanger (PN 1980), mètodes de determinació
de seqüències de DNA.
Walter Gilbert (amb l'estudiant de postgrau Allan M. MAXAM) i Frederick Sanger, el
1977, treballant per separat als Estats Units i Anglaterra, van desenvolupar noves
tècniques per a la seqüenciació ràpida d'ADN. Sanger i Gilbert van aprofitar els enzims
descoberts recentment per establir els seus mètodes i tots dos mètodes es van
beneficiar de millores en l'electroforesi en gel, un mètode utilitzat per a la imatge de
l'ordre de nucleòtids.
Veurem amb més detall els dos mètodes de seqüenciació al corresponent apartat.