‫קורס מבוא להמטולוגיה‬

‫המטופואזיס‬

‫ד"ר אלדה איסאקוב‬

 ‫המטולוגיה‬

‫היא תחום ברפואה העוסק במערכת תאי הדם‪,‬‬

‫באיברים ורקמות המייצרים אותם‪ ,‬במנגנון קרישת‬
‫הדם ובממאירויות השייכות למערכת זו‪.‬‬
‫מרכיבי הדם‬
‫תפקידי התאים בדם‬
‫המטופואזיס‬
‫תהליכי ההמטופואזיס‬

‫• אריטרופואזיס‬

‫• מילופואזיס‬

‫• לימפופואזיס‬

‫• טרומבופואזיס‬
‫אתרי ההמטופואזיס‬
 ‫‪Pluripotent Stem Cell‬‬

‫• יצירת תאי הדם מתחילה בתא גזע פלוריפוטנטי‪.‬‬

‫תכונות התא‪:‬‬

‫• יכולת חלוקה ושכפול עצמי ‪.‬‬

‫• יכולת התמיינות‪.‬‬

‫• במח העצם מס קבוע של ‪.stem cells‬‬

‫• התפתחות לסוגי תאים משניים ( ‪)Progenitor‬‬

‫• תא אחד מסוגל לייצר מיליון תאי דם בוגרים לאחר ‪ 20‬חלוקות תאים‪.‬‬

 ‫תכונות תאי הגזע‬

‫• לתא יכולת לאכלס תאי דם מחדש במח עצם שכל תאי הדם שלו‬
‫הושמדו‪.‬‬

‫• תאים נדירים (תא אחד מ ‪ 20‬מיליון תאים במח העצם)‪.‬‬

‫• מבחינה אימונולוגית – ‪ CD38- , CD34+‬ושלילי לכל המרקרים‬

‫המאפיינים תת אוכלוסיות אחרות‪.‬‬
Pluripotent Stem Cell
‫יצירת תאי דם במח עצם‬

‫‪Bone marrow stroma .1‬‬

‫‪.2‬מולקולות הדבקה‬
‫‪.3‬פקטורי גדילה המטופואטיים‬
 ‫‪Bone marrow stroma‬‬
‫• במח העצם תנאים המאפשרים לתאי הגזע לשרוד‪ ,‬להתחדש‪,‬‬
‫ולהתפתח לתת סוגי התאים‪.‬‬

‫• תאי ה ‪ stroma‬כוללים ‪,osteoblast ,fibroblast ,adipocytes‬‬

‫‪. macrophges,endothelial cells‬‬

‫• התאים מפרישים חומרים כמו קולגן‪ glycoproteins ,‬כמו ‪fibronectin‬‬

‫שיוצרים את ה ‪. extracellular matrix‬‬

‫• בנוסף‪ ,‬תאי ה ‪ Stroma‬מפרישים פקטורי גדילה הנדרשים להישרדות‬

‫תאי הגזע‪.‬‬
‫מבנה מח העצם‬
 ‫באזור העורק ‪ -‬מצב של‬
‫חוסר פעילות של תאי גזע‬

‫תאים הורסי עצם‬ ‫היפוקסיה – הפרשת‬

‫תאים מייצרי עצם‬ ‫כמוקינים שגורמים‬
‫להתמיינות‪.‬‬
 ‫מולקולות הדבקה‪Adhesion molecules-‬‬

‫זוהי קבוצה של גליקופרוטאינים המטווחים את הקישור של תאים שונים למרכיבים שונים‬

‫של הסטרומה והמטריקס‪ .‬אלה בעצם רצפטורים הנקשרים לליגנדים על פני תאי המטרה‪.‬‬
‫ניתן להבחין בין ‪ 3‬משפחות מרכזיות‪:‬‬
‫• אימונוגלובולינים‪ -‬הנקשרים לאנטיגנים אך לא רק‪ ,‬בקבוצה זו נכללים רצפטורים‬
‫לאנטיגן‪,‬‬
‫‪ TCR‬ורצפטורים ל‪.GFs‬‬
‫• סלקטינים‪ -‬מעורבים בעיקר בקישור הטסיות והלויקוציטים לאנדותל בתהליך דלקת‪.‬‬
‫• אינטגרינים‪ -‬מעורבים בקישור למטריקס החוץ תאי‪ ,‬מתווכים הדבקת תאים בזמן‬
‫הנדידה‪ ,‬וגם מהווים סיגנלים להתפתחות ולגדילה‪.‬‬
 ‫פקטורי שעתוק‬

‫פקטורים שמווסתים את השכפול של גן ספציפי‪.‬‬

‫‪ Progenitor cells‬מבטאים רמות נמוכות של פקטורי שעתוק שמכוונים אותם‬

‫לייצור של סוג תא ספציפי‪.‬‬

‫דוגמאות‪:‬‬

‫‪ -NOTCH-1 ,GATA-2 ,SCL .1‬מווסתים את ההישרדות של ה ‪stem‬‬

‫‪.cells‬‬

‫אחרים מווסתים את התפתחות סוגי התאים השונים‪ .‬לדוגמא ‪GATA-1‬‬ ‫‪.2‬‬

‫ו ‪ FOG-1‬מכוונים לכיוון ייצור אריתרוציטים ומגקריוציטים‪.‬‬
‫פקטורי גדילה של המערכת ההמטופואטית‬

‫• פקטורי הגדילה הם הורמונים ‪ glycoproteins‬שמווסתים את‬

‫הפרוליפרציה והדיפרנציאציה של תאי הדם ה ‪. progentior‬‬

‫• הם פועלים באופן מקומי במקום בו הם מיוצרים וכן יכולים לנוע‬

‫בפלסמה‪.‬‬

‫• עיקר פקטורי הגדילה מופרשים מתאי הסטרומה‪ ,‬מלבד‬

‫אריתרופואיטין שמסונטז בכליה וטרומבופויאטין שמסונטז בכבד‪.‬‬
‫מאפיינים כלליים של פקטורי הגדילה ההמטופואטים‬
‫פקטורי גדילה המטופואטים‬
 ‫פקטורי גדילה המטופואטים‬

‫• פקטורי הגדילה נקשרים לרצפטורים על פני התאים ‪.‬‬

‫• חלק גדול מהרצפטורים עוברים דימרזציה בעקבות הקישור‪.‬‬

‫• הדימרזציה מפעילה בתא שרשרת של העברת אותות‪.‬‬

‫אופן הפעולה‬
 ‫‪Apoptosis‬‬
‫• ‪ Apoptosis‬הוא מוות תאי מתוכנן‪.‬‬

‫• ‪ Apoptosis‬הינו תהליך מבוקר ‪ ,‬בו התא עובר גירוי ומפעיל חלבונים‬

‫תאיים שמובילים את התא להרס‪.‬‬

‫• ה ‪ Apoptosis‬היא תוצאה של פעילות של פרוטאזות בשם ‪caspases‬‬

‫שבעקבות הפעלתם גורם להפעלת ‪ endonuclease‬שגורם לפירוק‬
‫דנא וישנו פירוק של השלד התוך תאי‪.‬‬

‫• תא שעבר אפופטוזיס מציג מולקולות ממברנליות שגורמות לבליעתו‬

‫ע"י מקרופאגים‪.‬‬
 Apoptosis

Anti apoptosis proteins Pro apoptosis proteins

 ‫סיכום‬

‫• ייצור תאי הדם מקורם בתא ‪ pluripotent stem cell‬הנמצא במח העצם‪.‬‬

‫• ה ‪ ,stem cells‬לאחר חלוקה ודיפרנציאציה מייצרים את כל תאי הדם‪.‬‬

‫• במבוגר עיקר תהליך יצירת תאי הדם מתבצע בעצמות המרכזיות ‪ ,‬אך‬
‫בילדים הייצור מתרחש גם בעצמות הארוכות‪.‬‬

‫• פקטורי גדילה נקשרים לרצפטורים ספציפיים ‪ ,‬ומפעילים קסקדה של‬

‫פוספורילציות המשפיעה על גנים בגרעין התא‪.‬‬

‫• פקטורי גדילה שונים פועלים על תאים שונים בכדי לגרום לפרוליפרציה‬

‫ודיפרנציאציה של תאים מסוימים זאת בהתאם לצורכי הגוף‪.‬‬
‫אריתרופואזיס‬
‫מיאלופואזיס‬
‫לימפופואזיס‬
‫טרומבופואזיס‬
‫הרכב התאים ההמטופואטים במח עצם‬
CBC
 ‫‪Flow cell technology‬‬
‫היכולת לנתח הרבה תכונות של הרבה תאים בזמן קצר‬

‫מעטפת מים חיצונית‬

‫דוחפת את הנוזל הפנימי‬
‫דבר המאפשר העברת תא אחד‬
‫בכל פעם בלבד‬

‫התאים עוברים דרך קרן‬

‫לייזר וגורמים לפיזור הקרן‪.‬‬

‫‪Shuttle chamber‬‬ ‫‪Sheath stream‬‬

‫‪Sample stream‬‬
 ‫‪Forward‬‬
‫‪scatter‬‬
‫‪detector‬‬

‫‪Side scatter detector‬‬

‫קרני הלייזר עוברים לדרך התא ומתפזרים מפני שטח של התא‪.‬‬ ‫•‬
‫כמות האור המתפזרת מתורגמת לאותות חשמליים‪.‬‬ ‫•‬
‫כמות האור המתפזרת היא יחסית למתח הנמדד ולכן מייצגת את גודל התא‪.‬‬ ‫•‬
‫פיזור האור דרך התא מתאר את מורכבות התא (צורה מרקם של הגרעין‪ /‬ציטופלסמה)‪.‬‬ ‫•‬
RBC method

No matter
what your shape
or size ....
We can make you
a SPHERE
RBC method
Low angle scatter 2o - 3o (Volume)

High angle scatter 5o - 15o (HGB concentration)

 RBC method

Volume - MCV

Macrocytic

Hyperchromic
Normocytic
Normochromic

Microcytic

28 41
HGB Concentration - CHCM
 RBC method

Volume - MCV

HGB Concentration - CHCM

RBC method

28 41
RBC method

The RBC Volume histogram represents the

distribution of red blood cells by cell volume.
The histogram has a range from 0 fL to 200 fL.

Normal samples have a bell-curve shaped

distribution with a mode channel between
60 fL and 120 fL.

The mean corpuscular volume (MCV) and

the red cell distribution width (RDW) are
determined from this histogram.

• MCV is the mean of the of RBC Volume

histogram.

• RDW is the coefficient of variation of the

population.
 RBC method

Calculating reported parameters

• %MICRO Percent of red blood cells smaller than 60 fL

• %MACRO Percent of red blood cells larger than120 fL
• %HYPO Percent of red blood cells with less than 28 g/dL HGB
• %HYPER Percent of red blood cells with more than 41 g/dL HGB

The three severity levels are: +, ++ or +++ and are customized by Bayer for each customer site
based on the technologists severity levels on the manual differentials
 The Perox method

If you have the granules - we have the stain

I’m
melting

PEROX
STAIN

But you
still look
pale
Boy,
your granules
look great !
The Perox method

Scatter signal to measure the volume of

the cells

Absorption signal for peroxidase activity

measurement

Cells with medium peroxidase activity

absorbs less light

than cells with high peroxidase activity

 The Perox method
Number of neutrophil granules

Bone marrow Blood

Promyelocytes
Myelocytes
# granules

Metamyelocytes
Band cells
Mature PMN

Blasts

Cell maturation
The Perox method
 The Perox method
Morphology Flags

The three severity levels are: +, ++ or +++

• ATYP The presence of atypical lymphocytes is suspected. (Atypical Lymphocytes)

• IG The presence of immature granulocytes is suspected. (Immature Granulocytes)

• MPO Sample is a weak peroxidase stainer. (Myeloperoxidase deficiency)
• NRBC The presence of nucleated red blood cells is suspected. (Nucleated Red Blood Cells)

• PLT-CLM Presence of clumped platelets is suspected. (Platelet Clumps)

 The Baso method

When the high-angle light scatter (nuclear configuration) is

plotted on the x axis, and the low-angle light scatter (cell
size) is plotted on the y axis, distinct populations or clusters
are formed. Cluster analysis identifies each population based
on its position, area, and density, and then counts the
number of cells/nuclei in each population.

The BASO cytograms is representative of a patient specimen.

1 Noise
2 Blast cell nuclei
3 Mononuclear WBCs (Monocyte and Lymphocyte nuclei)
Nuclear Configuration 4 Basophils
5 Baso Suspect
6 Saturation
7 Polymorphonuclear WBCs (Neutrophil and Eosinophil
nuclei)
The Baso method
 The Baso method
Morphology Flags
The three severity levels are: +, ++ or +++

• BLASTS The presence of blasts is suspected

• LS The presence of nonsegmented neutrophils (bands) is suspected