Professional Documents
Culture Documents
اختبارات بكتريولوجي
اختبارات بكتريولوجي
-االٌجابٌة ( تصاعد عند نقل جزء من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة اختبار قدرة البكتٌرٌا علً Catalase test
فقاعات األكسجٌن). للتجربة إلى شرٌحة زجاجٌة نظٌفة و إضافة H2O2 إنتاج إنزٌم Catalaseالذي
إلٌها تقوم الخالٌا البكتٌرٌا فً الحالة االٌجابٌة بإفراز ٌكسر مادة H2O2فوق
-السلبٌة ( عدم تصاعد اإلنزٌم وتكسٌر هذه المادة مكونة األكسجٌن أكسٌد الهٌدروجٌن إلى ماء
فقاعات األكسجٌن). المتصاعد على هٌئة فقاعات ٌمكن مالحظتها. وأكسجٌن.
H2O2 H2o + O2
-االٌجابٌة ( تكون عند نقل نصف مل من المعلق الجاهز للمزرعة اختبار قدرة البكتٌرٌا على Coagulase
الخثرة). البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة إلى أنبوبة اختبار نظٌفة إفراز إنزٌم Coagulase
تحتوي على نصف مل من البالزما المجهزة ثم
test
الذي ٌعمل على تخثٌر
-السلبٌة ( عدم ( تكون التحضٌن عند درجة حرارة 37مئوٌة ومراقبة تكون بالزما الدم.
الخثرة) الخثرة كل نصف دقٌقة بإمالة األنبوبة ,تظهر الخثره
فً الحالة االٌجابٌة.
-االٌجابٌة ( تحول لون عند تلقٌح أنبوبة تحتوي وسط Simon's citrate اختبار قدرة البكتٌرٌا على Citrate
الوسط من األخضر إلى agarالمضبوط بـ pHحامضً بالمزرعة البكتٌرٌة استهالك السترات كمصدر
األزرق). وحٌد للكربون.
Utilization
الخاضعة للتجربة والتحضٌن عند درجة حرارة 37
test
+ -السلبٌة (عدم تحول
مئوٌة ٌتحول لون الوسط من األخضر(الحامضً) إلى
ــ األزرق (القاعدي) فً الحالة االٌجابٌة.وذلك بسبب
لون الوسط من األخضر تحلل السترات وإنتاج CO2الذي ٌتحد مع Na2
إلى األزرق) ٌبقى لونه الموجود فً الوسط لٌكون مواد قاعدٌة تغٌر pH
اخضر وال ٌتغٌر. الوسط من الحامضً إلى القاعدي فٌتغٌر لون الدلٌل
Bromothymol blueمن األخضر إلى األزرق.
-االٌجابٌة ( ظهور حلقة عند تلقٌح أنبوبة تحتوي وسط SIM agarبالمزرعة اختبار قدرة البكتٌرٌا على Indole test
حمراء على سطح البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة ثم التحضٌن عند درجة تحلٌل الحامض االمٌنً
األنبوبة). حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعة ثم الكشف فً Tryptophanوإنتاج
الٌوم التالً عن وجود االندول باستخدام كاشف االندول كأحد النواتج.
-السلبٌة (عدم ظهور ٌ Kovac's reagentالحظ تكون حلقة حمراء على
حلقة حمراء على سطح سطح األنبوبة فً الحالة االٌجابٌة ,نتٌجة تفاعل
األنبوبة). االندول مع الكاشف.
-االٌجابٌة ( ظهور لون عند نقل مزرعة البكتٌرٌا الخاضعة للتجربة وفركها اختبار قدرة البكتٌرٌا على Oxidase test
بنفسجً على سطح ورقة على سطح ورقة ترشٌح مشبعة بمحلول االوكسٌدٌز انتاج انزٌم Oxidase
الترشٌح). ٌالحظ تكون لون بنفسجً فً الحاله االٌجابٌة .نتٌجة المختزل لـ cytochrome
اختزال االنزٌم لـ cytochrome c c
-السلبٌة (عدم ظهور
لون بنفسجً على سطح
ورقة الترشٌح).
-االٌجابٌة ( تحول لون عند تلقٌح أنبوبة مائلة تحتوي وسط Urea agar اختبار قدرة البكتٌرٌا على Urease test
ــ الوسط الى الوردي). المضبوط بـ pHحامضً بالمزرعة البكتٌرٌة انتاج انزٌم Ureaseالذي
+ الخاضعة للتجربة و التحضٌن عند درجة حرارة 37 ٌحلل او ٌكسر مادة الٌورٌا
-السلبٌة (عدم تحول مئوٌة ٌتحول لون الوسط من األصفر (الحامضً) إلى الى ماء و CO2و
لون الوسط إلى الوردي). الوردي (القاعدي) فً الحالة االٌجابٌة.وذلك بسبب ammonia
تحلل الٌورٌا وإنتاج االمونٌا التً تعمل على زٌادة
pHالوسط إلى القاعدي وهذا التغٌر ٌمكن الكشف
عنه بواسطة دلٌل كٌمٌائً موجود فً الوسط ٌتحول
إلى اللون الوردي فً الظروف القاعدٌة.
-االٌجابٌة ( تحول لون عند تلقٌح أنبوبة تحتوي وسط اختبار قدرة البكتٌرٌا على Voges-
الوسط إلى الوردي Clark and Lubb's mediumبالمزرعة انتاج المواد المتعادلة
المحمر).
Proskauer
+ ــ البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة و التحضٌن عند درجة acetylmethylcarbinol
حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعة ٌتم فً الٌوم ) (acetoinمن تخمٌر سكر test
-السلبٌة (عدم تحول التالً الكشف عن وجود المواد المتعادلة بإضافة الجلوكوز
لون الوسط إلى الوردي Alpha-naphtol (5%) and potassium
المحمر). )hydroxide (40%
إلى الوسط ,حٌث ٌتحول لون الوسط إلى الوردي
المحمر فً الحالة االٌجابٌة.
صوره توضٌحٌة للنتائج النتائج المبدأ و طرٌقة إجراء االختبار الهدف أسم االختبار
R/R -1عدم تحلل كل عند تلقٌح أنبوبة مائلة تحتوي وسط Keligler اختبار قدرة البكتٌرٌا على Carbohydrate
السكرٌات. iron agarالمضبوط بـ pHقاعدي بالمزرعة تحلٌل أو استهالك أو
تخمٌر الكربوهٌدرات
Utilization
Y/Y -2تحلل كل السكرٌات. البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة و التحضٌن عند درجة
R/Y -3تحلل سكر الجلوكوز حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعة حٌث ٌتحول الممثلة بسكرٌات ثالثة test
فقط. لون الجزء المائل أو عمق الوسط أو كالهما من هم:
-4إنتاج CO2بظهور فقاعات االحمر (القاعدي) إلى االصفر (الحامضً) فً -الجلوكوز
أو ارتفاع فً الوسط داخل الحالة االٌجابٌة بسبب تحلل السكرٌات وإنتاج -الالكتوز
األنبوبة. األحماض العضوٌة التً تخفض مستوى pH -السكروز
-5إنتاج H2Sبظهور لون الوسط ,وهذا التغٌر ٌمكن الكشف عنه بواسطة
اسود فً الوسط داخل األنبوبة. دلٌل كٌمٌائً موجود فً الوسط.
-إنتاج CO2من تحلٌل السكرٌات وٌظهر على
شكل فراغ او فقاعات فً الوسط.
-إنتاج H2Sالناتج من تفاعل الهٌدروجٌن مع
الكبرٌت .وٌمكن استنتاج وجودة بظهور لون اسود
فً االنبوبة.
-االٌجابٌة ( اختفاء لون عند تلقٌح وسط DNase test agarبالمزرعة اختبار قدرة البكتٌرٌا على DNase test
الوسط األزرق حول البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة و التحضٌن عند درجة انتاج انزٌم DNase
المستعمرات النامٌة). حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعة ٌتم فً الٌوم الذي ٌكسر الحامض
التالً الكشف عن وجود مستعمرات نامٌة ٌختفً النووي DNA
+ ــ -السلبٌة (عدم اختفاء لون من حولها اللون األزرق الممٌز للوسط فً الحالة
الوسط األزرق حول االٌجابٌة .حٌث ٌحتوي الوسط على الحامض
المستعمرات النامٌة ). النووي DNAالمصبوغ بصبغة التلوٌدٌن األزرق
فٌصبح لون الوسط ازرق ,وعند تحلل الـ DNA
بواسطة إنزٌم DNaseالذي تفرزه البكتٌرٌا
تختفً هذه الصبغة كذلك.
-االٌجابٌة ( انتشار النمو عند تلقٌح أنبوبة تحتوي وسط SIMبالمزرعة اختبار قدرة البكتٌرٌا على Motility test
البكتٌري وظهور عكاره فً البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة و التحضٌن عند درجة الحركة.
+ كل أجزاء الوسط فً األنبوبة حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعة ٌتم فً الٌوم
ــ وتعنً أن البكتٌرٌا متحركة). التالً الكشف عن وجود انتشار للنمو البكتٌري فً
األنبوبة من عدمه.
-السلبٌة (ظهور النمو
البكتٌري حول منطقة الوخز
فقط وعدم انتشاره فً
األنبوبة)
-االٌجابٌة ( تحول لون عند تجهٌز 0.5 mlمعلق من المزرعة البكتٌرٌة اختبار قدرة البكتٌرٌا على ONPG test
المعلق البكتٌري إلى اللون الخاضعة للتجربة مع ماء مقطر معقم من مزرعة إفراز إنزٌم
األصفر خالل .)15-30 min عمرها 24ساعة فً أنبوبة اختبار و إضافة Β- galactosidase
القرص الخاص باختبار ONPG testإلى هذه الذي ٌعمل على مساعدة
-السلبٌة (عدم تحول لون األنبوبة و التحضٌن عند درجة حرارة 37مئوٌة الخلٌة البكتٌرٌا على
المعلق البكتٌري إلى اللون فً الحمام المائً ٌالحظ تحول لون المعلق إلى تكسٌر سكر الالكتوز
األصفر خالل ) 15-30 min اللون األصفر خالل 15-30 minفً الحالة
االٌجابٌة وذلك بسبب وجود انزٌم
Β- galactosidaseالذي ٌعمل على تحرٌر
جزٌئ النٌتروفٌنٌل من orthonitrophenyl-
) beta D-galactopyranoside (0NPGوهذا
هو سبب ظهور اللون األصفر
-االٌجابٌة ( ظهور منطقة عند تخطٌط طبق بتري من وسط Blood agar This is a Taxos A
عدم النمو حول القرص). من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة ثم نقل differential test
مثال /
(bacitracin
القرص الخاص باختبار used to distinguish
Streptococcus bacitracin sensitivity testingإلى سطح between organisms sensitivity
pyogenes (bacitracin الوسط المخطط و التحضٌن عند درجة حرارة 37 sensitive to the )testing
sensitive). مئوٌة لمدة 24ساعةٌ ,الحظ تكون هالة أو منطقة antibiotic
تثبٌط للنمو البكتٌري حول القرص وذلك بسبب bacitracin and
-السلبٌة (عدم ظهور منطقة التأثر بـ . bacitracin those not. It
عدم النمو حول القرص). inhibits cell wall
مثال/ synthesis and
Streptococcus disrupts the cell
agalactiae (bacitracin membrane. This
)resistant test is commonly
used to distinguish
between the-
hemolytic
streptococci.
صوره توضٌحٌة للنتائج النتائج المبدأ و طرٌقة إجراء االختبار الهدف أسم االختبار
-االٌجابٌة ( ظهور منطقة عند تخطٌط طبق بتري من وسط Blood agar This is a Taxos P
عدم النمو حول القرص). من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة ثم نقل differential test
مثال /
(optochin
القرص الخاص باختبار used to distinguish
Streptococcus optochin sensitivity testingإلى سطح between organisms sensitivity
pneumoniae الوسط المخطط و التحضٌن عند درجة حرارة 37 sensitive to the )testing
(bacitracin sensitive). مئوٌة لمدة 24ساعةٌ ,الحظ تكون هالة أو منطقة antibiotic optochin
تثبٌط للنمو البكتٌري حول القرص وذلك بسبب and those not. This
-السلبٌة (عدم ظهور منطقة التأثر بـ .Optochin test is used to
عدم النمو حول القرص). distinguish
مثال/ Streptococcus
Streptococcus mitis pneumoniae
)(bacitracin resistant (optochin sensitive
-Aالتحلٌل الكلً للدم ( اختفاء كامل للون هو وسط أغنائً وتفرٌقً ٌستخدم لعزل وتنمٌة األنواع البكتٌرٌة التً ٌتطلب Blood agar
االحمر وظهور هاالت شفافة حول نموها وجود الدم و اختبار قدرتها على تحلٌل كرات الدم الحمراء
المستعمرات النامٌة وٌطلق علٌه تحلل من و اقرازها إلنزٌم Hemolysin
نوع بٌتا عند تخطٌط طبق بتري من وسط Blood agar
β-hemolytic من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة
-Bالتحلٌل الجزئً للدم ( ظهور هاالت و التحضٌن عند درجة حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعةٌ ,الحظ تكون مناطق
تمٌل للون األخضر حول المستعمرات التحلٌل حسب النوع البكتٌري وقدرته على التحلٌل.
النامٌة وٌطلق علٌه تحلل من نوع الفا α-
hemolytic
-Cعدم القدرة على تحلٌل الدم ( ال تظهر
اي هاالت حول المستعمرات النامٌة وٌطلق
علٌه تحلل من نوع جاما γ-hemolytic
-االٌجابٌة ( نمو مستعمرات بٌئة تفرٌقٌة للتفرٌق بٌن البكتٌرٌا المخمرة لالكتوز Lactose fermenting MacConky
بلون وردي). والتً تأخذ اللون األحمر مثل E.coliو Klebsiellaو , Enterobacterوبٌن agar
البكتٌرٌا الغٌر مخمرة لالكتوز fermenting Non-lactoseوالتً لٌس لها
-السلبٌة (نمو مستعمرات لون (شفاف) مثل Proteusو Salmonellaو . Shigella
باهته ( غٌر وردٌة). • تحتوي على Crystal violetأو Bile Saltsبحٌث تسمح للبكتٌرٌا السالبة
لصبغة جرام بالنمو وتثبط نمو الموجبة لصبغة جرام
فعند تخطٌط طبق بتري من وسط MacConky agar
من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة و التحضٌن عند درجة حرارة 37
مئوٌة لمدة 24ساعةٌ ,الحظ ظهور مستعمرات بلون وردي فً الحالة االٌجابٌة
بسبب قدرتها على تحلٌل سكر الالكتوز و إنتاج الحامض وتغٌر لون الدلٌل
الموجود فً الوسط وهذا ٌتوقف على النوع البكتٌري المختبر.
-االٌجابٌة ( نمو مستعمرات • وسط لزراعة عٌنات الجهاز البولً . Cystine
صفراء اللون وتغٌر لون • بٌئة تفرٌقٌة للتفرٌق بٌن البكتٌرٌا المخمرة لالكتوز Lactose fermenting
الوسط).
Lactose
والتً تأخذ اللون األصفر مثل , E.coliوبٌن البكتٌرٌا الغٌر مخمرة لالكتوز
fermenting Non-lactoseوالتً لٌس لها لون (شفاف) electrolyte
-السلبٌة (نمو مستعمرات مثل Acnitobacterبسبب وجود الكاشف Bromo-thymol blue deficient agar
غٌر صفراء اللون وعدم تغٌر و له نفس وظٌفة الـ MacConkey Agar )(CLED agar
لون الوسط).
فعند تخطٌط طبق بتري من وسط CLED agarمن المزرعة البكتٌرٌة
الخاضعة للتجربة
و التحضٌن عند درجة حرارة 37مئوٌة لمدة 24ساعةٌ ,الحظ ظهور
مستعمرات صفراء اللون وتغٌر لون الوسط فً الحالة االٌجابٌة بسبب قدرتها
على تحلٌل سكر الالكتوز و إنتاج الحامض وتغٌر لون الدلٌل الموجود فً الوسط
وهذا ٌتوقف على النوع البكتٌري المختبر.
-االٌجابٌة ( نمو مستعمرات عند تخطٌط طبق بتري من وسطEMB agar ٌحتوي هذا الوسط على EMB agar
ذات لمعان معدنً اخضر على من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة عوامل تمٌز البكتٌرٌا
الوسط). و التحضٌن عند درجة حرارة 37مئوٌة لمدة القولونٌة البرازٌة
24ساعةٌ ,الحظ ظهور مستعمرات ذات لمعان
-السلبٌة (نمو مستعمرات ال معدنً اخضر وهذا ٌتوقف على النوع البكتٌري
تتمٌز بلمعان معدنً اخضر المختبر
على الوسط).
صوره توضٌحٌة للنتائج النتائج المتوقعة المبدأ وطرٌقة العمل الغرض اسم الوسط
-االٌجابٌة ( نمو مستعمرات صفراء اللون وتغٌر لون الوسط من األخضر إلى األصفر). عند تخطٌط طبق بتري من وسط TCBS agar • وسط اختٌاري لعزل Thiosulphate
من المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة للتجربة الكولٌرا Vibrio
-السلبٌة (نمو مستعمرات غٌر صفراء اللون وعدم تغٌر لون الوسط من األخضر إلى
citrate bile
و التحضٌن عند درجة حرارة 37مئوٌة لمدة Cholerae
األصفر). • تثبط نمو معظم الـ salt Agar
24ساعةٌ ,الحظ ظهور مستعمرات صفراء اللون
وتغٌر لون الوسط من األخضر إلى األصفر بسبب Enterbacteria )(TCBS agar
إنتاج الحامض وتغٌر لون الدلٌل الموجود فً والبكتٌرٌا الموجبة لصبغة
الوسط وهذا ٌتوقف على النوع البكتٌري المختبر. جرام بسبب احتوائها على
مواد مثبطة وكذلك قلوٌة
PHالوسط العالٌة.
-االٌجابٌة ( نمو مستعمرات عند تخطٌط طبق بتري من وسط Mannitol • بٌئة تفرٌقٌة للتفرٌق Mannitol Salt
صفراء اللون وتغٌر لون Salt agarمن المزرعة البكتٌرٌة الخاضعة بٌن Staphylococcus
الوسط من البرتقالً إلى
agar
للتجربة و التحضٌن عند درجة حرارة 37 speciesو
األصفر). مئوٌة لمدة 24ساعةٌ ,الحظ ظهور مستعمرات Staphylococcus
صفراء اللون وتغٌر لون الوسط من البرتقالً إلى aureusالتً تخمر
-السلبٌة (نمو مستعمرات غٌر األصفر بسبب إنتاج الحامض وتغٌر لون الدلٌل المانٌتول بتأثٌرها على
صفراء اللون وعدم تغٌر لون الموجود فً الوسط وهذا ٌتوقف على النوع لون الكاشف Phenol
الوسط من البرتقالً إلى البكتٌري المختبر. Redوتعطً اللون
األصفر). األصفر بٌنما الـ .Staph
األخرى ال تخمر المانٌتول
• بٌئة اختٌارٌة ألن تركٌز
األمالح العالً ( Nacl
)7.5%الموجود فٌه ٌثبط
نمو المٌكروبات األخرى .
• بٌئة اختٌارٌة ال تسمح بنمو البكتٌرٌا الموجبة لصبغة جرام وبعض البكتٌرٌا السالبة لصبغة جرام ماعدا Salmonella
& Salmonella Shigellaبسبب وجود bile salts & Na-citrate
Shigella Agar
• بٌئة تفرٌقٌة لـ Salmonellaو Shigellaحٌث أن الـ Salmonellaتأخذ لون البٌئة (شفاف) مع وجود لون
أسود فً المركز نتٌجة تحلل مواد موجودة فً البٌئة ٌنتج عنها غاز H2Sوالـ Shigellaتأخذ مستعمراتها لون )(S.S Agar
الوسط(شفاف) .
• بٌئة تفرٌقٌة بٌن األنواع المختلفة من الـ Streptococcusو الـ Bile Esculine
)Enterococcus (Strept. faecalisالتً تفرز عند نموها على هذه البٌئة
إنزٌما ً ٌفكك مادة األسكولٌن فٌتشكل مركب أسكولتٌن والذي ٌتحد مع أٌونات
الحدٌد الموجودة بالبٌئة على شكل سترات الحدٌد وٌتكون مركب اسود ٌدل على
وجود Enterococcus
• أٌضا ً وجود ( %4أمالح الصفراء) ٌثبط الكثٌر من البكتٌرٌا دون أن ٌؤثر
على نمو . Enterococcus