VJEŽBA 1

Mikroskopija
a) Mikroskopiranje
b) Priprema preparata

Medicinska Biologija; 2008/2009

Pitanje o veličini: što se može vidjeti svjetlosnim
mikroskopom? Bakterija? Virus? DNA? RNA?
Razlučivanje struktura:
Princip rada mikroskopa
 Životinjska stanica

Biljna stanica
Bakterija… pod svjetlosnim mikroskopom
Krvne stanice… pod mikroskopom
Što je to ispred mene?
 1. preparat: Krv žabe

1.Stavimo preparat na stolić tako

da je pokrovnica okrenuta gore.
Fiksiramo ga na stoliću.

2. Uvijek krećemo s objektivom 4x

3.Stolić podižemo okretanjem

makrovijka do vrha i polako ga
spuštamo tražeći sliku.

SLIKA MORA BITI KRISTALNO

JASNA NA 4X !
4. Kad smo našli za nas savršenu sliku na 4x prelazimo na
veća povećanja

5. Okrenuti 10x objektiv

6. Sa MIKROVIJKOM izoštriti sliku.

7. Tražiti po preparatu područje od interesa i pomicanjem

stolića pomoću kontrolera staviti ga u centar vidnog polja
– ZAŠTO?
Dalje...

8. Okrenuti objektiv 40x

9. Izoštriti sliku mikrovijkom

10. Područje od interesa dovesti u centar vidnog polja

Eritrociti žabe
2. preparat: Epididimis štakora- Cilindrični epitel

cilindrični epitel

spermatozoa
Što vidimo često u vidnom polju, a mislimo da smo
nešto novo otkrili ☺ ?
Svjetlosnim mikroskopom teško vidimo žive stanice jer su transparentne…
fazno- kontrastni mikroskop:
• Povećava kontrast izmeñu organela koje se vide tamno
• Pozadina je sive boje
• Oko stanice se vidi svjetlucavi “omotač”

SM

FCM

Stanica tumora prostate

Flourescencijski mikroskop

• filter dopušta prolaz samo emitiranog

svjetla – objekt koji emitira svjetlo se vidi, a
pozadina je tamna
Kako radi flourescencijski mikroskop?
• neka protutijela se mogu označiti
flourescencijskim bojama

• takav kompleks boje i protutijela se

veže na antigen u stanici ili tkivu

LM

• Antigen “svijetli”

• kako se kompleks veže na

specifična mjesta u tkivu /stanici
flourescencija je dobra metoda za
istraživanje strukturalnih obilježja
područja (tkiva)
FM
 TUNEL DAPI

stanice u testisu štakora obilježene flourescentnim protutijelom

merged
...nešto o izradi preparata za svjetlosnu mikroskopiju

Histološki preparati:

 Svježi (nativni) preparati (pločasti epitel jezika)

 Razmazi (krv)

 Trajni preparati- parafinski

Klasična histološka izrada trajnog preparata

1. Fiksacija ( 2-24h)

• 4% i 10% formalin
• Zenkerova otopina
• Bouinova otopina

- sprječava rast mikroorganizama

- ne smije otapati tkivo
- mora inaktivirati proteolitičke enzime
- zadržava originalnu arhitekturu tkiva
 2. ispiranje (24h)

3. Dehidracija - alkohol (70% - 100%)

- dehidracija mora biti potpuna budući da parafin ne
prodire na mjesta bogata vodom

4. Intermedijarne otopine
- čine tkivo prozirnim
- istiskuju vodu
(Xylol, Benzol, Toluol)

5. Impregnacija tkiva
• parafin
- daje tkivu čvrstoću
potrebnu kod rezanja
- stavljanje u kalupe
 6. Rezanje

mikrotom

mikrotomski nož
7. Lijepljenje na predmetnicu

8. Sušenje preparata u termostatu (T= 35 - 40oC)

9. Bojanje preparata
- deparafinizacija (ksilol)
- kupanje u alkoholu (100%-70%)
- ispiranje destiliranom vodom
- bojanje hemalaunom (jezgra - plava)
- ispiranje
- bojanje eozinom (citoplazma - crvena)
- ispiranje
- dehidracija alkoholom (70%-100%)
- kupanje u ksilolu
- ljepljenje pokrovnice s Canada balzamom
- sušenje - 37oC
- mikroskopiranje
3. preparat: Glatki mišić – poprečni presjek crijeva
o Tražimo mišićne slojeve u crijevu...

o Opet proći korake za objektive 40x

od 4x – do 40x

10x
 4. preparat: Testis i ovarij vodozemca dvospolca

• Snalaženje po preparatu – nañimo granicu izmeñu ovarija i

testisa