Producing the Chromatogram:

The chromatogram can be produced by dipping the

chromatographic plate (TLC plate with silica and mixture of
different spots to be separated) in the mixture of various solvent
systems (for e.g., n-Butanol, Glacial Acetic Acid and Distilled
Water) in a specific ratio for separating amino acids using standard
amino acid kit with known Rf values.
A pencil line is drawn near the bottom of the plate Fig. 22.2 and a
small drop of solution of the dye mixture is placed on it. Any
labeling on the plate to show the original position of the drop must
also be in pencil. If any of this was done in ink, dyes from the ink
would also move as the chromatogram developed.

When the spot of mixture is dry, the plate is stood in a shallow layer
of solvent in a covered beaker, it is important that the solvent level
is below the line with the spot on it.

The reason of covering the beaker is to make sure that the

atmosphere in the beaker or the chromatographic chamber is
saturated with solvent vapour. To help this, the beaker is often lined
with some filter paper soaked in the solvent. Saturating the
atmosphere in the beaker with vapour stops the solvent from
evaporating as it rises up the plate.

As the solvent slowly travels up the plate, the different components

of the dye mixture travel at different rates and the mixture is
separated into different spots.
The diagram shows the plate after the solvent has moved about half
way up it Fig. 22.10.

The solvent is allowed to rise until it almost reaches the top of the
plate fig. 22.11.

That will give the maximum separation of the dye components for
this particular combination of solvent and stationary phase
Kromatogram dapat diproduksi dengan mencelupkan plate kromatografi
(TLC plate dengan silika dan campuran spot berbeda untuk dipisahkan)
dalam campuran berbagai sistem pelarut ( contoh nya n-Butanol, Glokosa
asam asetat and Aquades). dalam rasio spesifik untuk memisahkan asam
amino dengan menggunakan kit asam amino standar dengan nilai Rf yang
diketahui.

Garis pensil ditarik di dekat bagian bawah pelat Gambar 22.2 dan sedikit
tetes larutan campuran zat warna ditempatkan di atasnya. Setiap pelabelan
di piring untuk menunjukkan posisi asli tetesan juga harus di pensil. Jika
semua ini dilakukan dengan tinta, pewarna tinta juga akan bergerak saat
kromatogram terbentuk

Bila tempat campuran kering, piring tersebut berada pada lapisan pelarut
dangkal dalam gelas gelas yang tertutup, penting agar tingkat pelarut di
bawah garis dengan titik di atasnya.

Alasan dari beaker dengan keadaan tertutup adalah untuk memastikan

bahwa atmosfir di gelas kimia atau ruang kromatografi jenuh dengan uap
pelarut. Untuk membantu ini, beaker dilapisi dengan beberapa kertas
saring yang direndam dalam pelarut. Saturasi atmosfer dalam gelas kimia
dengan uap menghentikan pelarut dari penguapan saat naik ke wadah.

pelarut perlahan-lahan naik ke plate (wadah), komponen yang berbeda dari

campuran zat warna bergerak pada tingkat yang berbeda dan campuran
dipisahkan menjadi bintik-bintik yang berbeda.
Diagram menunjukkan plate (wadah ) setelah pelarut telah bergerak sekitar
setengah jalan ke atas. Gambar 22.10

Pelarutnya dibiarkan naik sampai hampir mencapai bagian atas plate (wadah) gambar. 22.11 .

Itu akan memberikan pemisahan komponen pewarna maksimum untuk kombinasi fase pelarut dan
stasioner ini