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  • Manula Bioquimica I PI20200916 - 19501934

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    Gabriel Jaquez Fortuna
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    Manula Bioquimica I PI20200916_19501934

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    PRACTICA DE LABORATORIO N° 1 (PBO 1) INTRODUCCION AL LABORATORIO DE BIOQUIMICA A. OBJETIVOS: + Demostrar como usar las diferentes cristaleria para obtener mediciones exactas y precisas. + Analizar como se preparan las Soluciones que seran utlizadas en los experimentos a realizar. + _Interpretar la concentracién de las Soluciones usadas en el laboratorio, 8. PROCEDIMIENTOS PARA EL INICIO DE LAS ACTIVIDADES DEL LABORATORIO. 1. Los procedimientos de laboratorio mediante los cuales el estudiante obtiene resultados, son aplicados en base a determinados métodos. El estudiante que se inicia en la practica de Bioquimica debe conocer el manejo y cuidado de los diferentes instrumentos, cristalerias y equipos de precision, con lo ‘cual, se obtendran resultados confiables y se evitard cualquier accidente. 2. Por ola parte, en un laboratorio de Bioquimica se preparan frecuentemente soluciones porcentuales y Waloradas que requieren de pesada exacta y medicién precisa de fluidos, por tanto, es imprescindible tener un entrenamiento para poder realizar as actividades con eficacia, C. MEDIDAS VOLUMETRICAS. E'litro, es la unidad fundamental de volumen, viene dado por el volumen que ocupa un 1 kg. de agua a temperatura de maxima densidad, o sea aproximadamente 4°C y a 1 almésfera de presion, La miesima Parte del ltro es el mililitro (mi), éste y el centimetro caibico (cc), no son absolutamente idénticos, embargo, en la practica clinica, pueden emplearse indistintamente con iguales resultados. En el anal volumétrico se prefiere el milli. La temperatura y la presién son factores que pueden alterar las medicines volumétricas. La temperatura debe tenerse en cuenta cuando se requlere exactitud, ya que variaciones de 5°C producen cambios importantes de volumen. También la presién en las mediciones volumétricas debe ser estandar. La fabricacién y calibracién de los instrumentos que se emplean en e! laboratorio, indican la temperatura y Presién estandar (normalmente 20°C 6 = SC y 1 atmdsfera de presién) de manera, que ligeras Variaciones de éstos no modifiquen sensiblemente el volumen, D. INSTRUMENTOS PARA LAS MEDIDAS VOLUMETRICAS. En el laboratorio se usan 3 tipos de cristaleria: a) Graduada Volumétrica, b) Graduada No Volumétrica ) No Graduada. La cristaleria graduada volumétrica sirve para medir volumen con exacttud, requiere de un lavado especial no debe secarse al calor. Ejemplos: PIPE TRA La ct teleria graduada no volumétrica sive para medir volimenes aproximados. Ejemplos: NMEYERS 10 La cristaleria no graduada sirve para transferir liquidos y es usada durante los experimentos. Ejempios: TUBOS DE ENSAYO. Un error comin en todas las medidas volumétricas es el que lleva consigo la determinacién del enrase o aforo de la medida. Al leer las graduaciones de pipetas, matraces aforados, buretas y demés cristalerias, debe fomarse en cuenta el volumen de liquido que contienen para enrasarios con la marca de enrase de la cristaleria, tomar como referencia el nivel inferior del menisco del liquido si se emplean soluciones transparentes 0 e1 nivel superior si se usan soluciones opacas 0 coloreadas. Siempre debe hacerse la lectura con el ojo a nivel del menisco para evitar errores de paralelajc. jipetas: Sirven para medir exactamente porciones de las soluciones que se van 2 utilizar en las reacciones quimicas. Las mas comunes son de capacidades de 1,5, 10 y 25 mi. Para usar las pipetas se aspira el liquido hasta que éste sobrepase la marca de aforo o enrase, luego se deja descender lentamente hasta que el menisco coincida con la marca de enrasa segiin si Ia solucion es ooloreada o transparente. Existen dos tipos de pipetas: Volumétricas y Graduadas. Pipetas Volumétricas: Sirven para medir un volumsn de liquido, 0 sea, un volumen fjo. No poseen subdivisiones, son muy exactas y se sopia la ditima gota. Existen en diferentes capacidades y generalmente ‘se emplean para solucion2s dilsidas. Possen un bulbo en ia parte central. Tienen las sigias TC en su etiqueta que significa descarg Pipetas Graduadas: Sirven para medir cantidades variables de liquidos, poseen subdivisiones. Pueden ser de dos tipos: de simple enrase y de doble enrase. Pipetas de Simpie Enraso: Estén graduadas hasta la punta (Pipetas Serolégicas) y al usarias puede vaciarse todo su contenido sin sopler !a ultima gota, 2 menos que la pipeta tenga las siglas B.0. | (Blow Out), To (descargar) 6 una zona esmerilada en la boquilla. No son tan precisas como las. ‘Volumétricas y las medidas realizadas con ellas son mas exactas si se hacen entre dos graduaciones. Con ellas pueden medirse liquidos de elevade densidad como Suero, Plasma, Sangre, Orina, etc. Pipetas de Doble Enrase: Estén graduadas hasta una marca inferior (Pipetas de Mohr). El Volumen comprendido por debajo de esta marca no debe vaciarse, ya que no esté medido y cometeriamos error en la medicién, Micropipetas: Sor de menor calibre y principalmente sirven para contener pequefios volumenes. Ejemplo: Las pipetas de Lambda que son volumétricas y miden 0.1 ml. poseen 2 bulbos que sirven de depésito, La mayoria de las micropipetas son autométicas. Pipetas de Oswaid-Folin: Son pipetas volumétricas, llevan un bulbo en el extremo inferior y se ‘emplean para medir liquidos de elevada densidad. Se sopia la uitima gota, Buretas: Son realmente pipetas graduadas con una llave de contro! al flujo de liquide, se emplean para medir voldmenes variables. Su graduacién es de doble enrase, por tanto, se debe tener cuidado de no pasar el iquido més debajo de la dltima marca para evitar resultados erréneos. Las soluciones muy alcalinas no se deben dejar dentro de la bureta por mucho tiempo, ya que, la llave puede atorarse. Una vez limpia no se dabe secar, sino enjuagarse bien 2 6 3 veces con la solucién con la que se ha de Nenar. Para llenar las buretas hay que asegurarse de que la llave esté cerrada (horizontal). Se introducen de 5 a 10 mi. de la solucién y con cuidado se rota la bureta para mojar las paredes. Luego se le agrega més solucién y se abre la llave para llenar la punta de la bureta, Por dltimo, se completa la bureta llevando el iquido hasta la medida superior del enrase. Matraz Aforado: Sirve para la preparacién de soluciones exactas. Tiene une marca en el cuelio que sefiala el nivel de enrase para ol volumen que esta destinado. Probeta: Se usa para medir volimenes de liquidos que no requieren de un alto grado de exactitud. Beaker 6 Vaso de Precipitado: Sirve para contener liquidos, posee un pico de vaciamiento, Su uso mas comin es para verter pequefias porciones de liquidos que se van a pipetear para evitar > contaminaciones de los frascos que los contienen, para llenar las buretas, calentar soluciones, entre otras; aunque esté graduada, solo mide volimenes aproximados. Erlenmeyers: Sirven para medir volimenes aproximados y para reacciones de titulacién o neutralizacion, Tubos de Ensayo: Sirven para contener liquidos y realizar en ellos las reacciones quimicas. E. PREPARACION DE SOLUCIONES. Diferentes Formas de Expresar las Concentraciones. Es de gran importancia conocer las concentraciones en que vienen expresadas las soluciones, pues con este dato podemos trabajar mejor en el laboratorio. Existen diversas formas de expresarlas, sus ventajas y desventajas dependen de la finalidad con la cual se emplean. Volumen en Volumen (VIV) Soluciones Porcentuales ~ Peso en Peso (PIP) Peso en Volumen (PIV) Molares (M) Soluciones Valoradas ~ Normales (N) ‘Soluciones en Partes por Millon {rem ‘Soluciones Porcentuales: Expresan el porcentaje del soluto que existe en 100ml. de solucién. Pueden ser: Volumen en Volumen (VV): Se emplean para preparar soluciones de liquidos. Contiene mis. de soluto en 100 : mis. de solucién, Peso en Peso (PIP): Indican los gramos de soluto presentes en 100 gramos de solucién. Generalmente estas Soluciones no se preparan en el laboratorio, pero muchos reactivos comerciales son preparados de esta manera, Por ejemplo: Soluciones de Acido Cloricrico, Acide Nitrco, Acide Sulfuric, etc. Peso en Volumen (P/V): ndican los gramos de soluto presentes en 100 mi. de solucién, independientemente de cual sea el solvente, En Bioquimics, las soluciones expresadas en porciento, si no se especiica otra cosa, son ‘soluciones de peso en volumen. ‘Soluciones Valoradas: Expresan la cantidad de moles o equivalentes de soluto que existen en 1 iro de solucién. Pueden ser: M1 ‘Soluciones Molares (M): La solucién 1 Molar (1M) es aquella que posee 1 mol de soluto disuelto en 1 litro de ‘solucién. La solucién 0.1 Molar (0.1 M) es la que tiene disuelta la décima parte del mol de la sustancia en 1000 iis, de solucion, [ ia sustancia expresado en gramos. i | Ejenplo: NaOH => PM =40 Para preparar una soluoién de 1Mde | | 4 Mol de NaOH = 40 gr NaOHse pesan 40 gr en 1000 mis. j Soluciones Normales (N): La Solucién Normal (‘N) contiene el Equivalente Quimico del soluto disuelto en 1 litro de Solucién. La Solucién 0.1 normal (0.1N) o décimo, es la que tiene disuelta la décima parte del equivalente de la sustancia en 1 litro de Solucién. Equivaiente Quimico (Eq) = Peso Molecular de la Sustancia Valencia i i Valencia = No. de H’ 6 OH” uv i | Ejemplo: H,S0, =» PM =98 Para preparar una solucin de 1N de H2SOx | i Valencia =2 ‘se pesan 49 gren 1000 mls. de Solucién. i Eq = 98 =49 2 Soluciones Partes por Millon (ppm): Esta forma de expresar concentracién, se usa para soluciones muy diluidas, y asi evitar el manejo de cifras decimales con varios ceros. Peso del Soluto Peso de la Solucion ppm= X 1,000,000 SSiuna solucién contiene 0.00006 g por ciento del ion Na‘. Se expresa asi Peso del Soluto Peso de la Solucion X 1,000,000 = 6 x 10° x 10 x 10° =6 x 10" =0.60 ppm. F. PARTE EXPERIMENTAL. 12 1 \dentificar y Manejar las diferentes cristalerias utilizadas en el laboratorio de Bioquimica para habituarse a su uso. Practicando en especial en el uso de la bureta. Probar con soluciones transparentes y coloreadas. Resolver diferentes problemas para preparar soluciones tanto porcentuales como valoradas. Por ejemplo; preparar las siguientes soluciones: a) 200 mide Glucosa al 10% (P/V).

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