Real time PCR

*준비물: 기구(Real time PCR equipment, 48 well plate, film), 시약(master mix, Taq-man
probe,
cDNA)

*실험방법
1. cDNA를 vortex 후 spin down 한다. (16 well plate 사용할 때, 시약을 넉넉하게 준비 ->
용량은 18x )

2. 시약들을 표와 같이 mix 한다.

3. mixture를 만들었다면 48 well plate에 18μl씩 넣어준다.

4. 그 후, cDNA를 각각 2μl씩 추가로 넣어준다.

5. Film으로 sealing 해준 뒤, centrifuge 3000rpm, 25s 진행한다.

6. Real-time PCR 기기에 plate를 넣어 PCR을 진행한다

Mixture 1X 21X 38X
Master mix 10μl 210μl 380μl
NFW 7μl 147μl 266μl
Probe 1μl 21μl 38μl
Total 18μl 378μl 684μl
*실험

- 마스크 및 장갑 착용

- cDNA 깨지지 않게 조심히 Plate에 넣어야 하며 mixture와 닿지 않게 해야 결과가 잘나온다.

- 48well plate에 헷갈리지 않게 잘 써놓기, 컴퓨터 로딩속도 느리니까 미리 켜놓기

- mixture의 점성 때문에 tip에 남아있을 수 있는데 tip안에 아무것도 남아있지 않게 해야

한다.

- 용액을 넣을 땐 최대한 빠르게, 정확하게 넣어야 한다.

- cDNA담긴 뚜껑을 열 때 안에 내용물이 튀기지 않게 열고, spin down과 vortex는 꼭

해야한다.