РАДИОИМУНО АНАЛИЗА

Имунолошки техники кои се базираат на радијација е сега овие техники денес не се користат бидејки
се штетни за луѓето кои работат со нив,и се поскапи.Нема потреба да користиме техника која е
штетна и поскапа кога постојат други техники кои се многу поедноставни и поефтинии ни даваат исти
резултати и треба дополнителни дозволи за да може да користиме радиоактивен материјал.Денес
овие техники се главно исфрлени од употреба но се користат за да видиме како со овие техники
може да се одредат различни парамтери.Главно со овие техники одредуваме непозната
кконцентрација на даден антиген.Прво ни треба антиген кој знаеме колку го имаме и да го
означиме со одредена радиоактивна проба која најчесто е 125Јод или Н3 тритиум изотоп на
водород,значи различни радиоактивни елементи кои се вметнувале во самата молекула на
антигенот и има вакви антигени кои се радиоактивно обележани и антиген кој не е радиоактивно
обележан али го имаме во некој сад и незнаеме колку имаме од него во даден раствор во некој
сад.Додека друг раствор кој содржи антиген ист само обележан со радиоактивни елементи и знаеме
колку имаме од него.Ни треба антитело кое ке го врзува овој антиген е сега имајки го ова во
предвид може да направиме еден вид метод каде може да одредиме колкаво е количество на
антигенот во непознатиот раствор.Земаме садови 6 во секој сад додадваме антитело кое ке ни го
врзува дадениот антиген тоа антитело може да ни плови во растворот или да е вметнато на
мембраната долу на дното ,Во секој сад знаеме колку антитела сме ставиле секаде по 6 антитела
исто така во прв сад ставаме антиген кој е обележан со радиоактивна супстанца и ставаме 6 антигена
обележани ако го оставиме да се инкубира некое време сите антигени ке се врзат за антиген
врзувачко место на антителата тоа значи дека откога ке се случи тоа кога ке ја измериме радијација
на растворот на супернатантот ке излезе 0 додека таа кај антитела бидејки сите ке бидат врзани ке
биде 6.Во друг сад 6 антигени ке земеме обележани со радиоактивна супстанца и 3 кои не се
обележани односно некое мало количество од необележани антигени 2-3 капки и незнаеме колку
антигени има внатре поентата е да дознаеме колку има,вкупно имаме 9 антигени да речеме 6/3 =2/3
значи две третини од вкупно се обележани а 1/3 се необележани антигени тоа значи од 6 антитела
2/3 ке се зафатени со обележани а 1/3 со необележани антигени. И останало неврзани 2 обележани
и 1 необележано ,ако ја измериме радијација на раствор горе ке биде 2 а на фракција со антитела
долу ке биде 4.Во трет сад со 6 антитела и 6 обележани антигени и 6 необележани антигени значи
имаме ½ од обележани и ½ од необележани тоа значи 3 ке се врзат необележани за 3 антитела за
другите 3 ,ке се врзат обележани 3 антигени и остануваат по 3 обележани и 3 необележани слободни
и радијација измерена на супернатант ке биде 3 а на фракција со антитела исто 3.Во 4 сад имаме 6
антитела и 6 обележани и 9 небележани антигени значи 2/5 и 3/5 од вкупното бројот не е баш
оптимален ама во нормални услови ке има многу антигени и антитела.За 4 антитела ке се врзат 4
небелажни антигени а за 2 антитела ке се врзат 2 обележани антигени и ке останат 4 слободни
обележани антигени и 5 слободни необележани антигени па радијација горе ке е 4 а доле 2.

Во друг сад 6 обележани ставаме и 12 необележани антигени значи 1/3 обележани и 2/3
необележани од вкупното и 4 ке се врзеа од необележани и 2 обележани за 6те антитела. И
радијација горе 4 доле 2 ке беше.Во друг сад 6 обележани и 30 необележани антигени додаваме
значи 1/6 од вкупно обележани и 5/6 необележани антигени од вкупно и 5 необележани ке се врзеа
и 1 обележан антиген а радијација горе ке беше 5 и доле 1.Бидејки двата антигени и оној кој
незнаеме колку го имаме и оној кој знаеме имаат иста специфичност за антителата а ние знаеме
колку антитела сме ставиле знаеме колку бележани антигени сме ставиле па кога ке го видиме
соодносот на радијација во супернатант и во фракција со антитењла може да одредиме колку има
антигени во непознатата супстанца која сме ја ставиле.Ако е 3:3 тоа значи пола од антитела биле
зафатени со антигени кои не биле бележани од непоззнат раствор,тоа значи дека ако пола биле
зафатени од тоа во самиот раствор имало толку антигени од непозната супстанца колку што имало
односно колку што сме ставиле од познатата.Ако сме стваиле 6 значи мора да има 6 необележани.Во
случај 1:5 само еден антиген обележан се врзал 5 се врзале од другото значи има 5х повеќе од тоа
колку сме ставиле а сме ставиле 6 значи 6х5=30 ке има од необележаните антигени.Ако само 2 од 6
обележани антигени се врзале значи има дупло повеќе од тоа што сме ставиле .Ако 4 се врзале а 2
не се врзале значи моментално има дупло помалце од непознатата отколку од таа познатата што
сме ставиле.Може да се одреди колку антигени има во супстанца која сме ставиле 5 мл а знаеме
дека имало 30 во тие 5 мл ние започнуваме за да видиме колку имаме но бројот 30 не го знаеме
прво туку гледаме радијација колку се врзало и пресметуваме колку е.Во вистински услови нема се
убаво да се врзуваат значи ке има некои фракции измеѓу не искачаат толку убави резултатите затоа
се прави стандардна крива со цел да добиеме поточни резултати и да ги извадиме преку формула.За
стандардна крива да се направи и непознатото количество на антиген ке ни биде познато,ак знаеме
колку ставаме и од необележаниот антиген ако знаеме колку ставаме и од обележаниот може да
направиме стандардна крива и да видиме како со зголемување на необележан антиген така паѓа
количество на обележаниот барем во фракцијата со антитела.Но како што се зголемува број на
необележани так се зголемува број на обележани во растворот бидејки остануваат
несврзани.Поентата е како што зголемуваме необележани антигени тага опаѓаат обележаните во
фракција со антитела,но како зголемува необележани така и растат обележани во
супернатантот.Откако ке се добие стандардна крива со познати правиме иста но со непознати .Како
ги изолираат?Го имаме растворот и имаме некои кои останале обележани антигени и необележани
кои не се врзале и ако не се укотвени и антителата туку се расфрлани по растворот си пловат
неможе да го истуриме зашто се заедно ке се истури затоа ке ставиме друго антитело кое ке се врзе
со веќе постоечките внатре антитела и ке го исталожи комплексот ке направи талог ,другиот дел што
останува ке го истуриме само надвор во друг сад и тоа ке ни биде супернатантот а талогот ке биде
каде што ни се антителата врзани за даден антиген и ке ја измериме радијација на двете, и во однос
на тоа како ни се променува радиоактивноста во супернатантот ке правиме експерименти каде ке
ставаме непознати и ке имаме промени во радијација на талог и како што се променува радијацијата
ке бележиме на стандардна крива.