C 食品成分

H O

1.49 栄養補助食品中ルテイン，ゼアキサンチンの高速分析（1）̶ LC

■解説 ■分析条件
ルテインおよびゼアキサンチンは，食品添加物（既 カラム ：Shim-pack XR-ODS
存添加物）であるマリーゴールド色素に含まれる成 (75 mmL.×3.0 mmI.D., 2.2 μm)
分で，カロテノイドの一種です。これら成分は，近 ：Shim-pack VP-ODS
(150 mmL.×4.6 mmI.D., 4.6 μm)
年白内障や加齢性黄斑変性症（AMD）の予防に効
移動相 ：A：メタノール/テトラヒドロフラン/水
果があると言われています。ここでは，マリーゴー = 45/30/25 (v/v/v)
ルドエキス含有栄養補助食品に B ：テトラヒドロフラン
着目し，超高速LCシステム“Prominence UFLC” グラジエント溶出法
およびフォトダイオードアレイ検出器SPD-M20Aを タイムプログラム：(XR-ODS)
用いたルテインとゼアキサンチンの分析例をご紹介 B 0 % (0.00-4.50 min)
→ 100 % (4.50-5.50 min)
します。
→ 0 % (5.51-7.50 min)
(VP-ODS)
■標準試料の分析 B 0 % (0.00-15.50 min)
図1.49.1にルテインとゼアキサンチンの構造を示 → 100 % (15.51-20.00 min)
します。これら2成分は構造が類似した構造異性体 → 0 % (20.00-25.00 min)
であり，一般に逆相クロマトグラフィーで完全分離 流量 ：0.8 mL/min (XR-ODS), 1.0 mL/min (VP-ODS)
カラム温度：50 ℃
させるには工夫が必要です。ここでは，水/メタノー
検出 ：フォトダイオードアレイ
ル系移動相に対して，さらにテトラヒドロフランを
UV-VIS 検出器 450 nm
加えることにより，選択性を改善して分離の効率化 フルーセル：セミミクロセル (XR-ODS)
をはかりました。また，高速高分離用カラム“Shim- コンベンショナルセル (VP-ODS)
pack XR-ODS”（粒子径2.2 μm）を用いることによ 試料注入量：2 μL (XR-ODS), 5 μL (VP-ODS)
り，コンベンショナルカラム“Shim-pack VP-ODS” Shim-pack VP-ODS (150 mmL. × 4.6 mmI.D.)
mAU
（粒子径4.6 μm）の分離を保ちつつ，分析時間を約 22.5
2
20.0
1
1/4に短縮することができました。本条件では，実 17.5
15.0
試料分析のためにカラム洗浄工程を加えています。 12.5
10.0
7.5
CH3 5.0
OH
CH3 CH3 CH3 2.5
H3 C
0.0
CH3
CH3 CH3 CH3 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 min
HO
CH3
Lutein
CH3
OH
CH3 CH3 CH3
H3 C

mAU Shim-pack XR-ODS (75 mmL. × 3.0 mmI.D.)

CH3
CH3 CH3 CH3 22.5
HO
CH3 20.0
Zeaxanthin 2
17.5
1
15.0
図1.49.1 ルテイン，ゼアキサンチンの構造式 12.5
10.0
7.5
5.0
2.5
0.0

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 min

■ピーク成分
1 Zeaxanthin (10 mg/L) 2 Lutein (10 mg/L)

71 図1.49.2 ルテインおよびゼアキサンチンの
クロマトグラム

分析集.indb 71 11/08/26 9:58

 1.49 栄養補助食品中ルテイン，ゼアキサンチンの高速分析（2）̶ LC

■栄養補助食品の分析
図1.49.3に市販マリーゴールドエキス含有栄養補
4 capsules
助食品（カプセル）の分析例を示します。図1.49.4 Tetrahydrofuran 10 mL
は試料前処理手順です。図1.49.5は標準試料と栄養 Sample solution 1 mL
3 % Pyrogallol-ethanolic solution 10 mL
補助食品中各成分のスペクトルを重ね描きした結果 1 % NaCl 0.5 mL
60 % KOH 1.0 mL
を表しています。また，図1.49.6に栄養補助食品の Saponification (30 min,70 ˚C)
三次元表示例を示します。 Cooling (5 min)
Ethyl acetate / Hexane (1:9) 15 mL
mAU 1 % NaCl 22.5 mL
150
Shaking (5 min)
■ピーク成分
125 1 Zeaxanthin Centrifugation
2 Lutein
Aqueous (Lower layer)
100 2

Supernatant (Upper layer) ① Ethyl acetate / Hexane (1:9) 15 mL

75 Mixing (5 min) ×2

Centrifugation
50
Supernatant ② Residue
25
1 Supernatant ①+②
0 Evaporation to dryness
Tetrahydrofuran 10 mL
-25 2 μL Injection to HPLC
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
min

図1.49.3 栄養補助食品のクロマトグラム 図1.49.4 前処理手順

Lutein
mAU
448
475

Standard
100
464

Sample

75

50
269

25
303

300 400 500 600

nm 35
Zeaxanthin 30
200
453

6 Standard
25
471

250 20
479

Sample Lutein
5 300 15
350 10 Intenisty
4 (mAU)
400 Zeaxanthin 5
3 Wavelength 450 0
(nm) 4,000
2 500
3,000
279

1
550
2,000 Time
311

(min)
0 1,000

300 400 500 600

nm

図1.49.5 ルテインおよびゼアキサンチンのスペクトル 図1.49.6 栄養補助食品の三次元表示
［参考資料］
1）財団法人日本食品分析センター：五訂 日本食品標準成分表 分析マニュアルの解説
72
2）江川幸恵・馬場強三：長崎県衛生公害研究所報，49,100（2003）

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