Farmasains Vol. 6 No.

1, April 2019

UJI IN-VITRO PENGHAMBATAN ENZIM ASETILKOLINESTERASE DAN IDENTIFIKASI

FITOKIMIA FRAKSI AKTIF EKSTRAK ETANOL BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia L.)

IN-VITRO SCREENING FOR ENZYME ACETYLCHOLINESTERASE INHIBITORY AND

PHYTOCHEMICALS IDENTIFICATION OF ACTIVE FRACTION OF ETHANOLIC EXTRACT OF
NONI FRUIT (Morinda citrifolia L. )

Shela Puzi Dina1 , Rina Herowati2, Arief Nurrochmad3

1
Akademi Farmasi ISFI
2
Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi
3
Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada

Naskah diterima tanggal 29 Januari 2019

ABSTRACT
Acetylcholine is the neurotransmitter that plays a role in the regulation of
cognitive functions, especially in encoding of new memories. Excessive hydrolysis
of acetylcholine by the acetylcholinesterase enzyme can interference memory
encoding. Noni is widely available in Indonesia and had been proven to have the
ability of acetylcholinesterase enzyme inhibition. This study aimed to determine
the ability of fractions of ethanol extract of noni fruti to inhibits the enzyme
acetylcholinesterase activity and identification chemical compounds in the active
fraction of the ethanol extract of noni fruit with liquid chromathography-mass
spectrometry analysis. Separation of chemical compounds was done through a
two-stage extraction using maceration method and fractionated using vacuum
liquid chromathography. AChE enzyme inhibition testing conducted by the
Ellman's method (colorimetric method) at concentration of 1000, 500, 250, 125
µg/mL. Identification of chemical compounds was conducted liquid
chromathography-mass spectrometry. IC50 value of the fraction I, fraction II and
fraction III of noni fruit showed respectively at 4882,29, 947,99, 1726,99, 18673,82
µg/mL. Active fraction expected contained linolenic acid linoleic acid, pinoresinol,
methyl linoleate and methyl oleate.

Keywords : acetylcholine, acetylcholinesterase inhibitor, Morinda citrifolia L.

ABSTRAK
Asetilkolin adalah neurotransmitter yang berperan dalam pengaturan fungsi
kognitif terutama pembentukan memori baru. Hidrolisis berlebihan asetilkolin oleh
enzim asetilkolinesterase dapat menyebabkan gangguan pada pembentukan
memori. Mengkudu merupakan tanaman yang banyak terdapat di Indonesia dan
telah teruji memiliki kemampuan penghambatan enzim asetilkolinesterase.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan penghambatan aktivtas
enzim acetylcholinesterase fraksi-fraksi dari ekstrak etanol buah mengkudu dan
identifikasi senyawa yang terkandung dalam fraksi aktif dari ekstrak etanol buah
mengkudu melalui analisis liquid chromathography-mass spectrometry.
Pemisahan senyawa dilakukan melalui dua tahap yaitu ekstraksi menggunakan
metode maserasi dan fraksinasi menggunakan kromatografi cair vakum.
Pengujian penghambatan enzim asetilkolinesterase dilakukan dengan
menggunakan metode Ellman (kolorimetri) pada konsentrasi 1000, 500, 250, 125
µg/mL. Identifikasi senyawa kimia fraksi teraktif dilakukan dengan analisis liquid
chromathography-mass spectrometry. Nilai IC50 ekstrak etanol, fraksi 1, fraksi 2
dan fraksi 3 buah mengkudu secara berturut-turut sebesar 4882,29, 947,99,
1726,99, 18673,82 µg/mL. Fraksi teraktif diduga mengandung asam linolenat,
asam linoleat, pinoresinol, metil linoleat dan metil oleat.

Kata kunci : asetilkolin, penghambat asetilkolinesterase, Morinda citrifolia L.

Alamat korespondensi :
Sellapuzi@gmail.com
1
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)
PENDAHULUAN
Fungsi kognitif dapat didefinisikan
sebagai proses pengaturan informasi oleh
organisme. Pengaturan informasi meliputi
kegiatan memperoleh informasi (persepsi),
memilih (perhatian), mewakili (pemahaman) dan
mempertahankan (memori) informasi, serta
menggunakannya untuk memandu perilaku
(penalaran dan koordinasi motorik output)
(Bostrom and Sandberg, 2009). Acetylcholine
(ACh) adalah neurotransmitter pada sinapsis
neuromuskuler, di ganglia sistem motorik
visceral, dan di berbagai bagian dalam sistem
saraf pusat). ACh dihidrolisis oleh enzim hidrolitik
yang kuat, yaitu Acetylcholinesterase (AChE)
(Purves et al., 2012). Kekurangan kadar ACh di
otak terjadi pada penyakit demensia yang
ditandai dengan penurunan fungsi kognitif
(pengenalan, ingatan, daya membedakan)
hingga terjadi keruntuhan mental (Tjay and
Rahardja, 2015).
Intervensi dapat dilakukan untuk
meningkatkan fungsi kognitif dengan tujuan
memperbaiki patologi atau cacat pada subsistem
kognitif. Intervensi tersebut meliputi obat-obatan,
diet, edukasi, pengendalian lingkungan, mental
training, Transcranial Magnetic Stimulation dan
modifikasi secara genetik (Bostrom and
Sandberg, 2009). Saat ini, terapi masih identik
dengan intervensi obat-obatan, seperti
penghambat kolinesterase dan antagonis
reseptor NMDA (Tjay and Rahardja, 2015).
Penggunaan obat-obatan sintetis tidak terlepas
dari efek samping yang merugikan sehingga obat
tradisional mulai menjadi pilihan. Penelitian
menunjukkan bahwa beberapa tanaman
tradisional memiliki aktivitas terhadap fungsi
kognitif dan memori terutama dalam
penghambatan aktivitas enzim
acetylcholinesterase (AChE) di antaranya
Ginkgo biloba L. (Ding et al., 2013), pegagan
(Centella asiatica L.) (Rahman et al., 2012), dan
mengkudu (Morinda citrifolia L.) –(Pachauri et al.,
2012).
Mengkudu merupakan tanaman yang
banyak terdapat di Indonesia. Penelitian praklinis
(uji toksisitas kronis dan sub kronis) (West et al.,
2009a) dan klinis (double blind trial pada 96
probandus) (West et al., 2009b) menunjukkan
bahwa buah mengkudu aman dikonsumsi.
Ekstrak etanol buah mengkudu juga dapat
menghambat aktivitas enzim AChE baik secara in
vitro maupun in vivo –(Pachauri et al., 2012).
Penelitian Pachauri et al. (2012) telah
mencapai tahap fraksinasi dengan metode
ekstraksi cair-cair, dimana fraksi yang berasal
dari pelarut kloroform memiliki kemampuan
penghambatan aktivitas enzim AChE lebih besar
dibandingkan dengan fraksi yang berasal dari
pelarut dengan kepolaran lebih tinggi (etil asetat
2
dan n-butanol). Senyawa-senyawa yang terlarut
dalam fraksi kloroform diperkirakan adalah
senyawa-senyawa dengan kepolaran rendah
namun dapat juga berasal dari golongan alkaloid.
Alkaloid memiliki penghambatan kuat terhadap
aktivitas enzim AChE karena memiliki kemiripin
dengan substrat (ACh) yaitu adanya gugus
nitrogen –(Pachauri et al., 2012).
Senyawa-senyawa pada mengkudu yang
berperan dalam penghambatan enzim AChE
diperkirakan dapat berasal dari golongan
senyawa nonpolar, alkaloid, lignan dan flavonoid
sehingga fraksinasi dengan kromatografi cair
vakum (KCV) menggunakan seri eluen nonpolar
hingga semipolar. Fraksi aktif diperoleh dengan
pengujian penghambatan aktivitas enzim AChE
secara in vitro. Identifikasi senyawa pada fraksi
paling aktif dilakukan dengan menggunakan
liquid chromathography-mass spectrometry (LC-
MS).
LC-MS merupakan suatu teknik dengan
perkembangan electrospray ionisation (ESI)
yang sederhana dan kuat serta dapat diterapkan
untuk berbagai molekul biologis. Standar isotop
internal yang stabil memungkinkan tes yang
sangat sensitif dan akurat untuk dikembangkan
meskipun beberapa optimasi metode diperlukan
untuk meminimalkan efek penekanan ion.
Kecepatan scanning memungkinkan multiplexing
tingkat tinggi dan banyak senyawa dapat diukur
dalam analisis tunggal (Pitt, 2009). Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui kemampuan
penghambatan aktivtas enzim
acetylcholinesterase dan identifikasi senyawa
yang terkandung dalam fraksi aktif dari ekstrak
etanol buah mengkudu melalui analisis LC-MS
METODE PENELITIAN
Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini
meliputi bejana maserasi, oven (Memmert),
kertas saring (Whatman), Waterbath (Memmert),
Rotary evaporator (IKA), lemari asam (E-
scienting), neraca analitik (Ohaus), kolom KCV
(Iwaki), pompa KCV (Hitachi), plat KLT (Merck),
chamber (Macherey Nagel), pipa kapiler (Nesco),
LC-MS (Mariner Biospectrometry), alat-alat gelas
(Pyrex), magnetic stirer (IKA), mortir dan stamper
(OneMed), kolorimeter dari Elisa microplate
reader (Biotek), microplate (Iwaki), mikropipet
(Biohit), microtube (Axygen), kain flanel, dan
botol kaca.
Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini
meliputi serbuk simplisia buah mengkudu, etanol
96%, n-heksana, etil asetat, silika gel G 60,
DMSO, kontrol positif (neostigmin) dan enzim
AChE tipe VI-S, dari electric eel, 5,5-dithiobis[2-
,nitrobenzoic acid], AChI, Tris-HCl buffer, aqua

destilata.
Metode
Penelitian dilakukan dalam beberapa
tahap, yaitu :
Identifikasi serbuk simplisia buah mengkudu
Identifikasi serbuk simplisia dilakukan di
Laboratorium Taksonomi Universitas Setia Budi.
Identifikasi meliputi pemeriksaan makroskopis
dan mikroskopis. Pemeriksaan makroskopik
dilakukan dengan uji organoleptis meliputi
bentuk, warna, bau dan rasa. Pengamatan
secara mikroskopik dilakukan untuk
mengidentifikasi fragmen pengenal buah
mengkudu berdasarkan literatur. Serbuk
simplisia diletakkan di atas kaca objek, ditetesi
kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup
serta diamati di bawah mikroskop.
Pemisahan senyawa
Pemisahan senyawa dilakukan dengan
ekstraksi dengan metode maserasi dan
fraksinasi menggunakan kromatografi cair vakum
(KCV). Ekstrak etanol buah mengkudu dibuat
dengan cara maserasi menggunakan etanol
96%. Serbuk kering sebanyak 1 kg dimasukkan
ke dalam bejana maserasi dan ditambahkan 5
liter cairan penyari. Ekstraksi dilakukan selama 5
hari dengan pengadukan secara berkala dan
dilakukan penggantian cairan penyari
(remaserasi).
Langkah pertama dalam fraksinasi
dengan KCV adalah mengemas kolom. Kolom
kromatografi dikemas kering dalam keadaan
vakum agar diperoleh kerapatan kemasan
maksimum. Pompa vakum dihentikan dan 100
mL n-heksana dituangkan ke permukaan
penjerap dan divakumkan kembali. Kolom
dihisap sampai kering dan telah siap digunakan.
75 gram ekstrak etanol buah mengkudu
dimasukkan ke dalam kolom yang telah dilapisi
kertas saring, Elusi dimulai dengan eluen n-
heksana (100 %), kemudian dilakukan
peningkatan kepolaran bertahap yaitu n-heksana
: etil asetat dengan rasio perbandingan 99 : 1, 98
: 1, 97 : 3, 96 : 4, 95 : 5, 94 : 6, 92 : 8, 90 : 10, 88 :
12, 87 : 13, 86 : 14, 84 : 16. Volume eluen yang
digunakan setiap elusi adalah sebanyak 50 mL.
Fraksi-fraksi nonpolar-semipolar diidentifikasi
dengan KLT. Bercak pada plat KLT diamati di
bawah sinar UV. Bercak yang sama diidentifikasi
memiliki komponen kimia yang sama dan dapat
dijadikan satu fraksi.
Penyiapan larutan uji
Larutan uji digunakan dalam penelitian ini
antara lain ekstrak etanol buah mengkudu, fraksi-
fraksi nonpolar-semipolar ekstrak etanol buah
mengkudu dan neostigmin (kontrol positif).
Pembuatan larutan uji ekstrak etanol buah
mengkudu, fraksi-fraksi nonpolar-semipolar
ekstrak etanol buah mengkudu dilakukan dengan
Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019
cara memasukkan 2 mg (terlarut dalam pelarut
yang sesuai) bahan-bahan tersebut ke dalam
microtube dan ditambahkan buffer tris HCl pH 8
hingga tanda batas untuk memperoleh
konsentrasi 2000 µg/mL. Pengenceran dilakukan
untuk memperoleh konsentrasi yang lebih kecil
(1000, 500, 250, 125 µg/mL); Larutan neostigmin
500 µg/mL diencerkan dengan buffer tris HCl pH 8
untuk memperoleh konsentrasi 62,5; 31,25;
15,625; 7,812 dan 3,906 µg/mL.
Pengujian penghambatan aktivitas enzim AChE
secara in vitro
Pengujian penghambatan aktivitas enzim
AChE dilakukan dengan metode Ellman
dikombinasi dengan metode yang dikembangkan
Rhee et al. (2001). Microplate 96 wells diisi
dengan 25 µL larutan uji, 50 µL Tris–HCl buffer 50
mM pH 8, 25 µL larutan enzim AChE (0,2 unit/ml),
diinkubasi pada temperatur 250C selama 10
menit, ditambahkan 125 µL DTNB 3 mM.
Absorbansi diukur pada panjang gelombang 405
nm menggunakan kolorimeter dari Elisa
microplate reader. Absorbansi sebelum
penambahan substrat digunakan sebagai
blanko. Selanjutnya, 25 µL AChI 15 mM
ditambahkan ke dalam microplate 96 wells dan
diukur absorbansi pada panjang gelombang 405
nm menggunakan kolorimeter dari Elisa
microplate reader dengan interval waktu satu
menit sebanyak 5 kali (pada kontrol negatif 25 µL
larutan uji diganti dengan buffer tris HCl pH 8)
–(Rhee et al., 2001).
Persentase penghambatan aktivitas enzim AChE
dihitung dengan persamaan :
%Penghambatan =
slope kontrol negatif - slope larutan uji
x 100%
slope kontrol
Identifikasi senyawa kimia dengan LC-MS
dilakukan pada fraksi dengan penghambatan
aktivitas enzim AChE tertinggi. Analisis LC-MS
dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan
Indonesia (LIPI). Kolom yang digunakan adalah
C18 (RP 18), 150 mm x 2 mm. Sistem elusi
isokratik dengan eluen metanol. Laju alir eluen
0,5 mL/menit. Suhu kolom diatur pada suhu
0
ruangan yaitu 25 C.
Preparasi LC-MS dilakukan sebelum
analisis sampel. Pertama, dilakukan purging
pada kolom LC untuk menghilangkan sisa eluen
dan dilanjutkan dengan pumping eluen selama
5 menit dan equilibrate selama 5 menit untuk
menstabilkan LC. Selanjutnya, dilakukan
optimasi spektrometri masa dan kondisi sumber
ion dengan memvariasikan beberapa parameter.
Setelah preparasi LC-MS selesai, sampel
yang telah dilarutkan dalam metanol
3
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)

mengandung 0,3 % asam asetat diinjeksikan ke 100

% Penghambatan enzim (%)

LC-MS sebanyak 20 µL. Sampel akan dipisahkan 90
oleh HPLC fase terbalik untuk kemudian 80
dianalisis MS dengan metode ionisasi ESI. 70
Identifikasi fitokimia dilakukan dengan 60
membandingkan spektra MS dengan bobot 50
molekul senyawa menurut literatur. 40
30
20
HASIL DAN PEMBAHASAN
10
Ekstraksi 1 kg serbuk simplisia buah
0
mengkudu menghasilkan ekstrak kental sebesar 0 500 1000 1500 2000 2500
77,435 gram (rendemen 7,74%). Berdasarkan
hasil fraksinasi 20 g ekstrak etanol buah Konsentrasi (µg/ml)
mengkudu diperoleh fraksi 1, fraksi 2, dan fraksi 3 Keterangan :
= Ekstrak etanol buah mengkudu
berturut-turut sebesar 1703 mg (rendemen 8,51 = Fraksi 1 buah mengkudu
%), sebesar 959 mg (rendemen 4,79 %), 636 mg = Fraksi 2 buah mengkudu
(rendemen 3,18 %). = Fraksi 3 buah mengkudu
Pengujian penghambatan enzim = Neostigmin
asetilkolinesterase pada penelitian ini dilakukan Gambar 1. Grafik persentase penghambatan
dengan metode kolorimetri (Metode Ellman). enzim AChE
Slope kontrol negatif (enzim tanpa sampel) yang
diperoleh pada penelitian sebesar 0,087.
Persentase penghambatan enzim pada Tabel 1. Nilai IC50 penghambatan neostigmin,
Gambar 1 dihitung berdasarkan perbandingan ekstrak etanol buah mengkudu dan
selisih slope enzim dan sampel terhadap slope fraksi-fraksinya terhadap enzim
enzim. asetilkolinesterase
Nilai IC50 diperoleh dengan analisis log
probit. Hasil perhitungan IC50 dengan analisis log Sampel IC50 (µg/ml)
probit dapat dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan Neostigmin 3,44
perbandingan nilai IC50 masing-masing sampel, Ekstrak etanol buah
diketahui fraksi satu memiliki daya hambat mengkudu 4882,29
terbesar. Nilai IC50 ekstrak mengkudu dan fraksi- Fraksi1 buah mengkudu 947,99
fraksinya menunjukkan penghambatan enzim Fraksi 2 buah mengkudu 1726,99
yang lemah sedangkan pada penelitian Fraksi 3 buah mengkudu 18673,82
sebelumnya, ekstrak mengkudu dan fraksi-
fraksinya menunjukkan penghambatan sedang 3,2; 3,5; 4,1 dan 4,9 menit seperti terlihat pada
hingga kuat. Hal-hal yang menyebabkan Gambar 2. Kelimpahan senyawa pada sampel
perbedaan hasil dapat terjadi di antaranya enzim diperoleh dengan membandingkan luas area.
yang digunakan, perbandingan jumlah sampel Puncak pertama memiliki kelimpahan terbesar
dan enzim, pelarut pada proses fraksinasi serta diikuti oleh puncak kedua, keempat, ketiga dan
kelarutan sampel dalam buffer. kelima. Adanya 5 puncak diduga terdapat
Fraksi dengan kemampuan 5 senyawa pada fraksi I. Selanjutnya, masing-
penghambatan aktivitas enzim AChE terbesar masing puncak akan dianalisis oleh MS sehingga
(FI), dianalisis dengan LCMS. Berdasarkan diperoleh bobot molekul dengan penambahan
pemisahan LC fraksi I ekstrak etanol buah ion positif. Spektra MS dapat dilihat pada
mengkudu, diperoleh 5 puncak dengan persen Gambar 3. Beberapa senyawa pada buah
intensitas cukup tinggi pada waktu retensi 2,2; mengkudu yang memiliki bobot molekul (setelah

Tabel 2. Dugaan senyawa pada fraksi I ekstrak etanol buah mengkudu yang memiliki bobot
molekul (setelah penambahan ion positif) yang mirip dengan spektra MS

Waktu [M+H] + [M+NH4] + [M+Na]+ Perkiraan BM (g/mol)

retensi senyawa
(menit)
2,2 279,4439 296,4676 Asam linolenat 278,43
3,2 281,4676 298,5085 303,4664 Asam linoleat 280,4472
3,5 359,5965 376,6416 381,5965 Pinoresinol 358,38508
4,1 295,4904 312,5368 317,4894 Metil linoleat 294,47
4,9 297,5078 314,5575 319,5058 Metil oleat 296,49

4
 Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019

BPI = >NR(3. 00)=> S M3

T4.1 445.3
100 T 3.5
T3.2
90
T 2.2
80

70

60 T4.9
% Intensi ty

50

40

30

20

10

0 0
0 2 4 6 8 10
Retention Time (Min)

Keterangan:
Indeks Waktu (menit) Batas bawah Batas Tinggi Area Kelimpahan (%)
atas
1 2,166283 1,467267 2,672000 373 3405,90 25,79123
2 3,177733 2,749617 3,333617 404 2715,86 20,56589
3 3,528067 3,411400 3,839350 435 1996,99 15,12224
4 4,072183 3,916967 4,499633 445 3160,90 23,93597
5 4,888017 4,577416 5,432300 258 1926,00 14,58467

Gambar 2. Profil LC fraksi 1 ekstrak etanol buah mengkudu

MarinerSpec/56:57 (T /2.13:2.17)-48:50(T-2.13:2.17) ASC=>NR(2.00)[BP=279.5, 415]

279.4439 414.8
100
‫ﺀ‬a I ‫آ‬+
90

80

70

60
%Intensity

50

40

30
295.4474

[M+NH4 ]+ 319.4710
20
557.9112
335.4605
10 235.3425 296.4676
558.8756
242.2991 317.4641
227.3380 395.5209 573.9124 631.9186
181.2344 266.8339 308.5032 352.4693 438.0738 479.6884 523.2531 678.8156
0 0
‫و ﯾو‬ 281 391 501 611 721
Mass(m/z)

(a) Waktu retensi 2,2 menit

5
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)

Mariner Spec /82:84 (T /3 .14:3.22) -70:73 (T-3.14:3.22) ASC=>NR(2.00)[BP=303.5, 443]

303.4664 443.2
100

90
[M+Na] +

80

70
298.5085
+
[M+NH4 ]
60 353.5449
% Intensi ty

281.4676
50
+
[M+H]
40
331.5429
30
263.4433

20

348.5812
10 561.9445
313.5239
379.5366 599.8946 684.0733
130.7000 225.3629 302.1674 582.3710 686.0049 880.3892 957.4317
0 0
59.0 287.2 515.4 743.6 971.8 1200.0
Mass (m/z)

(b) Waktu retensi 3,2 menit

Mariner Spec /91:92(T/3.49:3.53)-87:89 (T -3.49:3.53) ASC=>NR(2.00)[BP= 381.6,295]

381.5985 294.7
100

90
359.5965

+
80 [M+Na]
+
[M+H]
70

60
% Intensity

50

376.6416
40
+
[M+NH4 ]
30
360.5878 382.5715
20 283.4765
341.5657
305.4780
10 360.1872 377.6101 413.5938
392.5714
284.4549 300.5155 342.5838 361.1329 376.9814 397.5691
256.4141 271.4849 315.4361 414.4559
0 0
252.0 290.2 328.4 366.6 404.8 443.0
Mass(m/z)

(c) Waktu retensi 3,5 menit

6
 Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019

Mariner Spec /106:107 (T /4 .07:4.11) -100:102 (T-4.07:4.11) ASC=>NR(2.00)[BP=295.5, 436]

295.4904 43 6.3
10 0
317.4894
+ +
[M+H] [M+Na]
90

312.5368
80

[M+NH4] +
70

60
% Intensi ty

50

40

30

20 263.4436

10

199.3229 297.5161 629.9877

431.7049 794.8484 935.2595
0 0
59 .0 2 87 .2 51 5.4 7 43 .6 97 1.8 1 20 0.0
Mass (m/z)

(d) Waktu retensi 4,1 menit

Mariner Spec /126:128 (T /4 .85:4.93) -116:119 (T-4.85:4.93) ASC=>NR(2.00)[BP=297.5, 272]

297.5078 272.1
100

90 [M+H]+

80

70

60
% Intensi ty

319.5058
50

[M+Na] +
40

30 559.9058

314.5575
20
[M+NH4] +
10
293.4775 445.6779 561.9256
191.1530 294.9050 415.6077 649.4669 725.8225 891.3118
0 0
59.0 287.2 515.4 743.6 971.8 1200.0
Mass (m/z)

(e) Waktu retensi 4,9 menit

Gambar 3. Spektra MS fraksi 1 ekstrak etanol buah mengkudu a) waktu retensi 2,2 menit,
b) waktu retensi 3,2 menit, c) waktu retensi 3,5 menit, d) waktu retensi 4,1 menit dan
e)waktu retensi 4,9 menit

7
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)
penambahan ion positif) yang mirip dengan
spektra MS dapat dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan hasil analisis spektra MS,
diperoleh dua prediksi senyawa pada fraksi I
adalah asam asam linolenat, asam linoleat,
pinoresinol, metil linoleat dan metil oleat.
Berdasarkan hasil penelitian in silico Srikanth et
al. (2017), diperoleh lima senyawa pada ekstrak
buah mengkudu yang memiliki afinitas lebih baik
daripada obat penghambat terhadap enzim
AChE secara in silico yaitu : (+)-3,3'-
bisdemetiltanegool ,3,3'-bisdemetilpinoresinol, (-
)-pinoresinol, asam isoamericanoat A, kuersetin.
Efek penghambatan mungkin berhubungan
dengan efek kumulatif dari ikatan kuat H 2 ,
interaksi cationin-π-π-π dan interaksi hidrofobik
terhadap enzim (Srikanth et al., 2017).
Pengujian yang dilakukan oleh El-Hasan
et al. (2003) menunjukkan bahwa syringaresinol
memiliki daya hambat signifikan terhadap
aktivitas enzim AChE dengan nilai IC50 200 µg/ml
sedangkan pinoresinol, leucanthemitol dan E-
ferulaldehid menghambat aktivitas enzim AChE
dengan rentang sebesar 20–35% pada
konsentrasi lebih tinggi (El-Hassan et al., 2003).
Berdasarkan penelitian lain, pinoresinol dapat
memperbaiki kerusakan memori pada mencit
yang diinduksi dengan penghambat kolinergik,
memfasilitasi induksi potensiasi jangka panjang
hipokampus, memblokir enzin AChE serta
memfasilitasi masuknya kalsium ke dalam sel
neuro 2a (Yu et al., 2019).
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian diperoleh
nilai IC50 ekstrak etanol, fraksi 1, fraksi 2 dan fraksi
3 buah mengkudu secara berturut-turut sebesar
4882,29, 947,99, 1726,99, 18673,82 ppm. Fraksi
teraktif dalam pengujian penghambatan aktivtas
enzim AChE diduga mengandung senyawa asam
linolenat, asam linoleat, pinoresinol, metil linoleat
dan metil oleat.
UCAPAN TERIMA KASIH
Selama penulisan karya tulis ini
berlangsung, tidak lepas dari bimbingan serta
dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu,
penulis mengucapkan terima kasih kepada
semua pihak atas dukungan, bantuan serta kerja
samanya hingga terselesaikannya karya tulis ini.
DAFTAR PUSTAKA
Bostrom, N., Sandberg, A., 2009. Cognitive
Enhancement: Methods, Ethics,
Regulatory Challenges. Sci. Eng. Ethics
1 5 , 3 1 1 3 4 1 .
https://doi.org/10.1007/s11948-009-
9142-5
Ding, X., Ouyang, M.-A., Liu, X., Wang, R.-Z.,
2013. Acetylcholinesterase Inhibitory
8
Activities of Flavonoids from the Leaves
of Ginkgo biloba against Brown
Planthopper. J. Chem. 2013, 14.
https://doi.org/10.1155/2013/645086
El-Hassan, A., El-Sayed, M., Hamed, A.,
Ve r p o o r t e , R . , 2 0 0 3 . B i o a c t i v e
constituents of Leptadenia arborea.
Fitoterapia 74, 184187.
https://doi.org/10.1016/S0367-
326X(02)00314-3
Pachauri, S.D., Tota, S., Khandelwal, K., Verma,
P.R.., Nath, C., Hanif, K., Shukla, R.,
Saxena, J.K., Dwivedi, A.K., 2012.
Protective effect of fruits of Morinda
citrifolia l. on scopolamine induced
memory impairment in mice: a
behavioral, biochemical and cerebral
blood flow study. J. Ethnopharmacol.
1 3 9 , 3 4 4 1 .
https://doi.org/10.1016/j.jep.2011.09.057
Pitt, J.J., 2009. Principles and applications of
liquid chromatography-mass
spectrometry in clinical biochemistry.
Clin. Biochem. Rev. 30, 1934.
Purves, D., Augustine, G.J., Fitzpatrick, D., Hall,
W.C., LaMantia, A.-S., White, L.E.,
Mooney, R.D., Platt, M.L., 2012.
Neurosciene 5 th edition. Sinauer
Associates, USA.
Rhee, I.K., van de Meent, M., Ingkaninan, K.,
Verpoorte, R., 2001. Screening for
acetylcholinesterase inhibitors from
Amaryllidaceae using silica gel thin-layer
chromatography in combination with
bioactivity staining. J. Chromatogr. A 915,
217223. https://doi.org/10.1016/S0021-
9673(01)00624-0
Srikanth, J., Kavimani, S., Reddy, C.U.M., Chitra,
K., 2017. Comparative Molecular
Docking Study of Phytoconstituents
Identified in Morinda Citrifolia Linn on
Acetylcholinesterase and
Butyrylcholinesterase. J. Chem. Pharm.
Res. 9(4), 121125.
Tjay, T.H., Rahardja, K., 2015. Obat-obat Penting
Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek
Sampingnya, 7th ed. PT Elex Media
Komputindo Kelompok Gramedia,
Jakarta.
West, B.J., Su, C.X., Jensen, C.J., 2009a.
Hepatotoxicity and subchronic toxicity
test of Morinda citrifolia (noni) fruit. J.
To x i c o l . S c i . 3 4 , 5 8 3 5 8 5 .
https://doi.org/10.2131/jts.34.581
West, B.J., White, L.D., Jensen, C.J., Palu, Afa
K., 2009b. A Double-Blind Clinical Safety
Study of Noni Fruit Juice. Pac. Health
Dialog 15, 2132.
Yu, J., Kwon, H., Cho, E., Jeon, J., Kang, R.H.,
Youn, K., Jun, M., Lee, Y.C., Ryu, J.H.,
 Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019

K i m , D . H . , 2 0 1 9 . T h e e ff e c t s o f
pinoresinol on cholinergic dysfunction-
induced memory impairments and
synaptic plasticity in mice. Food Chem.
To x i c o l . 1 2 5 , 3 7 6 3 8 2 .
https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.01.017