Aldosterone ELISA: Instructions For Use

Instructions for Use
Aldosterone ELISA
EIA-5298
96
Distributed by:
DRG Instruments GmbH, Germany DRG International, Inc., USA

Frauenbergstraße. 18, D-35039 Marburg 841 Mountain Ave., Springfield, NJ 07081
Phone: +49 (0)6421-1700 0, Fax: +49 (0)6421-1700 50 Phone: (973) 564-7555, Fax: (973) 564-7556
Website: www.drg-diagnostics.de Website: www.drg-international.com
E-mail: drg@drg-diagnostics.de E-mail: corp@drg-international.com
Aldosterone ELISA EIA-5298
Please use only the valid version of the Instructions for Use provided with the kit.
Verwenden Sie nur die jeweils gültige, im Testkit enthaltene, Gebrauchsanweisung.
Si prega di usare la versione valida delle istruzioni per l’uso a disposizione con il kit.
Por favor, se usa solo la version valida de la metodico técnico incluido aqui en el kit.
Utilisez seulement la version valide des Instructions d’utilisation fournies avec le kit.
Table of Contents / Inhaltsverzeichnis / Tabella die Contenuti / Tabla de Contenidos
1 INTRODUCTION .......................................................2 1 INTRODUCCIÓN .................................................... 29

2 PRINCIPLE OF THE TEST .......................................2 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO ............................... 29
3 WARNINGS AND PRECAUTIONS ...........................3 3 PRECAUCIONES ................................................... 29
4 REAGENTS ...............................................................4 4 COMPONENTES DEL KIT...................................... 30
5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION .....5 5 MUESTRAS ............................................................ 31
6 ASSAY PROCEDURE ...............................................7 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO ............................ 33
7 EXPECTED NORMAL VALUES ...............................8 7 VALORES ESPERADOS ........................................ 34
8 QUALITY CONTROL.................................................9 8 CONTROL DE CALIDAD ........................................ 35
9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS ....................9 9 CARACTERÍSTICAS DEL ENSAYO ....................... 35
10 LIMITATIONS OF USE ............................................10 10 LIMITACIONES DE USO ........................................ 36
11 LEGAL ASPECTS ...................................................11 11 ASPECTOS LEGALES ........................................... 36
1 EINLEITUNG ...........................................................12 12 REFERENCES / LITERATURE .............................. 37

2 TESTPRINZIP .........................................................12
3 VORSICHTSMAßNAHMEN.....................................13
4 BESTANDTEILE DES KITS ....................................14 SYMBOLS USED ............................................................ 38
5 PROBENVORBEREITUNG .....................................15
6 TESTDURCHFÜHRUNG ........................................17
7 ERWARTETE WERTE ............................................18
8 QUALITÄTSKONTROLLE .......................................19
9 ASSAY CHARACTERISTIKA ..................................19
10 GRENZEN DES TESTS ..........................................20
11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN ...............................20
1 INTRODUZIONE .....................................................21
2 PRINCIPIO DEL TEST ............................................21
3 PRECAUZIONI ........................................................21
4 COMPONENTI DEL KIT ..........................................22
5 CAMPIONI ...............................................................23
6 ATTUAZIONE DEL TEST ........................................25
7 VALORI NORMALI ..................................................26
8 CONTROLLO QUALITÀ ..........................................27
9 CARATTERISTICHE DEL TEST .............................27
10 LIMITAZIONE DEL TEST ........................................28
11 ASPETTI LEGALI ....................................................28
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English
1 INTRODUCTION
1.1 Intended Use
The DRG Aldosterone ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of
aldosterone in serum, plasma (EDTA-, heparin- or citrate plasma) and urine.
1.2 Summary and Explanation

The steroid hormone aldosterone is a potent mineral corticoid that is produced by the zona glomerulosa of the adrenal
cortex in the adrenal gland. The synthesis and release are controlled by the renin-angiotensin-aldosterone system
(RAAS)1, as well as by plasma potassium concentration 2, the pituitary peptide ACTH, and by the blood pressure via
pressure sensitive baroreceptors in the vessel walls of nearly all large arteries of the body 3. Aldosterone binds to
mineralocorticoid receptors (MR) and triggers the transcription of hormone-responsive genes. In consequence,
aldosterone increases the blood pressure by reabsorption of sodium and water from the distal tubules of the kidney into
the blood, secretion of potassium into the urine, and elevation of circulating blood volume. Chronic overproduction and
secretion of aldosterone leads to hypertension. Aldosterone activity is reduced in Addison's disease and increased in
Conn's syndrome.
Measurement of aldosterone levels in serum in conjunction with plasma renin levels (aldosterone/renin-ratio; ARR) can be
used to differentiate between primary and secondary aldosteronism 4,8,9.
Condition Serum Aldosterone Plasma Renin

Primary Aldosteronism High Low
Secondary Aldosteronism High High
The measurement of aldosterone in concert with selective suppression and stimulation tests can be used to further
differentiate primary aldosteronism into two basic types 5:
• Primary aldosteronism caused by an adenoma of one or both adrenals.
• Primary aldosteronism caused by adrenal hyperplasia.
This differentiation is vital in the treatment and management of the disease. The adrenal adenomas respond well to
surgery whereas hyperplastic disease of the adrenals is generally better managed medically 6.
In addition, pharmacological modulation of nuclear hormone receptors is a common strategy for the treatment of
cardiovascular disease 7. Therefore, determining the effects of such treatments on the RAAS is of increasing value in
evaluating the safety and efficacy of new therapeutics.
In summary, the precise and accurate measurement of serum aldosterone by enzyme immunoassay can be an important
adjunct to a diagnostic laboratory battery for the differential diagnosis of hypertensive disease.
2 PRINCIPLE OF THE TEST

The DRG Aldosterone ELISA Kit is a solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), based on the principle of
competitive binding.
The microtiter wells are coated with a polyclonal rabbit antibody directed towards an antigenic site of the aldosterone
molecule. Endogenous aldosterone of a patient sample competes with an aldosterone-horseradish peroxidase conjugate
for binding to the coated antibody. After incubation the unbound conjugate is washed off.
After addition of the substrate solution, the intensity of colour developed is inversely proportional to the concentration of
aldosterone in the patient sample.
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3 WARNINGS AND PRECAUTIONS

1. This kit is for in vitro diagnostic use only. For professional use only.
2. All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for
HIV I/II, HBsAg and HCV by FDA approved procedures. All reagents, however, should be treated as potential
biohazards in use and for disposal.
3. Before starting the assay, read the instructions completely and carefully. Use the valid version of instructions for use
provided with the kit. Be sure that everything is understood.
4. The microplate contains snap-off strips. Unused wells must be stored at 2 °C - 8 °C in the sealed foil pouch and
used in the frame provided.
5. Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step.
6. Use reservoirs only for single reagents. This especially applies to the substrate reservoirs. Using a reservoir for
dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored.
Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur.
7. Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results. Do not reuse microwells.
8. Do not let wells dry during assay; add reagents immediately after completing the rinsing steps.
9. Allow the reagents to reach room temperature (21 °C - 26 °C) before starting the test. Temperature will affect the
absorbance readings of the assay. However, values for the patient samples will not be affected.
10. Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes.
11. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled.
12. Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents. Microbial contamination of reagents or
specimens may give false results.
13. Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety
guideline or regulation.
14. Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels.
15. All indicated volumes have to be performed according to the protocol. Optimal test results are only obtained when
using calibrated pipettes and microtiterplate readers.
16. Do not mix or use components from kits with different lot numbers. It is advised not to exchange wells of different
plates even of the same lot. The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding
characteristics of the plates may result slightly different.
17. Avoid contact with Stop Solution containing 0.5 M H2SO4. It may cause skin irritation and burns.
18. Some reagents contain Proclin 300, BND and/or MIT as preservatives. In case of contact with eyes or skin, flush
immediately with water.
19. TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa. In case of possible contact, wash eyes with an abundant
volume of water and skin with soap and abundant water. Wash contaminated objects before reusing them. If
inhaled, take the person to open air.
20. Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national
biohazard safety guideline or regulation.
21. For information on hazardous substances included in the kit please refer to Safety Data Sheets.
Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG.
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4 REAGENTS
4.1 Reagents provided
1. Microtiterwells, 12 x 8 (break apart) strips, 96 wells;
Wells coated with anti-aldosterone antibody (polyclonal rabbit).
2. Standard (Standard 0-5), 6 vials (lyophilized); 1.0 mL;
Concentrations: 0 – 20 – 80 – 200 – 500 – 1000 pg/mL
Conversion: 1 pg/mL corresponds to 2.77 pmol/L
See “Reagents Preparation“;
Contain non-mercury preservative.
3. Control Low & High, 2 vials (lyophilized), 1 mL
For control values and ranges please refer to vial label or QC-Datasheet.
See “Reagents Preparation“;
Contain non-mercury preservative.
4. Enzyme Conjugate, 1 vial, 20 mL, ready to use,
Aldosterone conjugated to horseradish peroxidase;
Contains non-mercury preservative.
5. Substrate Solution, 1 vial, 25 mL, ready to use,
Tetramethylbenzidine (TMB).
6. Stop Solution, 1 vial, 14 mL, ready to use,
contains 0.5 M H2SO4,
Avoid contact with the stop solution. It may cause skin irritations and burns.
7. Wash Solution, 1 vial, 30 mL (40X concentrated),
see „Preparation of Reagents“.
Note: Additional Standard 0 for sample dilution is available upon request.
4.2 Materials required but not provided

− A microtiter plate calibrated reader (450 ± 10 nm)
− Calibrated variable precision micropipettes.
− Absorbent paper.
− Distilled or deionized water
− Timer
− Scale paper or semi-logarithmic graph paper or software for data reduction
− Optional: Reagents for determination of Aldosterone in urine (REF EIA-5298-URIN) – Contents:
1) Release Reagent, 1 vial, 3 mL, ready to use. Containing 1 M HCl.
Avoid contact with Release Reagent. It may cause skin irritation.
2) Neutralization Buffer, 1 vial, 3 mL, ready to use. Containing Tris buffer, pH 8.5.
3) Dilution Buffer, 2 vials, 25 mL each, ready to use. Containing PBS.
− Optional: Plastic tubes (e.g. 0.5 - 1.5 mL) for pre-treatment of urine samples
4.3 Storage Conditions

When stored at 2 °C to 8 °C unopened reagents will retain reactivity until expiration date. Do not use reagents beyond this
date.
Opened reagents must be stored at 2 °C to 8 °C. Microtiter wells must be stored at 2 °C to 8 °C. Once the foil bag has
been opened, care should be taken to close it tightly again.
Opened kits retain activity for two months if stored as described above.
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4.4 Reagent Preparation

Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use.
Standards
Reconstitute the lyophilized contents of the standard vials with 1.0 mL deionized water and let stand for at least
10 minutes. Mix several times before use.
Note: The reconstituted standards are stable for 8 weeks at 2 °C to 8 °C.
For longer storage freeze - only once - at -20 °C.
Controls
Reconstitute the lyophilized content of the controls with 1.0 mL deionized water and let stand for at least 10 minutes. Mix
several times before use.
Note: The reconstituted controls are stable for 8 weeks at 2 °C to 8 °C.
For longer storage freeze - only once - at -20 °C.
Wash Solution
Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution.
Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL.
The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature.
4.5 Disposal of the Kit

The disposal of the kit must be made according to the national regulations. Special information for this product is given in
the Material Safety Data Sheet.
4.6 Damaged Test Kits

In case of any severe damage to the test kit or components, DRG has to be informed in writing, at the latest, one week
after receiving the kit. Severely damaged single components should not be used for a test run. They have to be stored
until a final solution has been found. After this, they should be disposed according to the official regulations.
5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION

Serum or plasma (EDTA-, heparin- or citrate plasma) and urine can be used in this assay.
Do not use haemolytic, icteric or lipaemic specimens.

Please note: Samples containing sodium azide should not be used in the assay.
5.1 Serum / Plasma Samples

5.1.1 Specimen Collection
Serum:
Collect blood by venipuncture (e.g. Sarstedt Monovette for serum), allow to clot, and separate serum by centrifugation at
room temperature. Do not centrifuge before complete clotting has occurred. Patients receiving anticoagulant therapy may
require increased clotting time.
Plasma:
Whole blood should be collected into centrifuge tubes containing anti-coagulant (e.g. Sarstedt Monovette with the
appropriate plasma preparation) and centrifuged immediately after collection.
5.1.2 Specimen Storage and Preparation
Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 °C to 8 °C prior to assaying.
Specimens held for a longer time (up to two months) should be frozen only once at -20 °C prior to assay. Thawed
samples should be inverted several times prior to testing.
5.1.3 Specimen Dilution
If in an initial assay, a specimen is found to contain more than the highest standard, the specimens can be diluted with
Standard 0 and reassayed as described in Assay Procedure.
For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account.
Example:
a) dilution 1:10: 10 µL sample + 90 µL Standard 0 (mix thoroughly)
b) dilution 1:100: 10 µL dilution a) 1:10 + 90 µL Standard 0 (mix thoroughly).
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5.2 Urine Samples

Aldosterone concentration can also be determined from urine samples. However, urine samples must be pre-treated
before analysis. This will need additional reagents that are not included in this kit, but can be ordered separately
(REF EIA-5298-URIN).
5.2.1 Sample Collection
First clean genital area with mild disinfectant to prevent contamination. Then collect clean-catch midstream urine in an
appropriate sterile container. Directly after collection, the urine should be centrifuged for 5 - 10 minutes (e.g. at 2,000 g) to
remove cellular debris. Use supernatant for analyte quantification. The supernatant may be stored for up to 8 hours at
2 °C to 8 °C prior to assaying. Specimens held for a longer time should be frozen at -20 °C. Thawed supernatant should
be inverted several times prior to testing.
5.2.2 Protocol for Urine Sample Pre-treatment

1. Secure the desired number of vials (e.g. 0.5 - 1.5 mL plastic tubes; not included in this kit).
2. Dispense 25 µL of urine with new disposable tips into appropriate tubes.
3. Dispense 25 µL Release Reagent into each tube.
Thoroughly mix for 10 seconds. It is important to have a complete mixing in this step.
4. Incubate overnight at 2 °C to 8 °C.
5. Add 25 µL Neutralization Reagent to each tube and mix thoroughly.
6. Add 400 µL Dilution Buffer to each tube and mix thoroughly
(This pre-treatment leads to a 1:19 dilution. Therefore the dilution factor 19 has to be taken into account for
calculation of the final concentration of the urine sample.)
7. Transfer 50 µL of pre-treated and diluted urine samples directly to the microtiter well and continue with step 3 of
Test Procedure (Chapter 6.2).
5.2.3 Storage of pre-treated Urine Samples

Pre-treated and diluted urine samples should be capped and may be stored for up to 7 days at 2 °C to 8 °C prior to
assaying.
Samples held for a longer time (up to two months) should be frozen only once at -20 °C prior to assay.
Thawed samples should be inverted several times prior to testing.
5.2.4 Specimen Dilution

If in an initial assay, an urine sample is found to contain more than the highest standard, the pre-treated and diluted urine
sample can be further diluted with Dilution Buffer and reassayed as described in Assay Procedure.
For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account too.
Example:
a) dilution 1:10: 10 µL pre-treated and diluted urine sample + 90 µL Dilution Buffer (mix thoroughly)
(final dilution factor = 19 x 10 = 190)
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6 ASSAY PROCEDURE
6.1 General Remarks
− All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use. All reagents must be mixed
without foaming.
− Once the test has been started, all steps should be completed without interruption.
− Use new disposal plastic pipette tips for each standard, control or sample in order to avoid cross contamination.
− Absorbance is a function of the incubation time and temperature. Before starting the assay, it is recommended that all
reagents are ready, caps removed, all needed wells secured in holder, etc. This will ensure equal elapsed time for
each pipetting step without interruption.
− As a general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature.
6.2 Test Procedure

Each run must include a standard curve.
1. Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder.

2. Dispense 50 µL of each Standard, Control and samples with new disposable tips into appropriate wells.
For urine samples dispense 50 µL of the pre-treated and diluted urine samples (see chapter 5.2.2 Protocol for Urine
Sample Pre-treatment, step 7).
3. Incubate for 30 minutes at room temperature.
4. Dispense 150 µL Enzyme Conjugate into each well.
Thoroughly mix for 10 seconds. It is important to have a complete mixing in this step.
6. Briskly shake out the contents of the wells. Rinse the wells
5 x with 400 µL diluted Wash Solution per well (if a plate washer is used) - or.
5 x with 300 µL/well for manual washing.
Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets.
Important note:
The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing
procedure!
7. Add 200 µL of Substrate Solution to each well.
9. Stop the enzymatic reaction by adding 100 µL of Stop Solution to each well.
10. Determine the absorbance (OD) of each well at 450 ± 10 nm with a microtiter plate reader.
It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution.
6.3 Calculation of Results

1. Calculate the average absorbance values for each set of standards, controls and patient samples.
2. Using scale paper or semi-logarithmic graph paper, construct a standard curve by plotting the mean absorbance
obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical (Y) axis and
concentration on the horizontal (X) axis.
3. Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard
curve.
4. Automated method: The results in the Instructions for Use have been calculated automatically using a 4 Parameter
curve fit. (4 Parameter Rodbard or 4 Parameter Marquardt are the preferred methods.) Other data reduction
functions may give slightly different results.
5. The concentration of the serum / plasma samples can be read directly from this standard curve.
For urine samples the concentration read from the standard curve, has to be multiplied with the dilution factor 19
(see chapter 5.2.2).
6. Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted or reported as
> 1000 pg/mL. For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account too.
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6.3.1 Example of Typical Standard Curve

The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay.
Standard Optical Units (450 nm)

Standard 0 (0 pg/mL) 2.11
6.4 Final Calculation for Urine Samples

Calculate the 24 hours excretion for each urine sample: µg/24 h = µg/L x L/24 h
Example:
Concentration for urine sample read from the standard curve = 500 pg/mL
Result after correction with the dilution factor 19 = 9500 pg/mL
9500 pg/mL / 1000 = 9.5 µg/L
Total volume of 24 h-urine = 1.3 L (example)
9.5 µg/L × 1.3 L/24 h = 12.35 µg/24 h
7 EXPECTED NORMAL VALUES

It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values.
7.1 Serum / Plasma

In a study conducted with EDTA plasma samples of apparently normal healthy adults, using the DRG Aldosterone
ELISA the following values are observed:
Mean Median 2.5th - 97.5th Percentile Range (min. - max.)
Healthy Adults n
(pg/mL) (pg/mL) (pg/mL) (pg/mL)
Supine position 60 56.14 39.71 14.21 - 156.47 8.58 - 272.30
Upright position 60 77.48 58.00 13.37 - 233.55 12.87 - 358.50
These values are also valid for serum, heparin plasma and citrate plasma.
These results correspond well to published reference ranges 8,9.
In a study conducted with apparently normal healthy adults, using the DRG Aldosterone ELISA (EIA-5298) and the DRG
Renin ELISA (EIA-5125) the following Aldosterone-Renin Ratios were determined in plasma:
Ratio Aldosterone-Renin (pg/mL ⁄ pg/mL)

n Mean Median 2.5th - 97.5th Percentile
Healthy Adults 89 8.68 5.30 0.52 - 37.83
These values are also valid for serum.
7.2 Urine Samples
In a study conducted with urine samples of apparently normal healthy adults, using the DRG Aldosterone ELISA the
following values are observed:
Mean Median 2.5th - 97.5th Percentile Range (min. - max.)
n
(µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h)
Healthy Adults 8 11.34 9.40 3.31 - 25.09 3.06 - 27.17
These results correspond well to published reference ranges 8.
The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences. The results should be correlated to
other clinical observations and diagnostic tests.
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8 QUALITY CONTROL
Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve. A statistically significant number of
controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance.
It is recommended to use control samples according to state and federal regulations. The use of control samples is
advised to assure the day to day validity of results. Use controls at both normal and pathological levels.
The controls and the corresponding results of the QC-Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit. The
values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of
the results.
It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the
accuracy of the results.
Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends. If the results of the assay do not fit to the
established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid.
In this case, please check the following technical areas: Pipetting and timing devices; photometer, expiration dates of
reagents, storage and incubation conditions, aspiration and washing methods.
After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly.
9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS
9.1 Assay Dynamic Range
For serum and plasma the range of the assay is between 7.75 pg/mL – 1000 pg/mL.
For urine the range of the assay is between 9.81 pg/mL – 1000 pg/mL.
9.2 Specificity of Antibodies (Cross Reactivity)

The following substances were tested for cross reactivity of the assay:
3 β, 5 α Tetrahydroaldosterone: 17.2 %
3 β, 5 β Tetrahydroaldosterone: 0.12 %
The following steroids were tested but cross-reacted at less than 0.1%:
androstenedione, androsterone, corticosterone, cortisol, cortisone, 11-deoxycortisol, DHEA, estradiol, estriol, estrone,
17-hydroxyprogesterone, prednisolone, prednisone, progesterone and testosterone.
9.3 Sensitivity
The analytical sensitivity of the DRG ELISA was calculated by subtracting 2 standard deviations from the mean of
20 replicate analyses of the Standard 0 (S0) and was found to be < 5.7 pg/mL.
Serum / Plasma Urine

The Limit of Blank (LoB) 7.75 pg/mL 9.81 pg/mL
The Limit of Detection (LoD) 12.07 pg/mL 16.94 pg/mL
The Limit of Quantification (LoQ) 14.78 pg/mL 23.66 pg/mL
9.4 Reproducibility
9.4.1 Intra Assay
The within assay variability is shown below:
Sample n Mean (pg/mL) CV (%)
Serum 1 40 61.93 4.63
Serum 2 40 247.50 2.02
Serum 3 40 560.33 1.80
Urine 1 40 79.12 5.91
Urine 2 40 229.99 4.85
Urine 3 40 495.82 5.09
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9.4.2 Inter Assay

The between assay variability is shown below:
Sample n Mean (pg/mL) CV (%)
1 80 61.93 10.06
2 80 247.50 5.07
3 80 560.33 4.65
Urine 1 80 79.12 13.92
Urine 2 80 229.99 9.44
Urine 3 80 495.82 9.65
9.5 Recovery
Samples have been spiked by adding aldosterone solutions with known concentrations in a 1:1 ratio.
The % recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expected values with 100
(expected value = (endogenous aldosterone + added aldosterone) / 2; because of a 1:2 dilution of serum with spike
material).
Serum 1 Serum 2 Serum 3 Urine 1 Urine 2 Urine 3
Concentration [pg/mL] 94.6 211.6 585.3 70.59 232.55 516.52
Average Recovery [%] 91.3 107.4 98.2 102.1 99.9 95.1
from 85.1 104.5 91.3 97.4 92.7 91.0
Range of Recovery [%]
to 96.2 110.9 102.8 108.0 108.2 99.1
9.6 Linearity
Serum 1 Serum 2 Serum 3 Urine 1 Urine 2 Urine 3
Concentration [pg/mL] 296.3 406.0 631.2 569.8 655.5 683.7
Average Recovery 101.2 101.6 95.5 98.2 102.7 105.3
from 96.7 93.6 90.6 95.4 91.0 101.8
Range of Recovery [%]
to 105.6 109.4 98.6 105.5 111.3 110.6
10 LIMITATIONS OF USE
Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding
of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice.
Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results.
10.1 Interfering Substances

The following substances have no influence on the assay results up to the below stated concentrations.
Serum Urine
Concentration up to:
Haemoglobin 6 mg/mL
Bilirubin 0.4 mg/mL
Triglyceride 20 mg/mL
Cholesterol 2.84 mg/mL
Total protein 120 mg/mL
Glucose 10 mg/mL
Creatinine 0.05 mg/mL 5 mg/mL
10.2 Drug Interferences

Until today no substances (drugs) are known to us, which have an influence to the measurement of aldosterone in a
sample.
10.3 High-Dose-Hook Effect

A High-Dose-Hook Effect is not known for competitive assays.
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11 LEGAL ASPECTS
11.1 Reliability of Results
The test must be performed exactly as per the manufacturer’s instructions for use. Moreover the user must strictly adhere
to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable national standards and/or laws. This is especially
relevant for the use of control reagents. It is important to always include, within the test procedure, a sufficient number of
controls for validating the accuracy and precision of the test.
The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within
the given assay specifications. In case of any doubt or concern please contact DRG.
11.2 Therapeutic Consequences

Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement
with the items as stated under point 11.1. Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient.
Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient
should therapeutic consequences be derived.
The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences.
11.3 Liability
Any modification of the test kit and/or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another
could negatively affect the intended results and validity of the overall test. Such modification and/or exchanges invalidate
any claim for replacement.
Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11.2 are also invalid.
Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage
caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer.
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Deutsch
1 EINLEITUNG
Der DRG Aldosterone ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Aldosteron in Serum, Plasma (EDTA-, Heparin-
oder Zitratplasma) und Urin eingesetzt.
Nur für In-vitro Diagnostik.
1.1 Klinische Bedeutung

Das Steroidhormon Aldosteron ist ein hochwirksames Mineralkortikoid, das in der Zona glomerulosa der
Nebennierenrinde gebildet wird. Die Synthese unterliegt der Kontrolle des Renin-Angiotensin-Aldosteron-Systems
(RAAS) 1 und wird beeinflusst durch die Kaliumkonzentration im Plasma 2, durch das Peptidhormon ACTH der
Hypophyse, sowie durch den Blutdruck, der über drucksensitive Rezeptoren in den Gefäßwänden nahezu aller großen
Arterien des Körpers überwacht wird 3. Aldosteron bindet an Mineralkortikoid-Rezeptoren und induziert die Transkription
Hormon-responsiver Gene. Als Konsequenz dieser Genexpression erhöht Aldosteron den Blutdruck, indem es die
Resorption von Natrium aus den distalen Tubuli der Niere in das Blut fördert, die Ausscheidung von Kalium über den Urin
vermehrt und das Blutvolumen erhöht.
Eine chronische Überproduktion von Aldosteron führt zu Bluthochdruck. Die Aktivität von Aldosteron ist bei der
Addison´schen Erkrankung vermindert und beim Conn-Syndrom (primärer Hyperaldosteronismus) erhöht. Die
Bestimmung von Aldosteron und aktivem Renin in Serum oder Plasma (Aldosteron/Renin-Ratio; ARR) kann zur
Unterscheidung zwischen primärem und sekundärem Hyperaldosteronismus verwendet werden 4,8,9.
Erkrankung Aldosteron Renin

Primärer Hyperaldosteronismus erhöht normal
Sekundärer Hyperaldosteronismus erhöht erhöht
Weiterhin ermöglicht die Bestimmung von Aldosteron unter dem Einfluss spezieller dämpfender oder stimulierender
Maßnahmen eine weitergehende Differenzierung des primären Hyperaldosteronismus in zwei grundlegende
Krankheitstypen 5:
• Primärer Hyperaldosteronismus, der durch ein Adenom einer oder beider Nebennieren bedingt ist
• Primärer Hyperaldosteronismus, der durch eine Hyperplasie der Nebenniere bedingt ist
Die Unterscheidung beider Krankheitstypen ist essentiell für die weitere Behandlung der Erkrankung. Während Adenome
der Nebenniere gut auf operative Maßnahmen ansprechen, kann die Hyperplasie generell besser medikamentös
behandelt werden 6.
Im Rahmen einer Behandlung kardiovaskulärer Erkrankungen kommen zunehmend Medikamente zum Einsatz, die
modulierend auf Hormonrezeptoren wirken 7. Im Rahmen eines solchen Behandlungskonzepts müssen die Auswirkungen
auf das RAAS gut untersucht werden, um die Sicherheit und Wirksamkeit dieser Therapeutika sicher zu stellen.
Zusammenfassend spielt die präzise Erfassung des Aldosteron-Spiegels eine wesentliche Rolle bei der
Differentialdiagnose des Bluthochdrucks.
2 TESTPRINZIP
Der DRG Aldosteron ELISA ist ein Festphasen-Enzymimmunoassay, der auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung
basiert.
Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem polyklonalen Antikörper beschichtet, der gegen eine Antikörper-
Bindungsstelle des Aldosteron-Moleküls gerichtet ist.
Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und zusammen mit einem Aldosteron-Enzymkonjugat inkubiert.
Während der Inkubation konkurriert das Aldosteron aus der Probe mit dem Aldosteron-Enzymkonjugat um die freien
Bindungsstellen auf den beschichteten Wells.
Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt. Anschließend wird die Substratlösung
zugegeben, und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt.
Die Intensität der gebildeten Farbe ist umgekehrt proportional der Aldosteron-Konzentration in der Probe. Die Extinktion
wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplatten-Lesegerät gemessen.
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3 VORSICHTSMAßNAHMEN
− Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet.
− Nur die gültige, im Testkit enthaltene, Gebrauchsanweisung verwenden.
− Informationen zu im Kit enthaltenen gefährlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt.
− Alle Bestandteile dieses Testkits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, wurden mit FDA-geprüften Methoden
auf HIV I/II, HbsAg und HCV getestet und als negativ bestätigt. Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei
der Entsorgung wie mögliche Gefahrenstoffe betrachtet werden.
− Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden, da sie 0.5 M H2SO4 enthält. Schwefelsäure kann
Hautreizungen und Verbrennungen verursachen.
− Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimhäuten
vermeiden.
− In den Bereichen, in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden, nicht rauchen, essen oder Kosmetika
verwenden.
− Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg-Latexhandschuhe tragen. Die Verunreinigung von Reagenzien
oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen führen.
− Der Gebrauch sollte gemäß der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrstoff-Sicherheitsrichtlinie
erfolgen.
− Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit-Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden.
− Alle im Kit-Protokoll angegebenen Mengen müssen genau eingehalten werden. Optimale Ergebnisse können nur
durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten-Lesegeräte erreicht werden.
− Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen. Es wird empfohlen, keine
Wells von verschiedenen Platten zu verwenden, auch nicht, wenn es sich um das gleiche Lot handelt. Die Kits können
unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein, so dass die Bindungscharakteristik der Platten
leicht unterschiedlich ausfällt.
− Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien müssen gemäß den nationalen Gefahrstoffvorschriften
wie gefährlicher Abfall behandelt werden.
− Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erhältlich.
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4 BESTANDTEILE DES KITS

4.1 Kitinhalt
1. Microtiterwells, 96 Wells, 12 x 8 Wells (einzeln brechbar);
Mit anti-Aldosteron-Antikörper (polyklonal) beschichtet.
2. Standard (Standard 0-5), 6 Fläschchen (lyophilisiert), je 1 mL
Konzentrationen: 0 – 20 – 80 – 200 – 500 – 1000 pg/mL
Umrechnungsfaktor: 1 pg/mL entspricht 2,77 pmol/L
Siehe „Vorbereitung der Reagenzien“.
Enthält quecksilberfreies Konservierungsmittel.
3. Control Low & High (Kontrollen), 2 Fläschchen (lyophilisiert), je 1 mL
Kontrollwerte und -bereiche entnehmen Sie bitte dem Fläschchenetikett oder dem QC-Datenblatt.
4. Enzyme Conjugate (Enzymkonjugat), 1 Fläschchen, 20 mL, gebrauchsfertig;
Aldosteron mit Meerrettichperoxidase konjugiert.
5. Substrate Solution (Substratlösung), 1 Fläschchen, 25 mL, gebrauchsfertig;
Substratlösung TMB.
6. Stop Solution (Stopplösung), 1 Fläschchen, 14 mL, gebrauchsfertig;
enthält 0,5 M H2SO4,
Kontakt mit der Stopplösung vermeiden! Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen.
7. Wash Solution (Waschlösung), 1 Fläschchen, 30 mL, 40X konzentriert;
Anmerkung: Zusätzlicher Standard 0 zur Probenverdünnung ist auf Anfrage erhältlich.
4.2 Erforderliche aber nicht enthaltene Geräte und Materialien

− Kalibriertes Mikrotiterplatten-Lesegerät mit 450 ± 10 nm Filter), (z.B. das DRG Instruments Mikrotiterplatten-
Lesegerät)
− Kalibrierte variable Präzisions-Mikropipette
− Saugfähiges Papier
− Destilliertes Wasser
− Optional: Reagenz zur Bestimmung von Aldosteron in Urin (REF EIA-5298-URIN) – Inhalt:
1) Release Reagent, 1 Fläschchen, 3 mL, gebrauchsfertig. Enthält 1M HCl.
Kontakt mit Release Reagent vermeiden. Es kann zu Hautirritationen führen.
2) Neutralization Buffer, 1 Fläschchen, 3 mL, gebrauchsfertig. Enthält Trispuffer, pH 8,5.
3) Dilution Buffer, 2 Fläschchen, je 25 mL, gebrauchsfertig. Enthält PBS.
− Optional: Plastikröhrchen (z.B. 0.5 - 1.5 mL) zur Vorbehandlung von Urinproben
4.3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits

Die ungeöffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 °C bis 8 °C ihre Reaktivität bis zum Verfallsdatum. Nach dem
Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden.
Nach dem Öffnen sollten alle Reagenzien bei 2 °C bis 8 °C gelagert werden.
Die Mikrotiterwells sollten bei 2 °C bis 8 °C gelagert werden. Der einmal geöffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgfältig
wieder verschlossen werden.
Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten geöffnete Kits zwei Monate ihre Reaktivität.
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4.4 Vorbereitung der Reagenzien

Alle Reagenzien sowie die benötigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden.
Standards
Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Standardfläschchen mit 1,0 mL destilliertem Wasser und lassen Sie die
Fläschchen mindestens 10 Minuten ruhen. Vor Gebrauch die Standards mehrmals vorsichtig schütteln.
Achtung: Bei 2 °C bis 8 °C sind die rekonstituierten Standards 8 Wochen haltbar.
Für eine längere Aufbewahrung - nur einmal - bei -20 °C einfrieren.
Controls
Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Fläschchen mit 1,0 mL destilliertem Wasser und lassen Sie die
Fläschchen mindestens 10 Minuten ruhen. Vor Gebrauch die Kontrollen mehrmals vorsichtig schütteln.
Achtung: Bei 2 °C bis 8 °C sind die rekonstituierten Kontrollen 8 Wochen haltbar.
Für eine längere Aufbewahrung - nur einmal - bei -20 °C einfrieren.
Wash Solution
Die 40-fach konzentrierte Wash Solution (30 mL) mit 1170 mL destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 mL
verdünnen. Die verdünnte Waschlösung ist bei Raumtemperatur für 2 Wochen stabil.
4.5 Entsorgung des Kits

Die Entsorgung des Kits muss gemäß den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen. Spezielle Informationen für
dieses Produkt finden Sie im Sicherheitsdatenblatt, Abschnitt 13.
4.6 Beschädigte Testkits

Im Falle einer starken Beschädigung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form
spätestens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden. Stark beschädigte Einzelkomponenten sollten nicht für
den Testlauf verwendet werden. Sie müssen gelagert werden bis eine endgültige Lösung gefunden wurde. Danach
sollten Sie gemäß den offiziellen Richtlinien entsorgt werden.
5 PROBENVORBEREITUNG
Serum, Plasma (EDTA-, Heparin- oder Zitratplasma) oder Urin kann in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt
werden.
Lipämische, ikterische und/oder stark hämolysierte Proben sollten nicht verwendet werden.
Achtung: Proben, die Natriumazid enthalten, sollten nicht verwendet werden.
5.1 Serum- /Plasmaproben

5.1.1 Probenentnahme
Serum:
Blut durch Venenpunktion entnehmen (z.B. mit Sarstedt Monovette für Serum), gerinnen lassen und das Serum durch
Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen. Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollständig abgeschlossen
sein. Bei Patienten, die Antikoagulantien erhalten, kann die Gerinnungszeit länger dauern.
Plasma:
Die Blutentnahme erfolgt mit Röhrchen, die ein Antikoagulanz enthalten (z.B.: Sarstedt Monovette - mit entsprechender
Plasma-Präparierung). Das Plasma wird als Überstand nach einer Zentrifugation gewonnen.
5.1.2 Probenaufbewahrung
Proben sollten stets gut verschlossen sein und können vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2 °C bis 8 °C gelagert werden.
Für eine längere Aufbewahrung (bis zu 2 Monaten) sollten die Proben eingefroren bei -20 °C bis zum Testbeginn gelagert
werden. Nur einmal einfrieren.
Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden, ohne Schaumbildung.
5.1.3 Probenverdünnung
Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration höher als der höchste Standard gefunden wird,
kann diese Probe mit Standard 0 weiter verdünnt und nochmals bestimmt werden. Die Verdünnung muss jedoch bei der
Berechnung der Konzentration beachtet werden.
Beispiel:
a) Verdünnung 1:10: 10 µL Probe + 90 µL Standard 0 gründlich mischen)
b) Verdünnung 1:100: 10 µL Verdünnung a) 1:10 + 90 µL Standard 0 (gründlich mischen).
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5.2 Urinproben
Die Aldosteronkonzentration kann ebenfalls in Urinproben bestimmt werden. Vor der Analyse müssen die Urinproben
allerdings vorbehandelt werden. Dazu werden zusätzliche Reagenzien benötigt, die nicht im Kit enthalten sind. Diese
Zusatzreagenzien können separat bestellt werden unter REF EIA-5298-URIN.
5.2.1 Probenentnahme
Um Kontaminationen zu vermeiden, den Genitalbereich zuerst mit einem milden Desinfektionsmittel reinigen. Mittelstrahl-
Urin in einem geeigneten sterilen Gefäß sammeln.
Sofort nach Erhalt der Urinproben, sollten diese bei für 5 - 10 Minuten zentrifugiert werden (z.B. 2000 x g), um Zellreste
zu entfernen. Der Überstand wird für die Messung eingesetzt.
Der Überstand kann vor Testbeginn bis zu 8 Stunden bei 2 °C bis 8 °C gelagert werden.
Für eine längere Aufbewahrung sollte der Überstand eingefroren bei -20 °C bis zum Testbeginn gelagert werden.
Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden.
5.2.2 Vorbehandlung der Urinproben
1. Die benötigte Anzahl der Röhrchen (z.B. 0.5 - 1.5 mL Plastikröhrchen, nicht im Kit enthalten) zur Vorbehandlung von
Urinproben bereitstellen.
2. Je 25 µL Urinprobe mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Röhrchen geben.
3. 25 µL Release Reagent in jedes Röhrchen geben.
Für 10 Sekunden gut schütteln. Es ist sehr wichtig, in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen.
4. Über Nacht bei 2 °C - 8 °C inkubieren.
5. Je 25 µL Neutralization Reagent in jedes Röhrchen geben, vorsichtig mischen.
6. Je 400 µL Dilution Buffer in jedes Röhrchen geben, vorsichtig mischen.
(Diese Vorbehandlung führt zu einer 1:19-Verdünnung. Der Verdünnungsfaktor 19 muss daher bei der Berechnung
der Endkonzentration einer Urinprobe berücksichtigt werden.)
7. 50 µL der vorbehandelten und verdünnten Urinprobe direkt in die beschichtete Mikrotiterplatte überführen und
mit Schritt 3 der Testdurchführung (Kap. 6.2) fortfahren.
5.2.3 Aufbewahrung der vorbehandelten und verdünnten Urinproben

Die vorbehandelten und verdünnten Proben sollten gut verschlossen sein und können vor Testbeginn bis zu 7 Tage bei
2 °C bis 8 °C gelagert werden.
Für eine längere Aufbewahrung (bis zu 2 Monaten) sollten die Proben eingefroren bei -20 °C bis zum Testbeginn gelagert
werden. Nur einmal einfrieren.
Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden, ohne Schaumbildung.
5.2.4 Probenverdünnung
Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Urinprobe eine Konzentration höher als der höchste Standard gefunden
wird, kann die vorbehandelten und vorverdünnten Urinprobe mit Dilution Buffer weiter verdünnt und nochmals bestimmt
werden. Die Verdünnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration zusätzlich beachtet werden.
Beispiel:
a) Verdünnung 1:10: 10 µL vorbehandelte und vorverdünnte Urinprobe + 90 µL Dilution Buffer (gründlich mischen)
(Verdünnungsfaktor = 19 x 10 = 190)
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6 TESTDURCHFÜHRUNG
6.1 Allgemeine Hinweise
− Alle Reagenzien und Proben müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchmischt werden.
Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden.
− Wenn die Testdurchführung einmal begonnen wurde, muss sie ohne Unterbrechung zu Ende geführt werden.
− Für jeden Standard, jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden, um Verschleppungen zu
vermeiden.
− Die Optische Dichte ist abhängig von Inkubationszeit und Temperatur. Deshalb ist es notwendig, vor Beginn der
Testdurchführung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen, die Deckel der Fläschchen zu öffnen,
alle benötigten Wells in den Halter zu setzen. Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten für jeden
Pipettiervorgang ohne Pausen.
− Als generelle Regel gilt, dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist.
6.2 Testdurchführung
Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten.
1. Die benötigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen.

2. Je 50 µL Standard, Controls und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben.
Bei Urinproben 50 µL der vorbehandelten und verdünnten Urinproben in die Wells pipettieren (siehe Kapitel 5.5.2
Vorbehandlung der Urinproben, Schritt 7).
3. 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
4. 150 µL Enzyme Conjugate in jedes Well geben.
Für 10 Sekunden gut schütteln. Es ist sehr wichtig, in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen.
6. Den Inhalt der Wells kräftig ausschütteln.
Wells 5 x mit 400 µL verdünnter Wash Solution waschen (mit automatischem Waschsystem) – oder
Wells 5 x mit 300 µL pro Well waschen (mit manuellem Waschsystem).
Verbleibende Flüssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugfähigem Papier entfernen.
Achtung: Die Sensitivität und Präzision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchführung
des Waschschrittes!
7. 200 µL Substrate Solution in jedes Well geben.
9. Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 100 µL Stop Solution in jedes Well abstoppen.
10. Die Optische Dichte bei 450 ± 10 nm mit einem Mikrotiterplatten-Lesegerät innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe
der Stop Solution bestimmen.
6.3 Ergebnisermittlung
1. Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte (OD) für jedes Set von Standards, Kontrollen und
Patientenproben bestimmen.
2. Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die
Konzentration, wobei der OD-Wert auf der vertikalen (Y) Achse und die Konzentration auf der horizontalen (X) Achse
eingetragen wird.
3. Unter Verwendung der mittleren OD wird für jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve
ermittelt.
4. Automatische Methode: Die in der Gebrauchsanweisung angegebenen Werte wurden automatisch mit Hilfe der
4 Parameter-Gleichung bestimmt. (4 Parameter Rodbard oder 4 Parameter Marquardt sind die bevorzugten
Methoden.) Andere Auswertungsfunktionen können leicht abweichende Werte ergeben.
5. Die Konzentration der Serum-/Plasmaproben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden.
Für Urinproben muss die aus der Standardkurve ermittelte Konzentration mit dem Verdünnungsfaktor 19
multipliziert werden (Siehe Kap. 5.2.2).
6. Proben, die eine höhere Konzentration als die des höchsten Standards enthalten, müssen weiter verdünnt werden.
Dieser Verdünnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration zusätzlich beachtet werden.
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6.3.1 Beispiel für eine Standardkurve

Nachfolgend wird ein typisches Beispiel für eine Standardkurve mit dem DRG ELISA gezeigt. Diese Werte sollten nicht
zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden.
Standard Optische Dichte (450 nm)

Standard 0 (0 pg/mL) 2,11
6.4 Finale Berechnung für Urinproben

Für jede Urinprobe sollte die 24-Stunden-Extraktion berechnet werden: µg/24 h = µg/L x L/24 h
Beispiel:
aus der Standardkurve ermittelte Konzentration der Urinprobe = 500 pg/mL
Ergebnis nach Korrektur mit den Verdünnungsfaktor 19 = 9500 pg/mL
9500 pg/mL / 1000 = 9,5 µg/L
Gesamtvolumen des 24-Stunden-Urins = 1,3 L (Beispiel)
9,5 µg/L × 1,3 L/24 h = 12,35 µg/24 h
7 ERWARTETE WERTE
Es wird empfohlen, dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt.
7.1 Serum- /Plasma

In einer Studie wurden EDTA-Plasmaproben von gesunden Erwachsenen untersucht. Dabei ergaben sich mit dem DRG
Aldosterone ELISA folgende Werte:
Mittelwert Median 2,5. - 97,5. Perzentile Bereich (min. - max.)
Gesunde Erwachsene n
Liegende Körperhaltung 60 56,14 39,71 14,21 – 156,47 8,58 – 272,30
Stehende Körperhaltung 60 77,48 58,00 13,37 – 233,55 12,87 – 358,50
Diese Werte gelten auch für Serum, Heparin- und Zitratplasma.
Diese Werte stimmen gut überein mit publizierten Referenzbereichen 8,9.
In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsenen untersucht. Dabei ergaben sich mit dem DRG
Aldosterone ELISA (EIA 5298) und dem DRG Renin ELISA folgende Aldosteron-Renin-Quotienten in Plasma:
Aldosteron-Renin-Quotienten (pg/mL/pg/mL)
n Mittelwert Median 2,5. - 97,5. Perzentile
Gesunde Erwachsene 89 8,68 5,30 0,52 – 37,83
Diese Werte gelten auch für Serum.
7.2 Urinproben
In einer Studie wurden die Urinproben von gesunden Erwachsenen untersucht. Dabei ergaben sich mit dem DRG
Aldosteron ELISA folgende Werte:
Mittelwert Median 2,5. - 97,5. Perzentile Bereich (min. - max.)
n
(µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h)
Gesunde Erwachsene 8 11,34 9,40 3,31 - 25,09 3,06 - 27,17
Diese Werte stimmen gut überein mit publizierten Referenzbereichen 8.
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8 QUALITÄTSKONTROLLE
Es wird empfohlen, die Kontrollproben gemäß den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen. Durch die
Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag-zu-Tag Überprüfung der Ergebnisse erzielt. Es sollten Kontrollen sowohl
mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden.
Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC-Labors sind im QC-Zertifikat, das dem Kit beiliegt,
aufgeführt. Die im QC-Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten
zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden.
Es wird ebenfalls empfohlen, an nationalen oder internationalen Qualitätssicherungs-Programmen teilzunehmen, um die
Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern.
Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll-Werten und Trends angewendet werden. Wenn die
Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials übereinstimmen, sollten
die Patientenergebnisse als ungültig eingestuft werden.
In diesem Fall überprüfen Sie bitte die folgenden Bereiche: Pipetten und Zeitnehmer, Photometer, Verfallsdatum der
Reagenzien, Lagerungs- und Inkubationsbedingungen, Absaug- und Waschmethode.
Sollten Sie nach Überprüfung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben, setzen Sie sich bitte mit Ihrem
Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung.
9 ASSAY-CHARAKTERISTIKA
9.1 Messbereich
Der Messbereich des Testes für Serum und Plasma liegt zwischen 7,75 pg/mL – 1000 pg/mL.
Der Messbereich des Testes für Urin liegt zwischen 9,81 pg/mL – 1000 pg/mL.
9.2 Spezifität der Antikörper (Kreuzreaktivität)

Die Daten entnehmen Sie bitte der ausführlichen englischen Gebrauchsanweisung.
9.3 Sensitivität
Die analytische Sensitivität, definiert als Mittelwert minus der zweifachen Standardabweichung des Standards 0 (n = 20),
beträgt < 5,7 pg/mL.
Serum / Plasma Urin

„Limit of Blank“ (LoB) 7,75 pg/mL 9,81 pg/mL
Nachweisgrenze (LoD 12,07 pg/mL 16,94 pg/mL
Quantifizierungsgrenze (LoQ) 14,78 pg/mL 23,66 pg/mL
Die Daten zu:

9.4 Reproduzierbarkeit (Präzision)
9.5 Wiederfindung
9.6 Linearität
entnehmen Sie bitte der ausführlichen englischen Version der Gebrauchsanweisung.
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10 GRENZEN DES TESTS

Jede unsachgemäße Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests können die Ergebnisse beeinflussen.
10.1 Interferenzen
Die folgenden Substanzen haben bis zu der angegebenen Konzentration keinen Einfluss auf das Testergebnis.
Serum Urin
Konzentration bis zu:
Hämoglobin 6 mg/mL
Bilirubin 0.4 mg/mL
Triglyzeride 20 mg/mL
Cholesterol 2.84 mg/mL
Gesamtprotein 120 mg/mL
Glukose 10 mg/mL
Kreatinin 0.05 mg/mL 5 mg/mL
10.2 Beeinflussung durch Medikamente

Uns sind bislang keine Stoffe (Medikamente) bekannt geworden, deren Einnahme die Messung des Aldosteron -Gehaltes
der Probe beeinflussen würde.
10.3 High-Dose-Hook Effekt

Ein High-Dose-Hook-Effekt ist für kompetitive Assays nicht bekannt.
11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN
11.1 Zuverlässigkeit der Ergebnisse
Der Test muss exakt gemäß der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden. Darüber hinaus muss der Benutzer
sich strikt an die Regeln der GLP (Good Laboratory Practice) oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder
nationale gesetzliche Vorgaben halten. Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien. Es ist sehr wichtig,
bei der Testdurchführung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur Überprüfung der Genauigkeit und Präzision
mitlaufen zu lassen.
Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen, und wenn alle anderen
Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen für diesen Assay erfüllen. Wenn Sie bezüglich eines Ergebnisses
Zweifel oder Bedenken haben, setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung.
11.2 Therapeutische Konsequenzen

Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen, selbst dann nicht, wenn
alle Testergebnisse mit den in 11.1 genannten Voraussetzungen übereinstimmen. Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil
des klinischen Gesamtbildes eines Patienten.
Nur in Fällen, in denen die Laborergebnisse in akzeptabler Übereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des
Patienten stehen, sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden.
Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage für die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen.
11.3 Haftung
Jegliche Veränderungen des Testkits und/oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher
Chargen von einem Testkit zu einem anderen, können die gewünschten Ergebnisse und die Gültigkeit des gesamten
Tests negativ beeinflussen. Solche Veränderungen und/oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher
Ersatzansprüche zur Folge.
Reklamationen, die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gemäß Punkt 11.2
erfolgen, sind ebenfalls abzuweisen. Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert
des Testkits beschränkt. Jegliche Schäden, die während des Transports am Kit entstanden sind, unterliegen nicht der
Haftung des Herstellers.
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Italiano
1 INTRODUZIONE
Il test immuno-enzimatico DRG Aldosterone ELISA contiene materiale per la determinazione quantitativa di aldosterone
in siero, plasma (plasma EDTA, eparina o citrato) o in urina.
Questo test kit è adatto soltanto per l’uso diagnostico.
2 PRINCIPIO DEL TEST

Il test kit DRG Aldosterone ELISA è un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato (ELISA),
basato sul principio del legame competitivo.
I micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo policlonale diretto contro un unico sito antigenico della molecola
aldosterone. Aldosterone endogeno/a di un campione compete con il aldosterone coniugato alla perossidasi di rafano per
il sito di legame sull’anticorpo ancorato nel micropozzo. Dopo l’incubazione il coniugato non legato è lavato via.
Dopo l’aggiunta della soluzione substrato, l’intensità del colore sviluppato è inversamente proporzionale alla
concentrazione di aldosterone nel campione del paziente.
3 PRECAUZIONI
− Questo kit è adatto soltanto per l’uso diagnostico in vitro.
− Si prega di usare la versione valida dell'inserto del pacco a disposizione con il kit.
− Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza.
− Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza
di HIV I/II, HbsAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA. Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere
trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento.
− Il contatto con la Stop Solution dovrebbe essere evitato perché contiene 0,5 M H2SO4. L’acido solforico può provocare
irritazioni cutanee e ustioni.
− Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose.
− Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare, mangiare, bere o fare uso di prodotti cosmetici.
− Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso. La contaminazione dei reagenti o
dei campioni con microbi può dare risultati falsi.
− L’utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze
nocive.
− Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit.
− Ogni indicazione sulla quantità indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito. Risultati ottimali
possono essere ottenuti soltanto con l’uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato.
− Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati. È consigliabile di non utilizzare pozzetti di
piastre diversi, anche se si tratta dello stesso lotto. I kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni
diverse, cosicché le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente.
− I componenti chimici e reagenti preparati o già utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza
nazionali sulle sostanze nocive.
− I regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta
DRG Instruments GmbH.
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4 COMPONENTI DEL KIT

4.1 Contenuto del kit
1. Microtiterwells (Micropozetti), 12 x 8 file (separatamente staccabili), 96 pozzetti;
Pozzetti ricoperti con l’anti-aldosterone anticorpo (policlonale)
2. Standard (Standard 0 - 5), 6 flaconi, 1 mL ognuno, liofilizzato;
Concentrazione: 0 – 20 – 80 – 200 – 500 – 1000 pg/mL
Conversione 1 pg/mL = 2,77 pmol/L
Vedi “Preparazione dei reagenti”.
Contiene conservante senza mercurio.
3. Control Low & High (Controllo), 2 flaconi, 1 mL ognuno, liofilizzato;
I valori dei controlli sono indicati sull’etichetta dei flaconi o sulla descrizione QC.
Vedi „Preparazione dei reagenti“.
4. Enzyme Conjugate (Tracciante enzimatico), 1 flacone, 20 mL, pronto all’uso;
Aldosterone coniugato alla perossidasi di rafano;
5. Substrate Solution (Soluzione di substrato), 1 flacone, 25 mL, pronto all’uso;
TMB (benzidine tetrametilico).
6. Stop Solution (Soluzione d’arresto), 1 flacone, 14 mL, pronto all’uso;
Contiene 0,5 M H2SO4.
Evitare il contatto con la soluzione d’arresto. Può causare irritazioni cutanee e ustioni.
7. Wash Solution (Soluzione di lavaggio), 1 flacone, 30 mL (concentrata 40X);
vedi „preparazione dei reagenti“.
Nota: Ulteriore Standard 0 per la diluizione dei campioni può essere richiesto alla ditta.
4.2 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit

− Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti (450 ± 10 nm) (p.es. il DRG Instruments Microtiterplate Reader)
− Micropipette calibrate di precisione a volume variabile
− Carta assorbente
− Acqua distillata o deionizzata
− Timer
− Carta millimetrata o carta per grafici semi-logaritmici o software per la riduzione dei dati.
− Facoltativo: reagente per la determinazione di Aldosterone nell’urina (REF EIA-5298-URIN) – Contenuto:
1) Release Reagent (Reagente di rilascio), 1 flacone, 3 mL, pronto all’uso, contiene 1 M HCl.
Evitare il contatto con il Reagenti di rilascio. Può causare irritazione cutanea.
2) Neutralization Buffer (Tampone di neutralizzazione), 1 flacone, 3 mL, pronto all’uso.
Contiene Tris buffer, pH 8,5.
3) Dilution Buffer (Tampone di diluizione), 2 flaconi, 25 mL ciascuno, pronto all’uso. Contiene PBS.
− Facoltativo: tubetti di plastic (p.es. 0,5 – 1,5 mL) per il pre-trattamento dei campioni di urina.
4.3 Magazzinaggio e stabilità del kit

A 2 °C a 8 °C i reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata. Non usare reagenti oltre questa
data.
Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 °C a 8 °C. I micropozzetti devono essere magazzinati a 2 °C a 8 °C.
Una volta aperti i pacchi, questi devono essere richiusi accuratamente.
Test kits aperti rimangono attivi per 2 mesi se magazzinati alle condizioni sopra descritte.
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4.4 Preparazione dei reagenti

Prima dell’uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente.
Standards
Ricostituire il contenuto liofilizzato di ogni flacone con 1,0 mL acqua distillata e lasciare per almeno 10 minuti a
temperatura ambiente. Mescolare alcune volte prima dell’uso.
Nota: Gli standard ricostituiti sono stabili per 8 settimane a 2 °C a 8 °C.
Per una conservazione più lunga congelare – una volta soltanto – a -20 °C.
Control
Ricostituire il contenuto liofilizzato di ogni flacone con 1,0 mL acqua distillata e lasciare per almeno 10 minuti a
temperatura ambiente. Mescolare alcune volte prima dell’uso.
Nota: Il controlli ricostituiti sono stabili per 8 settimane a 2 °C a 8 °C.
Per una conservazione più lunga congelare – una volta soltanto – a -20 °C.
Wash Solution
Diluire 30 mL Wash Solution concentrata con 1170 mL di acqua deionizzata fino ad un volume finale di 1200 mL.
La soluzione di lavaggio diluita è stabile per 2 settimane a temperatura ambiente.
4.5 Smaltimento del kit

Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge. Informazioni particolareggiate per questo
prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza, capitolo 13.
4.6 Test kits danneggiati

Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG, al
più tardi una settimana dopo il ricevimento del kit. Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test.
Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema. Dopo di che essi devono essere smaltiti
secondo le norme ufficiali.
5 CAMPIONI
Siero, plasma (plasma EDTA, eparina o citrato) o urina può essere usato per questo test.
Non usare campioni emolitici, itterici o lipemici.

Attenzione: Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test.
5.1 Campioni di siero / plasma

5.1.1 Raccolta dei campioni
Siero:
Collezionare sangue tramite puntura venale (p.es. Sarstedt Monovette per siero), far coagulare e separare il siero
centrifugando a temperatura ambiente.
Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata. Campioni di pazienti con una terapia anticoagulante possono
richiedere più tempo per la coagulazione.
Plasma:
Il sangue dovrebbe essere collezionato in tubetti da centrifuga contenenti un anticoagulante (p. es. Sarstedt Monovette
con un'adeguata preparazione per il plasma) e centrifugando immediatamente dopo la puntura.
5.1.2 Magazzinaggio dei campioni
I campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 5 giorni a 2 °C a 8 °C prima del dosaggio.
Campioni magazzinati per un periodo più lungo (fino a 2 mesi) dovrebbero essere congelati solo una volta a -20 °C prima
dell’analisi. Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell’uso.
5.1.3 Diluizione dei campioni
Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard più alto, questo campione può essere
diluito con Standard 0 e nuovamente determinato.
Della diluizione deve essere però tenuto conto.
Esempio:
a) diluizione 1:10: 10 µL campione + 90 µL Standard 0 (agitare bene)
b) diluizione 1:100: 10 µL della diluizione a) + 90 µL Standard 0 (agitare bene)
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5.2 Campioni di urina

La concentrazione di Aldosterone può anche essere determinate usando campioni di urina. Comunque, i campioni di
urina devono essere pretrattati prima dell’analisi. Questo richiede reagenti aggiuntivi che non sono inclusi in questo kit,
ma che possono essere ordinati separatamente (REF EIA-5298-URIN).
5.2.1 Raccolta dei campioni
Pulire l’area genitale con un disinfettante leggero per prevenire contaminazioni. Poi raccogliere il secondo getto di urina in
un apposite contenitore sterile. Direttamente dopo la raccolta, centrifugare l’urina per 5 - 10 minuti (p.es. a 2000 g) per
rimuovere detriti cellulari. Usare il surnatante per la quantificazione dell’analita. Il surnatante può essere conservato fino
a 8 ore a 2 °C a 8 °C prima del saggio. Campioni da conservare per periodi prolungati devono essere congelati a -20 °C.
Surnatanti scongelati devono essere mescolati per inversione prima del saggio.
5.2.2 Protocollo per il pretrattamento dei campioni di urina

1. Fissare il numero necessario di tubetti (p.es. 0.5 – 1.5 mL tubetti di plastica; non inclusi in questo kit).
2. Aggiungere 25 µL di urina con una nuova punta monouso nei tubetti relativi.
3. Aggiungere 25 µL Release Reagent in ogni tubetto. Mescolare accuratamente per 10 secondi. È importante
ottenere un mescolamento completo in questo passaggio.
4. Incubare per tutta la note a 2 °C a 8 °C.
5. Aggiungere 25 µL Neutralization Reagent in ogni tubetto e mescolare accuratamente.
6. Aggiungere 400 µL Dilution Buffer in ogni tubetto e mescolare accuratamente.
(Questo pretrattamento porta alla diluizione 1:19. Pertanto, il fattore di diluizione 19 deve essere usato per il calcolo
della concentrazione finale nei campioni di urina.
7. Trasferire 50 µL dei campioni di urina pretrattati e diluiti direttamente ai pozzetti della piastra microtiter e
continuare con passaggio 3 del procedimento del test (capitolo 6.2).
5.2.3 Magazzinaggio dei campioni di urina pretrattati

I campioni di urina pretrattati e diluiti dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 7 giorni a 2 °C a 8 °C prima del
dosaggio.
Campioni magazzinati per un periodo più lungo (fino a 2 mesi) dovrebbero essere congelati solo una volta a -20 °C prima
dell’analisi. Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell’uso.
5.2.4 Diluizione dei campioni

Se in un saggio iniziale, in un campione di urina viene trovato una quantità superiore allo standard più alto, il campione
pretrattato e diluito può essere diluito ulteriormente con il Dilution Buffer (tampone di diluizione) e re-analizzato come
descritto nel procedimento.
Per il calcolo della concentrazione, anche questo fattore di diluizione deve essere usato.
Esempio:
a) diluizione 1:10: 10 µL del campione di urina pretrattato e diluito + 90 µL di Dilution Buffer (mescolare
accuratamente)
(fattore di diluizione finale = 19 x 10 = 190)
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6 ATTUAZIONE DEL TEST

6.1 Indicazioni generali
− Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell’uso. Evitare la
formazione di schiume.
− Una volta iniziato il procedimento del test, questo deve essere portato alla fine senza interruzione.
− Per ogni componente, standard, controllo o campione è necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare
reazioni incrociate.
− La densità ottica dipende dal tempo d’incubazione e dalla temperatura. Perciò si rende necessario di preparare tutti i
reagenti, di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni. Soltanto una tale
preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento.
− Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e con la
temperatura.
6.2 Eseguimento del test

Ogni analisi deve includere una curva standard.
1. Fissare i pozzetti necessari sul supporto.

2. Pipettare 50 µL di ogni Standard, Control e campione nei pozzetti, cambiando ogni volta la punta monouso.
Per i campioni di urina erogare 50 μL dei campioni di urina pretrattati e diluiti (vedere il capitolo 5.2.2 Protocollo per il
pretrattamento dei campioni di urina, step 7).
3. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente.
4. Pipettare 150 µL Enzyme Conjugate in ogni pozzetto.
Agitare bene per 10 secondi. È molto importante raggiungere un completo mescolamento.
6. Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti.
Lavare i pozzetti 5 volte con 400 µL Wash Solution diluita in ogni pozzetto, se si utilizza una piastra di lavaggio
- oppure -
lavare i pozzetti 5 volte con 300 µL Wash Solution diluita in ogni pozzetto per il lavaggio manuale.
Rimuovere le gocce d’acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente.
Importante:
La sensibilità e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio!
7. Aggiungere 200 µL della Substrate Solution ad ogni pozzetto.
9. Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 100 µL della Stop Solution ad ogni pozzetto.
10. Determinare la densità ottica a 450 ± 10 nm con un fotometro per microtiter-piastre entro 10 minuti dopo l’aggiunta
della Stop Solution.
6.3 Rilevamento dei risultati

1. Determinare i valori medi della densità ottica per ogni set di standard, controlli e campioni.
2. Usando carta scalare o carta semi-logaritmica, costruire una curva standard riportando il valore medio
dell’assorbanza di ogni standard contro la sua concentrazione con il valore dell’assorbanza sull’ordinata (Y) e la
concentrazione sull’ascissa (X).
3. Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard.
4. Metodo automatico: I valori riportati in questo istruzioni per l’uso sono stati determinati tramite l'equazione a
4 parametri. (I methodi preferiti sono 4 Parameter Rodbard oppure 4 Parameter Marquardt.) Altri funzioni usati per
l’elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti.
5. La concentrazione dei campioni di siero / plasma può essere determinata direttamente dalla curva standard.
Per campioni di urina, la concentrazione letta dalla curva standard deve essere moltiplicato con il fattore di
diluizione 19 (vedi capitolo 5.2.2).
6. Campioni con una concentrazione più elevata dello standard più concentrato devono essere diluiti. Di questo fattore
di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione.
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6.3.1 Esempio di una curva standard tipica

I seguenti dati sono a scopo dimostrativo soltanto e non possono sostituire i dati generati dall'eseguimento del test.
Standard Densità ottiche (450 nm)
6.4 Calcolo finale per campioni di urina

Calcolare l’escrezione nelle 24 ore per ogni campione di urina: µg/24 h = µg/L x L/24 h
Esempio:
Concentrazione per campione di urina letta dalla curva standard = 500 pg/mL
Risultato dopo la correzione con il fattore di diluizione 19 = 9500 pg/mL
9500 pg/mL / 1000 = 9.5 µg/L
Volume totale di urina in 24 ore = 1,3 L (esempio)
9,5 µg/L × 1,3 L/24 h = 12,35 µg/24 h
7 VALORI NORMALI
È consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali.
7.1 Siero / Plasma

In uno studio condotto con adulti apparentemente sani, usando il DRG Aldosterone ELISA, i seguenti valori sono stati
trovati con campione di siero/plasma:
Media Mediano 2,5. - 97,5. percentile Intervallo (min. - max.)
Adulti sani n
Posizione supina 60 56,14 39,71 14,21 - 156,47 8,58 - 272,30
Posizione eretta 60 77,48 58,00 13,37 - 233,55 12,87 - 358,50
Questi valori sono validi anche per il siero, plasma eparinico e plasma citrato.
Questi risultati corrispondono bene con il campo di riferimento pubblicato di 8,9.
In uno studio condotto con adulti apparentemente sani, usando il DRG Aldosterone ELISA (EIA-5298) e il DRG Renin
ELISA (EIA-5125), i seguenti quozienti Aldosterone - Renina sono stati determinati nel plasma.
Quozienti Aldosterone - Renina (pg/mL / pg/mL)

n Media Mediano 2,5. - 97,5. percentile
Adulti sani 89 8,68 5,30 0,52 - 37,83
Questi valori sono validi anche per il siero.
7.2 Urina
In uno studio condotto con campioni di urina di adulti apparentemente normali, usando DRG Aldosterone ELISA, i
seguenti valori sono stati ottenuti:
Media Mediano 2,5. - 97,5. percentile Intervallo (min. - max.)
n
(µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h)
Adulti sani 8 11,34 9,40 3,31 - 25,09 3,06 - 27,17
Questi risultati coincidano con i campi di riferimenti publicati 8.
Come per tutti i test diagnostici, una diagnosi clinica definitiva non dovrebbe basarsi sui risultati di un singolo dosaggio.
Una diagnosi clinica dovrebbe essere formulata dal medico in seguito ad un’attenta valutazione di tutti gli aspetti clinici
assieme ai dati di laboratorio.
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8 CONTROLLO QUALITÀ
È consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge. Attraverso l’utilizzo dei campioni controllo si può
raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno. Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello
normale sia con uno patologico.
Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato, che è allegato al kit. I valori
riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati.
È altresì consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualità nazionali o internazionali, per assicurarsi
dell’esattezza dei risultati.
Appropriati metodi statistici per l’analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati.
Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo, i risultati
dei pazienti devono essere considerati invalidi. In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d’errore: pipette,
cronometri, fotometro, data di scadenza dei reagenti, condizione di magazzinaggio e d’incubazione, metodi di aspirazione
e di lavaggio.
Se dopo il controllo dei suddetti fattori non è rilevabile alcun errore, si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta
DRG.
9 CARATTERISTICHE DEL TEST

9.1 Assay Dynamic Range
Per il siero e il plasma le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 7,75 pg/mL – 1000 pg/mL.
Per le urina le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 9,81 pg/mL – 1000 pg/mL.
9.2 Specificità degli anticorpi (reazioni ad incrocio)

Per dettagli più precisi consultare la metodica in inglese.
9.3 Sensitività analitica

La sensitività analitica è stata calcolata dai valori medi, meno due deviazione standard, di venti (20) repliche dello
Standard 0 ed erano < 5,7 pg/mL.
Siero / Plasma Urina

Limite del bianco (LoB) 7,75 pg/mL 9,81 pg/mL
Limite di rilevabilità (LoD 12,07 pg/mL 16,94 pg/mL
Limite di quantificazione (LoQ) 14,78 pg/mL 23,66 pg/mL
Dati dettagliati su
9.4 Precisione
9.5 Recupero
9.6 Linearità
si prega di consultare le dettagliate istruzioni per l’uso in inglese.
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10 LIMITAZIONE DEL TEST

Risultati affidabili e riproducibili saranno ottenuti quando il procedimento del test è seguito con una comprensione
completa delle istruzioni all’uso e seguendo una buona pratica di laboratorio (GLP).
Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione al saggio può influenzare i risultati.
10.1 Sostanze interferenti

Le seguenti sostanze non influenzano i risultati del test fino alle concentrazioni sotto indicate.
Siero Urina
Fino alla concentrazione:
Emoglobina 6 mg/mL
Bilirubina 0,4 mg/mL
Trigliceridi 20 mg/mL
Colesterolo 2,84 mg/mL
Proteine totali 120 mg/mL
Glucosio 10 mg/mL
Creatinina 0,05 mg/mL 5 mg/mL
10.2 Droghe interferenti

Fino ad oggi nessuna sostanza (farmaco) è conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di aldosterone nel
campione.
10.3 Effetto Hook (Gancio) ad alto dosaggio

Un effetto Hook ad alto dosaggio non è noto per analisi competitive.
11 ASPETTI LEGALI
11.1 Affidabilità dei risultati
Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore. Inoltre l’utente deve seguire le regole
del GLP (Good Laboratory Practice) o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali. Questo vale
soprattutto per l’uso delle referenze. È molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai
campioni test per poter controllare l’esattezza e la precisione del test.
I risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del
test soddisfano la specificazione per questo test. Se esistono dubbi o domande su questi risultati, si prega di contattare la
ditta DRG.
11.2 Conseguenze terapeutiche

Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun
tipo, anche se i risultati del test sono d’accordo con gli aspetti articolati nel punto 11.1. Ogni risultato di laboratorio è
soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente.
Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell’ammalato, si possono
intraprendere delle conseguenze terapeutiche.
Il risultato del test da solo non è base sufficiente per lo stabilimento di una terapia.
11.3 Responsabilità legali

Ogni cambiamento del protocollo del test e/o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse
possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validità del test. Questi cambiamenti e/o scambi
annullano ogni diritto al risarcimento.
Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell’utente secondo il paragrafo 11.2.
Nel caso di reclamazione, la garanzia del produttore è limitato al valore massimo del test kit. Ogni danno provocato
durante il trasporto del kit non sottostà alla responsabilità del produttore.
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Español
1 INTRODUCCIÓN
El Kit de inmunoensayo enzimático DRG Aldosterone proporciona los materiales necesarios para la determinación
cuantitativa del Aldosterona en suero, plasma (EDTA, heparina o citrato) y urina.
Este ensayo está diseñado solo para diagnóstico in vitro.
2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO

El Kit DRG Aldosterone ELISA es un ensayo en fase sólida de inmunoadsorción unido a enzimas (ELISA), basado en el
principio de unión competitiva.
Los pocillos de las placas están recubiertos con un anticuerpo policlonal dirigido contra un foci antigénico en la molécula
Aldosterona. En las muestras de los pacientes Aldosterona compite con un conjugado Aldosterona -peroxidasa de
rábano en la unión al anticuerpo inmovilizado. Después de la incubación el conjugado no unido se lava.
La cantidad de conjugado de peroxidasa unido es inversamente proporcional a la concentración de Aldosterona en la
muestra. Después de la adición de la solución sustrato, la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional
a la concentración de Aldosterona en la muestra del paciente.
3 PRECAUCIONES
− Este kit es solamente para diagnóstico in vitro.
− Por favor, se usa solo la version valida de la metodico técnico incluido aqui en el kit.
− Para obtener información de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de
seguridad del material.
− Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser
negativos para HIV I/II, HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA. Sin embargo, todos los
reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensación como potencialmente biopeligrosos.
− Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO4 0,5 M. Puede provocar irritación y quemaduras en la piel.
− Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas.
− No fumar, comer, beber o usar cosméticos en áreas donde las muestras o los reactivos del kit están siendo usados.
− Usar guantes de látex cuando se utilicen las muestras y los reactivos. La contaminación microbiana de los reactivos o
las muestras puede dar resultados erróneos.
− El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las guías o regulación nacionales de
seguridad de sustancias biopeligrosas.
− No utilizar los reactivos después de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit.
− Todos los volúmenes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo. Los resultados óptimos del ensayo
se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados.
− No mezclar o usar componentes de kits con distinto número de lote. Se recomienda no intercambiar pocillos de
distintas placas incluso si son del mismo lote. Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes
condiciones y las características de unión de las placas pueden resultar diferentes.
− Los compuestos químicos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de
acuerdo con las guías o regulación nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas.
− Las hojas de los datos de seguridad de este producto están disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments
GmbH.
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4 COMPONENTES DEL KIT

4.1 Componentes del Kit
1. Microtiterwells (Placas multipocillo), 12 x 8 tiras separables, 96 pocillos;
Pocillos recubiertos con anticuerpo anti-aldosterona (policlonal).
2. Standard (Standard 0 - 5), (Estándar), 6 viales (liofilizados), 1,0 mL;
Concentraciones: 0 – 20 – 80 – 200 – 500 – 1000 pg/mL
Conversión: 1 pg/mL = to 2,77 pmol/L
Ver “Preparación de los Reactivos”;
Contiene conservante sin mercurio.
3. Control Low & High (Control), 2 viales, (liofilizado), 1,0 mL,
Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC.
ver “Preparación de los Reactivos”
4. Enzyme Conjugate (Conjugado enzimático), 1 vial, 20 mL, listo para usar,
Aldosterona conjugado con la Peroxidasa de rábano;
5. Substrate Solution (Solución de sustrato), 1 vial, 25 mL, listo para usar,
Tetrametilbencidina (TMB).
6. Stop Solution (Solución de parada), 1 vial, 14 mL, listo para usar,
contiene 0.5 M H2SO4,
Evitar el contacto con la Solución de parada. Puede causar irritación y quemaduras en al piel.
7. Wash Solution (Solución de lavado), 1 vial, 30 mL (concentrado 40X),
ver “Preparación de los Reactivos”.
Nota: Se puede solicitar el Standard 0 para la dilución de la muestra.
4.2 Equipamiento y material requerido pero no provisto

− Lector de microplacas calibrado (450 ± 10 nm) (ej. DRG Instruments Microtiter Plate Reader).
− Micropipetas de precisión variable calibradas.
− Papel absorbente.
− Agua destilada o deionizada
− Temporizador
− Papel a escala, papel para gráficos semilogarítmicos o software de reducción de datos
− Opcional: Reactivos para la determinación de Aldosterona en urina (REF EIA-5298-URIN) – Contenido:
1) Release Reagent (Reactivo de liberación), 1 vial, 3 mL, listo para usar. Contiene HCl 1M.
Evitar el contacto con el reactivo de liberación. Puede ocasionar irritación en la piel.
2) Neutralization Buffer (Tampón de neutralización), 1 vial, 3 mL, listo para usar.
Contiene tampón Tris, pH 8,5.
3) Dilution Buffer (Tampón de dilución), 2 viales, 25 mL cada uno, listo para usar. Contiene PBS.
− Opcional: Tubos de plástico (e.g. 0,5 - 1,5 mL) para el pretratamiento de muestras de orina
4.3 Almacenamiento y estabilidad del kit

Cuando se almacena a 2 °C - 8 °C, los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad. No
utilizar los reactivos más allá de esta fecha.
Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 °C - 8 °C. Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 °C - 8 °C. Una
vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo.
Los kits abiertos conservan su actividad durante dos meses si se almacenan como se ha descrito arriba.
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4.4 Preparación de los Reactivos

Dejar que todos los reactivos y el número requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse.
Standards
Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los estándares con 1,0 mL de agua destilada y dejar reposar
como mínimo durante 10 minutos. Mezclar varias veces antes de usar.
Nota: Los estándares reconstituidos son estables durante 8 semanas de 2 °C - 8 °C.
Para el almacenamiento a largo plazo congelar - solo una vez - a ‑20 °C.
Control
Reconstituir el contenido liofilizado con 1,0 mL de agua destilada y dejar reposar como mínimo durante 10 minutos.
Mezclar varias veces antes de usar.
Nota: Los controles reconstituidos son estables durante 8 semanas de 2 °C - 8 °C.
Para el almacenamiento a largo plazo congelar - solo una vez - a ‑20 °C.
Wash Solution
Mezclar 30 mL de Wash Solution concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL.
La solución del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente.
4.5 Eliminación del Kit

La eliminación del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales. En las hojas de datos de seguridad se
proporciona información especial de este producto (ver capítulo 13).
4.6 Kits de ensayo dañados

En caso de que exista cualquier daño severo del kit de ensayo o de sus componentes, ha de informarse por escrito a
DRG, no mas tarde de una semana después de recibir el kit. No deben utilizarse componentes dañados para llevar a
cabo un ensayo. Han de almacenarse hasta que se encuentre una solución. Después de esto, deben ser eliminados de
acuerdo con las leyes oficiales.
5 MUESTRAS
Suero o plasma (EDTA, heparina o citrato) y urina pueden ser usados en este ensayo.
No usar muestras hemolíticas, ictéricas o lipémicas.

Tener en cuenta: No deben usarse muestras que contengan acida sódica.
5.1 Muestras de suero/ plasma

5.1.1 Toma de muestras
Suero:
Recoger la sangre por punción en la vena (ej. Sarstedt Monovette para el suero), permitir coagulación, y separar el suero
por centrifugación a temperatura ambiente. No centrifugar antes de la coagulación completa. Las muestras de pacientes
que reciben terapia anticoagulante requieren más tiempo para coagular.
Plasma:
Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centrífuga que contengan anticoagulante (Ej. Sarstedt Monovette con una
preparación adecuada para el plasma) y centrifugar inmediatamente tras la recogida.
5.1.2 Almacenamiento de las muestras
Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 días a 2 °C - 8 °C antes del ensayo.
Las muestras almacenadas por un período de tiempo mas largo (hasta 2 meses) han de congelarse sólo una vez a
-20 °C antes del ensayo. Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo.
5.1.3 Dilución de las muestras
Si en un ensayo inicial, se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el estándar mas concentrado, ha
de diluirse con Standard 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo.
Para el cálculo de las concentraciones habrá que tener en cuenta el factor de dilución.
Ejemplo:
a) dilución 1:10: 10 µL muestra + 90 µL Standard 0 (mezclar totalmente)
b) dilución 1:100: 10 µL dilución a) 1:10 + 90 µL Standard 0 (mezclar totalmente).
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5.2 Muestras de orina

La concentración de aldosterona se puede determinar también a partir de muestras de orina. Sin embargo, las muestras
de orina tienen que ser pretratadas antes del análisis. Esto significaría usar reactivos que no están incluidos en este kit,
pero que pueden ser encargados por separado (REF EIA-5298-URIN).
5.2.1 Recogida de muestras

Primero, lavar la zona genital con un desinfectante moderado para prevenir la contaminación. Después recoger
directamente en un recipiente esterilizado la orina a la mitad de la micción. Inmediatamente tras la colecta, la orina tiene
que ser centrifugada de 5 a 10 minutos (e.g. a 2000 g) para eliminar los deshechos celulares. Usar sobrenadante para la
cuantificación de analitos.
El sobrenadante puede almacenarse por un máximo de 8 horas de 2 °C a 8 °C antes del ensayo.
Las muestras almacenadas durante más tiempo deben ser congeladas a -20 °C. El sobrenadante descongelado debe
ser invertido varias veces antes de su uso.
5.2.2 Protocolo para el pretratamiento de muestras de orina

1. Asegurarse del número deseado de viales (e.g. tubos de plástico de 0,5 a 1,5 mL; no incluidos en este kit).
2. Dispensar 25 µL de orina con puntas desechables nuevas en los tubos apropiados.
3. Dispensar 25 µL Release Reagent (reactivo de liberación) en cada tubo.
Mezclar completamente durante 10 segundos. En este paso es importante conseguir un mezclado completo.
4. Inbubar durante la noche de 2 °C a 8 °C.
5. Añadir 25 µL Neutralization Reagent (reactivo de neutralización) en cada tubo y mezclar exhaustivamente.
6. Añadir 400 µL Dilution Buffer (tampón de dilución) en cada tubo y mezclar exhaustivamente
(Este pretratamiento da lugar a una dilución de 1:19. Por ello el factor de dilución 19 tiene que ser tomado en cuenta
para calcular la concentración final de la muestra de orina.)
7. Transferir 50 µL de las muestras de orina pretratadas y diluidas directamente al pocillo de la microplaca y
continúe con el paso 3 del procedimiento del test (Capítulo 6.2).
5.2.3 Almacenamiento de las muestras de orina pretratadas y diluidas

Las muestras pretratadas y diluidas deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 7 días a 2 °C - 8 °C antes del
ensayo.
Las muestras almacenadas por un período de tiempo mas largo (hasta 2 meses) han de congelarse sólo una vez a
-20 °C antes del ensayo.
Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo.
5.2.4 Dilución de la muestra

Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra de orina que continene más que el mayor estándard, la muestra de
orina pretratada y diluida puede diluirse otra vez con Dilution Buffer (tampón de dilución) y nuevamente analizada según
la descripción del procedimiento del ensayo.
Para calcular las concentraciones este factor de dilución también tiene que ser tenido en cuenta.
Ejemplo:
a) dilución 1:10: 10 µL de muestra de orina pretratada y diluida + 90 µL Dilution Buffer
(mezclar exhaustivamente)
(factor de dilución final = 19 x 10 = 190)
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6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
6.1 Consideraciones generales
− Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso. Todos los reactivos deben
mezclarse sin formar espuma.
− Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupción.
− Utilizar puntas de pipeta de plástico nuevas para cada estándar, control o muestra para evitar combinaciones
cruzadas.
− La absorbancia es función del tiempo de incubación y la temperatura. Antes de comenzar el ensayo, se recomienda
que todos los reactivos estén preparados, tapas removidas, todos los pocillos que se necesiten asegurados en
recipiente, etc. Esto asegurará un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones.
− Como regla general, la reacción enzimática es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura.
6.2 Procedimiento de ensayo

Cada uno debe incluir una curva de estándares.
1. Asegurar el número deseado de pocillos en el recipiente.

2. Dispensar 50 µL de cada Standard, Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados.
Para las muestras de orina, dispensar 50 μL de las muestras previamente tratadas y diluidas (véase el capítulo 5.2.2
Protocolo para el pretratamiento de la muestra de orina, paso 7).
3. Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente.
4. Dispensar 150 µL de Enzyme Conjugate a cada pocillo.
Mezclar totalmente durante 10 segundos. Es importante mezclar completamente en este paso.
6. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos. Lavar los pocillos
5 x con 400 µL de solución de lavado diluida por pocillo (si se usa un lavador de microplacas automático) - o.
5 x con 300 µL/pocillo para el lavado manual.
Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales.
Nota importante: La sensibilidad y la precisión de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realización
correcta del proceso de lavado!
7. Adicionar 200 µL de Substrate Solution a cada pocillo.
9. Parar la reacción enzimática mediante la adición de 100 µL de Stop Solution a cada pocillo.
10. Leer la OD a 450 ± 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos después de la adición de la Stop
Solution.
6.3 Cálculo de los Resultados

1. Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de estándares, controles y muestras de pacientes.
2. Usando papel a escala o papel para gráficos semilogarítmicos, construir la curva estándard trazando la absorbancia
media obtenida de cada estándard en función de su concentración, con la absorbancia en la eje vertical (Y) y la
concentración en el eje horizontal (X).
3. Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentración correspondiente a partir de la
curva estándar.
4. Método automatizado: Los resultados en las instrucciones de uso se han calculado automáticamente usando una
curva de regresión 4 Parámetros. (4 Parámetros Rodbard o 4 Parámetros Marquardt son los métodos preferidos.)
Otras funciones de regresión darán lugar a resultados sensiblemente diferentes.
5. La concentración de las muestras de suero/ plasma se puede leer directamente de esta curva estándard.
Para muestras de orina, la concentración leída de la curva estándard, tiene que ser multiplicada con el factor de
dilución 19 (ver capítulo 5.2.2).
6. La concentración de las muestras puede leerse directamente de la curva de estándares. Las muestras con
concentraciones superiores al mayor estándar han de diluirse. Para el cálculo de las concentraciones hay que tener
en cuenta el factor de dilución.
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6.3.1 Ejemplo de una Curva Estándar Típica

Los siguientes datos son solamente para la explicación y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el
momento del ensayo.
Estándar Unidades Ópticas (450 nm)
6.4 Cálculo final para muestras de orina

Calcular las 24 horas de excreción para cada muestra de orina: µg/24 h = µg/L x L/24 h
Por ejemplo:
Concentración de muestra de orina leída de la curva estándard = 500 pg/mL
Resultado después de la corrección con el factor de dilución 19 = 9500 pg/mL
9500 pg/mL / 1000 = 9,5 µg/L
Volumen total de orina en 24 h = 1,3 L (ejemplo)
9,5 µg/L × 1,3 L/24 h = 12,35 µg/24 h
7 VALORES ESPERADOS
Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales.
7.1 Suero / plasma

En un estudio con adultos aparentemente sanos (plasma EDTA) utilizando el DRG Aldosterone ELISA se observaron los
siguientes valores:
Media Mediana Percentil 2,5 - 97,5 Rango (min. - max.)
Adultos sanos n
Posición supina 60 56,14 39,71 14,21 - 156,47 8,58 - 272,30
Posición vertical 60 77,48 58,00 13,37 - 233,55 12,87 - 358,50
Estos valores también son válidos para el suero, plasma heparina y plasma de citrato.
Estos resultados corresponden bien con los rangos de referencia publicados 8,9.
En un estudio realizado con adultos normales aparentemente sanos, usando la ELISA de DRG Aldosterona (EIA-5298) y
la ELISA de DRG Renina (EIA-5125) se determinaron en plasma las siguientes cocientes Aldosterona-Renina:
Cociente Aldosterona-Renina (pg/mL / pg/mL)

n Media Mediana Percentil 2,5 - 97,5
Adultos sanos 89 8,68 5,30 0,52 - 37,83
Estos valores también son válidos para el suero.
7.2 Orina
En un estudio con adultos aparentemente sanos (muestras de orina) utilizando el DRG Aldosterone ELISA se
observaron los siguientes valores:
Media Mediana Percentil 2,5 - 97,5 Rango (min. - max.)
n
(µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h) (µg/24 h)
Adultos sanos 8 11,34 9,40 3,31 - 25,09 3,06 - 27,17
Estos resultados corresponden bien con los rangos de referencia publicados 8.
Version 10.0 2019/03 - vk - 34 -

8 CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales. El uso de muestras control se
recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados. Usar controles tanto a niveles normal como patológico.
Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad están fijados en el certificado de
control de calidad que acompañan al kit. Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren
siempre al kit actual y deben usarse para la comparación directa de los resultados.
Es recomendable también hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para
asegurar la exactitud de los resultados.
Utilizar métodos estadísticos apropiados para el análisis de los valores y tendencia de los controles. Si los resultados del
ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles, los resultados obtenidos de los pacientes
han de considerarse inválidos.
En este caso, por favor comprobar las siguientes áreas técnicas: Pipeteo y tiempo empleado, fotómetro, fecha de
caducidad de los reactivos, condiciones de almacenamiento e incubación, métodos de aspiración y lavado.
Después de comprobar los asuntos arriba mencionado sin encontrar ningún error, contactar con su distribuidor o con
DRG directamente.
9 CARACTERÍSTICAS DEL ENSAYO

9.1 Rango dinámico del ensayo
Para el suero y el plasma, el rango del ensayo se encuentra entre 7,75 pg/mL - 1000 pg/mL.
Para la orina, el rango del ensayo se encuentra entre 9.81 pg / mL - 1000 pg / mL.
9.2 Especificidad de los Anticuerpos (Reactividad Cruzada)

Consultar el manual de usuario en inglés.
9.3 Sensibilidad Analítica

La sensibilidad analítica se calculó a partir de la media menos dos desviaciones estándar de veinte (20) réplicas del
Estándar 0 y resultó ser 5,7 pg/mL.
Suero/ Plasma Orina
Límite del blanco (LoB) 7,75 pg/mL 9,81 pg/mL
Límite de Detección (LoD 12,07 pg/mL 16,94 pg/mL
Límite de Cuantificación (LoQ) 14,78 pg/mL 23,66 pg/mL
Para información sobre

9.4 Precisión
9.5 Recuperación
9.6 Linealidad
por favor consulte la versión detallada en inglés de las Instrucciones de Uso.
Version 10.0 2019/03 - vk - 35 -

10 LIMITACIONES DE USO
Cualquier manipulación inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados.
10.1 Sustancias que pueden interferir

Hemoglobina (hasta 4 mg/mL), Bilirrubina (hasta 0.125 mg/mL) y Triglicéridos (hasta 30 mg/mL) no influencian los
resultados del ensayo.
Las siguientes sustancias no tienen influencia en los resultados del ensayo hasta las concentraciones indicadas a
continuación.
Suero Orina
hasta la concentración:
Hemoglobina 6 mg/mL
Bilirrubina 0,4 mg/mL
Triglicéridos 20 mg/mL
Cholesterol 2,84 mg/mL
Proteína total 120 mg/mL
Glucosa 10 mg/mL
Creatinina 0,05 mg/mL 5 mg/mL
10.2 Interferencias con drogas

Hasta ahora no se han encontrado sustancias (drogas) conocidas por nosotros, que tengan influencia en la medida de
Aldosterona en una muestra.
10.3 Efecto Gancho-Dosis-Elevada

Un efecto de gancho de alta dosis no se conoce por ensayos competitivos.
11 ASPECTOS LEGALES
11.1 Fiabilidad de los Resultados
El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Mas aún, el usuario debe ajustarse
estrictamente a las reglas BPL (Buenas Prácticas de Laboratorio) o a otros estándares y/o leyes nacionales aplicables.
Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control. Es importante incluir siempre, dentro del procedimiento
de ensayo, un número suficiente de controles para validar la exactitud y la precisión del ensayo.
Los resultados del ensayo son válidos sólo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si
todos los otros parámetros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo. En cado de
alguna duda o inquietud, por favor, contactar con DRG.
11.2 Consecuencias Terapéuticas

Las consecuencias terapéuticas nunca deben basarse sólo en los resultados de laboratorio incluso si todos los
resultados del ensayo están de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11.1. Cualquier resultado de laboratorio es
solamente una parte del cuadro clínico de un paciente.
Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio están en acuerdo con todo el cuadro clínico de un paciente,
se pueden derivar consecuencias terapéuticas.
Nunca deben derivarse consecuencias terapéuticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo
11.3 Responsabilidad
Cualquier modificación del kit y/o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes
puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test. Esas modificaciones y/o cambios
invalidad cualquier reclamación de reposición.
Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretación de los resultados de laboratorio por parte del comprador
referidos al punto 11.2 son también inválidas. A pesar de todo, en el caso de cualquier reclamación, la responsabilidad
del fabricante no excede el valor del kit. Cualquier daño provocado al kit durante su transporte no está sujeto a la
responsabilidad del fabricante.
Version 10.0 2019/03 - vk - 36 -

12 REFERENCES / LITERATURE
1. Brown RD, Strott CA, and Liddle GW. Site of stimulation of Aldosterone biosynthesis by angiotensin and potassium.
J Clin Invest. (1972), 51 (6), 1413–8.
2. Bauer JH, Gauntner WC. Effect of potassium chloride on plasma renin activity and plasma aldosterone during
sodium restriction in normal man.
Kidney Int. (1979), 15 (3): 286–93.
3. Williams GH, Dluhy RG. Aldosterone biosynthesis. Interrelationship of regulatory factors.
Am J Med. (1972), 53 (5), 595–605.
4. Tiu SC et al. The use of aldosterone-renin ratio as a diagnostic test for primary hyperaldosteronism and its test
characteristics under different conditions of blood sampling.
J Clin Endocrinol Metab. (2005), 90 (1), 72-8.
5. Mulatero P et al. Confirmatory tests in the diagnosis of primary aldosteronism.
Horm Metab Res. (2010), 42 (6), 406-10.
6. Quillo AR. Primary aldosteronism: results of adrenalectomy for nonsingle adenoma.
J Am Coll Surg. (2011), 213 (1), 106-12.
7. Grossmann C and Gekle M. New aspects of rapid aldosterone signaling.
Mol Cell Endocrinology (2009), 308 (1-2), 53-62.
8. Thomas L (editor). Renin-Angiotensin-Aldosteron-System (RAAS).
Labor und Diagnose (2005); 1406-24.
9. Perschel FH et al. Rapid Screening test for primary hyperaldosteronism: ratio of plasma aldosterone to renin
concentration determined by fully automated chemiluminescence immunoassays.
Clin. Chemistry (2004); 50 (9), 1650-55.
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European Conformity Conformità europea Conformidad europea
kennzeichnung européennes
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use * beachten * per l’uso instrucciones de uso d’utilisation
In vitro diagnostic medical
In-vitro-Diagnostikum * Diagnostica in vitro Diagnóstico in vitro Diagnostic in vitro
device *
Catalogue number * Artikelnummer * No. di Cat. No de catálogo Référence
Batch code * Chargencode * Lotto no Número de lote No. de lot
Contains sufficient for Ausreichend für <n> Contenuto sufficiente per Contenido suficiente Contenu suffisant pour
<n> tests * Prüfungen * ”n” saggi para <n> ensayos ”n” tests
Temperatura di Temperatura de Température de
Temperature limit * Temperaturbegrenzung *
conservazione conservacion conservation
Use-by date * Verwendbar bis * Data di scadenza Fecha de caducidad Date limite d’utilisation
Manufacturer * Hersteller * Fabbricante Fabricante Fabricant
Caution * Achtung *
Nur für Sólo para uso en Seulement dans le cadre

RUO For research use only Solo a scopo di ricerca
Forschungszwecke investigación de recherches
Distributed by Distributed by Vertreiber Distributore Distribuidor Distributeur
Content Content Inhalt Contenuto Contenido Conditionnement
Volume/No. Volume / No. Volumen / Anzahl Volume / Quantità Volumen / Número Volume / Quantité
Plaques de micro-
Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells Micropozzetti Placas multipocillo
titration
Antiserum Antiserum Antiserum Antisiero Antisuero Antisérum
Enzyme Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Tracciante enzimatico Conjugado enzimático Conjugué enzymatique
Conjugate
Enzyme Complex Enzyme Complex Enzymkomplex Complesso enzimatico Complejo enzimático Complexe enzymatique
Substrate Substrate Solution Substratlösung Soluzione di substrato Solución de sustrato Solution substrat
Solution
Stop Solution Stop Solution Stopplösung Soluzione d´ arresto Solución de parada Solution d’arrêt
Zero Standard Zero Standard Nullstandard Standard zero Estándar cero Zero Standard
Standard Standard Standard Standard Estándar Standard
Control Control Kontrolle Controllo Control Contrôle
Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampone del test Tampón de ensayo Tampon d’essai
Wash Solution Wash Solution Waschlösung Soluzione di lavaggio Solución de lavado Solution de lavage
1N NaOH (idrossido di
1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH
sodio 1N)
1 N HCl 1 N HCl 1 N HCl 1 N HCl 1N HCl
Probenverdünnungs- Solución para dilución Solution pour dilution de
Sample Diluent Sample Diluent Diluente dei campioni
medium de la muestra l’échantillon
Konjugatverdünnungs- Solución para dilución Solution pour dilution du
Conjugate Diluent Conjugate Diluent Diluente del tracciante
medium del conjugado conjugué
Version 10.0 2019/03 - vk - 38 -

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Table of Contents / Inhaltsverzeichnis / Tabella die Contenuti / Tabla de Contenidos

1 INTRODUCTION .......................................................2 1 INTRODUCCIÓN .................................................... 29

1 EINLEITUNG ...........................................................12 12 REFERENCES / LITERATURE .............................. 37

Version 10.0 2019/03 - vk -2-

1.2 Summary and Explanation

Condition Serum Aldosterone Plasma Renin

2 PRINCIPLE OF THE TEST

Version 10.0 2019/03 - vk -2-

3 WARNINGS AND PRECAUTIONS

Version 10.0 2019/03 - vk -3-

Note: Additional Standard 0 for sample dilution is available upon request.

4.2 Materials required but not provided

4.3 Storage Conditions

Version 10.0 2019/03 - vk -4-

4.4 Reagent Preparation

4.5 Disposal of the Kit

4.6 Damaged Test Kits

5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION

Do not use haemolytic, icteric or lipaemic specimens.

5.1 Serum / Plasma Samples

Version 10.0 2019/03 - vk -5-

5.2 Urine Samples

5.2.2 Protocol for Urine Sample Pre-treatment

5.2.3 Storage of pre-treated Urine Samples

5.2.4 Specimen Dilution

Version 10.0 2019/03 - vk -6-

6.2 Test Procedure

1. Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder.

6.3 Calculation of Results

Version 10.0 2019/03 - vk -7-

6.3.1 Example of Typical Standard Curve

Standard Optical Units (450 nm)

6.4 Final Calculation for Urine Samples

Total volume of 24 h-urine = 1.3 L (example)

9.5 µg/L × 1.3 L/24 h = 12.35 µg/24 h

7 EXPECTED NORMAL VALUES

7.1 Serum / Plasma

These results correspond well to published reference ranges 8,9.

Ratio Aldosterone-Renin (pg/mL ⁄ pg/mL)

These results correspond well to published reference ranges 8.

Version 10.0 2019/03 - vk -8-

9.2 Specificity of Antibodies (Cross Reactivity)

Serum / Plasma Urine

Version 10.0 2019/03 - vk -9-

9.4.2 Inter Assay

10.1 Interfering Substances

10.2 Drug Interferences

10.3 High-Dose-Hook Effect

Version 10.0 2019/03 - vk - 10 -

11.2 Therapeutic Consequences

Version 10.0 2019/03 - vk - 11 -

1.1 Klinische Bedeutung

Erkrankung Aldosteron Renin

Version 10.0 2019/03 - vk - 12 -

Version 10.0 2019/03 - vk - 13 -

4 BESTANDTEILE DES KITS

Anmerkung: Zusätzlicher Standard 0 zur Probenverdünnung ist auf Anfrage erhältlich.

4.2 Erforderliche aber nicht enthaltene Geräte und Materialien

4.3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits

Version 10.0 2019/03 - vk - 14 -

4.4 Vorbereitung der Reagenzien