roe a a ee Obtencién de Sobrenadante de E. foetida Se procedi al lavado de las lombrices eon abun- dante agua destilada para eliminar la tierra. Una ver limpias, se incubaron en agua destilada estéril, 44°C, en un vaso de precipitado, para de este mo. do eliminar la tierra de su interior. A las 12 horas, se tomaron las lombrices limpias y se depositaron ‘en un tubo homogenizador junto a suero fisil6gico, fen una proporcién de ml de suero por 1g de lom- brriz. Se obtuvo asi el homogenizado de E. foetida Posteriormente, se centrifugé el homogenizado a 10006 y 10000G por 5 minutos a temperatura am- biente, obteniéndose los dos tipos de sobrenadante. Para cada concentracién se realizaron diluciones de 5%, 1% y 0.1% v/v, estableciéndose los distintos grupos experimentales (Tabla 1). Instilacién de la MAC con la sustancia de prueba Se abricron la ventanas que anteriormente se ‘habian generado, introduciéndose los filtros de me- lulosa impregnados con 5 yl de sobrenadante EB. foctida (6 hnevos para cada grupo experi- mental) y de sustancia control, suero fisiolbgico (3 ). Los fitros permanecieron en contacto con MAC durante 48 horas, tras lo cual se extrajo pporcién de membrana alantocoriénica adyacen- sal lugar donde introdujimos el filtro" raci6n de muestras histol6gicas y conteo ‘vasos sanguineos vez obtenidas las muestras, se fijaron y tifleron ‘Hematoxilina Eosina y Aleian Blue™, Para realizar el conteo, se utilizé un microsco- de luz, equipado con una rejilla micrométrica cuadrilétera, dividida en 100 cuadrados juan por 30 1m, la cual se encuentra debajo del del ocular derecho. Se utilizé el micrascopio -el objetivo mayor (40x). Se consideré un érea 9000 j1m?, lo cual corresponde a una fila de la _graduada (10 campos). Asise realiz6 el minu- ‘eonteo dle vasos sanguineos, baséndose en la in de los gldbulos rojos y, principalmente, endotelio de los vasos sanguineos. La medi- se realizé en los segmentos de tejido de MAC es 0 cercanos a fragmentos de filtro. animales utilizados en el estudio cl presente estudio se utilizaron lombrices de rojas californianas adultas (Kisenia foetida) Rev Chil Estud Med 2008; 5(1): 7-11. Cavurr et al., Est. de la act, angiogénica de Eisenia foetida 9 y embriones de pollo (Gallus gallus) Anidlisis estadistico Para analizar los resultados obtenidos, se utilizé el método estadistico Test t de Student en el progra- ma Stata 9©, el cual permite evaluar las diferen- cias entre medias empiricas. Las medias compara- das corresponden a la densidad promedio de vasos I ee ea pee eS gs po control"? Los resultados fueron expresados en gréficos de barras aisladas, con las variables densidad de va- sos sangusneos promedio en 9000 jm? (DVSP) en el eje de las ordenadas y el grupo correspondiente en el eje de las abscisas, Resultados ‘Tras realizar el conteo de vasos sanguineos el gru- po control presenté una DVSP igual a 3:36 + 0,19 (Figuras 1 y 2) Los grupos expuestos al sobrenadante obteni- 4o a 1000 presentaron una DVSP menor que el srupo control (p < 0,05). El grupo expuesto a un sobrenadante concentrado al 0.1% v/v (grupo A) presenté una DYSP de 1,21 + 0,105. Por otro lado, cl grupo sometido a uma concentracién igual al 1 % v/v (grupo B) mostré tener una DVSP de 2,24 = 0,15, Por timo, el grupo sometido al sobrenadan- te concentrado al 5% v/v (grupo C) mostré tener tuna DVSP igual a 1,71 + 0,15 (Bigura 1) Fig. 1: Resumen det efecto angiogénico de las diferentes concentraciones del sobrenadante de E fotide ‘btenido 2 1000G. £1 grupo H es el grupo contro El grupo A corresponde 2 una concentacién igual 2.0:1% v/v; el grupo B a 1% v/v y al grupo Cal '5% v/v. Las barra representan el promedio + error ‘stadistic. DVSP: Densidad de vases sanguineos ‘promedio en 9000 pm, * Valor p < 0,05 respecte