MS #6

Блок-схеми приладів для МС-МС експерименту. Потрійний

квадруполь. Іонна пастка.

Схеми приладів, основані на комбінації «квадруполь-

часопролітний мас-спектрометр». Орбітреп.

Використання тандемної мас-спектрометрії для

підтверджуючого та кількісного аналізу.
Моніторинг заданих реакцій (MRM).

Галузі практичного застосування МС/МС.

 Аналізатори m/z

B/E
Q

TOF

OТ
IT ICR

Тандемні: QqQ, QIT, LIT, TOF/TOF

Гібридні: Q/TOF, LIT/ОT, LIT/FTICR 2
 Стратегія MС/MС

• Прилади - тандемні мас-

спектрометри, MС/MС або MС2;
стадії позначаються MС1, MС2, MСn.
• Спектри називаються
тандемними мас-спектрами
MС1 (MС/MС-спектрами).

Іони, що виходять з MС1 - іони-попередники

(батьківський іон)

MС2
фрагментація

• Іони, що надходять у MС2 - іони продукту

(дочірні іони); в експериментах вищого
порядку - іони продукту n-го покоління.

m/z аналіз

судові дослідження, охорона навколишнього середовища,

Застосування: допінг-контроль, в усіх дослідженнях "оміки". 3
Історія розвитку МС/МС

EB-EB

EB-qQ

QqQ

ReTOF

4
 Розділення (тандем) у просторі
QqQ
детектор

Іонне джерело

TOF/TOF

Розділення у часі
Один аналізатор використовується двічі з розділеними в часі функціями сканування
QIT, LIT

Вилучення Фрагментація

детектор
5
 Іонна пастка (quadrupole ion trap, QIT)
z
полюсні електроди
k
m
Імпульсне
джерело
іонів

детектор

кільцевий електрод Р=10-3 Торр

кількість іонів в пастці 2000

• Маніпулюючи напругою змінюють E взаємодії між іонами та Не

• ІТ працює як камера зіткнення
• ІТ забезпечує вищу чутливість в порівнянні з системою фрагментації на
основі квадруполя

6
 потрійний квадруполь (QqQ)

джерело
детектор
іонів

Метастабільні іони
час розкладу 10–5 с
m1 m2 m30
m1 m12 е
m1 m2 m30

7
 камера зіткнення (q2)

дисоціація, спричинена зіткненням, або

колізійно активована дисоціація
Mг • Low‐energy CID; десятки еВ
E вн E кін
M ioн M г • High‐energy HCD; 1-20 кВ; Не

8
 Е зіткнення

[M+Na]+

Вплив Е на ступінь фрагментації іонів [M+Н]+ сульфадиметоксину 9

 Типи камер зіткнення

• Дисоціація, спричинена зіткненням, або колізійно активована дисоціація

(CID, Low‐energy collision‐induced dissociation )
• Високоенергетична колізійна дисоціація (HCD, High‐energy collisional dissociation)
• Поверхнево-індукована дисоціація (SID, Surface‐induced dissociation)

• Дисоціація з переносом електронів (ETD, Electron transfer dissociation )

QqQ, QTOF, OT
• Дисоціація захоплення електронів (ECD, Electron capture dissociation) FTICR

• Дисоціація з відривом електронів (EDD, Electron detachment dissociation)

• Інфрачервона радіаційна дисоціація чорного тіла (BIRD, Blackbody Іnfrared

Radiative Dissociation) FTICR
• Post‐source decay (PSD)/laser‐induced dissociation (LID)
• Інфрачервона багатофотонна дисоціація (IRMPD, Infrared multiphoton
dissociation) FTICR

10
Колізійно активована дисоціація Поверхнево-індукована дисоціація
СID SID

Фрагментація пептидів
ETD та ECD зберігають посттрансляційні модифікації (PTM),
зокрема фосфорилювання та дозволяють визначати місце
розташування PTM.
11
 Методи активації іонів
час

PD (193 nm)
fs
EID
kеВ, CID
SID Метод Енергія МС/МС
ps еB, CID активації
СІD Низька QqQ, QqTOF, QqLIT, FT-ICR
Висока BE, ReTOF, TOF-TOF
SІD Низька QqQ, BqQ, IT, FT-ICR
s kеV, CID Висока TOF

еB, CID PD, IRMPD Низька IT, FT-ICR

BIRD, EDC Низька FT-ICR
ms ETD Низька LIT
IT, CID
ICR -CID cw IRMPD
s

BIRD
h
12
 Режими сканування QqQ
Іонне джерело Q1 q2 Q3
EI, CI, APCI

Сканування продукту

Сканування попередника

Сканування нейтральних втрат 13

сканування попередника

Всі попередники утворюють одинаковий фрагмент. Н-п, фосфоліпіди в

клітинній мембрані
cканування нейтральних втрат

Група завжди фрагментується з вивільненням молекул постійної маси - але цей

франмент не іоном.Н-п, для фосфопептидів характерна постійна втрата фосфорної
кислоти (-98) 14
 Цільові забруднювачі
(необхідні аналітичні стандарти)

Перелік забруднювачів
(ідентифікація/
кількісна оцінка)
• час утримання
SIM SRM XIC

• фрагментні іони
• Іон попередник іони продукту
• Точні маси в мас-спектрі
• мас-спектр іонів -продуктів

ОК Підтвердження ідентичності

• сурогат
ISTD

• ізотопічно мічений ІС
• матричний стандарт

ОК Кількісна оцінка

Q, QqQ, QIT, QqLIT, TOF, QqTOF, Orbitrap

15
 Моніторинг вибраної реакції (SRM)
Четвертий вимір, доданий тандемною МС.
Якщо прилад працює, щоб виявити лише один
характерний іон продукту (3b)

SIM(Selected ion monitoring) вибраний моніторинг іонів

MID (Multiple ion detection) багаторазове виявлення іонів
SRM (Selected reaction monitoring) моніторинг вибраної реакції
SIM для моніторингу реакцій у тандемному режимі МС
MRM (Multiple reaction monitoring) моніторинг множинних реакцій
За цикл контролюється більше однієї реакції
16
Аналіз заборонених наркотиків у стічних водах методами LC-MS / MS та MRM

ESI(+) CID-спектр [M+H]+ -іону

кокаїну (М.м.=303.15) та
отриманий з нього MRM-слід

Спектр ESI-CID з [M+H]- аніона

11-нор-9-карбокси-Δ9-
тетрагідроканабінол
(М.м.=344.2) та відповідний
MRM

17
ТІС та MRM для пестицидів у річковій воді

18
Не ефективний при > 5 кДа TOF/TOF

рефлектон
MALDI-TOF

TOF 2

CID
МС спектр міоглобіну (616 Да). Точність визначення маси
TIS білків становить + 0,1%. Роздільна здатність в TOF
селектор іонів
із синхронізацією обмежена.

TOF 1

лазер детектор

Час перебування іонів у CID ( 1–2 кеВ) коротший

MALDI-TOF/TOF використовується нижчий тиск газів 19
 Q/TOF

Переваги перед QqQ:

• значно вища роздільна здатність,
рефлектон
• висока точність вимірювання m/z
• швидке сканування

TOF

2 режими
CID
роботи Q
детектор

ESI, MALDI
Q/q

Зона середнього вакууму Зона високого вакууму

20
 Конструкції іонних пасток

Спрощення
Збільшення ємності
геометрії IT
утримуваних іонів

IT гіперболічна IT циліндрична IT прямолінійна

Фільтр мас Спрощення

IT лінійна геометрії IT

ІТ має власну систему виявлення іонів

разом із системами доставки реагенту,
здатними забезпечити основи для
фрагментації (CID, HCD та ETD)
 Формування MСn з використанням іонних пасток (QIT/LIT)

спектр від першого сканування:

структурна інформація

CID

для отримання CID-спектрів Y та Z іони

потрібно виділяти в окремі аналізатори

CID
CID

У QIT (LIT) один і той же аналізатор використовується послідовно у

часі для генерування спектрів. 22
 LIT/OT

Іонне джерело Лінійна пастка C-пастка Друга комірка

LIT зіткнення

Orbitrap :
• висока швидкість сканування ( n 100 Гц)
• висока роздільна здатність (R 106)

Використовується як для МС так і МСn експериментів, оскільки має LIT детектор.

Додаткова фрагментація м/б здійснена у другій камері зіткнення.
Продукти з будь-якої комірки зіткнення вводяться через C пастку.

23
 ізоляція та фрагментація іонів

Магніт
Гібрдні МС/МС

Q/q LIT

ОТ
24
 Напрямки роботи аналітичних лабораторій

Цільовий Визначення структури

скринінг Нецільовий скринінг
невідомої сполуки

25
 Нецільові забруднювачі

Нецільовий скринінг Невідомі сполуки

(завжди повний MC та перевірка (метаболіти, нові забрудники)
бази даних та бібліотек)
• MС • інтенсивність сигналу
• • точний МС
IDA XIC

MС/МС
IDA XIC

• Ізотопний паттерн • точний МС/МС

• Точні маси в мас-спектрі • Ізотопний паттерн
• еквівалентність подвійного зв’язку • еквівалентність подвійного зв’язку

Ідентифікація ОК Емпірична формула

ОК (неточні маси та відповідність
бібліотечним спектрам • пошук в базах даних
• зв'язок із спектром МС/МС
З'ясування структури
ОК
Q, QqQ, QIT, QqLIT, TOF, QqTOF,
Orbitrap • відповідність аналітичним
стандартам

ОК TOF, QqTOF,
Ідентифікація
Orbitrap

TOF, QqTOF, Orbitrap

26