Professional Documents
Culture Documents
Total Phenolic and Flavonoid Contents of Srikaya (Annona Squamosa L.) Leaf Fermented Extracts
Total Phenolic and Flavonoid Contents of Srikaya (Annona Squamosa L.) Leaf Fermented Extracts
2, Oktober 2020
ABSTRACT
Srikaya leaves contain phenolic and flavonoid compounds can be used as
antioxidants, antidiabetic, hepatoprotective, antitumor. Fermentation cause
changes in chemical compounds that affect plant bioactivity. The aim of this
study was to determine total phenolic and flavonoid content of srikaya leaf
extract and it fermented with probiotic for 24, 48 and 72 hours. Extraction by
maceration method using 70% ethanol. Determination of total phenolic and
flavonoid content by UV- Vis spectrophotometry. Total phenolic content was
determined by gallic acid standard concentrations of series 40, 55, 70, 85, 100
ppm, total flavonoids content by quercetin concentrations of 40, 65, 90, 115, 140
ppm. Total phenolic content of extract is 4.028 ± 0.064 mgGAE /g, while the
fermented extracts at 24, 48, 72 hours are 8.817 ± 0.079 mgGAE /g; 7.391 ±
0.018 mgGAE /g; 5.997 ± 0.078 mgGAE /g. Total flavonoid content of extract
3.861 ± 0.041 mgQE /g, the fermented extract at
24, 48 and 72 hours are 17.022 ± 0.392 mgQE /g; 11,691 ± 0.268 mgQE /g;
9,227
± 0.243 mgQE /g. The conclusions are the process and duration of fermentation
affecting the content of total phenolic and flavonoids in srikaya leaf extract and
fermented extract.
ABSTRAK
Daun srikaya mengandung senyawa fenolik dan flavonoid yang dapat
digunakan sebagai antioksidan, antidiabetik, hepatoprotektif, antitumor.
Fermentasi menyebabkan perubahan senyawa kimia sehingga mempengaruhi
bioaktivitas tanaman. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui
kandungan total fenolik dan flavonoid pada ekstrak daun srikaya dan ekstrak
daun srikaya terfermentasi probiotik dengan lama fermentasi 24, 48 dan 72 jam.
Ekstraksi daun srikaya dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol
70%. Penetapan kandungan total fenolik dan flavonoid menggunakan
spektrofotometri UV-Vis. Kandungan total fenolik ditetapkan dengan asam galat
konsentrasi baku seri 40,
55, 70, 85, 100 ppm, penentuan kandungan total flavonoid dengan kuersetin
konsentrasi 40, 65, 90, 115, 140 ppm. Hasil penetapan kandungan total fenolik
ekstrak adalah 4,028±0,064 mgGAE/g, sedangkan kandungannya pada ekstrak
terfermentasi berturut-turut pada 24, 48, 72 jam yaitu 8,817±0,079; 7,391±0,018
dan 5,997±0,078 mgGAE/g. Kandungan total flavonoid ekstrak 3,861±0,041
mgQE/g, pada ekstrak terfermentasi jam ke-24, 48, 72 berturut-turut yaitu
17,022±0,392; 11,691±0,268 dan 9,227±0,243 mgQE/g. Kesimpulan yang
diperoleh adalah proses dan lama fermentasi mempengaruhi kandungan total
fenolik dan flavonoid pada ekstrak daun srikaya dan ekstrak daun srikaya
terfermentasi.
Alamat korespondensi :
DOI 10.22236/farmasains.v7i2.5635 Farmasains Vol. 7 No. 2, Oktober 2020
dyah.aryantini@iik.ac.id
67
Ekstrak Daun Srikaya (Annona squamosa L) Terfermentasi ......................... (Dyah Aryantini,
dkk)
PENDAHULUAN METODE PENELITIAN
Senyawa fenolik merupakan senyawa Alat
bioaktif yang memiliki peran besar pada Alat-alat yang digunakan
manusia diantaranya dalam pencegahan dan d a l a m penelitian ini adalah spektrofotometer
pengobatan penyakit degeneratif, kanker, UV Visible (Shimadzu), Autoklaf (Yazumi),
penuaan dini dan ganguan sistem imun tubuh Inkubator Mikrobiologi(Memmert), Mikropipet
(Apsari, 2011). Sedangkan hampir semua (Dragonlab), Lampu UV (Camag)
tumbuhan di alam termasuk bagian buah, akar, Bahan
daun dan kulit batang mengandung senyawa Etanol 70% teknis (Bratac
flavonoid yang tak kalah pentingnya dengan h e m ) , Kloroform teknis (Bratachem),
senyawa fenolik dalam memberikan efek Asam Galat (Merck), Kuersetin (Merck),
farmakologi pada manusia reagen Folin
(Ahmad, 2015) Ciocalteu (Merck), AlCl3 (Merck), media MRSA
Tanaman Annona squamosa L. atau dan MRSB (Oxoid), media susu sapi murni,
yang sumber probiotik berupa yogurt plain (Biokul).
sering disebut srikaya adalah salah satu contoh Sebagai bahan penelitian utama adalah daun
tanaman yang mengandung senyawa fenolik srikaya yang diperoleh di desa Bandar Lor,
dan flavonoid. Senyawa fenolik dan flavonoid Kecamatan Mojoroto, Kota Kedi
adalah senyawa yang memiliki gugus polyol dan r i . D a u n dikumpulkan siang hari saat terik
memiliki banyak aktivitas farmakologi yang panas matahari terhadap daun pada urutan
bermanfaat bagi kesehatan. Daun srikaya ketiga sampai lima pada setiap rantingnya.
mengandung senyawa fenolik dan flavonoid Metode
yang dapat digunakan sebagai antioksidan, 1. Pembuatan Ekstrak
antidiabetik, hepatoprotektif, aktivitas Determinasi daun srikaya dilakukan di
antitumor, dan lain s e b a g a i n y a ( P u r w Materia Medika Batu Malang. Metode ekstraksi
ita, 2013). Biji srikayabermanf terhadap simplisia dilakukan secara maserasi.
aat untuk mengatasi gangguan Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi adalah
pencernaan, cacingan, mematikan kutu kepala, etanol 70%. Sebanyak 1000 gram serbuk
dan serangga. Buah muda dapat digunakan simplisia direndam dalam 10 Liter etanol 70%
untuk mengatasi diare, disentri akut, dan selama 3 hari dalam bejana tertutup rapat
gangguan pencernaan. Bagian akar bermanfaat dengan pengadukan berulang.
mengatasi sembelit, disentri akut, depresi 2. Skrining Fitokimia Secara
mental, dan nyeri tulang punggung. Kulit kayu Kualitatif
digunakan untuk mengatasi diare, disentri, dan a. Terhadap senyawa fenolik dan
luka berdarah (Soedarso, 2012). flavonoid
Penelitian sebelumnya, Adetuyi dan Skrining fitokimia fenolik dilakukan
Ibrahim (2014) meneliti tentang pengaruh waktu dengan cara 1 ml ekstrak dimasukkan ke tabung
fermentasi dengan interval waktu inkubasi 0, 24, reaksi lalu ditambahkan FeCl3 1% 3-5 tetes.
72, dan 120 jam terhadap kandungan total Hasil positif senyawa fenolik memberikan warna
fenolik, flavonoid, vitamin C serta aktivitas hijau hingga biru hitam (Hanani, 2015).
antioksidan pada biji okra. Hasil penelitian Skrining fitokimia flavonoid dilakukan
menunjukkan bahwa biji okra yang difermentasi dengan cara 1 ml ekstrak dimasukkan ke tabung
memiliki jumlah total kandungan fenolik lebih reaksi lalu ditambahkan serbuk Mg dan
besar dibandingkan dengan yan beberapa tetes HCl pekat. Warna jingga sampai
g t i d a k difermentasi. Fermentasi pada merah menandakan positif flavonoid (Faskalia,
jam ke-24 memberikan total kandungan 2014).
fenolik paling besar. Penelitian lainnya, b. Secara kromatografi lapis tipis
Nazarni, dkk (2016) meneliti tentang pengaruh (KLT).
fermentasi terhadap kandungan total fenolik, Metode KLT dengan cara menotolkan
flavonoid, dan tanin serta hubungannya dengan ekstrak kental pada fase diam silica gel GF254
aktivitas antibakteri pada tanaman jaruk yang telah diaktivasi. Untuk senyawa fenolik
tiguran. Hasil yang didapatkan a d a l a h f e r digunakan fase gerak asam asetat:kloroform
mentasi memberikan jumlah (1:9 v/v)) dan dilanjutkan dengan penegasan
kandungan total fenolik, flavonoid, dan tanin reaksi semprot mengunakan reagen FeCl3.
lebih banyak dibandingkan tanpa fermentasi. Untuk mendeteksi keberadaan s
Berdasarkan penelitian yang dilakukan e n y a w a flavonoid digunakan fase gerak n-
Dini Rizkiawati (2017) tentang ekstrak daun Butanol:asam asetat;air (4:1:5 v/v) dan
srikaya terfermentasi aktif men dilanjutkan dengan reaksi penegasan uap
g h a m b a t Staphylococcus aureus. Aktivitas ammonia.
tersebut lebih tinggi dibandingkan dengan 3. Identifikasi Mikroskopis Bakteri Asam
ekstrak daun srikaya yang tidak difermentasi. Laktat.
Penelitian ini terfokus pada kandungan senyawa Alat-alat yang digunakan dalam proses
flavonoid total dan senyawa fenolik total pada fermentasi disterilkan terlebih dahulu dengan
ekstrak daun srikaya terfermentasi probiotik.
Ekstrak Daun Srikaya (Annona squamosa L) Terfermentasi .........................
C selama (Dyah Aryantini,
o
sterilisasi
dkk) basah mengunakan autoklaf pada 120 15 menit dan sterilisasi kering
o
suhu pada oven suhu 110 C
68
Farmasains Vol. 7 No. 2, Oktober 2020
Fermentasi pada penelitia 3) Penentuan kurva baku standar
n i n i memanfaatkan aktivitas bakteri asam Larutan baku dibuat dengan cara 10 mg
laktat yaitu L a c t o b a c i l l u s , S t r e p t o c kuersetin dilarutkan dengan etanol ad 10 ml
o c c u s , d a n Bifidobacterium yang terdapat sehingga diperoleh konsentrasi 1000 ppm.
pada sediaan yoghurt Biokul Plain. Identifikasi Selanjutnya dibuat baku seri dengan variasi
mikroskopis pada sediaan yoghurt Biokul konsentrasi 40, 65, 90, 115, dan 140 ppm lalu
Plain untuk mengetahui bentuk bakteri melalui masing-masing baku seri diambil 1 ml dan
pewarnaan gram. Sebanyak 1 ml dimasukkan direaksikan dengan 1 ml AlCl3 10%, kemudian
ke tabung reaksi yang berisi 10 ml MRSB (De ditambahkan 8 ml asam asetat 5% dan
Mann Rogosa Sharpe Broth) lalu diinkubasi didiamkan selama operating time lalu diukur
selama 24 jam suhu absorbanci pada panjang gelombang
0
37 C. Bakteri hasil inkubasi diambil dengan maksimum. Kurva standar diperoleh dari
menggunakan ose bulat sebanyak 1 ose lalu hubungan konsentrasi kuersetin (ppm)
diinokulasi ke dalam MRSA (De Mann Rogosa dengan absorbansi (Ipandi,
Sharpe Agar) pada cawan petri membentuk zig 2016).
0
zag. Cawan petri diinkubasi suhu 37 C selama 4) Penetapan Kandungan Senyawa Total
48 jam lalu dilakukan pengamatan. Penetapan kadar flavonoid
4. Fermentasi Ekstrak t o t a l dilakukan dengan metode Chang et al
Fermentasi ekstrak dibuat dengan cara (2002). Larutan ekstrak diambil 1 ml lalu
menyiapkan 3 kelompok perlakuan yakni 24 dimasukkan ke tabung, ditambahkan AlCl3 10%
jam, dan 8 ml asam asetat 5%. Larutan diinkubasi
48 jam dan 72 jam dengan masing-masing 3 selama operating time pada suhu ruang
replikasi menggunakan media susu sapi murni kemudian dilakukan p e m b a c a a n a b s o r
yang lebih dahulu dipasteurisasi dengan b a n s i p a d a p a n j a n g gelombang
0
pemanasan 85 C selama 10 menit kemudian maksimum (Bakti, 2017)
0
didiamkan hingga suhu turun mencapai 42-45 C
kemudian ditambahkan 10% v/v yogurt yang Analisis Data
berlaku sebagai starter pada setiap tabung Data dianalisa secara statistik dengan
perlakuan. Setiap tabung ditambahkan ekstrak SPSS Windows 8. Varian yang terdistribusi
daun srikaya kemudian diamati setiap periode normal dan homogen dianalisa dengan ANOVA
0
jam ke 24, 48 dan 72 pada suhu 37 C. One Way dan dilanjutkan dengan metode Post
5. Uji pH Ekstrak Hoc dengan tingkat kepercayaan <0,05 untuk
Terfermentasi mendapatkan kelompok yang m
Salah satu keberhasilan suatu proses e m i l i k i perbedaan bermakna.
fermentasi ditentukan oleh derajat keasaman
(pH). Untuk mengetahui pH ekstrak HASIL DAN PEMBAHASAN
terfermentasi maka perlu dilakukan pengukuran 1. Ekstraksi Daun Srikaya
pH sebelum dan sesudah diinkubasi. Metode maserasi yang digunakan dalam
6. Penetapan Kandungan Senyawa penelitian ini diharapkan dapat mencegah
Total kerusakan senyawa fenolik dan flavonoid akibat
Secara Spektrofotometri pemanasan saat ekstraksi (Yuda, 2017). Ekstrak
a. Kandungan senyawa fenolik daun srikaya diperoleh sebanyak 201,364 gram
total dengan rendemen sebesar 20,14%
1) Penentuan λmax 2. Skrining Fitokimia
2) Penentuan operating a. Terhadap senyawa fenolik dan flavonoid
time Menunjukkan hasil positif
3) Pembuatan kurva a d a n y a senyawa fenolik dengan warna hijau
standar hingga biru
Larutan baku induk asam galat 1000 ppm dibuat
variasi baku seri 40, 55, 70, 85, 100 ppm.
Diambil baku seri masing-masing 1 ml dan
ditambahkan
0,5 ml reagen Folin-Ciocalteu 10%, selanjutnya
ditambahkan 4 ml Na2 CO 3 1 M. Didiamkan kehitaman (Hanani, 2015). Hasil positif adanya
selama operating time dan dibaca absorbansi b. Kandungan senyawa flavonoid total
pada panjang gelombang maksimum (Sari, 1) Penentuan λmax
2017). 2) Penentuan Operating Time
4) Penetapan kandungan senyawa total
Penetapan kadar fenolik total dilakukan
dengan menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu.
Sebanyak 1 ml larutan ekstrak ditambah 0,5 ml
reagen Folin-Ciocalteu dan 4 ml Na2CO3 1 M lalu
diinkubasi selama operating time kemudian
diukur absorbansi pada panjang gelombang
maksimum (Anwar, 2016)
senyawa flavonoid juga ditandai dengan adanya Farmasains
lampu UV 366 nm padaVol.Rf7 No.
35, 2,
40,Oktober
79, 852020
dan
warna jingga hingga merah (Faskalia, 90. Dengan penampak bercak FeCl3 1% bercak
2014). b. Secara KLT tersebut menunjukkan warna coklat. Menurut
Bercak yang terjadi pada setiap plat Hanani (2017) bercak warna biru dengan Rf 35
dideteksi dibawah lampu UV 254 dan 366 nm. diduga senyawa fenolik.
Hasil KLT senyawa fenolik di bawah lampu UV H a s i l p e n g a m a t a n K LT s e n y
366 disajikan dalam Gambar 1 menunjukkan awa
senyawa berwarna biru (berpendar) di bawah
69
Ekstrak Daun Srikaya (Annona squamosa L) Terfermentasi ......................... (Dyah Aryantini, dkk)
kuning (Rizkiawati,
2017).
Hasil pengujian menunjukkan bahwa
Keterangan : ekstrak daun srikaya positif mengandung
(a) : lampu UV 254 nm senyawa fenolik dan flavonoid baik secara
(b) : lampu UV 366 nm kualitatif dengan uji warna maupun KLT.
(c) : visibel 3. Identifikasi Mikroskopis Bakteri Asam
Eluen : asam asetat : kloroform (1:9) Laktat
Fase diam : silika gel F254 Hasil pewarnaan pada Gam
Penampak bercak : FeCl3 1% b a r 3 menunjukkan bahwa jenis bakteri yang
terdapat dalam yogurt Biokul Plain adalah
Gambar 1. Uji KLT Fenolik Ekstrak Daun bakteri asam laktat dengan warna ungu,
Srikaya tergolong gram positif dan berbentuk basil. Sel
bakteri Gram Positif terlihat berwarna ungu
karena dapat membentuk ikatan komplek
flavonoid ditunjukkan pada Gambar 2 dengan dengan reagen gentian violet (Ismail dkk, 2017).
noda hitam yang meredam fluoresensi pada Rf 4. Fermentasi Ekstrak
60, dengan reaksi penampak bercak uap Kombinasi probiotik dalam
ammonia memperlihatkan bahwa noda y o g u r t sebagai starter fermentasi
berwarna menyebabkan bakteri memiliki fase
eksponensial dan stasioner yang lebih panjang,
sehingga diharapkan ekstrak terfermentasi
dalam waktu yang cukup panjang dalam periode
24 sampai 72 jam. Dengan adanya kombinasi
bakteri asam laktat meningkatkan
pertumbuhan biomassa dan mempercepat
proses fermentasi (Kamara dkk, 2016)
5. Uji pH Pada Ekstrak
Terfermentasi
Hasil pengukuran pH pada ekstrak kental
adalah 5, sedangkan pada ekstrak terfermentasi
24 jam pH 3, ekstrak fermentasi 48 jam dan 72
jam keduanya dengan pH 2. Penurunan pH
ekstrak akibat proses fermentasi dan terjadi
akumulasi asam laktat yang menghasilkan
- + +
CH3CHOHCOO dan H , sehingga ion H yang
dibebaskan semakin tinggi.. Fermentasi 48 jam
dan 72 jam memberikan nilai pH yang tidak
berbeda signifikan karena berkurangnya nutrisi
yang dibutuhkan bakteri, sehin
Keterangan :
g g a mengakibatkan menurunnya pembentukan
(a) : lampu UV 254 nm
asam laktat selama fermentasi.
(b) : lampu UV 366 nm 6. Penetapan Kandungan Senyawa Total
(c) : visibel (c) Secara Spektrofotometri
Eluen : n-butanol:asam asetat:air (4:1:5) a. Penetapan kandungan senyawa fenolik
Fase diam : silika gel F254 total
Penampak bercak : uap amonia Penetapan kandungan sen
y a w a menggunakan konsentrasi asam galat
Gambar 2. Uji KLT Flavonoid Ekstrak Daun 40 ppm,
Srikaya 55 ppm, 70 ppm, 85 ppm dan 100 ppm. Waktu
operasional yang didapatkan adalah 30 menit
70
Farmasains Vol. 7 No. 2, Oktober 2020
Gambar 6. Grafik Kandungan Senyawa Fenolik Total dan Flavonoid Total Ekstrak
Terfermentasi Daun Srikaya
enzimatik yang dapat memodifikasi senyawa dasar penelitian jangka panjang dalam formulasi
bioaktif substrat, diantaranya adalah menjadi minuman yogurt yang mengandung ekstrak
bentuk bebas seperti alkaloid, fenolik dan terfermentasi selama 24 jam dari daun srikaya
flavonoid (Ibrahim, 2014). dengan kandungan senyawa fen
Penetapan kandungan senyawa fenolik o l i k d a n flavonoid.
dan flavonoid total ekstrak daun srikaya
memberikan hasil bahwa kadar total senyawa DAFTAR
pada kelompok ekstrak fermentasi lebih tinggi PUSTAKA
dibandingkan kelompok ekstrak kental tanpa Adetuyi, F.O dan Ibrahim, T.A. 2014. Effect of
fermentasi (disajikan dalam gambar 6). Hal ini Fermentation Time on the Phenolic,
membuktikan bahwa fermentasi ekstrak dapat Flavonoid and Vitamin C Contents and
meningkatkan kadar total fenolik dan flavonoid Antioxidant Activities of O
pada ekstrak. Kelompok ekstrak fermentasi kra(Abelmoschus esculent
diperoleh kadar total tertinggi senyawa fenolik u s ) S e e d s . Journal of Nigerian
dan flavonoid pada periode fermentasi 24 jam. Institute of Food Science and
Berdasarkan analisa data secara statistik Technology, Vol. 32, No. 2.
d e n g a n u j i o n e - w a y A N O VA k e m Ahmad, Aktsar R, Juwita, S.A.D. Ratulangi,
u d i a n dilanjutkan dengan uji post hoc Abdul Malik. 2015. Penetapan Kadar
menunjukkan ada perbedaan bermakna pada Fenolik dan Flavonoid Total Ekstrak
kadar total senyawa fenolik dan flavonoid Metanol Buah dan Daun Patikala
kelompok ekstrak kental d i b a n d i n g k a n t (Etlingera elatior (Jack) R.M.SM). Jurnal
e r h a d a p e k s t r a k y a n g terfermentasi Pharm Sci Res, Vol. 2 No. 1
dengan tingkat kepercayaan kepercayaan Anwar, Khoerul, Liling Triyasmono. 2016.
<0,05. Hal ini menggambarkan bahwa proses Kandungan Total Fenolik, Total
fermentasi mempengaruhi kadar senyawa Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan
fenolik dan flavonoid dalam ekstrak. Ekstrak Etanol Buah Mengkudu
(Morinda citrifolia L.). Jurnal
KESIMPULAN Pharmascience, Vol. 3(1), 83-92.
Ekstrak daun srikaya terfermentasi Apsari, Pramudita Dwi., & Susanti, H. 2011.
terbukti meningkatkan kandungan senyawa Penetapan kadar fenolik total ekstrak
fenolik total dan flavonoid total metanol kelopak bunga rosella merah
s e c a r a spektrofotometri UV Visible. Dapat (Hibiscus sabdariffa Linn) dengan variasi
disimpulkan b a h w a l a m a f e r m e n t a s i tempat tumbuh secara spektrofotometri.
s e l a m a 2 4 j a m menunjukkan Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 2(1), 73-80.
peningkatan kadar senyawa fenolik dan Bakti, A. A, Liling Triyasmono, Muhammad I.R.
flavonoid total tertinggi dibandingkan dengan 2017. Penentuan Kadar Flavonoid Total
kelompok ekstrak kental, ekstrak dan Uji Antioksidan Ekstrak Etanol Daun
terfermentasi 48 jam dan 72 jam. Peningkatan Kasturi (Mangifera casturi Kosterm.)
periode fermentasi menyebabkan penurunan dengan Metode DPPH. Jur
kadar total fenolik dan flavonoid. Perlu dilakukan n a l Pharmascience. Vol. 4(2).
optimasi waktu fermentasi untuk mengetahui Faskalia, M.H. Wibowo. 2014. Skrining
kandungan optimum senyawa fenolik dan Fitokimia, U j i A k t i v i t a s , A n t i o k
flavonoid. Dari simpulan tersebut dapat menjadi s i d a n d a n U j i Sitotoksik Ekstrak
Metanol pada Akar dan K u l i t B a t a n
g Soma (Ploiarium
72
Farmasains Vol. 7 No. 2, Oktober 2020