610 JAPAN ANALYST Vol.

20 (1971)

製 剤 中 のdl-塩 酸 メ チ ル エ フ ェ ドリンの 吸 光 光 度 定 量 法

海東 常 敏,  相 楽 和 彦*

(1970年11月26日 受 理)

dl-塩 酸 メ チ ル エ フ ェ ド リ ン(MEP)は ア ル カ リ溶 液 中 で フ ェ リ シ ア ン 化 カ リ ウ ム に よ り 酸 化 さ れ て
ベ ン ズ ア ル デ ヒ ドを 生 成 す る.ベ ン ズ ア ル デ ヒ ドは241nmに 極 大 吸 収 を 有 し,MEPに 比 べ て強 い 吸

収 を 示 す の で,こ の 反 応 を 利 用 し て 製 剤 中 の 定 量 を 行 な い 良 好 な 結 果 を 得 た.ま た本 定 量法 は 反応 温 度
を20℃ に す る こ と に よ り塩 酸 エ フ ェ ド リ ン(EP)が10倍 量 共 存 し て も 影 響 な く 定 量 す る こ とが 可 能
で あ る.

と し て は か な り の 特 異 性 を 持 ち,簡 単 な 処 方 の 製 剤 は本
1  緒 言
定 量 法 を 直 接 適 用 で き,妨 害 物 質 を 含 む 場 合 は,解 熱鎮

MEPの 定 量 法 と して従 来 紫 外 部 吸 光 光 度 法1)の ほ か, 痛 剤 試 験 法8)で 用 い られ て い る イ オ ン 交 換 カ ラ ム に よる

プ ロ ム ク レ ゾ ール グ リー ン な どの スル ホ フ タ レン 系 色 素 分 離 法 を さ ら に 簡 略 化 し,精 度 よ く 定 量 で き た.

に よ る色 素 法2)が あ る.こ の 色 素 法 は製 剤 中 の定 量法 と
2  実 験
して 広 く用 い られ て い る が,リ ン 酸 ジ ヒ ドロコ デ ィ ン な
どの 妨 害 成 分 を含 む 場 合 は,あ らか じめ 水 蒸 気 蒸 留 に よ 2・1  試 薬 お よ び 装 置

る 分 離3)を 行 なわ な けれ ば な らな い.特 にEPを 共存 さ 2・1・1  試 薬 お よ び イ オ ン 交 換 力 ラ ム  MEP:日 本

せ た 場 合 は 分 離 が さ らに 困 難 とな るな どの 欠 点 が あ る. 薬 局 方 適 品 を105℃ で3時 間 乾 燥 し て 用 い た.
3%フ ェ リ シ ア ン 化 カ リ ウ ム 溶 液(用 時 調 製).
日本 薬 局 方 のMEPは,水 酸 化 ナ ト リウ ム アル カ リ性 で
pH10緩 衝 液:0.05M炭 酸 ナ ト リ ウ ム 溶 液50mlを
過 マ ン ガ ン酸 カ リウ ム酸 化 に よ り得 られ た ベ ン ズ ア ル デ
と り,0.05Mホ ウ 酸 ナ ト リ ウ ム 溶 液 を 加 え てpH10.0
ヒ ドの 芳 香 に よ っ て確 認 を行 な って い る4).さ ら に 同解 に 調 整 す る.
20%塩 酸,0。IN塩 酸, 2N水 酸 化 ナ ト リ ウ ム 液,
説 書5)は フ ェ リシ ア ン化 カ リウ ム酸 化 に よ って も,ベ ン
n-ヘ キ サ ン(ビ タ ミ ン 定 量 用),弱 酸 性 イ オ ン 交 換 樹脂
ズ アル デ ヒ ドが 生 成 され る こ とが 記 され て い る.著 者 ら
ア ン バ ー ラ イ トCG50[NH4型]カ ラ ム:弱 酸性イオ
は この フ ェ リシ ア ン化 カ リウ ムを 川 い てMEPの 定量法
ン 交 換 樹 脂 ア ン バ ー ラ イ トCG50を 常 法 に よ り[NH4
を確 立 した.類 似 化 合物 で あ るEPは 過 ヨ ウ素 酸 酸 化6) 型]と し,内 径10mmの カ ラ ム に 層 長5cmに 詰 め る.
ま た は ク ロ ム酸 酸 化7)に よ りベ ン ズ アル デ ヒ ドを生 成 さ 試 液 調 製 用 の 試 薬 は い ず れ も 試 薬 特 級 を 用 い た.
2・1・2・ 装置 日立EPS2型 自 記 分 光 光 度 計,日 立
せ,定 量 を 行 な っ て い る が,本 法 はEPが3倍 量 共存 し
パ ー キ ン エ ル マ ー139型 分 光 光 度 計.
て も影 響 な く,さ ら に反 応温 度 を20℃ にす る こ とに よ
り,10倍 量 まで 共 存 して も,そ の 影 響 な しに 定 量 す る
こ とが で き る.ま た感 度 はMEPそ の もの の 吸 光 度 に比 2・2  定 量 法

べ て 約68倍 増 加 し,製 剤 へ の 応用 も紫 外 部 吸 光 光 度 法 試 料 溶 液(60μg/ml)お よ び 水2mlず つ を 量 り,そ

*大 正 製 薬 株 式 会 社 研 究 部:東 京 都 豊 島 区高 田3丁 目 れ ぞ れ 共 せ ん 遠 沈 管 に 入 れ,3%フ ェ リシ ア ン 化 カ リウ
 報 文 海 東,相 楽:製 剤 中 のdl-塩 酸 メ チ ル エ フ ェ ドリ ンの 吸 光光 度 定 量 法 611

ム溶液2mlお よびpH10緩 衝液3mlを 加 え,密 せ ん 2mlを 用 い,他 は定 量法 に 従 って 操 作 した と こ ろ,Fig・

して,25℃ で1時 間 放 置 す る.そ の後20%塩 酸1ml 2に 示 す とお りフ ェ リ シア ン化 カ リウ ム 溶 液 の 濃 度 が

お よびn-ヘ キサ ン20mlを 加 え て1分 間 激 し く振 り混 2∼10%で 吸 光 度 が一 定 値 を 示 した.し た が って 定 量 法
ぜ放 置 した の ち,n-ヘ キ サ ン層 に つ き,か ら試 験 液 を対 で は フ ェ リシ ア ン化 カ リ ウム 溶 液 の 濃 度 を3%と 定め
照 と して,層 長10mmで,波 長241mmに お ける 吸 た.
光 度 浸丁 を測 定 す る.別 にMEPの 標 準 液(60μg/ml)
を調 製 し,同 様 の 操 作 を行 な い 吸光 度 魂 を測 定 し,次
式 に よ り含 量 を 算 出 す る.

MEP の 量(mg)=標 準 品 の 量(mg)×

2・3 定 量 条 件 の 検 討
2・3・1 酸 化 生 成 物 お よびMEPの 吸 収 曲線 標準

液(60μg/ml)2mlを と り定 量 法 に 従 って 得 た 液 お よ
びMEP400μ9/mlを 含 む 溶 液 の吸 収 曲線 をFig.1に
示 す.定 量 法 に 従 って得 た液 の 吸 収 曲 線 は 波長241mm
に 吸収 の 極 大 を持 つ ベ ン ズ ア ル デ ヒ ドの吸 収 曲線 と一 致
し,そ の吸 光 度 は0・064/μ9で あ った ・ これ に 対 して
Fig. 2 Effect of concentration of K3Fe(CN)6
MEPは257nmに 吸 収 の極 大 が あ り,吸光 度 は0.00094/
solution
μgで あ った.し た が って ベ ンズ アル デ ヒ ド生 成 に よ る
感 度 はMEPそ の もの の約68倍 と な る.
2。3・4 pHと 吸光度の関係 標 準 液(60μg/ml)

2mlを と り,0.05M炭 酸 ナ トリウ ム溶 液 お よび0.05M

ホ ウ酸 ナ トリウ ム溶 液 でpH9・25∼10・75に,ま た0・05

Mホ ウ酸 ナ ト リウ ム溶 液 お よび0.05N水 酸 化 ナ トリ ウ

ム溶 液 でpH 11.0∼12.5に 調 節 した 緩 衝 液 をつ く り,

そ の3mlを 用 い,他 は 定 量 法 に 従 って 操 作 した と こ
ろ,吸 光 度 はpH9.25∼9.75の 間 で 徐 々 に増 加 し,pH
9.75∼12・5の 問 で 一 定 値 を示 した.定 量法 で はEPの

影 響 も考 えてpH10.0と した.
2・3・5 反 応 時 間 と温 度 の 関 係 標 準 液(60μ9/ml)
2mlを と り,反 応 時 間 は10∼90分 と し,一 一方 反 応 温

度 を15∼400Cに 変 え,定 量法 に 従 って 操 作 した 結 果 を
Fig.3に 示 す 。定 量 法 で は再 現 性 が よ く,ま た 定 量 条 件
Fig. 1 Absorption spectra of dl-methylephedrine
と して 適 当で あ る と考 え られ る と ころ,す な わ ち 反 応 時
hydrochloride in water and of its oxidation
間60分,温 度25。Cを 採 用 した.
product in n-hexane
2・3・6 塩 酸 濃 度 と吸 光 度 の 関係 お よ び 塩 基 性 妨 害 物

質の除去法 塩 酸 は反 応 に は直 接 関係 な い が,塩 基 性
妨 害 物 質 を 除 去 す るた め に 用 い る こ と と した ・ 標 準 液
2・3・2  検 量 線 標 準 液(15∼120μ9/ml)を 調製 (60μ9/ml)2mlを と り,塩 酸 の 濃 度 を5∼36・5%(濃
し,そ の2mlを と り,以 下 定 量 法 に従 って操 作 した結 塩 酸)に 変 え,そ の1mlを 用 い,他 は 定 量 法 に 従 って
果,原 点 を 通 る 直 線 関 係 が 得 ら れ た. 操 作 し,吸 光 度 を測 定 した と ころ,5∼36.5%の 間でほ
2・3・3  フ ェ リ シ ア ン 化 カ リ ウ ム 溶 液 の 濃 度 と 吸 光 度 と ん ど一 定 の値 を示 した.次 に塩 酸 を加 え な い 場合 に 妨
の 関係 標 準 液(60μg/ml)2ml'を と り,フ ェ リシ 害 す るお そ れ の あ る塩 基 性 物 質 をMEPの5倍 量ず つ 混
ア ン 化 カ リ ウ ム 溶 液 の 濃 度 を0.5∼10%に 変 え,そ の 合 し,塩 酸 の 濃 度 を5∼20%に 変 え て測 定 した と ころ,
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影 響 が大 き くな る こ とが わ か った 。 ま たpH12・5緩 衝
液 お よび10%フ ェ リシ ア ン化 カ リウ ム溶 液 を用 い操 作
して得 た液 の 吸 収 曲 線 を測 定 した とこ ろ,ベ ンズ アルデ
ヒ ドの 吸 収 曲 線 と一 致 した.し か し定 量こ
法 で 用 い られて
い るpH10緩 衝 液 お よび3%フ ェ リシ ア ン化 カ リウ
ム溶 液 を 用 い た 場合,そ の 影 響 は ほ とん ど無 視 で き るも
の で あ る。

Fig. 3 Relation between reaction time and tem-

perature to absorbance

TableIに 示 す とお り5∼10%の 間 で ほ とん ど 除 去 す

る こ とが で きた ・ 実 際 に製 剤 に つ い て 行 な う と,賦 型 剤

そ の 他 の 影 響 のた めか20%で な け れ ば 妨 害 物 質 を除 去
で きな い もの も あ る た め,こ こで は20%塩 酸 を用 い る
Fig. 4 Relation between concentration of K3Fe-
こ と と 新た.た だ し適 当 な前 処 理 を行 な う場 合 には,さ (CN)6 solution and pH for ephedrine
らに低 濃 度 の 塩 酸 を用 い て も よ い と考 え る。 hydrochloride

Table I Relation between concentration of hy-

drochloric acid and basic obstructive
substance on determination [Recovery 2・4・2 EP に対 す る反 応 温 度 の 影 響EP溶 液(300

(%) } μ9/ml)を 調 製 し,そ の2mlを と り,反 応 温度 を15∼

400Cに 変 え るほ か は 定 量 法 に 従 って操 作 して得 た 吸光

度 の 変 化 をFig.5に 示 した.そ の結 果15,200Cで は吸

光 度 は ゼ ロを示 し,定 量 法 に用 い られ て い る温 度250c
で は 吸 光 度 が0・008で あ った.さ らに30,40QCと 温

度 が 高 く な る に した が って か な りの 影 響 が み られ た.し
た が ってEPを 共 存 させ た 場 合 に は,反 応温 度 を200c
にす れ ば影 響 が さ らに少 な くな る こ とが わ か る.

2.4  EP の影響

2・4。1  EP に 対 す るpHと フ エ リシ ア ン化 力 リ ウム

溶 液 の 濃 度 の 関 係EP溶 液(300μg/ml)を 調 製 し,
5個 の 遠 沈 管 に 各2mlず つ を と り,こ れ に2∼10%の

濃 度 の フ ェ リ シ ア ン 化 カ リ ウ ム 溶 液 各2mlお よ び0.05

M炭 酸 ナ ト リ ウ ム 溶 液 と0・052Mホ ウ酸 ナ ト リウ ム溶 液
Fig. 5 Effect of temperature for ephedrine
でpH9.25∼10.75に,ま た0.05Mホ ウ酸 ナ ト リウ ム hydrochloride

溶 液 と0・05N水 酸 化 ナ ト リ ウ ム 溶 液 でpHl1.0∼125

に 調 節 し た 緩 衝 液3mlず つ を 加 え,他 は定量法に従 っ 2・4・3 EP 共 存 時 に お け るMEPの 定量結果 標

て 操 作 し た と こ ろ,Fig.4に 示 す 結 果 を 得 た.こ の結果 準 液(60μg/ml)2ml中 にEPを1∼10倍 量 共存 させ

か ら緩 衝 液 の ア ル カ リ性 が 強 く な り,さ らに フ ェ リシ ア て,そ の 影 響 を 定 量法 お よび 反応 温 度 を20。cに 変 え た
ン 化 カ リ ウ ム 溶 液 の 濃 度 が 濃 く な る に し た が っ てEPの 場 合 の ご つ の 方 法 に よ って 調 べ た と ころ,TableIIに
 613
報 文 海 東,相 楽:製 剤 中 のdl-塩 酸 メ チ ル エ フ ェ ドリ ンの 吸 光 光 度 定 量 法

示 す とお り 定 量 法 で はEPが3倍 量,ま た 反 応 温度 が Table III Effect of various compounds

on determination
20。Cの 場 合 にお い て は10倍 量 ま で共 存 しで もほ とん

どそ の影 響 が なか った.し た が ってEPを 共存 させた場

合 は,反 応 温 度 を20℃ に して定 量 を行 な え ば よい ・

Table II Effect of ephedrine hydrochloride

on determination

2・5 製 剤 へ の 応 用
2・5。1 妨 害物 質TableI以 外 の30種 類の物質を
MEPの5倍 量ず つ混 合 し定 量 を行 な った.TableI II

に示 した とお り多 くの成 分 は 影 響 しな い が,ア セ トアニ

リ ド,ア セ トア ミノ フ ェン,フ ェナ セ チ ン,エ トキ シベ
ン ズ ア ミ ド,ア ス ピ リン,'ア ス ピ リン アル ミニ ウ ムな ど
が 正 の妨 害 を示 す・ ス ル ピ リンは5倍 量 で は妨 害 しな い
が,大 量 に 配合 す る と若 千 負 に 妨 害 を与 え る.
2・5・2 製 剤 中の 定 量TableIVに 示 した 処 方A, Table IV Recovery of dl-methylephedrine hydro-
chloride in synthetic preparations
B, Cの 製剤 に つい て 以 下 に 示 す 方 法 に よ って 定 量 を行

な った と ころ,TablcIVに 示 す とお りの 良 好 な 結 果 を

得 た.
処 方Aの 定 量 法:こ の処 方 に は妨 害 成 分 が 配 合 され て
い な い ので 前 処 理 を行 な う必 要 は ない 。 まず,試 料 を微

粉末 として,MEP6mg相 当 量 を 精 密 に 量 り100mlの
メス フ ラス コに 入 れ,水50mlを 加 えて10分 間 振 り混

ぜ た の ち,水 を加 え て正 確 に100mlと し,こ れ を試 料

溶 液 とす る.以 下 は定 量法 に従 って 定 量す る.
処 方Bお よびCの 定 量法:処 方 中 さ き に記 した妨 害 物
質 を共存 す る場 合 は,弱 酸性 イ オ ン交 換 樹 脂 ア ン バ ー ラ
イ トCG50[NH4型]を 通 し,こ れ らを 徐 い た の ち定

量 を行 なわ な けれ ば な らな い.す な わ ち処 方Bお よびC

の 場 合 は,試 料 を微 粉 末 と し,MEP15mg相 当 量 を精

密 に量 り,共 せ ん遠 沈 管 に入 れ,水20mlを 加 えて よく
振 り混 ぜ た の ち,遠 心 分 離 す る.残 留 物 は さ らに水20
mlず つ で3回 抽 出 し,全 抽 出液 を 合 わせ100mlの メ
ス フ ラス コに入 れ,水 を加 え て正 確 に100mlと す る。

この液40mlを 正 確 に量 り,流 速1分 間2∼3mlで あ

 614 JAPAN ANALYST Vol. 20 (1971)

らか じ め用 意 した 弱 酸 性 イ オ ン交 換 樹 脂 ア ン バ ー ラ イ ト 6) L. Chafetz : J. Pharm. Sci., 52, 1193 (1963).

CG50[NH4型]カ ラ ム を通 し,さ らに水150mlを 7) J. E. Wallace : Anal. Chem., 39, 531 (1967).
8) 日 本 公 定 書 協 会 編:“ 解 熱 鎮 痛 剤 試 験 法 ”, p.46
通 過 させ た の ち,0.1N塩 酸90mlを 用 い て溶 出す る. ( 1967).
こ の液 に2N水 酸化 ナ ト リウ ム液 を加 え てpH10に ☆
調 節 し,さ らに水 を 加 えて 正 確 に100mlと し,試 料 溶 Spectrophotometric determination of dl-me-
液 とす る.以 下 は 定 量 法 に 従 って 定 量 す る. thylephedrine-HC1 in pharmaceutical prepara-
tions. Tsunetoshi KAITO and Kazuhiko SAGARA

3  ま と め (Research Laboratory, Taisho Pharmaceutical Co.,

Ltd., Toshima-ku, Tokyo)
An ultraviolet spectrophotometric method has been
この 定 量 法 に20%塩 酸 を用 い た理 由 は 塩 基 性 妨 害 成
proposed for the determination of cll-methylephedrine-
分 の うち の い ず れ か が 解 熱 鎮 痛 剤 中 に 含 ま れ る可 能 性 が HC1 (MEP) in pharmaceutical preparations. MEP
is quantitatively oxidized with K3Fe (CN)6 in an
あ るた め で あ り,こ の操 作 に よ りほ とん どの 塩 基 性 物 質
alkaline solution to benzaldehyde having an absorp-
は 除 か れ る.本 定 量 法 は解 熱 鎮痛 剤 試 験 法 に採 用 され て tion maximum at 241 nm. The oxidation product
い る プ ロ ム ク レ ゾ ー ル グ リー ン に よ る比 色 法 と比 較 した represents an increase in sensitivity of approximately
68 fold over the absorbance obtained by the ultraviolet
場 合,鋭 敏 度 は ほ ぼ 同 じで あ る が,Table IVに 示 した determination of MEP.
よ う にば らつ き が 少 な く,ま た 水 蒸 気 蒸 留 の 必要 も な In this method, MEP is determined without an
influence of cphedrine-HCl 3times against it at 25℃
い.た だTableIIIに 示 した 妨 害 物 質 を含 む場 合 は,
and 10 times at 20•Ž. The analytical procedure is
上 記 試 験 法 と同 じ く弱 酸 性 イ オ ン交 換 樹 脂 ア ン バ ー ライ as follows.
Transfer 2 ml of the test solution containing 120
トCG50[NH4型]を 用 い る必 要 が あ るが,マ レイ ン
mg of MEP into a centrifuge tube. Add 2 ml of
酸 ク ロル フ ェニ ラ ミンな ど の分 離 は不 要 で0.IN塩 酸を 3% K3Fe (GN)6 solution and 3 ml of pH 10 buffer

用 い て溶 出 す れ ば よい な ど,か な り簡 略化 され て い る も solution (0.05M Na2CO3-0.05M Na2B407) , and stand

for 60 minutes at 25•Ž. Add 1 ml of 20% HC1 and

の と考 え る.さ ら に反 応 温 度 を20℃ にす ることによ り
20 ml of n-hexane and shake for 1 minute. Separate
類 似 化 合 物 で あ るEPが10倍 量共 存 して も定 量 可 能 で the n-hexane layer. Determine the absorbance of

the n-hexane extract at 241 nm (AT) against the

あ る利 点 が あ る.
reagent blank. At the same time, determine the
終 わ りに,本 報 の こ校 閲 な らび に ご指 導 を賜 わ った 昭 absorbance of the standard solution (As) . Calculate
和 大学辻 章 夫 教 授,本 研 究 の 発 表 を許 可 さ れ た大 正 製 the amount of MEP by AT /As. The influences of

薬 株 式 会 社 上 原 昭 二 常務,終 始 激 励 い ただ い た 井 川 俊 一 other compounds are examined, among which ace-

常 務,田 中一 郎研 究 部 長 に 深 謝 の意 を表 しま す. taminophen, acetanilide, phenacetin, ethoxybenzamide,

aspirin, sulpyrin etc. interfered considerably. In

(1966年10月,第23回 薬 学 会 に お い て 発 表)
order to remove these ingredients, the test solution is

文 献 prepared as follows.
Transfer 40 ml of the sample solution containing

1) 服 部 哲 靖,西 海 里:薬 剤 学, 21, 9 (1961). 6 mg MEP into a column of cation exchange resin

2) 堀 岡 正 義:薬 誌, 77, 200 (1957). (Amberlite CG50 NH4 type, 5cm X 1 cm i. d.) and
3) 小 野 真 一,尾 西 良 一,川 村 邦 夫,小 田 容 子:日 本 pour 150 ml of water. Then elute MEP with 90 ml

公 定 書 協 会 会 報, 22, 37 (1968). of 0 . 1N HC1 and after adjusting pH to 10 with

4) 策7改 正 日本 薬 局 方. 2N NaOH solution, make up exactly to 100 ml with

5) 緒 方  章,刈 米 達 夫:“ 第7改 正 日本 薬 局 方 第 一 water.

部 解 説 書 ”, C-354(広 川 書 店). (Received Nov. 26, 1970)