2.

2 Farmasötik İlaç Maddelerinin Ve Ürünlerin Safsızlık Profili

2.2.1 Giriş

Bulk ilaç endüstrisi, belirli kalitede aktif farmasötik bileşenlerin (API) kaynağı olduğu için
tüm ilaç endüstrilerinin temelini oluşturur. Son birkaç on yılda piyasaya giren ilaçların
kalitesine çok dikkat edilmektedir. Hem bulk ilaç endüstrileri hem de ilaç endüstrileri için en
büyük zorluk kaliteli ürünler üretmektir. Her bir endüstrinin çıktı kalitesini ve saflığını
korumak için güçlü kalite kontrol kontrolleri yapmak gerekir. Aktif farmasötik bileşenin
saflığı, hammaddeler, bunların üretim yöntemleri ve kristalizasyon ve saflaştırma işleminin
türü gibi çeşitli faktörlere bağlıdır. Saflık kavramı zamanla değişir ve analitik kimyadaki
gelişmelerden ayrılmazdır. Farmakopeler sadece saflığı belirtmekle kalmaz, aynı zamanda
çeşitli safsızlık seviyelerinde çok katı olabilen sınırlar koyar. Modern ayırma yöntemleri
günümüzde bilimsel araştırmalarda baskın bir rol oynamaktadır, çünkü bu yöntemler aynı
anda bileşenleri ayırır ve nicelendirir, böylece safsızlıkların ayrılmasını ve
karakterizasyonunu kolaylaştırır.

Safsızlık, saf olmayan ya da başka bir şeyi saf olmayan hale getiren bir şeydir. Saf olmayan
bir madde, yabancı veya genellikle düşük bir madde ile karıştırılmış veya emprenye edilmiş
ilgili bir madde olarak tanımlanabilir. Aktif farmasötik bileşenlerin (API) üretimi sırasında,
safsızlıkların üretimi için birçok fırsat ortaya çıkabilir. Safsızlık, orijinal ilaç maddesi ile bir
arada bulunan herhangi bir madde, herhangi bir kimyasal etkileşime bağlı olarak veya yan
reaksiyondan elde edilen ürünlerle oluşan reaksiyon materyali veya veya ara ürünler olarak
tanımlanabilir. İlacın güvenliği sadece API'nin toksikolojik özelliklerine değil, içerdiği
safsızlıklara da bağlıdır. Bu nedenle, API safsızlık profillerinin doğru değerlendirilmesi,
farmasötik analizdeki en önemli faaliyet alanlarından biridir. Bu arada, bir ilaç adayının
geçtiği çeşitli geliştirme aşamalarındaki sentetik reaksiyon adımları, reaksiyon koşulları,
saflaştırma işlemleri, vb. gibi sentetik proseslerdeki e ve işlem ölçeği artırma aşamasındaki
herhangi bir değişiklik kirlilik profilinde değişikliklere ve güvenlik ile ilgili sorulara neden
omaktadır. Bu nedenle, safsızlık profilinin belirlenmesi sık sık zaman alan ve emek yoğun bir
iş haline gelmektedir. [33] 

Farmasötik dünyasında, bir safsızlık, ilaç maddesinin veya bileşenlerinin yanı sıra, ilaç etken
maddelerinde (API) kalan sentez veya istenmeyen kimyasallardan kaynaklanan diğer organik
materyaller olarak kabul edilir. Farmasötik safsızlıklar, ilaçların formülasyonu sırasında kalan
veya üretilen istenmeyen kimyasallardır. Farmasötik ilaçlardaki safsızlıkların varlığı ve
miktarı, kalite ve güvenlik üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir, artan endüstri verimliliği
için sürekli baskı ile, sistematik ve kapsamlı bir ilaç safsızlığı profilleme stratejisine acil
ihtiyaç vardır. İlacın içinde bulunan safsızlıklar, ilaç ürününün kalitesini olumsuz
etkilemektedir. Başlangıç malzemeleri, ara ürünler, sondan bir önceki bulk ilaçlarda ve
farmasötik formülasyonlarda çeşitli katışkı türlerinin yanı sıra artık çözücülerin saptanmasına,
tanımlanmasına ve ölçülmesine yardımcı olur. Bulk ilaçların ve farmasötik formülasyonların
kalitesini ve stabilitesini karakterize etmenin en iyi yoludur. [34] 

Safsızlıklar ve insan sağlığı üzerindeki kötü etkileri hakkında bilgi veren yeni ilaç
moleküllerinin geliştirilmesine yönelik itici güç büyük önem kazanmıştır. Son on yıl, ilaç
endüstrisi ilaçların safsızlık profiline büyük ilgi duymuştur. Bu istenmeyen kimyasalların,
önemsiz miktarlarda bile meydana gelmesi, farmasötik ürünlerin etkinliğini ve güvenliğini
etkileyebilir. Birçok Farmakope Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP), Hint
Farmakopesi (IP) ve İngiliz Farmakopesi (BP), Avrupa Farmakopesi (AB) [4], kabul edilebilir
minimum ilaç kalitesini sağlamak için aktif maddeler ve ilaç ürünleri için monograflar
tasarlamıştır. [34] 

Safsızlık profili, iki veya daha fazla numune arasında, ilaç dağıtım paterninin belirlenmesi,
ilaç örneği kaynağının tanımlanması ve aynı zamanda ilaç üretimi sürecinin izlenmesi için
spesifik bir bağ oluşturulması amaçlarıyla incelenir. Safsızlıkların sağlık üzerindeki etkileri,
potansiyel teratojenik, mutajenik veya kanserojen etkileri nedeniyle önemli
olabilir. Farmasötik safsızlıkların tanımlanması, ilaç maddelerinde veya belirli bir eşiğin
üzerindeki ilaç ürünlerinde bulunan bilinmeyen farmasötik safsızlığın kimyasal yapısını tam
olarak ortaya çıkarmak olan ilaç geliştirme sürecinde kritik bir analitik aktivitedir. [34]

 İlaç üreticilerinin ve ilaç tescil yetkililerinin dökme ilaç maddelerinin safsızlık profillerine
artan ilgisinin ana nedenleri şunlardır [37]:

a) Mevcut bir ilacın üretilmesi için yeni bir ilacın veya yeni bir teknolojinin geliştirilmesi
sırasında, safsızlıkların yapılarını bilmek önemlidir: sentetik organik kimyagerler, bu tür bir
reaksiyondaki reaksiyon koşullarını sıklıkla değiştirebilirler. safsızlık oluşumundan
kaçınılması veya miktarının kabul edilebilir bir seviyeye düşürülmesi.

b) Safsızlıklar için önerilen yapılara sahip olduklarından, sentezlenebilirler ve böylece daha

önce spektroskopik yöntemlerle belirlenen yapıları için nihai kanıt sağlayabilirler.

c) Sentezlenen malzeme, safsızlığın kantitatif olarak belirlenmesi ve bu yöntemin her partinin

kalite kontrol testinin bir parçası olarak kullanılması için seçici bir yöntemin geliştirilmesi
sırasında bir 'safsızlık standardı' olarak kullanılabilir.
d) Büyük safsızlıklar durumunda, sentezlenen veya izole edilen materyal toksikolojik
çalışmalara tabi tutulabilir, böylece ilaç tedavisinin güvenliğine büyük katkıda bulunur.

e) İlaç yetkilileri için, bir ilaç maddesinin safsızlık profili, dökme ilaç maddesinin üretim
sürecinin seviyesini ve sabitliğini göstermek için iyi bir parmak izidir.

2.2.2 Safsızlık ve safsızlık profilinin tanımlanması

Safsızlık profili, organik ve inorganik safsızlıkların yanı sıra dökme ilaçlarda ve farmasötik
formülasyonlarda artık çözücülerin saptanması, tanımlanması / yapılarının aydınlatılması ve
nicel olarak belirlenmesi amacıyla bir grup analitik faaliyettir. ICH, ABD FDA, Kanada İlaç
ve Sağlık Ajansı gibi çeşitli düzenleyici otoriteler, Aktif İlaç Hammaddelerinde (API'ler)
saflık gereklilikleri ve safsızlıkların tanımlanması üzerinde durmaktadır. Yeni ilaç
maddelerinde bulunan tanımlanmış ve tanımlanmamış safsızlıkların tanımlanması,
karakterizasyonu ve miktarının belirlenmesi safsızlık profili olarak bilinir [8]. Dökme ve
bitmiş ilaçta bulunan safsızlıkları açıklar. İlaç maddesi (API) veya farmasötik formülasyonda
bulunan safsızlıkların tanımlanmasına ve miktarının belirlenmesine yardımcı olur. İlaç
maddesinde (API) ve farmasötik formülasyonlarda bulunan olası maksimum safsızlık tiplerini
verir]. Uluslararası Uyumlaştırma Konferansı (ICH) yönergelerine göre "Safsızlıklar, üründe
Aktif Farmasötik Bileşenlerin (API) kendisi veya bunu üretmek için kullanılan yardımcı
madde olmayan maddelerdir".

IP, safsızlığı, farmasötik kullanım için herhangi bir ilaç maddesi veya maddeyi tanımlayan
kimyasal madde olmayan bir ilaç ürünü veya bir ilaç ürünü durumunda üründe bir yardımcı
madde olmayan bileşen olarak tanımlamıştır.

Kısacası, safsızlık, başlangıç ilacı veya ara maddeler gibi orijinal ilaçla birlikte mevcut olan
herhangi bir madde olarak tanımlanabilir; herhangi bir yan reaksiyon nedeniyle. Safsızlık
profili, ilaç ürünlerinde bulunan tanımlanmış ve tanımlanmamış safsızlıkların bir tanımıdır. 

İngiliz Farmakopesi (BP) ve Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP) gibi farklı
farmakopeler, API'lerde veya formülasyonlarda bulunan izin verilen katışkı seviyelerine
yavaş yavaş sınırlar ekler. Kanada İlaç ve Sağlık Ajansı, Aktif İlaç Bileşenlerindeki (API'ler)
saflık gereklilikleri ve safsızlıkların tanımlanması üzerinde durmaktadır. Safsızlıkların
niteliği, bireysel bir safsızlığın biyolojik güvenliğini kuran verileri elde etme ve
değerlendirme, böylece farmasötik araştırmalarda ilaçların safsızlık profillerinin ihtiyacını ve
kapsamını ortaya çıkarma sürecidir. Uluslararası Uyum Konferansı (ICH), yeni ilaç
maddeleri, ürünler ve kalıntı çözücülerdeki safsızlıklar hakkında kılavuzlar yayınlamıştır.
2.2.3 Farmakope ve Düzenleyici Yönergeler ve Safsızlık profili oluşturma durumu

Hem düzenleyici makamlardan hem de ilaç şirketlerinden gelen API referans standartlarıyla
birlikte safsızlık referans standartlarına önemli bir talep vardır. İlaç maddeleri ve ilgili
malzemelerdeki safsızlık profillerinin tahmini, çağdaş farmasötik analizinde en önemli
faaliyet alanlarından biri haline gelmiştir. Genel olarak, tüm safszıklıklar (% 0.1), aşağıdaki
nedenlerden dolayı (1-3), belirtilmelidir. [36] 
 Bu şekilde elde edilen bilgilere dayanarak, sentetik organik kimyagerler genellikle söz
konusu safsızlığın oluşumundan kaçınabilir veya miktarını tolere edilebilir bir seviyeye
indirmek için bir saflaştırma yöntemi geliştirebilir.
 Kaçınılmaz bir safsızlığın yapısal tanımlanmasının ardından, aşağıdakiler için yeterli bir
miktar sağlamak üzere sentezlenebilir:
1. Yapısının nihai kanıtı;
2. “Safsızlık standardı” olarak kullanımı;
3. Toksikolojik çalışmalarda kullanımı.

Çeşitli Farmakopelerin önceki baskılarında, ilaçların safsızlık profilinde stres testleri sonucu
elde edilen degredasyon safızlıklarının çoğu verilmemiştir. Ancak, son baskıları birçok ilacın
safsızlık profilinlerinde bunlara vurgu yaptı ve bunlar monografiye dahil edildi. IP, BP ve
USP, API ve formülasyonlarda bulunan safsızlıkların izin verilen seviyelerine sınırlama
getirmiştir. ICH kılavuzu, Beşeri İlaçların ruhsatlandırılması için teknik gereklilik yeni ilaç
maddeleri ve ürünlerdeki safsızlıkları, kalıntı çözücüleri ve mikrobiyal safsızlıkları analiz
etmek için geliştirilen analitik yöntemlerin validasyonuları için kılavuzlar yayınlamıştır [36].

USP'ye göre, saflık kavramları zamanla değişir ve analitik kimyadaki gelişmelerden

ayrılmaz. Daha önce saf olarak kabul edilen bir aktik madde inorganik, organik, izomerik
veya safsızlık olarak kabul edilen polimerik bileşenler gibi yeni saflık ve safsızlık terimlerine
yeniden tanımlanabilir. Bitmiş preparatlardaki saflık veya safsızlık ölçümleri, farmakopel
standart set edilmesinde bir zorluk oluşturur. Bir preparatın zaman içinde bozunması
söz konusu olduğunda, stabilite göstergeli analitik yöntemler aynı zamanda saflığı da gösterir
[36].

BP'ye göre, safsızlıklar 'Kalifiye safsızlıklar' ve diğer 'Saptanabilir safsızlıklar' başlıklı iki alt
türe ayrılır. Kalifiye safsızlıklar, daha önce yetkili makam tarafından nitelikli  olarak kabul
edilen doğal metabolitler olarak ortaya çıkan safsızlıklardır.Diğer 'Saptanabilir Safsızlıklar',
monografın hazırlanması sırasında herhangi bir madde örneğinde tespit edilmemiş veya %
0.1'in altında miktarlarda ortaya çıkan, ancak testlerle sınırlı olduğu gösterilmiş olan
safsızlıklardır. Farmakopenin monografları, kullanıcılar için ilaç maddelerinin ve ilaç
ürünlerinin kabul edilebilir minimum kalitesini sağlamak üzere tasarlanmıştır. Kirlilikleri ve
bozunma ürünlerini sınırlamak için birçok monografta ilgili maddeler için testler
araştırılmıştır. Her ne kadar, Farmakopenin ana hedeflerinden biri aktif madelerin
tanımlanmasını, gücünü, saflığını ve kalitesini garanti etmek olsa da, her monografta her
kirlilik veya kirletici veya hatta mevcut olabilecek tüm yabancı maddeler için bir test eklemek
mümkün değildir [36].

Safsızlıklar ile ilgili çeşitli düzenleyici yönergeler aşağıdaki gibidir:

1. ICH kılavuzları “yeni ilac maddelerinin ve ürünlerinin stabilite testi "- Q1A

2. ICH kılavuzları “Yeni İlaç Maddelerindeki Safsızlıklar” - Q3A

3. ICH kılavuzları “Yeni İlaç Ürünlerindeki Safsızlıklar” - Q3B

4. ICH yönergeleri “Safsızlıklar: Kalıntı çözücüler için yönergeler ”- Q3C

5. ABD-FDA yönergeleri “NDA'lar - Yeni İlaç Maddelerindeki Safsızlıklar”

6. ABD-FDA yönergeleri “ANDA'lar - Yeni İlaç Maddelerindeki Safsızlıklar”

7. Reçeteli İlaçlar için Avustralya düzenleyici yönergelei Terapötik Yönetim Otoritesi (TGA),
Avustralya

ICH Q3A ilaç maddelerini ve Q3B ilaç ürünlerini kapsar. Bu kılavuz ilkelei, önerilen
depolama koşullarında stabilite çalışmalarında görülen safsızlık ve bozunma ürünlerinin
araştırılmasında hangi araştırmaların ve belgelerin yapılması gerektiğini tanımlar. Genel
olarak, yeni ilaç ürünlerindeki safsızlıklar hakkındaki ICH kılavuzlarına göre, potansiyel
safsızlıkların alışılmadık derecede güçlü veya toksik olması beklenmedikçe,% 0.1 seviyesinin
altındaki safsızlıkların tanımlanması gerekli değildir. Her durumda, safsızlıklar
raporlandırılmalıdır. Bir safsızlığın önerilen spesifikasyon seviyesini nitelemek için veriler
mevcut değilse, bu tür verilerin elde edilmesi için çalışmalara ihtiyaç duyulabilir (aşağıda
verilen olağan nitelendirme eşiği sınırları aşıldığında). ICH'ye göre,alınan maksimum günlük
doza göre raporlandrma eşiği aşağıdaki gibi kabul edilir:

- Maksimum günlük doz ≤ 2g / gün ise % 0.1 veya günde maksimum 1 mg alım için
(hangisi daha düşükse)
 - Maksimum günlük doz ≥ 2g / gün ise % 0.05

2.2.4 Safsızlık profiline ilişkin güncel bakış:

Bir safsızlık profili hakkındaki konunun büyüklüğü, konuyla ilgili olarak yayınlanan inceleme
makalelerinden ve araştırma belgelerinden öğrenilebilir; bilgilerimize göre, farklı yazarlar
tarafından çeşitli safsızlık profiliyle ilgili 29'dan fazla inceleme makalesi yayınlanmıştır.
Literatür çalışmaları, aktif farmasötik bileşenlerin safsızlık profiline ilişkin farklı dergilerde
yayınlanan birçok derleme makalesi Tablo 2.2 'de verilmiştir.

Tablo 2.2 Safsızlık Profiline İlişkin Güncel Bakış

Yazar Konu Yıl Referans

S. Singh and M. İlaçların stabilitesi için rehber 2000 11
Bakshi
J. Roy Safsızlık kaynakları 2002 12
S.Klick et.al Stres testi kılavuzları 2005 13
S.Ahuja Terminoloji, kaynaklar ve izolasyon, 2006 14
karakterizasyon tekniği
N. Rahman Safsızlık profillerinin farmasötiklerde 2006 15
önemi
D. Jacobson-Kram Safsızlık toksisitesi ile ilgili düzenleyici 2006 16
and T. Mc-Govern rehber
J. Kovaleski Jenerik ilaçlarda safsızlıklar 2006 17
S. B. Sanjay et al Çeşitli türlere, kaynaklara ve 2007 18
analitik yöntem geliştirme ve
karakterizasyonuna odaklanma
S. Poornachary Safsızlıkların kristal büyüme sürecine 2007 19
etkisi
A.Worth et.al Genotoksisite ve kanserojenlik için 2010 20
kullanılan yazılım
H. Hatakka Kristalleşme ile ilgili safsızlıklar 2010 21
D. I. Robinson API'de genotoksik safsızlığının kontrolü 2010 22
A.Ayre ICH tarafından verilen kılavuzlara ve 2011 23
safsızlık kaynaklarına odaklanma
S.S. Pawale et.al Safsızlıkların niteliğine odaklanma 2012 24
R. Singh Geliştirme sırasında üretilen 2012 25
safsızlıkların oluşum mekanizması
ve karakterizasyonu
Shah et al. Farmasötik analizde safızlık 2012 39
 profili için son yaklaşımlar
M.Blessy et.al İlacın stres testi ve stabilitesi 2013 26
S. Santosh Kumar Safsızlığın tanımlanması için analitik 2014 27
yönteme dikkat
P. Vyankatasan and K. Safsızlık profili oluşturma için analitik 2014 28
Valliappan yöntem geliştirme ile ilgili hususlar
P.Venkatesan et al Safsızlık Profili: Teori ve pratik 2014 37
M.Blessy et.al İlaçlar için zorla bozundurma ve stabilite 2017 40
göstergeli metotlar geşiltirme: Bir
derleme
Çin'de antibiyotikler için mevcut
Y. Jiang et al safsızlık kontrol probleminin üstesinden 2015 29
gelmek için uluslararası uyum
konferansı (ICH) ve üye devletlerinin
kılavuzları ve stratejileri
S. Zaza et al Farmasötik ürünlerde 2015 30
safsızlıkların ayrılması ve
belirlenmesinde son gelişmeler
V. Desfontaine et al Farmasötik analizde süperkritik sıvı 2015 31
kromatografisi
P.P. Patil and V.S. Kalite kılavuzları ve safszılık 2015 32
Kasture profillerinin farmasötikler için
uygulamaları
B. Ramachandra Modern Analitik Teknikler Kullanılarak 2016 33
Safsızlık Profilleme Yöntemlerinin
Geliştirilmesi
A. C. Kogawa, Safsızlıklar ve stres çalışmaları: Bir 2016 34
R.N. Herida, Gözden Geçirme
S.V. Saibaba, Farmasötik Safsızlıklar ve 2016 35
M.Satish Kumar eta al Karakterizasyonu: Bir Gözden Geçirme
Aktif İlaç Hammaddeleri ve Bitmiş ilaç 36
R. Solank et al ürünlerinin safsızlık profili yakın 2017
zamanda gözden geçirilmiş ve farklı
ülkelerin yasal gerekliliklerinin
karşılaştırılmasına önem verilmiştir.
R. Kiran et al İlaçların Güvenlik ve Etkinlik Konusunda 2017 38
Safsızlık Profili: Teori ve Uygulama

2.2.5 Safsızlıkların Kaynağı ve Sınıflandırılması [37-42]

2.2.5.1 Safsızlıkların Farmakope Ve ICH Yönergelerine Gör Sınıflandırılması

İlaçlar, aynı zamanda ilaç maddesi (DS) olarak da adlandırılan aktif farmasötik bileşenler
(API) ve bitmiş farmasötik ürün (FPP) olarak da adlandırılan ilaç ürünü (DP) olmak üzere iki
ana alana bölünebilir. Farmasötiklerin safsızlıkları farmakopi ve ICH yönergelerine göre
aşağıdaki gibi sınıflandırılmaktadır [38].

2.2.5.1.1 Genel adlar

-Yan ürünler: Reaksiyonda gerekli ara bileşikler dışında üretilen bileşiklerdir. Aşırı reaksiyon,
eksik reaksiyon ve yeniden düzenleme, başlangıç materyalleri veya kimyasal reaktifler veya
katalizörler içeren ara ürünler arasındaki istenmeyen reaksiyonlar gibi çeşitli yan reaksiyonlar
yoluyla ortaya çıkabilirler.

-Bozunma ürünleri: Etken maddenin ayrışması sonucu veya ilgili diğer materyalin etkisiyle
oluşurlar.

-Etkileşim ürünleri: Bu ürünler, ilgili çeşitli kimyasallar arasında kasıtlı veya kasıtsız olarak
etkileşim sonucu oluşmaktadır.

-Ara ürünler: İstenen materyalin sentezi sırasında veya sentez yolunun bir parçası olarak
üretilen bileşiklerdir.

-Sondan bir önceki ara ürünler: İstenen son bileşiğin üretilmesinden önce sentez zincirindeki
son bileşiktir.

-İlgili bileşikler: Bunlar kimyasal olarak ilaç maddesine benzer ve hatta biyolojik aktiviteye
sahip olabilir.

-Dönüşüm ürünleri: Bunlar reaksiyonda oluşabilecek teorikleşmiş ve teorileşmemiş ürünlerle

ilgilidir. Bu reaksiyon ürünleri hakkında daha fazla bilgi sahibi olunmasının dışında bunlar
yan ürünlere benzerler.

2.2.5.1.2 Amerika Birleşik Devletleri Farmdaakopesi (USP)

USP'ye göre safsızlıklar üçe ayrılır

- Resmi Makalelerdeki Safsızlıklar

- Sıradan Safsızlıklar
 - Organik Uçucu Safsızlıklar

2.2.5.1.3 ICH Terminolojisi

ICH kılavuzlarına göre, kimyasal sentez ile üretilen ilaç maddesindeki safsızlıklar geniş bir
şekilde aşağıdaki üç kategoride sınıflandırılabilir;

- Organik Safsızlıklar (Proses ve İlaçla ilgili)

- İnorganik Safsızlıklar (Reaktif, ligandlar, katalizörler)

- Artık Çözücüler (Uçucu çözücüler)

İlaç maddesinin üretimi ve / veya depolanması sırasında ortaya çıkabilecek organik

safsızlıklar tanımlanabilir veya tanımlanamaz, uçucu veya uçucu olmayabilir ve şunları
içerebilir;

- Başlangıç malzemeleri veya ara ürünler

- Yan ürünler

- Bozunma ürünleri

Herhangi bir farmasötik ilaç ve dozaj formunda, ürünün başlangıcından bitirilmesine kadar
çeşitli safsızlık kaynakları vardır. İlaçlarda 2 tip safsızlık vardır: (1) Aktif farmasötik
bileşenlerle ilişkili safsızlıklar ve (2) Oluşan safsızlıklar: formülasyon sırasında veya
yaşlanma ile veya formüle edilmiş formlarla ilişkili olan safsızlıklar. Genel olarak, farmasötik
maddelerde bulunabilecek çeşitli kirlilik türleri aşağıdaki kaynaklardan gelebilir: [39].

- Kullanılan hammaddeler.

- Benimsenen üretim yöntemi.

- Ürünün kararsızlığı nedeni ile

- Atmosferik kirleticilerden

Safsızlıklar, çok adımlı sentez boyunca yer alan her adımda uygun bir özen gösterilmedikçe
API'lerde bulunur; örneğin parasetamol bulk ürününde, bir üretici için bir başlangıç
malzemesi olabilen veya diğerleri için bir ara madde olabilen paminofenol için, bir limit testi
vardır.

Sentetik organik kimyada,% 100 verimle tek bir ürün elde etmek çok nadirdir; her zaman yan
ürün elde etme şansı vardır. Parasetamol bulk ürünü durumunda, diasetile parasetamol bir yan
ürün olarak oluşur. [63]

ŞEKİL 2.11 p-aminofenolden Parasetamol sentezi esnasıda diasetile parasetamol yan

ürününün oluşu

Safsızlıklar ayrıca bulk ilaçların üretimi sırasında nihai ürünün bozunmasıyla da oluşabilir.
Penisilin ve sefalosporinlerin bozunması, bozunma ürünlerinin iyi bilinen örnekleridir. C6 /
C7 yan zincirinde bir β-laktam halkasının yanı sıra bir amino grubunun varlığı,
bozunmalarında kritik bir rol oynar. Alıntılanabilecek başka bir örnek, ibuprofen (IBP) 'nin 2-
(4-formilfenil) propionik asit (FPPA), 2- (4-izobütilfenil) propionik asit (IBP), 2- (4-
metilfenil) propiyonik asit (MPPA), 2- (4-etilfenil) propiyonik asit (EPPA), 4
izobülasetofenon (4-IBAP), 2- (4-n-propilfenil) propiyonik asit (PPPA) ve 2- (4-n-butilfenil)
propionik asit (BPPA) iyi bilinen safsızlıklarıdır. [63]

2.2.5.2 Safsızlıkların Genel Olarak Sınıflandırılması

Safsızlıklar geniş bir şekilde dört türe ayrılabilir, bunlar; [40]

• Proses ile ilgili ilaç maddesi

• Proses ile ilgili ilaç ürünü
• İlaç maddesinin veya ilaç ürününün bozulması ve
• Bozunma ilaç ürün

Reaktif, ligandlar,
katalizörler

Başlangıç
maddesi Yan ve orta ürünler
Organik safsızlık
temel alınarak
 ürünleri

Şekil 2.12 Organik safsızlığın sınıflandırılması

Reaktif, ligandlar,
katalizörler

İnorganik
tuzlar Ağır metaller yada
İnorganik safsızlık kalıntı çözücüler
temel alınarak

Diğer malzemeler:
filitre, kömür

Şekil 2.13 İnorganik safsızlığın sınıflandırılması

Organik ve
inorganik safsızlık

Kalıntı solvent
Enantiyomeriik
Tanımlama temel Safsızlık
alınarak

Poliformik Form

Şekil 2.14 Safsızlıkların sınıflandırılması

2.2.5.2.1 Organik Safsızlıklar [41]

Bu tür safsızlıklar imalat sırasında (ilaç maddesinin işlenmesi ve / veya depolanması
sırasında) ortaya çıkar. Bunlar aşağıdaki alt safsızlıkları içerir.

 Başlangıç Materyalleri veya Ara Safsızlıklar

Bu tür katışkılar, ilaç ürününün çok aşamalı sentezi sırasında her adımda uygun bir özen
gösterilmedikçe hemen hemen her API'de ortaya çıkar. Son ürünler her zaman çözücülerle
yıkanmasına rağmen, üreticiler safsızlıklar konusunda çok dikkatli olmadıkça, reaksiyona
girmemiş başlangıç malzemelerinin kalıntısına sahip olma şansı vardır.

 Yan ürünler

Sentetik organik kimyada, tam verimle tek bir uç ürün elde etmek çok nadirdir; her zaman
istenen son ürünle birlikte yan ürünlere sahip olma şansı vardır.

 Bozunma Ürünleri

Safsızlıklar ayrıca, dökme ilaçların üretimi sırasında son ürünün bozulmasıyla da oluşabilir.
Bu esas olarak formülasyonun yanlış depolanması nedeniyle oluşur.

Diğer Organik Safsızlık Türleri:

A. Sentezle İlgili Safsızlıklar

Sentetik işlem sırasında hammadde, çözücü, ara ürün, yan üründen üretilen yeni kimyasal
madde. Sentez işlemi sırasında, reaksiyonda yer alan herhangi bir maddede eser miktarda
veya önemli miktarda safsızlık varsa, sonuçta nihai ürün bir veya daha fazla istenmeyen
malzeme ile kontamine olur. Bu nedenle, senteze bağlı safsızlık, ortaya çıkabilecek safsızlık
seviyesini en aza indirmek için sentez işlemine dahil olan her adımda en üst düzeyde dikkat
gerektirir.

Kristalleşmeye bağlı safsızlık: Birçok ilaç kristalin katı halde bulunur ve polimorflar, solvatlar
veya hidratlar şeklinde çıkabilir. Kristalin oluşumunun geçerli nedeni, ilaç geliştirmenin
çeşitli aşamalarında stabilite ve kullanım kolaylığından kaynaklanmaktadır [75].
Kristalizasyon, ilaç endüstrisinde parçacık oluşumu için önemli bir teknolojik süreçtir ve buna
ek olarak, son dozaj formlarının stabilitesini ve ilaç salım özelliklerini tanımlamada önemli
bir rol oynar. Bu nedenle, FDA, ilacın raf ömrü boyunca kristal formların oranının analizi için
geliştirme ve onaylanmış yöntemler talep etmektedir.
Genellikle, metastabil polimorfik form, ilaç ürününün işlenmesi ve depolanması sırasında
sıcaklık, mekanik işlem ve nem nedeniyle yanlışlıkla üretilir. Örneğin Salmeterolksinafoatın,
iki kristalimsi polimorfik formda meydana geldiği bildirilmektedir; bunların, form I, ortam
koşulları altında Form II'den (metastabil polimorf) daha stabildir.

Stereokimya ile ilgili safsızlık: Stereokimya, bir molekülün üç boyutlu yönleridir; ilacın
biyolojik sistemdeki etkisi, ilaç molekülündeki atomların uzamsal düzenlemesine bağlıdır.
Stereokimya ile ilgili bileşikleri aramak başlıca büyüklüktür; yani, benzer kimyasal yapıya
sahip fakat farklı uzamsal oryantasyona sahip olan bileşikler; bu bileşikler API'lerde safsızlık
olarak kabul edilebilir. Kiral moleküllere genellikle enantiyomerler denir. Saf enantiyomer
olarak verilen kiral ilaç durumunda, antipod safsızlık olarak kabul edilir. Kiral ilacın tek
enantiyomerik formu, günümüzde daha iyi bir farmakolojik profil ve daha uygun bir advers
reaksiyon profili ile artan bir terapötik indeks sunabilen geliştirilmiş bir kimyasal madde
olarak kabul edilmektedir.

İki Talidomid izomeri vardır. Sedatif ve hipnotik etkiye sahip (R) - (+) Talidomid, diğer
taraftan (s) - (-) Talidomid, mutajenik aktivite gösterir. Bununla birlikte, levofloksasin (S-
izomerik form) ve ofloksasinin (R-izomerik form) farmakokinetik profili benzerdir ve bu
bağlamda tek izomerin avantajlarının eksikliğini gösterir. Piyasaya sürülen önemli tek izomer
ilaçları arasında levofloksasin (S ofloksasin), lavalbuterol (R-albuterol) ve esomeprazol (S
omeprazol) bulunur. İlacın aktif izomeri ve yapıları,

Tablo 2.3 Aktif İlaç İzomeri

İlaç Aktif İzomerin Yapısı Aktif İzomer

Thalidomid R-(+)-
Thalidomid

Esomeprazol S-Omeprazol

Levofloksasin S-Ofloksasin
 Lavalbüterol R-Albüterol

2.2.5.2.2 İnorganik Safsızlıklar [41]

İnorganik safsızlıklar ayrıca dökme ilaç formülasyonunda kullanılan imalat işlemlerinden elde
edilir. Normalde bilinirler ve tanımlanırlar.

a. Reaktif, Ligandlar ve Katalizörler: Bu safsızlıkların nadir görülme olasılığı vardır.. Bunlar

üretim sırasında usulüne uyulmazsa sorun yaratacaktır.

b. Ağır Metaller: Su genellikle asitleme veya asit hidrolizinin gerçekleştiği Ar, Cd, Cr, Na,
Mg, Mn, vb. Gibi ağır metallerin ana kaynağı olarak hareket eden farklı üretim işlemlerinde
kullanılır. Demineralize su ve cam astarlı reaktörler kullanılarak ağır metal safsızlıkları
kolayca önlenebilir.

Tablo 2.4 Metal Katalizör Kalıntılarının Güvenlik Endişeleri Temelinde Sınıflandırılması

Metal Sınıf I Sınıf II Sınıf III

Krom + - -
Bakır - + -
İridyum + - +
Demir - - +
Manganez - + -
Molibidyum + - -
Nikel + - -
Platinyum + - -
Rehubidyum + - -
Vanadyum + - -
Çinko - - +

Sınıf -1 (Önemli güvenlik endişesi olan metal)

Sınıf -2 (Düşük güvenlik endişesi olan metal)

Sınıf -3 (Minimum güvenlik endişesi olan metal)

c. Diğer Malzemeler (Filtre Yardımcıları, Kömür): Santrifüj torbaları gibi filtreler veya
filtreleme yardımcıları, dökme ilaç üretim tesislerinde rutin olarak kullanılır ve birçok
durumda, aynı zamanda bir safsızlık kaynağı olarak da işlev gören aktif karbon da kullanılır.
Bu nedenle kontaminasyonu önlemek için dökme ilaçlardaki liflerin ve siyah partiküllerin
düzenli olarak izlenmesi esastır.

2.2.5.2.3 Artık Çözücüler [41]

Artık çözücüler, imalat işlemi sırasında kullanılan organik veya inorganik sıvılardır. Bu
çözücüleri işleme işlemiyle tamamen çıkarmak çok zordur. Dökme ilaçların üretiminde
toksisiteye neden olduğu bilinen bazı solventlerden kaçınılmalıdır.

Artık çözücüler, insan sağlığı üzerindeki olası riskler temelinde üç türe ayrılır. Bunlar
genellikle Sınıf-1 (kaçınılması gereken çözücü), Sınıf-2 (ilaç maddesinde sınırlı olmalıdır)
ve Sınıf-3'tür (insanlar için daha az toksik ve düşük sağlık tehlikesi).

Tablo 2.5 Artık Solventler, Sınıfı Ve Sınırları

 İlaç Sınıf 1 Sınıf 2 Sınıf 3 Aktif İzomer
Asetik Asit - - + A*
Aseton - + + A*
Astonitril - + - 410
Anizol - - + A*
Benzen + - - 2
1-Bütanol - - + A*
2-Bütanol - - + A*
Bütil Asetat - - + A*
Ters-Bütilmetil Eter - - + A*
Karbon tetraklorid + - - 4
Klorobenzen - + - 360
Kloroform - + - 60
Kümen - - + A*
Siklohekzan - - + 3880
1,2-Dikloraetan + - - 1870
1,1-Dikloraetan + - - 8
1,2-Dikloraeten - + - 5
Diklorometan - + - 600
1,2-Dimetoksietan - + - 100
N,N-Dimetilasetamid - + - 1090
N,N-Dimetilformamid - + - 880
Dimetil Sülfoksit - - + A*
1,4-Dioksan - + - 380
Etanol - - + A*
2-Etoksietanol - + - 160
Etil Asetat - - + A*
Etilen Glikol - + - 620
Etil Eter - - + A*
Etil Format - - + A*
Formamid - + - 220
Formik Asit - - + A*
Heptan - - + A*
Hekzan - + - 290
İzobütil Asetat - - + A*
Metanol - + - 3000
2-Metoksietanol - + - 50
Metil Asetat - - + A*
3-Metil-1-bütanol - - + A*
Metilbütilketon - + - 50
Metilsiklohekzan - + - 1180
Metiletilketon - + - A*
Metilizobütilketon - - + A*
2-metil-1-propanol - - + A*
N-Metilpirolidin - + - 530
Nitrometan - - + 50
1-Pentanol - - + A*
1-Propanol - - + A*
2-Propanol - - + A*
Propil Asetat - - + A*
Piridin - + - 200
Sülfolan - + - 160
Tetrahidrofuran - + - 720
Tetralin - + - 100
Toluen - + - 890
1,1,1-Trikloraetan + - - 1500
1,1,2-Trikloraetan - + - 80
Ksilen - + - 2170
A*: 5000 ppm konsantrasyon limit

2.2.5.3 Safsızlıkların Oluşum Kaynağına Göre Sınıflandırılması [36,41]

2.2.5.3.1 Formulasyon İle İlgili Safsızlıklar (İlaç ürünlerindeki safsızlıklar)

Çözeltiler ve süspansiyonlar hidroliz nedeniyle bozulmaya eğilimlidir. Formülasyonda

kullanılan su sadece safsızlığına katkıda bulunmaz, aynı zamanda hidroliz ve kataliz için de
durum sağlar.

Bir ilaç ürünündeki safsızlıkların sayısı, bir ilaç maddesini formüle etmek için kullanılan
etkisiz bileşenlerden kaynaklanabilir. Formülasyon sürecinde, bir ilaç maddesi bozulmasına
veya diğer zararlı reaksiyonlara yol açabilecek çeşitli koşullara maruz kalır. Çözeltiler ve
süspansiyonlar potansiyel olarak hidrolize bağlı olarak bozunmaya eğilimlidir.
Formülasyonda kullanılan su sadece kendi safsızlıkları ile katkıda bulunamaz; hidroliz ve
kataliz için de uygun bir ortam sağlayabilir. Kullanılabilecek diğer çözücüler için de benzer
reaksiyonlar mümkündür. Formülasyon ile ilgili safsızlıklar aşağıdaki gibi sınıflandırılabilir:
[50]

2.2.5.3.2 Metot ile ilgili Safsızlıklar

Bilinen bir safsızlık olan 1- (2,6-diklorofenil)-2-indolin, otoklav ile terminal olarak sterilize
edilen diklofenak sodyumun parenteral bir dozaj formunun üretiminde oluşur.Otoklav
yönteminin koşulları (yani 123 + 2°C, bir indolinon türevi ve sodyum hidroksit oluşturan
diklofenak sodyumun molekül içi siklik reaksiyonunu zorlar. Bu safsızlığın oluşumunun,
formülasyonun başlangıç pH'ına bağlı olduğu bulunmuştur.

Bu safsızlığın oluşumunun, formülasyonun başlangıç pH'ına bağlı olduğu bulunmuştur. Elde

edilen üründe ampul içindeki safsızlığın konsantrasyonu, BP'deki hammadde monografındaki
safsızlık limitlerini karşılamamaktadır.

Şekil 2.15 Diklofenak Sodyum ‘un molekül içi siklik reaksiyonu (otoklavda, 123 °C’de)
2.2.5.3.3 Çevre ile ilgili Safsızlıklar:

Stabiliteyi azaltabilecek temel çevresel faktörler şunlardır:

Olumsuz sıcaklıklara maruz kalma: Isıya veya tropik sıcaklıklara uygun olmayan birçok API
vardır. Örneğin, ilaç maddesi olarak vitaminler çok ısıya karşı hassastır ve bozunma sıklıkla
vitamin ürünlerinde, özellikle sıvı formülasyonlarda potens kaybına yol açar.

Işık-özellikle UV ışığı: Birkaç çalışma ergometrinin yanı sıra metil ergometrin

enjeksiyonunun ışık ve ısı gibi tropikal koşullar altında kararsız olduğunu ve birçok saha
örneğinde çok düşük düzeyde aktif bileşen bulunduğunu bildirmiştir. Test edilen pazarlanmış
ergometrin enjeksiyon örneklerinin sadece % 50'sinde, aktif bileşen seviyesi belirtilen içeriğin
% 90 ila % 110'luk BP / USP sınırına uymuştur. Özel yapım ergometrin (0.2 mg / mL)
enjeksiyonu, 42 saat doğrudan güneş ışığında tutulduğunda neredeyse tamamen bozulma
göstermektedir.

Nem: Higroskopik ürünler için, nem hem dökme toz hem de formüle edilmiş katı dozaj
formları için zararlı kabul edilir. Aspirin ve ranitidin klasik örneklerdir.

2.2.5.3.4 Dozaj formu ile ilgili Safsızlıklar:

İlaç şirketleri, ürünleri pazarlamaktan önce bir stabilite çalışması da dahil olmak üzere ön
formülasyon çalışmaları yapsa da, bazen ilaç stabilitesini etkileyen dozaj formu faktörleri
şirketi ürünü geri çağırmaya zorlar. Fluocinonide Topical Solution USP,% 0,05 (Teva
Pharmaceuticals USA, Inc., Sellersville, Pennsylvania) 60 mL'lik şişelerde Amerika Birleşik
Devletleri'nde yetersiz potense neden olan bozunma / safsızlıklar nedeniyle geri çekildi. Genel
olarak, sıvı dozaj formları hem degradasyona hem de mikrobiyolojik kontaminasyona çok
duyarlıdır. Bu bağlamda, su içeriği, çözeltinin / süspansiyonun pH'ı, anyonların ve katyonların
uyumluluğu, bileşenlerin karşılıklı etkileşimleri ve primer ambalaj kritik faktörlerdir. Nemli
ve sıcak bir ortamda bakteri, mantar ve maya büyümesinden kaynaklanan mikrobiyolojik
büyüme, insan tüketimi için oral sıvı ürünleri kullanılamaz duruma getirebilir.Mikrobiyal
kontaminasyonlar, raf ömründe ve daha sonra, preparatlarda belirli koruyucuların uygunsuz
kullanımı veya primer ambalajların yarı geçirgen doğası nedeniyle çok dozlu bir ürünün
tüketici kullanımı sırasında ortaya çıkabilir. [50]

2.2.5.3.5 Bileşenler arasında karşılıklı etkileşim:

Çoğu vitamin çok kararsızdır ve raf ömrü boyunca, farklı dozaj formlarında özellikle sıvı
dozaj formlarında, kararsızlık sorunu yaratırlar. Vitaminlerin bozulması toksik safsızlıklar
vermez; bununla birlikte aktif bileşenlerin potensi farmakope spesifikasyonlarının altına
düşer. Karşılıklı etkileşim nedeniyle, dört vitamin (nikotinamid, piridoksin, riboflavin ve
tiamin) içeren bir formülasyonda nikotinamidin varlığı, vitamin B-kompleksi enjeksiyonunun
bir yıllık raf ömrü içinde tiaminin alt standart seviyeye indirgenmesine neden olabilir.

2.2.5.3.6 Fonksiyonel gruba bağlı tipik degredasyon

 Ester hidrolizi: Ester hidrolizi, aspirin, benzokain, sefotaksim, etil paraben ve

sefpodoksim proksetil gibi birkaç ilaçla açıklanabilir.

 Hidroliz: Hidroliz, ester tipi ilaçlarda, özellikle sıvı dozaj formlarında, örneğin
benzilpenisilin, oksazepam ve lincomycin'de yaygın bir fenomendir.

 Oksidatif bozunma: Hidrokortizon, metotreksat gibi aromatik bir halkaya doğrudan

bağlanmış hidroksil grubu içren ilaçlar (katekolaminler ve morfin gibi fenol
türevleri), konjuge dienler (A vitamini ve doymamış serbest yağ asitleri gibi),
heterosiklik aromatik halkalar, nitrozo ve nitrit türevleri ve aldehidler (özellikle
tatlandırıcılar) oksidatif bozunmaya duyarlıdır.

 Fotolitik bölünme: Fotolitik bölünme, katı veya çözelti olarak üretilirken,

paketlenirken veya tüketiciler tarafından kullanılmak üzere eczane dükkanlarında
veya hastanelerde depolanırken ışığa maruz kalan farmasötik ürünlere örnek olarak
verilebilir. Ergometrin, nifedipin, nitroprussid, riboflavin ve fenotiyazinler, foto
oksidasyona karşı çok sorumludur. Duyarlı bileşiklerde, fotokimyasal enerji, zincir
reaksiyonlarını sürdürebilen serbest radikal ara maddeleri oluşturur. Çoğu bileşik,
yüksek enerjili UV maruziyetine maruz kaldığında çözelti halinde bozunur.
Florokinolon antibiyotiklerin de fotolitik bölünmeye yatkın oldukları bulunmuştur.
Siprofloksasin göz damlası preparasyonunda (% 0.3) güneş ışığı, siprofloksasinin
etilendiamin analoğunu üreten foto bölünmereaksiyonunu indükler.
  Dekarboksilasyon: P-aminosalisilik asit gibi bazı çözünmüş karboksilik asitlerin
dekarboksilasyonu; ısıtıldığında karboksil grubundan karbondioksit kaybını gösterir.
Dekarboksilasyonun bir örneği, rufloksasinin foto reaksiyonudur.

2.2.5.3.7 Depolama sırasında oluşan safsızlıklar

İlaç ürünlerinin depolanması sırasında bir takım safsızlıklar ortaya çıkabilir. İlaç ürün
güvenliğini tahmin etmek, değerlendirmek ve sağlamak için kararlılık çalışmaları yapmak
şarttır.

2.2.5.3.8 Ürünün Kararsızlığı:

Kimyasal Dengesizlik: Farmasötik maddenin kimyasal dengesizliği nedeniyle, depolama

sırasında kirlilikler de ortaya çıkabilir. Farmasötik açıdan önemli birçok madde, depolama
koşulları yetersiz olduğunda kimyasal bozunmaya uğrar. Bu kimyasal ayrışma genellikle ışık,
asit veya alkali izleri, metalik safsızlık izleri, hava oksidasyonu, karbondioksit ve su buharları
ile katalize edilir. Ayrışmanın doğası, maddenin kimyasal özellikleri bilgisinden kolayca
tahmin edilebilir. Tüm bu ayrışmalar, uygun depolama prosedürleri ve koşulları kullanılarak
en aza indirilebilir veya önlenebilir.

Işığa duyarlı maddeler, karanlık cam veya metal kaplarda saklanarak ışıktan korunmalı,
böylece fotokimyasal bozunmayı engellemelidir. Hava ile oksidasyona veya neme karşı
saldırıya duyarlı malzemeler kapalı kaplarda saklanmalıdır ve gerekirse kaplardan gelen hava
Azot gibi inert bir gazla yer değiştirebilir. Oksidasyon, uygun antioksidanlar ilave edilerek de
önlenebilir. Antioksidanlar aktif maddeler yerine oksidasyona maruz kalabilirler.

Fiziksel Özelliklerde Değişiklikler: İlaçlar depolama sırasında fiziksel özelliklerde

değişikliklere uğrayabilir. Süspansiyon haline getirilmiş partiküllerin kristal boyutu ve şekli,
sedimantasyon, aglomerasyon ve kekleşmesinde değişiklikler olabilir. Bu fiziksel
değişiklikler her zaman önlenemez ve ürünün fiziksel görünümü, farmasötik ve terapötik
etkilerinde önemli değişikliklere neden olabilir.

Parçacık büyüklüğü ve sonuç olarak yüzey alanı, griseofulvin gibi düşük çözünürlükteki
ilacın biyoyararlanımını belirlemede kritik bir faktördür. Çoklu doz süspansiyonu durumunda
sedimantasyon ve kil gibi fiziksel değişiklikler, dozajın altında ve daha sonra ilaçların aşırı
dozlanması olasılığına yol açan bir güvenlik tehlikesi oluşturabilir. Benzer şekilde depolama
sırasında enjekte edilebilir emülsiyonların globül boyutundaki artış, yağ embolisine yol
açabilir.
Ambalaj malzemesi ile reaksiyon: Ambalaj malzemesi ile içindekiler arasındaki reaksiyon
olasılığı, bir güvenlik tehlikesi oluşturduğu için göz ardı edilemez. Salisilik asit merhemi gibi
metal yüzeylerle reaksiyona duyarlı preparatlar metal tüplerde paketlenmemelidir. Atropin
sülfat enjeksiyonu gibi alkali duyarlı maddelerin çözeltileri, hidrolitik direnç testine uyan cam
ampullerde paketlenmelidir, bu nedenle bu tür preparatlar soda camından yapılmış kaplarda
paketlenmemelidir. Plastik kaplar ve kapaklar, özellikle sulu olmayan çözücüler varlığında
plastikleştiriciler gibi istenmeyen katkı maddeleri verme eğilimleri nedeniyle dikkatle
değerlendirilmelidir. Enjekte edilebilir ürünler için tasarlanan plastik kaplar, içeriklerin görsel
olarak incelenmesine izin verecek kadar yarı saydam olmalıdır.

Kauçuk kapaklar, ilgili bileşiklerin çözeltilerine daldırma ile uygun şekilde ön işlem
görmedikleri sürece ilaçları, antioksidanları ve bakterisitleri çözeltiden emmeye daha
duyarlıdır.

Sıcaklık: Depolanan ürünlerin kimyasal bozunma ve fiziksel değişme oranları sıcaklığa

bağlıdır. Duyarlı maddelerin, istenmeyen ayrışmalara karşı korunmaları için kendilerine
atanan sıcaklık depolama gereksinimleri olabilir.

Tablo 2.6 ICH Q3A(R2)’e Göre Yeni İlaç Ham Maddelerindeki Safsızlık Limitleri

En yüksek günlük Nitel eşik değer Belirleme eşik Raporlanan eşik değer
doz değeri
≤ 2 g/gün % 0,15 % 0,10 veya 1,0 % 0,05
mg/gün (en düşük
hangi değere karşılık
gelirse)
>2 g/gün % 0,05 % 0,05 % 0,03

Tablo 2.7 ICH Q3A(R2)’e Göre Yeni İlaç Ürünlerindeki Safsızlık Limitleri

En yüksek günlük Nitel eşik değer Belirleme eşik Raporlanan eşik değer
doz değeri
< 1 mg %1,0 veya 50 %1,0 veya 5 μg/TDI %0,1
μg/TDI
1 mg-10 mg %1,0 veya 50 %0,5 veya 20 %0,1
μg/TDI μg/TDI
>10 mg-100 mg %0,5 veya 200 %0,2 veya 2 mg/TDI %0,1
μg/TDI
 >100 mg-1 g %0,2 veya 3 mg/TDI %0,2veya 2 mg/TDI %0,1
>1 g-2 g %0,2 veya 3 mg/TDI %0,2veya 2 mg/TDI %0,05
>2 g %0,15 %0,10 %0,05

TDI: Toplam günlük alım düzeyi (total daily intake).

Tablo 2.8 ICH Q3A(R2)’e Göre Yeni İlaç Ürünlerindeki Degredasyon Safsızlık Limitleri

En yüksek günlük doz Nitel eşik değer

≤ 1 g/gün % 0,10
>1 g/gün % 0,05

2.3 Zorla Bozundurma (Degredasyon) Çalışmaları

Farmasötiklerin güvenliği, sadece aktif bileşenin içsel toksikolojik özelliklerine değil, aynı
zamanda içerebileceği safsızlıklara ve bozunma ürünlerine de bağlıdır. Aktif bileşenlerde
safsızlıkların varlığı, farmasötiklerin kalitesi, güvenliği ve etkinliği üzerinde önemli bir etkiye
sahip olabilir. Düzenleyici kurumların yüksek saflıkta ilaç üretme talebinin artması nedeniyle,
ilaçtaki bilinmeyen tüm safsızlıkları tanımlamak ve karakterize etmek için çaba
gösterilmelidir. [58]

İlaç safsızlık profili, yüksek saflıkta maddelerin üretimi için teknoloji geliştirme sürecinde
modern farmasötik analizinde en önemli konulardan biridir.Bozunma (degredasyon) ürünleri,
uygun spesifiklik ve seçicilik, üründeki aktif farmasötik bileşenin uygun pik saflığına sahip
stabilite gösergeli analitik yöntemlerin geliştirilmesini mümkün kılan zorla bozundurma
çalışmaları yoluyla sağlanabilir. Beelirli bir ürünün olası degradasyon yolları, ilaç
stabilitesinde herhangi bir şekilde müdahale edebilecek faktörlerin değerlendirilmesi ve ilaç
degradasyon profilinin kritik analizi hakkında bilgi sağlar. [58]

Farmasötik moleküllerin kimyasal stabilitesi, ilaç ürününün güvenliğini ve etkinliğini

etkilediği için büyük bir endişe konusudur. FDA ve ICH kılavuzları, bir ilaç maddesinin ve
ilaç ürününün kalitesinin çeşitli çevresel faktörlerin etkisi altında zamanla nasıl değiştiğini
anlamak için kararlılık testi verilerinin gerekliliğini belirtir. Molekülün stabilitesi hakkında
bilgi, uygun formülasyon ve ambalajın seçilmesine ve ayrıca uygun dokümantasyon ve raf
ömrünün sağlanmasına yardımcı olur; Zorla bozundurma, ilaç ürünlerinin ve ilaç
maddelerinin hızlandırılmış koşullardan daha şiddetli koşullarda parçalanmasını içeren ve
dolayısıyla molekülün kararlılığını belirlemek için incelenebilen parçalanma ürünleri üreten
bir süreçtir. Ancak bu kılavuz ilkeler zorla degradasyonun yürütülmesinde çok geneldir ve
stres testine yönelik pratik yaklaşım hakkında ayrıntı vermez. Zorla degradasyon çalışmaları
ilaç geliştirme sırasında düzenleyici bir gereklilik ve bilimsel gereklilik olmasına rağmen,
resmi stabilite programı için bir gereklilik olarak görülmemektedir. [58]
Ruhsat dosyasını hazırlamadan önce yeni ilaç parçasının stabilite çalışmalarının yapılması
zorunlu hale gelmiştir. Stabilite çalışmaları uzun süreli çalışmaları (12 ay) ve hızlandırılmış
stabilite çalışmalarını (6 ay) içerir. Ancak ara çalışmalar (6 ay), hızlandırılmış çalışmalarda
kullanılandan daha hafif koşullarda gerçekleştirilebilir. Bu nedenle, ayırma, tanımlama ve
niceleme gibi bozunma ürünlerinin incelenmesi daha fazla zaman alacaktır. Kararlılık
çalışmalarına kıyasla, zorla degradasyon çalışmaları, çoğunlukla birkaç hafta olmak üzere çok
daha kısa sürede degradasyonların üretilmesine yardımcı olur. Zorla bozundurma
(degredasyon) çalışmaları sonucu üretilen numuneler, hızlandırılmış ve uzun vadeli stabilite
çalışmalarından üretilen numunelerin analizi için uygulanabilecek stabilite belirleme
yöntemini geliştirmek için kullanılabilir. [70]
Stres çalışmaları, aktif bileşenlerin olası bozunma yolları ve bozunma ürünleri hakkında bilgi
sağlar ve bozunma ürünlerinin yapısının aydınlatılmasına yardımcı olur. Zorla degradasyon
çalışmalarından üretilen degradasyon ürünleri, ilgili depolama koşullarında oluşturulabilen
veya bulunamayan potansiyel degradasyon ürünleridir, ancak stabilite göstergeli analitik
yönteminin geliştirilmesine yardımcı olurlar. Molekülün stabilitesi hakkında daha fazla bilgi
edinmek için yeterli zamana sahip olmak için ilaç geliştirme sürecinde bozunma çalışmalarına
daha erken başlamak daha iyidir. Bu bilgiler de formülasyon üretim sürecinin iyileştirilmesine
ve depolama koşullarının belirlenmesine yardımcı olacaktır. Tüm ilaç ürünleri ve ilaç
maddeleri için belirli bir koşul kümesi geçerli olmadığından ve düzenleyici rehber
kullanılacak koşullar hakkında belirtmediğinden, bu çalışma deneycinin sağduyuyu
kullanmasını gerektirir. Zorla degradasyon için kullanılan herhangi bir stratejinin amacı,
istenen degradasyon miktarını üretmektir, yani % 5-20. Düzgün tasarlanmış ve yürütülen
zorla bozundurma çalışması, stabilite göstergeli analitik yönteminin geliştirilmesi için uygun
bir örnek oluşturacaktır. [70]

Zorla bozundurma çalışmalarının, potansiyel degredasyon ürünlerin tanımlanması,

degradasyon yolu ve ilaç molekülünün içsel stabilitesi için büyük miktarda veri üretmesi
beklenmektedir. Zorla bozundurma çalışmaları normalde ilacı hidrolitik, oksidasyon, fotolitik
ve termal koşullara maruz bırakarak gerçekleştirilir. Hidrolitik çalışma asidik ve bazik
koşullar altında gerçekleştirilir. Oksidasyon koşullarında, hidrojen peroksitler yoğun olarak
kullanılır. İlaç maddelerinin oksidatif degradasyonu, reaktif anyonlar ve katyonlar oluşturmak
için bir elektron transfer mekanizması içerir. Benliklik karbon, alilik karbon ve üçüncül
karbon gibi değişken hidrojene sahip fonksiyonel grup veya hetero atomuna göre α-
pozisyonları oksidasyonlara eğilimlidir. UV veya flüoresan koşullara maruz bırakılarak esas
olarak ilaç maddelerinin birincil bozunma ürünlerini oluşturmak için foto stabiliye çalışmaları
yapılır. [63]
İlaç maddeleri en az 1,2 milyon lüks ve 200 Wsaat / m 2 ışığa maruz kalmaktadır. Karboniller,
nitro aromatik, N-oksit, alkenler aril klorürler zayıf C-H ve O-H bağları, sülfitler ve polienler
gibi fonksiyonel grupların bazıları ışığa duyarlıdır. [63]

Beş fonksiyonel grubun analizi, kayıtlardaki degredasyon ürünlerinde bulunan uyarı

yapılarının yaklaşık % 70'ini oluşturur: (1) aldehidler; (2) doymamış karboniller; (3) aromatik
aminler, hidroksilamin ve türevleri; (4) epoksitler; ve (5) poliamatik hidrokarbonlar. Analizin
ikinci aşaması, en yaygın beş uyarı yapısının oluşturulmasından sorumlu başlıca kimyasal
reaksiyonları sınıflandırmayı içerir. Bu iki aşamalı yaklaşım, sonuç olarak, ana molekülde
zorunlu olarak bulunmayan uyarıcı yapılara bozunma eğilimi gösterebilen fonksiyonel
grupların tahmini için bir olanak sağlar. [63]

2.3.1 Zorla Bozundurma (Degredasyon) Çalışmalarının Amacı

Aşağıdaki amaçlara ulaşmak için zorla bozunma çalışmaları yürütülmektedir: [72]
 İlaç maddelerinin ve ilaç ürünlerinin bozunma yollarının oluşturulması.
 İlaç ürünleri ile ilgili bozunma ürünlerini bir formülasyonda ilaç dışı üründen
üretilenlerden ayırmak.
 Bozunma ürünlerinin yapısını aydınlatmak.
 Formülasyonda bir ilaç maddesinin iç kararlılığını belirlemek.
 İlaç maddesinin ve ilaç ürününün hidroliz, oksidasyon, termoliz veya fotoliz gibi
bozunma mekanizmalarını ortaya çıkarmak.
 Stabilite göstergeli analitik yöntem geliştirmek
 İlaç moleküllerinin kimyasal özelliklerini kavrayabilmek
 Daha kararlı formülasyonlar üretmek.
 ICH koşulları altında resmi bir stabilite çalışmasında gözlemlenene benzer bir
bozunma profili üretmek.
 Kararlılıkla ilgili problemleri çözmek için.

2.3.2 Zorla Bozundurmayı Gerçekleştirme Zamanı

Yeni ilaç maddesi ve yeni ilaç ürününün geliştirilmesi için ne zaman degedasyon
çalışmalarının yapılması gerektiğini bilmek çok önemlidir. FDA klavuzu, stres testinin ruhsat
başvuru sürecinin III. Fazında yapılması gerektiğini belirtir. Stres çalışmaları, farklı pH
çözeltilerinde, oksijen ve ışığın varlığında ve ilaç maddesinin stabilitesini belirlemek için
yüksek sıcaklık ve nem seviyelerinde yapılmalıdır. Bu stres çalışmaları tek bir parti üzerinde
yapılır. Sonuçlar özetlenmeli ve yıllık raporda sunulmalıdır. Bununla birlikte, klinik
çalışmaların klinik öncesi veya faz I'de stres testine erken başlanması oldukça teşvik edilir ve
bozunma ürünlerinin tanımlanması ve yapıların aydınlatılması için yeterli zaman elde etmek
üzere ilaç maddesi üzerinde yapılmalıdır.stres koşullarının optimize edilmesinin yanı
sıra. Erken bir stres çalışması ayrıca imalat sürecinde iyileştirmeler yapmak ve stabilite
göstegeli analitik prosedürlerin uygun seçimini yapmak için zamanında önerilerde bulunur.
[72]

2.3.3 Bozundurma (degredasyonun) Limiti:

Ne kadar degredasyonun yeterli olduğu sorusu, farmasötik bilimciler arasında birçok
tartışmanın konusu olmuştur. İlaç maddelerinin % 5 ile % 20 arasında bozulması
kromatografik testlerin validasyonu için makul kabul edilmiştir. Bazı farmasötik bilim
insanları, etiket değerinin % 90 ‘uun stabilite limiti olarak kabulunun yaygın olduğu küçük
farmasötik moleküller için analitik validasyonunda kullanım için % 10 bozundurmanın en
uygun olduğunu düşünmektedir. Diğerleri, bilinen bozunma ürünleri ile spike edilen ilaç
maddesinin, ilaç ürününün stabilitesini izlemek için kullanılan yöntemler test etmek için
kullanılabileceğini öne sürmktedir. Biyolojik ürün grupları için fizyokimyasal değişiklikler,
aktivite kaybı veya raf ömrü boyunca bozunma için böyle bir sınırlama getirilmemiştir.
Zorla bozundurmanın bir degradasyon ürününe yol açması gerekli değildir. İlaç maddesi veya
ilaç ürünü hızlandırılmış stabilite protokolünde belirtilen koşullardan daha fazla stres
koşullarına maruz kaldıktan sonra bozunma görülmezse çalışma sonlandırılabilir. Bu, test
edilen molekülün stabilitesinin bir göstergesidir. Bir numunenin aşırı strese mahruz
bırakılması, resmi raf ömrü stabilite çalışmalarında görülmeyecek ikincil bir bozunma
ürününün oluşmasına yol açabilir ve yeterli bozunma ürünleri üretmeyebilir. Ürünle ilgili
bozunmanın üretilmesine yönelik protokoller, matrisler ve konsantrasyonlardaki farklılıklar
nedeniyle ilaç maddesi ve ilaç ürünü için farklılık gösterebilir.  Metot geliştirme için stresli
örnekler sağlamak üzere çözeltide stres testi için (oksidatif testler için maksimum
24 saat) maksimum 14 gün önerilmektedir. [72]

2.3.4 Bozunma koşullarının seçimi için strateji

İlaç maddeleri ve ilaç ürünleri için stabilite göstergeli yöntemler geliştirmek üzere temsili
örnekler üretmek için zorla bozundurma gerçekleştirilir. Stres koşullarının seçimi, ürünün
normal üretim, depolama ve her durumda spesifik olan kullanım koşulları altında bozunması
ile tutarlı olmalıdır. İlaç maddesi ve ilaç ürünü için kullanılan bozunma koşullarının genel bir
protokolü şekil 4’de gösterilmektedir. [72]

İlaç Maddesi İlaç Ürünü

Katı Çözelti / Çözelti /

Süspansyon Katı Yarı Katı Süspansyon

Fotolitik
Fotolitik Fotolitik
Termal Asit / Baz Fotolitik
Termal Termal
Termal Hidroliz Termal
Termal Termal
/Nem Oksidatif Termal
/Nem /Nem
Oksidatif /Nem

Şekil 2.16  İlaç maddesinin ve ilaç ürününün bozulması için kullanılan çeşitli stres koşullarını
tarif eden açıklayıcı bir akış şeması.

Zorlamalı degradasyon çalışmaları için önerilen minimal stres faktörleri listesi asit ve baz
hidrolizi, termal degradasyon, fotoliz, oksidasyon  içermeli ve donma-çözülme çevrimleri ve
germe içerebilir. Düzenleyici kılavuzlarda pH, sıcaklık ve kullanılacak spesifik oksitleyici
ajanların koşulları hakkında bir spesifikasyon yoktur. Q1B, ışık kaynağının kombine görünür
ve ultraviyole (UV, 320-400  nm) çıktılar üretmesi gerektiğini ve maruziyet seviyelerinin
gerekçelendirilmesi gerektiğini belirtmesine rağmen, fotoliz çalışmalarının tasarımı
başvurucunun takdirine bırakılmıştır. İlk denemede, ilacı yaklaşık % 10 oranında azaltan
koşullar ortaya çıkmalıdır. Zorla degradasyon çalışmaları için en sık kullanılan bazı
koşullar Tablo 8'de sunulmaktadır. [72]
Tablo 2.9 Degredasyon Çalışmaları İçin Çoğunlukla Kullanılan Koşullar [10]

Bozunma Örnekleme
Deneysel Durumlar Depolama Koşulları
Türü Zamanı (Gün)
Hidroliz Kontrol API'sı (asit veya baz
40 °C, 60 °C 1,3,5
yok)
0.1  M HC1 40 °C, 60 °C 1,3,5
0.1  M NaOH 40 °C, 60 °C 1,3,5
Asit kontrolü (API yok) 40 °C, 60 °C 1,3,5
Baz kontrolü (API yok) 40 °C, 60 °C 1,3,5
 Bozunma Örnekleme
Deneysel Durumlar Depolama Koşulları
Türü Zamanı (Gün)
pH: 2,4,6,8 40 °C, 60 ° 1,3,5
%3 H 2 O 2 25°C, 60 °C 1,3,5
Peroksit kontrolü 25°C, 60 °C 1,3,5
Oksidasyon
Azobisisobutyronitril (AIBN) 40 °C, 60 °C 1,3,5
AIBN kontrolü 40 °C, 60 °C 1,3,5
Işık 1 × ICH Uygulanabilir değil 1,3,5

Işık 3 × ICH Uygulanabilir değil 1,3,5

Fotolitik

Işık kontrolü Uygulanabilir değil 1,3,5

Isı odası 60  ° C 1,3,5

Isı odası 60 °C /% 75 Bağıl Nem 1,3,5
Termal Isı odası 80  ° C 1,3,5
Isı odası 80 °C /% 75 Bağıl Nem 1,3,5
Isı kontrolü Oda ısısı. 1,3,5
Bazı bilim adamları, 80  ° C veya daha yüksek sıcaklıklar gibi aşırı koşullarla başlamayı ve
daha kısa (2, 5, 8, 24  saat, vb.) ve birden fazla zaman noktasında test etmeyi pratik buldular,
böylece bozulma oranı değerlendirilebilir. Birincil ve ikincil bozunma ürünleri erken zaman
noktalarında test edilerek ayırt edilebilir ve böylece daha iyi bir bozunma yolu belirlemesine
yardımcı olabilir. Başka bir yaklaşımda bozunma, ilaç maddesinin kararsız olduğu
düşünülerek ve Tablo 8'de belirtilen koşullarda bozunma başlatılarak başlatılır. Daha sonra
stres, yeterli bozunma elde etmek için arttırılacak veya azaltılacaktır. Daha sert koşullar ve
daha az zaman yaklaşımı ile karşılaştırıldığında, bu strateji aşağıdaki nedenlerden dolayı daha
iyidir: (i) sert bir şart kullanıldığında reaksiyon mekanizmasında bir değişiklik olabilir ve (ii)
nötralize etmede pratik bir sorun var veya HPLC kolonu üzerine bir enjeksiyon yapılmadan
önce, örneğin asit veya baz gibi yüksek bir reaktan konsantrasyonu içerdiğinde her
numunenin seyreltilmesi. Her iki neden de, ilacın ayrışmasına neden olmak için mümkün
olduğunca normal koşulların kullanılması gerektiğini düşündürecek kadar
güçlüdür . Formülasyonlar veya yöntemler değiştiğinde çalışmalar tekrarlanmalıdır, çünkü
değişiklik yeni bozunma ürünlerinin üretimine yol açabilir. [72]

2.3.4.1 İlaç konsantrasyonunun seçimi

Degradasyon çalışması için hangi ilaç konsantrasyonunun kullanılması gerektiği, yasal
kılavuzda belirtilmemiştir. Çalışmaların 1  mg / mL konsantrasyonda başlatılması
önerilmektedir . 1  mg / mL ilaç konsantrasyonu kullanılarak , genellikle tespit aralığında
küçük ayrışma ürünleri elde etmek mümkündür. Bazı degradasyon çalışmalarının, ilacın son
formülasyonlarda bulunması beklenen bir konsantrasyonda da yapılması
önerilmektedir . Bunu önermenin nedeni , yüksek konsantrasyonlarda ilaç içeren ticari
preparatlarda bir dizi polimerik ürünün oluştuğu tespit edilen aminopenisilin ve
aminosefhalosporinlerin örnekleridir. [72]

2.3.4.2 Bozunma koşulları

Hidrolitik koşullar
Hidroliz, geniş bir pH aralığında en yaygın bozunma kimyasal reaksiyonlarından
biridir. Hidroliz, kimyasal bir bileşiğin su ile reaksiyona girerek ayrışmasını içeren kimyasal
bir işlemdir. Asidik ve bazik koşullar altında hidrolitik çalışma, molekülde bulunan
iyonlaşabilir fonksiyonel grupların katalizini içerir. Asit veya baz stres testi, bir ilaç
maddesinin arzu edilen aralıkta birincil degradanlar üreten asidik veya bazik koşullara maruz
bırakılarak zorla bozunmasını içerir. Asit veya baz tipinin ve konsantrasyonlarının seçimi, ilaç
maddesinin stabilitesine bağlıdır.  Asit hidrolizi için hidroklorik asit veya sülfürik asitler (0.1-
1 M) ve  Baz hidroliz için sodyum hidroksit veya potasyum hidroksit (0.1-1 M), hidroliz için
uygun reaktifler olarak önerilmektedir . Stres testi için bileşikler suda az çözünürse, bunları
HC1 veya NaOH içinde çözmek için yardımcı çözücüler kullanılabilir. Yardımcı çözücünün
seçimi, ilaç maddesi yapısına dayanmaktadır. Stres testi deneyi normal olarak oda
sıcaklığında başlatılır ve bozulma olmazsa yüksek sıcaklık (50-70  ° C) uygulanır. Stres testi 7
günden fazla olmamalıdır. Bozulmuş numune daha sonra daha fazla ayrışmayı önlemek için
uygun asit, baz veya tampon kullanılarak nötralize edilir. [72]

Oksidasyon koşulları
Hidrojen peroksit, zorla bozundurma çalışmalarında ilaç maddelerinin oksidasyonu için
yaygın olarak kullanılır, ancak metal iyonları , oksijen ve radikal başlatıcılar (örn.,
Azobisisobutyronitril, AIBN) gibi diğer oksitleyici ajanlar da kullanılabilir. Bir oksitleyici
maddenin seçimi, konsantrasyonu ve koşulları ilaç maddesine bağlıdır. Çözeltilerin nötr pH
ve oda sıcaklığında yedi gün veya maksimum % 20'ye kadar bozulmaya maruz bırakılmasının
potansiyel olarak ilgili bozunma ürünleri oluşturabileceği bildirilmektedir. İlaç maddesinin
oksidatif degradasyonu, reaktif anyonlar ve katyonlar oluşturmak için bir elektron transfer
mekanizması içerir. [72]

Aminler, sülfürler ve fenoller N-oksitler, hidroksilamin , sülfonlarve sülfoksit vermek üzere

elektron transferi oksidasyonuna duyarlıdır. Hidrojen atomuna göre benzilik karbon, alilik
karbon ve üçüncül karbon veya α-pozisyonları gibi kararsız hidrojene sahip fonksiyonel grup,
hidroperoksitler , hidroksit veya keton oluşturmak üzere oksidasyona yatkındır.

Fotolitik koşullar
İlaç maddelerinin foto stabilitesi testi, ışığa maruz kalmanın kabul edilemez bir değişiklikle
sonuçlanmadığını göstermek için değerlendirilmelidir. UV veya flüoresan koşullara maruz
bırakılarak ilaç maddesinin birincil bozunma maddelerinin üretilmesi için foto kararlılık
çalışmaları yapılır. Fotostabilite testi için önerilen bazı koşullar ICH kılavuzlarında
açıklanmıştır. İlaç maddesi ve katı / sıvı ilaç ürününün numuneleri en az 1.2 milyon  lüx / saat
ve 200  W/saat/m 2 ışık maruz olmalıdır  . En sık kabul edilen ışık dalga boyu  fotolitik
degradasyona neden olmak üzere 300-800 nm arasındadır. Tavsiye edilen maksimum
aydınlatma 6 milyon  lüx / saattir. Işık stresi koşulları, serbest radikal mekanizması ile foto
oksidasyonu indükleyebilir. Karboniller, nitro aromatik, N-oksit, alkenler , aril klorürler, zayıf
CH ve OH bağları, sülfitler ve polienler gibi fonksiyonel grupların ilaç ışığa
duyarlılığı getirmesi muhtemeldir. [72]

Termal koşullar
Termal bozulma (örn. Kuru ısı ve ıslak ısı), önerilen ICH Q1A hızlandırılmış test
koşullarından daha zorlu koşullarda gerçekleştirilmelidir. Katı hal ilaç maddeleri ve ilaç
ürünleri örnekleri kuru ve ıslak ısıya, sıvı ilaç ürünleri kuru ısıya maruz
bırakılmalıdır. Çalışmalar daha kısa bir süre daha yüksek sıcaklıklarda yapılabilir. Sıcaklığın
bir maddenin termal bozunması üzerindeki etkisi Arrhenius denklemi ile incelenir. [72]
k = A e- Ea / RT
(2.1)

Burada k özgül reaksiyon hızıdır, A frekans faktörüdür, Ea aktivasyon enerjisidir, R gaz sabiti

(1.987 kal / °C mol) ve T mutlak sıcaklıktır. Termal bozunma çalışması 40-80  °C'de
gerçekleştirilir.

2.3 Safsızlıkların Tanımlanması İçin Analitik Metotlar

Yeni ilaç geliştirme, gelişimin çeşitli aşamalarında anlamlı ve güvenilir analitik verilerin
üretilmesini gerektirir. [59]
a) Analitik yöntem geliştirme için örnek set seçimi

b) Kromatografik koşulların ve Aşamaların taranması, tipik olarak gradyan elüsyonunun

lineer çözücü mukavemeti modeli kullanılarak
c)Sağlamlık ve sağlamlık ile ilgili parametrelere ince ayar yapmak için yöntemin
optimizasyonu

Safsızlıkları doğru bir şekilde izlemek için izole etmek ve karakterize etmek zorunlu hale
gelir, çünkü safsızlıkların yaklaşık tahminleri genellikle ilaç maddesinin malzemesine karşı
yapılır ve düzeltilemez.

Bu tahminler, safsızlıkların ilgili malzeme ile yapısal olarak ilişkili olduğu ve dolayısıyla aynı
dedektör tepkisine sahip olduğu varsayımına dayanmaktadır.

Safsızlıkların izolasyonu ve karakterizasyonu için yöntem sayısı önemli olacaktır.

Safsızlıkların ayrılması ve karakterizasyonu için birçok analitik teknik kullanılır.

Safsızlıklar ağırlıklı olarak aşağıdaki yöntemlerle tanımlanabilir; [70]

• Referans standart yöntemi

• Spektroskopik yöntemler

• Ayırma yöntemleri

• İzolasyon yöntemi

• Karakterizasyon yöntemleri

2.3.1 Referans standart yöntemi

Bunun temel amacı, yeni ilaçların geliştirilmesi ve kontrolünde kullanılan referans

standartlarının genel yaşam döngüsüne, niteliğine ve yönetişimine açıklık sağlamaktır.

Referans standartlar, hem proses hem de ürün performansının değerlendirilmesinde temel

teşkil eder ve hasta tüketimi için ilaç güvenliğinin değerlendirilmesinde temel ölçütlerdir.

Bu standartlar, sadece dozaj formlarındaki aktif bileşenler için değil, aynı zamanda
safsızlıklar, bozunma ürünleri, başlangıç materyalleri, işlem ara maddeleri ve eksipiyanlar için
de gereklidir. [70]

2.3.2 Spektroskopik Yöntemler

Aşağıdaki spektroskopik yöntemler kullanılabilir; [38]

- Ultraviyole (UV)
- Infrared (Kızılötesi) Spektrofotometri (IR)
- Nükleer manyetik rezonans (NMR)
 - Kütle spektrometresi (MS)

2.3.2.1 Ultraviyole (UV)

Tek bir dalga boyunda UV, minimum analiz seçiciliği sağlar; bununla birlikte, diyot dizisi
detektörlerinin (DAD) mevcudiyeti ile, daha fazla seçicilik sağlamak için çeşitli dalga
boylarında aynı anda yeterli bilgi elde etmek artık mümkündür. UV-VIS spektroskopisinin
kromatografik ayrımı olmayan ilaçlarda safsızlıkların tanımlanması ve yapılarının
aydınlatılması için bir araç olarak kullanımı oldukça mütevazıdır. Bu yöntem sadece 200
nm'nin üzerindeki ultraviyole bölgesinde absorpsiyon yapan safsızlıklar için yararlıdır. UV-
Visible, saf ilaç bileşiklerinin tanımlanmasında faydalı bir tekniktir. Kromofor içeren
bileşikler, örneğin konsantrasyonu ile doğrudan ilişkili olarak ultraviyole veya görünür ışığın
spesifik dalga boyunu absorplar. [71]

2.3.2.2 Kızılötesi (infrared) Spektrofotometri (IR)

Kızılötesi spektro-fotometri, bazı fonksiyonel gruplar hakkında miktarlandırma ve seçiciliğe

izin verebilecek spesifik bilgiler sağlar. Bununla birlikte, düşük düzeyli seçilebilirlik,
genellikle sorunu atlatmak için daha kapsamlı yaklaşımlar gerektiren bir sorundur. FT-IR
spektrometrisi, hammdelerde kimyasal yapıları biliniyorsa ve belli yüzde limitlerinin üzerinde
olarak bulunursa, kimyasal olarak ilgili safsızlıklarının varlığını veya yokluğunu saptamak
için fonksiyonel olabilir. Atorvastatin ve Simvastatin gibi statinlerdeki safsızlıkların FT-IR
spektroskopisi ile analiz edildiği bildirilmektedir. [70]

2.3.2.3 Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi (NMR)

Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi bir molekül hakkında oldukça yapısal bilgi sağlar
ve safsızlıkların karakterizasyonu için çok yararlı bir yöntemdir; ancak, maliyet ve zaman
dikkate alındığında nicel bir yöntem olarak kullanımı sınırlıdır. [70]

2.3.2.4 Kütle Spektrometresi (MS)

Kütle spektrometrisi mükemmel yapısal bilgi sağlar ve aletin çözünürlüğüne bağlı olarak;
moleküler ağırlıktaki küçük farklılıkları ayırt etmek için etkili bir araçtır. Bununla birlikte,
maliyet ve zaman dikkate alındığında nicel bir teknik olarak kullanımı sınırlıdır.

Özetle, IR, NMR ve MS, tekniklerin herhangi biri tarafından izole edilen katışkıların
karakterizasyonu için mükemmel tekniklerdir. UV'nin, yüksek basınçlı sıvı kromatografisi ile
çoğu numuneyi analiz etmek için özellikle yararlı olduğu bulunmuştur. Bu kombinasyon
yaygın olarak farmasötik analizde kullanılır. [70]
2.3.3 Ayırma Yöntemleri

Aşağıdaki ayırma yöntemleri kullanılabilir: [39]

- İnce tabaka kromatografisi (TLC)

- Gaz kromatografisi (GC)
- Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC)
- Kapiler elektroforez (CE)
- Süperkritik sıvı kromatografisi (SFC)
Potansiyel kullanımlarının hızlı bir şekilde gözden geçirilmesini sağlamak için yukarıda
listelenen yöntemlerin kısa bir açıklaması burada verilmektedir. CE hariç, tüm bu teknikler
kromatografik yöntemlerdir. CE, kromatografinin yaygın gereksinimlerinin çoğunu paylaştığı
için sıklıkla kromatografik yöntemlerle toplanan bir elektroforetik yöntemdir. Bununla
birlikte, kesinlikle GC – MS, LC – MS, GC – LC – MS, LC – MS – MS, vb gibi iki fazlı bir
ayırma sistemi değildir - kromatografide birincil gereksinimdir. [71]

Çok çeşitli bileşikler, çeşitli farklı plakalar ve mobil fazlar kullanılarak TLC kullanılarak
çözülebilir. Bu yönteme ilişkin temel zorluklar sınırlı çözünürlük, tespit ve miktar tayini
kolaylığıdır. En büyük avantajlar kullanım kolaylığı ve düşük maliyettir. [71]

Gaz kromatografisi, miktar tayini için çok faydalı bir tekniktir. İstenilen çözünürlük, seçicilik
ve miktar tayini kolaylığı sağlayabilir. Bununla birlikte, birincil sınırlama, numunenin uçucu
olması ya da türevlendirme yoluyla uçucu hale getirilmesi gerektiğidir. Bu teknik organik
uçucu safsızlıklar için çok yararlıdır. [71]

Yüksek basınçlı sıvı kromatografisine günümüzde sıklıkla yüksek performanslı sıvı

kromatografisi denir. Bu terimlerin her ikisi de HPLC olarak kısaltılabilir ve bunlar
kromatograflar tarafından dönüşümlü olarak kullanılır. Bu, floresan, elektrometrik, MS,
vb.Gibi çeşitli detektörlerin kullanılmasıyla farmasötik kimyager için önemli ölçüde uzatılmış
uygulamalarla yararlı bir tekniktir. HPLC, safsızlıkların tanımlanması ve ayrılması için en çok
atıfta bulunulan faydalınılan kromatografik tekniklerden biridir. İlaç bileşiği, alıkonma süresi
ve bilinen standartlarla doğrudan karşılaştırma temelinde tanımlanır. HPLC ile izolasyon ve
safsızlıkların tanımlanması için kolon, optimize edilmiş sistem ve uygun mobil faz sistemi
gerekir. HPLC'yi preperatif modunda yürütmek için özel araçlar kullanılır. Safsızlıkların
ayrılması için en çok araştırılan analitik yöntem HPLC'yi içerir. [71]
Kapiler elektroforez, çok düşük miktarlarda numune mevcut olduğunda ve yüksek çözünürlük
gerektiğinde yararlı bir tekniktir. Birincil zorluk, enjekte edilen numunelerin tekrar
üretilebilirliğini sağlamaktır. [71]

Süperkritik sıvı kromatografisi, GC'nin deteksiyon açısından avantajlarını ve HPLC'nin

ayırmalar açısından avantajlarını sunar, çünkü numunenin uçuculuğu çok önemli değildir. Bu
teknik hala gelişmektedir ve en büyük uygulaması örneklerin ekstraksiyonunda bulunmuştur.
[71]

İzolasyon yöntemi: Safsızlıkları izole etmek genellikle gereklidir. Ancak enstrümantal

yöntemler kullanılırsa, safsızlıkları doğrudan karakterize ettiği için safsızlıkların
izolasyonundan kaçınılır. Genellikle kromatografik ve kromatografik olmayan teknik,
karakterizasyonundan önce safsızlıkların izolasyonu için kullanılır. "Kromatografik reaktör"
terimi, herhangi bir analitik ölçek kolonunun hem reaktörden akış olarak hem de aynı
zamanda reaktan (lar) ve ürünler için ayırma ortamı olarak kullanılmasını ifade eder. HPLC
kullanılarak kromatografik reaktör yaklaşımı, Aprepitant ön ilacı olan fosaprepitant
dimegluminin çözelti fazı hidroliz kinetiği araştırıldı. [69]

Safsızlıkların izolasyonu için kullanılabilecek yöntemlerin bir listesi aşağıda verilmiştir. [69]

- Katı faz ekstraksiyon yöntemi

- Sıvı-sıvı ekstraksiyon yöntemi
- Hızlandırılmış solvent ekstraksiyon yöntemi
- Süperkritik sıvı ekstraksiyonu
- Kolon kromatografisi
- Flaş kromatografisi
- TLC
- GC
- HPLC
- HPTLC
- Kapiler elektroforez (CE)
- Süperkritik sıvı kromatografisi (SFC)

2.3.4 Karakterizasyon Yöntemleri:

Bir GC veya HPLC'ye bağlı MS gibi son derece sofistike enstrümantasyon, çeşitli matrislerde
küçük bileşenlerin (ilaçlar, safsızlıklar, bozunma ürünleri, metabolitler) tanımlanmasında
kaçınılmaz araçlardır. Safsızlıkların karakterizasyonu için farklı teknikler kullanılır; ki bunlar;
[69]

2.3.4.1 Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi (NMR)

NMR'nin, farmasötik açıdan ilgi duyulan moleküllerin spesifik bağlanma yapısı ve

stereokimyası hakkında bilgi sağlama yeteneği, onu yapısal aydınlatma için güçlü bir analitik
araç haline getirmiştir.

NMR’ ın difüzyon katsayısı tayininine dayanarak, monomerik ve dimerik maddeleri

birbirinden ayırt edebilme yeteneği, hem monomerleri hem de dimerleri içeren otantik
malzemeler kullanılarak valide edilmiştir. [73]

Ne yazık ki, NMR geleneksel olarak diğer analitik tekniklere kıyasla daha az duyarlı bir
yöntem olarak kullanılmıştır. NMR için konvansiyonel numune gereksinimleri, 1 mg'dan daha
az gerektiren MS ile karşılaştırıldığında 10 mg mertebesindedir. [73]

2.3.4.2 Kütle Spektrometresi (MS)

Son birkaç on yılda ilaç geliştirme süreci üzerinde giderek daha önemli bir etkiye sahiptir.
Ayırma tekniklerini Kütle Spektrometreleri ile doğrudan bağlayan arayüzlerin tasarım ve
verimliliğindeki gelişmeler, aktif farmasötik bileşenler ve farmasötik formülasyonlardaki
ilaçla ilgili maddelerin izlenmesi, karakterizasyonu ve miktarının ölçülmesi için yeni fırsatlar
sağlamıştır. Tek bir yöntemin gerekli seçiciliği sağlayamaması halinde, HPLC-TLC ve
HPLC-CE gibi kromatografik tekniklerin dikey olarak birleştirilmesi veya kromatografik
ayırmaların HPLC-MS veya HPLC-NMR gibi bilgi açısından zengin spektroskopik
yöntemlerle birleştirilmesi düşünülmelidir. [69]

2.3.4.3 Hyphenated yöntemler

Aşağıdaki hyphenated yöntemler, safsızlıkları izlemek için etkili bir şekilde kullanılabilir.
[69]

- GC–MS

- LC–MS

- LC–DAD–MS

- LC–NMR

- LC-MS-MS

- HPLC-DAD-MS
 - HPLC-DAD-NMR-MS

Tablo 2.10 Safsızlıkların Ayrılması İçin HPLC Yöntemi

İlaçlar Çözücü/Mobil Faz Safsızklıklar Referans

Salisilik asit ve Metansülfonik Asit: ACN (% Salisilik aside 74
betametazon 0.05) bağlı: 7-
dipropionat betametazon
dipropionat
Almotriptan malat Sodyum fosfat tamponu: ACN 3 safsızlık 75
(80:20)
Alogliptin Benzoat Gradyan SistemA -% 0.1 9 safsızlık 76
Perklorik asit (trietilamin ile pH:
3.0) B - Asetonitril
Atomoksetin Orto-Fosforik asit, Fenil 77
hidroklorür Oktansülfonik asit: n-Propanol metilamino
propanol ve
mandelik asit
Atorvastatin ACN:CH3COOH4 Tampon Diastereomer- 78, 79, 80
kalsiyum Gradient atorvastatin
(DSAT)
Desfloro-
atorvastatin
(DFAT)
Bendazac lizin Asetonitril: sulu tampon (1000 2 safsızlık 81
ml Su içinde 1.0 ml glasiye
asetik asit) (47:53)
Bosentan Gradyan sistemA - Asetonitril ve 4 safsızlık 82
Amonyum asetat (pH3.3) (27:73)
B - Metanol ve amonyum asetat
(pH4.5) (70:30)
Sefotaksim Tampon: Metanol: Su (80:15:05) 5 safsızlık 83
Klopidogrel Eluent A: ACN: potasyum fosfat 5- [1- (2- 84
tamponu (20:80); Eluent B: Klorofenil) -2-
ACN: potasyum fosfat tamponu metoksi-2-
(pH 2.3; 10 mM) (80:20); oksoetil] -6,7-
dihidrotieno
[3,2-c] piridin-
5-ium
Dapoksetin % 0.1 formik asit ile metanol ve 1 safsızlık 85
su
Ekonazol Nitrat MeOH: H2O; gradient 4-Klorobenzil 86
alkol ve a- (2,4-
dikloro-fenil) -1
H-imidazol-1-
etanol)
Efavirenz Su, Asetonitril ve Metanol 5 safsızlık 87
Ertapenam A- 0.1 N Suda tampon (pH 8) B- 4 safsızlık 88
ACN Gradyan profil
Ezetimib Suda A-Ortofosforik asit 89
B-Asetonitril ve su (50:50) 2 safsızlık
Flupirtin maleat A - 0.02 M Amonyum 4 safsızlık 90
 dihidrojen fosfat tamponu
(fosforik asit ile pH 5.5)
B - Asetonitril (60:47)
Ibuprofen ACN: fosfat tamponu (25 mM, 3- [4- (2- 91
pH 2.1) (40:60) Metilpropil)
fenil] propanoik
asit
Icofungipen ACN:H2O (1R, 2S) -2- 92
(25:75) (Sinnamil
amino) -4-
metilen
siklopentan
karboksilik asit
Irbesartan gradient çözücü A ( % 0.55 h/h 4 safsızlık 93
orto-fosforik asit, pH, trietil
amin ile 3.2'ye ayarlandı) ve
çözücü B ( 95: 5 h/h asetonitril
ve çözücü A karışımı)
1-Aspartik Asit ve MeOH:H2O Süksinik asit, 94
1 – alanin (50:50) sitrik asit, malik
asit, maleik asit,
fumarik asit,
glisin, glutamik
asit
Meglumin A – % 0.1 suda formik asit 2 safsızlık 95
B –% 0.1 90:10 MeOH:ACN
içinde formik asit
Nevirapin Gradient Sistem 4 safsızlık 96
A % 0.1 formik asit
B – ACN içerisinde % 0.1
formik asit

Omlesartan Fosfat tamponu: Asetonitril Omlesartan asit 97

Paclitaxal H2O:ACN (52:48) 10 98

Deasetilbakatin
III, bakatin III,
10-deaset-il-7-
ksilosil taksol C,
foto-degredant,
taksol C, ceph-
alomannin, 10-
deasetil-7-epi
taksol, 7-
episode -taksol
Phenazopyridin H2O:ACN (25:75) 3-Fenil-5- 99
fenilazo-piridin-
2,6 diamin
Pridinol Mesilat Potasyum Fosfat 3-Piperidino- 100
tamponu:MeOH:2- propanol propiofenon,
hidroklorür, 1-
(3,3-difenilprop-
 2-en-1-il)
piperidin
Retigabin Asetonitril ve su 2 safsızlık 101
Rizatriptan benzoat Amonyum dihidrojen ortofosfat Rizatriptan-1,2- 102
(20 mM) + 2 ml TEA (pH 2): dimer ve
ACN; gradient Rizatriptan-2,2-
dimer
Ropinirol HCl ACN: sodyum heptan sülfonat (5 4- [2- 103
mM) (21.6:78.4) (pH 2) (Diizopropilami
no) etil] -1H-
indol-2,3-dion
Sumatriptan Asetonitril ve metanol 4 safsızlık 104
süksinat
Temozolomid Gradient system 3 safsızlık 105
A – Su ile % 0.5 asetik asit
B - ACN
Tolperoson Tampon ( 0.01 M Potasyum 4 safsızlık 106
dihidrojen fosfat pH 8) and ACN
gradient sistem (50:50)
Trans-resveratrol A- sudaki sodyum dihidrojen 5 safsızlık 107
ortofosfat dihidrat B- ACN
Trimetoprim gradient elusyon A- TEA (% 2 safsızlık 108
0.25) ve suda formik asit (1.1%)
(pH5.8) B- ACN
Vareniklin Amonyum asetat tamponu: 4, 6, 7,8, 9, 10- 109
Metanol (70:30) heksahidro-1 H-
6,10-
metanopirazino
[2,3-h] [3]
benzazepin-2,3-
dion.

Tablo 2.11 Safsızlıkların Ayrılması İçin GC Yöntemi

İlaçlar Çözücü/Mobil Faz Safsızklıklar Referans

Kloksasilin Sikloheksan N, N dimetilanilin 110

Doksorubisin
hidroklorür Dioksan Aseton ve Etanol 111
Floresan sodyum Metanol Dimetilformamid 112
1,2-dimetil-3-fenilaziridin, efedrin,
metilefedrin, N-
formilmetamfetamin, N-
asetilmetamfetamin, N-
n-Heksan ve Fosfat formilfedrin, N-asetilefedrin, N, O-
Metamfetamin tamponu diasetilefedrin, metametamin dimer 113
Tablo 2.12 Safsızlıkların Ayrılması İçin UV-Visible Spektroskopi Yöntemi

İlaçlar Çözücü/Mobil Faz Safsızklıklar Referans

Amfoterisin B Dimetil Sülfoksit ve metanol Tetraene 110

Atropin sülfat Metanol Apo Atropin 111

Dekstroz Su 5 hidroksimetilfurfural 112

Dimetil sülfoksit ve 0.1 M

Merkaptopürin HC1 Hypoxanthine 113

3,17α-dietil-13-etil-
Norgestrel Etanol 3,5-gonadien-17-ol 114

Tablo 2.13 Safsızlıkların Ayrılması İçin Kapiler Elektroforez Yöntemi

İlaçlar Safsızklıklar Referans

Dialkil Caracurine (DAC),

Monomerik alkil-Wieland-
Alcuronium Gumlich-aldehit (WAG) 115

Seftazidimin anti-izomeri, 7-
seftazidim epimer, 3-metiliden
Seftazidim Pentahidrat bileşiği 116

Sefotaksim 6 safsızlık 117

cephradine cephalexin 118

bir ilave ürün (katkı maddesi) ve

Fluvoksamin maleat fllüvoksketon (keton) 119

Seramin, Paromamin, 2-
Gentamisin Sülfat deoksistreptamin 120

Linkomisin Linkomisin B 121

Meklofenoksat N, N-dimetil etanolamin 122

4-epiminosiklin, 6-deoksi-6-
demetil tetrasiklin, 7-didimetil
minosiklin 7-
monodemetilminosiklin, 9-
Minosiklin minosiklin 123
Table 2.14 İlaçların Safsızlık Profillemesinde Hypenated Teknikler

İlaçlar Metot Mobil Faz Safsızlık Referans

Deferesiroks HPLC-UV Su: Metanol Deferesiroks A and B 124

LC-UV-Diode Asetonitril: Su:

Dup941 array Trifloroasetik asit PC, SL, LS 125

2-Hidroksi-asetofen-on,
Salisilaldehid- İsonikotinoilhidrazon, 2-
izonikotinoil- Fosfat tamponu: Metanol hidroksi-propiofenon
hidrazon LC–ESI-MS (40:60) Isonicot inoilhidrazon 126

Trinitrotoluen GC-MS Nitrojen gazı 2,4-dinitrotoluen 127

ESI/MS
Norethisterone deteksiyon MeOH:H2O 19-Norandrostenedione 128

(53:47)
20-N-delizin-20-N-
glutamin, 20-N-delizin-
Kapreomisin LC-MS ACN ve formik asit 36-N-lizin 129

HPLC-
DAD/UV-
Lumefantrin ESI/MS H2O :ACN Desbenzilketo türevi 130

LC/DAD ACN:0.015M KH2PO4

Mikofenolat
Mofetil LC/MS/MS (28:72 h/h) Mikofenolik asit 131

Konsantre Amonyum
Folkodin LC-ESI-MS çözeltisi ve ACN Folkodin A, B, C 132

Crysolactone,
alletrolone, krizantemik
D-alletrin GC-FID/MS Helyum asit 133

Gradient Sistem
A – sulu Amonyum
format çözeltisi B -
Saksagliptin LC-ESI-MS/MS Metanol 7 safsızlık 134

HPLC - Su: Metanol:

Asetonitril (40:20:40) MS
Ritonavir LC-MS/MS - Azot gazı 8 safsızlık 135

HPLC - Metanol ve Su
Toremifen LC-MS/MS (85:15) MS - Azot gazı 4 safsızlık 136
2.4 Stabilite Göstergeli Analitik Metot (SIM)

Bir stabilite gösterheli metot (SIM), bozunma nedeniyle ilaç ürünündeki aktif farmasötik
bileşen (API) miktarındaki azalmayı ölçmek için kullanılan analitik bir prosedürdür. Bir FDA
klavuz dokümanına göre, stabilite göstergeli metot, ilaç maddelerinin ve ilaç ürünlerinin
stabilitesinin zamanla nasıl değiştiğini saptamak için kullanılabilen onaylanmış bir kantitatif
analitik prosedürdür. Stabilite göstergeli metot, diğer bozunma ürünlerinden, safsızlıklardan
ve yardımcı maddelerden etkilenmeden aktif bileşen konsantrasyonundaki değişiklikleri
doğru bir şekilde ölçer. Potansiyel degradasyon ürünü hakkında çok az bilgi olduğunda ilaç
maddesinin konsantrasyonundaki değişiklikleri ölçmek için geliştirilen yöntemin özgüllüğünü
göstermek için stres testi yapılır. Uygun bir stabilite göstergeli yönteminin geliştirilmesi, ön
formülasyon çalışmaları, stabilite çalışmaları ve uygun depolama gereksinimlerinin
geliştirilmesi için bir arka plan sağlar. RP-HPLC, safsızlıkları ayırmak ve ölçmek için en
yaygın kullanılan analitik bir araçtır ve en sık UV dedektörü ile birleştirilir. [40]

Stabilite götergeli metotta yer alan adımlar örnek oluşturma, yöntem geliştirme ve
optimizasyon, yöntem validasyonunu içerir. Ayrıca, aşağıdaki amaçlarla yürütülen
degredasyon çalışmalarının yürüütlmesini de içerir; [40]
-Stabilite götergeli analitik yöntemi geliştirmek ve geçerli kılmak
- İlaç maddesi ve ilaç ürünlerinin bozunma yollarını oluşturmak
-İlaç maddesi veya yardımcı maddeler ile ilgili safsızlıkları izole etmek ve tanımlamak
-İlaç molekülünün kimyasını anlamak
- ICH klavuzuna göre degradasyon profili oluşturmak ve
- Kararlılıkla ilgili problemleri çözmek

2.4.1 Stabilite Göstergeli Analitik Metot Geliştirme Adımları

Yasal gereklilikleri karşılayan HPLC'de SIM geliştirilmesine yönelik adımlar aşağıdadır.

2.4.1.1 Örnek oluşturma

SIM için numune üretmek için, API hızlandırılmış bozunma koşullarından daha şiddetli
koşullarda zorla bozunur. Daha önce tartışıldığı gibi, ilacın hidrolitik, oksidatif, fotolitik ve
termal koşullarda bozulmasını içerir. Katı haldeki ve çözelti formundaki API'nın zorla
bozunması, gerçekçi depolama koşullarında oluşması muhtemel bozunma ürünlerinin
üretilmesi amacıyla gerçekleştirilir. Bu örnek daha sonra bir SIM geliştirmek için kullanılır.
[40]
2.4.1.2 Yöntem geliştirme ve optimizasyon
Yöntem geliştirmeye başlamadan önce, ilacın pKa değeri, log P, çözünürlüğü ve maksimum
emilimi gibi çeşitli fizyokimyasal özelliklerin bilinmesi gerekir, çünkü HPLC yönteminin
geliştirilmesi için bir temel oluşturur. Log P ve çözünürlük, mobil faz ve örnek çözücünün
seçilmesine yardımcı olurken, pKa değeri mobil fazın pH'ının belirlenmesine yardımcı olur.  

Ters faz kolonu, bozundurma sulu çözelti içinde gerçekleştirildiğinden numune bileşenlerinin
ayrılmasını başlatmak için tercih edilen bir seçenektir. Metanol , su ve asetonitril , ayrılmanın
ilk aşamaları için çeşitli oranlarda hareketli faz olarak kullanılabilir. Organik faz için metanol
ve asetonitril arasındaki seçim, analitin çözünürlüğüne dayanmaktadır. Başlangıçta su:
organik faz oranı 50: 50'de tutulabilir ve piklerin iyi bir şekilde ayrılması için denemeler
devam ederken uygun modifikasyonlar yapılabilir. Daha iyi tepe ayrımı ve tepe simetrisi elde
edilmesi gerekiyorsa, ikinci tampon ilave edilebilir. Yöntem sıvı kromatografi-kütle
spektrometrisine (LC-MS) genişletilecekse, mobil faz tamponu triflouroasetik asit ve
amonyum format gibi MS uyumlu olmalıdır. Kolon sıcaklığındaki değişiklik, analitler
sıcaklık değişikliklerine farklı tepki verdiği için yöntemin seçiciliğini etkiler.  İyi
tekrarlanabilirlik elde etmek için 30-40° C aralığındaki bir kolon sıcaklığı uygundur. Tüm
bozunma ürünlerinin ayrılmasıyla sonuçlandığı için ilaç pikini kromatogramda daha ileri
itmek daha iyidir. Ayrıca ilaç pikinden sonra yeterli bir çalışma süresi, ilaç pikinden sonra
kolonu terk edecek olan degredasyon ürünlerinin elde etmesine izin verir. [40]

Metot geliştirme sırasında ilaç pikinin, ilaçla birlikte elüte edilen bir safsızlık veya
degredasyon ürünü pikini gizleyebileceği görülebilir. Bu, yöntemin spesifikliğini ve
seçiciliğini belirleyen pik saflık analizi gerektirir. Doğrudan analiz, foto diyot dizisi (PDA)
tespiti kullanılarak çevrimiçi olarak yapılabilir. PDA, spektral pikin homojenliği hakkında
bilgi sağlar, ancak ilaca benzer UV spektrumuna sahip bozucular için geçerli değildir. Dolaylı
yöntem, pik faz ayrılmasını etkileyecek olan mobil faz oranı, kolon, vb. kromatografik
koşullarda değişimi içerir. Değiştirilmiş kromatografik durum spektrumu daha sonra orijinal
spektrumlarla karşılaştırılır. Degradant pikler ve ilaç pikinin alan yüzdesi aynı kalırsa, ilaç
pikinin homojen olduğu doğrulanabilir. Hızlandırılmış ve uzun süreli saklama koşullarında
oluştuğu tespit edilmezse, ilaçla birlikte elute edilen degredasyon ürünü kabul edilebilir
olacaktır. Yöntem daha sonra akış hızını, enjeksiyon hacmini, kolon tipini ve mobil faz
oranını değiştirerek birbirlerine oldukça yakın elüte edilen piklerin ayrılması için optimize
edilir. [40]
2.4.1.3 Yöntem Valide Edilmesi
Geliştirilen SIM daha sonra yöntemin doğrusallığı, doğruluğu, hassasiyeti, özgüllüğü, nicelik
limiti, saptama limiti, sağlamlığı USP / ICH kılavuzuna göre doğrulanır. Tanımlama eşiğinin
(genellikle % 0.1) üzerinde olduğu tespit edilen bozunma ürünlerinin izole edilmesi,
tanımlanması ve nicelendirilmesi gerekmektedir. Eğer yöntem validasyon için kabul kriterleri
içinde değilse, metot değiştirilir ve yeniden doğrulanır.

2.4.2 Stabilite Göstergeli Metot Geliştirmek İçin Diğer Analitik Yöntemler

Stabilite göstergeli yöntemler, potens, saflık ve biyolojik aktivite ile karakterize
edilecektir. Testlerin seçimi ürüne özeldir. Kararlılık gösteren yöntemler, elektroforez (SDS-
PAGE, immünoelektroforez , Western blot , izoelektrofokusif), yüksek çözünürlüklü
kromatografi (örn., Ters faz kromatografisi, SEC, jel filtrasyonu, iyon değişimi ve afinite
kromatografisi) ve peptit haritalama gibi çeşitli yöntemleri içerebilir. Analitik yöntemin
seçimi, düşük seviyelerde (yani, ilgilenilen analitin% 0.05'i veya daha düşük) safsızlıkları
tespit edecek kadar duyarlı olmalı ve pik cevapları dedektörün lineer aralığında
olmalıdır. Analitik yöntem, ICH eşik sınırlarında veya altında resmi bir stabilite çalışması
sırasında oluşan tüm safsızlıkları yakalayabilmelidir. Bozunma ürününün tanımlanması ve
karakterizasyonu, ICH gerekliliklerine uygun olarak formal kararlılık sonuçlarına dayanarak
gerçekleştirilecektir. Geleneksel yöntemler (örn. Kolon kromatografisi) veya hypenated
teknikler (ör. LC -MS, LC-nükleer manyetik rezonans (NMR)), bozunma ürünlerinin
tanımlanması ve karakterizasyonu için kullanılabilir. Bu tekniklerin
kullanılması, genotoksisite için potansiyel yapısal uyarıların bilgi alanına katkıda
bulunabilecek safsızlıkların yapısına ve bu tür safsızlıkların daha sıkı sınırlarla kontrol
edilmesine daha iyi bir bakış sağlayabilir. Formal raf ömrü stabilite çalışmaları sırasında ve
nitel eşik sınırının üzerinde oluşan safsızlıklar için bozunma ürünlerinin yapısal
karakterizasyonunun gerekli olduğuna dikkat edilmelidir. [40]

Sürekli geliştirilen yeni analitik teknolojiler, stabilite göstergeli yöntem geliştirmenin uygun
olduğu durumlarda da kullanılabilir. İlaç maddelerinin ve ilaç ürününün analizi, farmasötik
gelişimi, stres çalışmaları ve formal stabilite çalışmaları sırasında gözlemlenen bilinmeyen
safsızlık, ters faz yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC), ince tabaka
kromatografisi (TLC), gaz kromatografisi (GC), kılcal elektroforez(CE), kılcal elektroforez
kromatografisi (CEC) ve süper kritik sıvı kromatografisi (SFC) gibi çeşitli kromatografik
teknikler kullanılarak ayrılabilir ve analiz edilebilir. Degredasyon ürünleri saf biçimde izole
edilemediğinde, HPLC-fotodiyot dizisi ultraviyole dedektörü (DAD), LC – MS, LC-NMR ve
GC – MS gibi hypenated kromatografik ve spektroskopik tekniklerinin mükemmel bir
kombinasyonu kullanılır. HPLC-DAD ve LC-MS, bağıl alıkonma zamanları (RRT), UV
spektrumları, kütle spektrumlarını (MS / MS veya MSN) karşılaştırmak için kullanılır. [40]

[33] S. Ahuja, Impurities Evaluation of Pharmaceutical, Marcel Dekker Inc.,New

York, 1998

[34] S. Gorog, Identification and Determination of Impurities in Drugs, Elsevier,

Amsterdam, 2000.

[35] S. Ahuja, K. Alsante, Handbook Of Isolation And Characterization Of

Impurities In Pharmaceuticals, Academic, San Diego, CA, 2003.

[36] S. R. Shah, M. A. Patel, M. V. Naik, P.K. Pradhan, and U.M. Upadhyay,

Recent Approches Of “Impurity Profiling” In Pharmaceutical Analysis: A
Review., IJPSR, vol. 3, no.10, 2012; pp. 3603-3617

[37] A. Ayre, D. Varpe, R. Nayak, N. Vasa, Impurity profiling of Pharmaceuticals.

Advance Research in Pharmaceutical and Biologicals, vol.1, no. 2, 2011, pp.
76-90.

[38] ICH Topic Q3 A (1995)“Impurities Testing Guideline: Impurities in New Drug

Substances”, The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products
Human Medicines Evaluation Unit.

[39] R.S. Deshmukh, Impurity Profile in Pharmaceutical Substances- A

Comprehensive: A Review, International Journal of Pharmacy and Biological
Sciences, vol. 1, no. 4, 2011, pp. 382-392.

[40] K. Pilaniya, H. K. Chandrawanshi, U. Pilaniya, P. Manchandani, P. Jain, and

N. Singh, Recent trends in the impurity profile of pharmaceuticals, Journal of
Advanced Pharm. Technol. Res., vol.1, no. 3, 2010, pp. 302–310.

[41] P.Venkatesan, K.Valliappan, Impurity Profiling: Theory and Practice, J.

Pharm. Sci. And Res., vol. 6, no.7, 2014, pp. 254-259.

[42] G. Ngwa, Forced degradation studies as an integral part of HPLC stability

indicating method development, Drug Deliv. Technol., vol. 10, no. 5, 2010, pp.
56-59.

[43] S. Singh, M. Bakshi, Guidance on Conduct of Stress Tests to Determine

Inherent Stability of Drugs, pharma. tech., vol. 4, 2000, pp. 1-14, 2000.
[44] J. Roy, Pharmaceutical Impurities- A Mini-Review, AAPS PharmSciTech, vol.
3,no. 2, 2002, pp. 1-8.

[45] S. Klick, P. Muijselaar, J. Waterval, J. C. Waterval, T. Eichinger, Toward a

Generic Approach for Stress Testing of Drug Substances and Drug Product,
pharma. tech., vol. 29, 2005, pp. 48-66,

[46] S. Ahuja, Assuring quality of drugs by monitoring impurities, Adv. Drug

Del.,vol. 59, 2007, pp. 3-11.

[47] N. Rahman, S. Azmi, H. Wu, The importance of impurity analysis in

pharmaceutical products: an integrated approach, Accreditation and Quality
Assurance, vol. 11, 2006, pp. 69-74.

[48] D. Jacobson-Kram, T. McGovern, Toxicological overview of impurities in

pharmaceutical products, Adv. Drug. Deliv. Rev., vol. 59, 2007, pp. 38-42.

[49] J. Kovaleski, B. Kraut, A. Mattiuz, M. Giangiulio, G. Brobst, W. Cagno, P.

Kulkarni, T. Rauch, Impurities in generic pharmaceutical development,
Advanced Drug Delivery Reviews, vol. 59, no. 1, 2007, pp. 56-63.

[50] S. Bari, B. Kadam, Y. Jaiswal, A. Shirkhedkar, Impurity profile: Significance

in Active Pharmaceutical Ingredient, Eurasian Journal Of Analytical
Chemistry, vol. 2, no. 1, 2007, pp. 32- 53.

[51] K. R. Dhangar, R. B. Jagtap, S. J. Surana and A. A. Shirkhedkar, Review

Article Impurity Profiling of Drugs towards Safety and Efficacy: Theory and
Practice, J. Chil. Chem. Soc, vol. 62, no. 2, 2017, pp. 3543-3557.

[52] H. Hatakka, H. Alatalo, M. Louhi-Kultanen, I. Lassila, E. Haeggström Closed-

Loop Control of Reactive Crystallization PART II: Polymorphism Control of
L-Glutamic Acid by Sonocrystallization and Seeding, Chemical Enginnering
Technology, vol. 33 no. 5, 2010, pp. 751-756.

[53] H. Hatakka, H. M. Alatalo, M. Louhi-Kultanen, J. Kohonen, Closed-Loop

Control of Reactive Crystallization. Part I: Supersaturation-Controlled
Crystallization of L-Glutamic Acid, Chemical Engineering & Technology, vol.
33, no. 5, 2010, pp. 743-750.
[54] D. Robinson, Control of Genotoxic Impurities in Active Pharmaceutical
Ingredients: A Review and Perspective, Org. process res. Dev, vol. 14, no. 4,
2010, pp. 946-959.

[55] A. Ayre, D. Varpe, R. Nayak, N. Vasa, Focused on guidelines given by ICH

and sources of impurities, Adv. Res. Pharm. Bio, vol.1, , 2011,pp. 6-90.

[56] S. Pawale, S. Saley, S, D. Mundhada, S. Tilloo, Focused on qualification of

impurities, J. Chem. pharma. res, vol. 1, 2012, pp. 227-1237.

[57] R. Singh, Z. Rehman, Mechanism of formation and characterization of

generated impurities during development J. Pharma. Edu. Res, vol. 3, 2012, pp.
54-64.

[58] M. Blessy, R. Patel, P. Prajapati, Y. Agrawal, Forced degradation and stability

of drug, J. Pharma. Anal, vol. 3,2014, pp. 159-165.

[59] S. Kumar, P. Kumar, A. Ajitha, R. Reddy, R. Maheshwar, inter. J. pharma. res.

anal, 47-57, 2014.

[60] P.Venkatesan, K.Valliappan, Aspects related to the analytical method

development for impurity profiling, J. Pharm. Sci. & Res, vol. 6, no. 7, 2014
pp. 254-258.

[61] Y. Jiang, X.I. Jun-Ping, Y.A. Jian-Hong, Z.F. ZHANG, H.U. Chang-Qin, Z.R.
Zhang, Guidelines and strategies of the international conference on
harmonization (ICH) and its member states to overcome existing impurity
control problem for antibiotics in china, Chinese journal of natural medicines,
vol. 13, no. 7, 2015, pp. 498-506.

[62] S. Zaza, S.M. Lucini, F. Sciascia, V. Ferrone, R. Cifelli, G. Carlucci, M.

Locatelli, Recent advances in the separation and determination of impurities in
pharmaceutical products Instrumentation Science & Technology, vol. 43, no.
2,2015, pp. 182-196.

[63] V. Desfontaine, D. Guillarme, E. Francotte and L. Nováková, Super critical

fluid chromatography in pharmaceutical analysis, Journal of pharmaceutical
and biomedical analysis, vol. 113, 2015, pp. 56-71.
[64] P.P. Patil, V.S. Kasture, Quality guidelines and applications of impurity
profiling for pharmaceutical, International Journal of Pharmaceutical
Chemistry, vol. 5, no. 1, 2015, pp. 1-10.

[65] B. Ramanchandran, Development of Impurity Profiling Methods using Modern

Analytical Techniques, Critical Review in Analytical Chemistry, 2016, pp. 24-
36.

[66] A. C. Kogawa, R.N. Herida, Impurities and forced degradation studies: A

Review, Current Pharmaceutical Analysis, vol.12, no. 1, 2016, pp. 18- 24.

[67] S. V. Saibaba, M. SatishKumar and B. Ram, Pharmaceutical Impurities and

their Characterization: A Review, European Journal of Pharmaceutical and
Medical Research, vol. 3, no. 5, 2016.

[68] R. Solank, Impurity profiling of Active Pharmaceutical Ingredients and

Finished drug products was recently reviewed and emphasis has been given on
the comparison of the regulatory requirements of different countries,
International Journal of Drug Research and Technology, vol. 2,no. 3, 2017, pp.
231-238.

[69] P.Venkatesan et al, Impurity Profiling: Theory and Practice, J. Pharm. Sci. And
Res. vol. 6, no.7, 2014, pp. 254-255.

[70] K. R. Dhangar, R. B. Jagtap, S. J. Surana and A. A. Shirkhedkar, Impurity

Profiling of Drugs towards Safety and Efficacy: Theory and Practice, J. Chil.
Chem. Soc., vol. 62, no.2, 2017, pp. 3543-3557.

[71] Shah et al, Recent Approches Of “Impurity Profiling” In Pharmaceutical

Analysis: A Review, IJPSR, vol. 3, no.10, 2012,pp. 3603-3617.

[72] M. Blessy, R. Patel, P. Prajapati, Y. Agrawal, Development of forced

degradation and stability indicating studies of drugs—A review J. Pharma.
Anal, vol. 4, no. 3, 2014, pp.159-165.

[73] M. Nisha, M. Ismail, R. Ismail, F. Duncan, L. Maili, K. N. Jeremy and C. L.

John, Impurity profiling in bulk pharmaceutical batches using 19F NMR
spectroscopy and distinction between monomeric and dimeric impurities by
NMR-based diffusion measurements. J. Pharm. Biomed Anal., vol.19, 2019,
pp. 511-518.
[74] M. Shou, W. Galinada, Y. Wei, Q. Tang, R. Markovich, A. Rustum,
Development and validation of a stability-indicating HPLC method for
simultaneous determination of salicylic acid, betamethasone dipropionate and
their related compounds in Diprosalic Lotion, J.Pharm. Biomed Ana, vol. 50,
2009, pp. 356-361.

[75] A. Kumar, V. Ganesh, D. Rao, et al. A validated reversed phase HPLC method
for the determination of process-related impurities in almotriptan malateAPI. J.
Pharma. Biomed. Ana, vol. 46, 2008, pp. 792-798.

[76] Y. Zhou, W. Zhou, L. Sun, Q. Zou, P. Wei, P. OuYang, Characterization of

process-related impurities including forced degradation products of alogliptin
benzoate and the development of the corresponding reversed-phase high-
performance liquid chromatography methodJ. Sep. Sci., vol. 37,no. 11, 2014,
pp. 1248-1255.

[77] P. Gavin, B. Olsen, A quality by design approach to impurity method

development for atomoxetine hydrochloride, J. Pharma. Biomed. Anal, vol. 46,
no. 3, 2008, pp. 431-441.

[78] A. Kadav, D. Vora, Stability indicating UPLC method for simultaneous

determination of atorvastatin, fenofibrate and their degradation products in
tablets, J.Pharm. Biomed. Ana, vol. 48, no. 1, 2008, pp. 120-126.

[79] L. Gupta, Spectroscopic characterization and quantitative determination of

atorvastatin calcium impurities by novel HPLC method, Spectrochim. Acta
Part A: Molec. Biomol. Spectr, vol. 97, 2012, pp. 495-501.

[80] S. Ertürk, E. Aktaş, L. Ersoy, S. Fıçıcıoğlu, An HPLC method for the

determination of atorvastatin and its impurities in bulk drug and tablets, J.
Pharm. Biomed. Ana, vol. 33, no. 5, 2003, pp. 1017-1023.

[81] P. Zhu, W. Yang, L. Hong, et al, Characterization of a novel process-related

impurity in commercial bendazac lysine eye drops by LC-ESI-QTOF/MS/MS
and NMR., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, vol. 107,2015,
pp. 437-443.

[82] K. Gadapayale, R. Kakde, V. Sarma, Validation of a High-Performance Liquid

Chromatography Method for the Assay of and Determination of Related
Organic Impurities in bosentan, J. é Sep. Sci, vol. 38, 2015, pp. 218-230.
[83] D. Tippa, N. Singh, Cefotaxime sodium for injection reconstitution stability
study in intravenous and intramuscular diluents, Pelagia Research Library, D.
Pharm. Sin, vol. 1, no.2, 2010, pp. 113-121,

[84] A. Mohan, M. Hariharan, E. Vikraman, G. Subbaiah, B. Venkataraman, D.

Saravanan, Identification and characterization of a principal oxidation impurity
in clopidogrel drug substance and drug product, J. Pharma. Biomed. Ana, vol.
47, 2008, pp. 183-189.

[85] A. Darcsi, G. Tóth, J. Kökösi, S. Bni, Structure elucidation of a process-related

impurity of dapoxetine, J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 96, 2014, pp. 272-277.

[86] A. Gaona-Galdos, P. García, M. Aurora-Prado, M. Santoro, E. Kedor-

Hackmann, Simultaneous determination of econazole nitrate, main impurities
and preservatives in cream formulation by high performance liquid
chromatography, Talanta, vol. 77, , 2008, pp. 673-678.

[87] K. Gadapayale, R. Kakde, V. Sarma, Sarma, Reversedphase liquid

chromatography with electrospray mass detection and 1H and 13C NMR
characterization of new process-related impurities, including forced degradants
of Efavirenz: Related substances correlated to the synthetic pathway J. é Sep.
Sci, vol. 38, 2015, pp. 218-230.

[88] P. Sajonz, Y. Wu, T. Natishan, N. McGachy, D. DeTora, Challenges in the

Analytical Method Development and Validation for an Unstable Active
Pharmaceutical Ingredient, J. Chrom. Sci, vol. 44, , 2006, pp. 132-140.

[89] S. Guntupalli, U. Ray, N. Murali, et al, Identification, isolation and

characterization of process related impurities in ezetimibe, J. Pharm. Biomed.
Ana, vol. 88, , 2014, pp. 385-390.

[90] D. Zhang, X. Song, J. Su, Isolation, identification and characterization of novel

process-related impurities in Flupirtine maleate, J. Pharma. Biomed. Ana, vol.
90, , 2014, pp. 27-34.

[91] P. Kalafut, R. Kučera, J. Klimeš, J. Sochor, An innovative approach to the

analysis of 3-[4-(2-methylpropyl)phenyl]propanoicacid as an impurity of
ibuprofen on a carbon-coated zirconia stationary phase, J. Pharma. Biomed.
Ana, vol. 49, , 2009, pp. 1150-1156.
[92] P. Novak, P. Tepeš, M. Ilijaš, et al. Rapid LC-NMR and LC-MS
Characterization of an Unknown Component in a Novel Antifungal Drug
Icofungipen. J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 50, , 2009, pp. 68-72.

[93] N. Goswami, A validated stability-indicating liquid chromatographic method

for determination of process related impurities and degradation behavior of
Irbesartan in solid oral dosage, J. Adv. Pharm. Tech. Res, vol. 5, no. 1, 2014,
pp. 33.-40.

[94] U. Holzgrabe, C. Nap, S. Almeling, Control of impurities in L-aspartic acid

and L-alanine by high-performance liquid chromatography coupled with a
corona charged aerosol detector, J. Chromatogr. A, vol. 1217, 2010, pp. 294-
301.

[95] F. Qiu, D. Cobice, S. Pennino, M. Becher, D.Norwood, Identification of Drug

Meglumine Interaction Products Using LC/MS and Forced Degradation
Studies J. Liq. Chrom. Rel.Tech., vol. 31, 2008, pp. 2331-2336.

[96] Q. Li, T. Tougas, K. Cohen, et al, Validation of a high-performance liquid

chromatography method for the assay of and determination of related organic
impurities in nevirapine drug substance, J. Chrom. Sci, vol. 38, , 2000, pp.
246-254.

[97] N. Pai, S. Sawant, Development and validation of new RP-HPLC method for
determining impurity profiling in olmesartan medoxomil drug as well as in
tablet dosage formDer. Pharma. Chem., vol. 54, 2013, pp. 274-281.

[98] P. Sun, X. Wang, L. Alquier, C. Maryanoff, Determination of relative response

factors of impurities in paclitaxel with high performance liquid
chromatography equipped with ultraviolet and charged aerosol detectors,
Journal of Chromatography A, vol.117,2008, pp. 87-91.

[99] R. Rao, P. Maurya, A. Raju, Isolation and characterization of a potential

process related impurity of phenazopyridine HCl by preparative HPLC
followed by MS-MS and 2D-NMR spectroscopy, J. Pharma. Biomed. Ana, vol.
4, 2009, pp.1287-1291.

[100] R. M. Bianchini, P. Castellano, T. Kaufman, Development and validation of an

HPLC method for the determination of process-related impurities in pridinol
 mesylate, employing experimental designsAnalyt. Chim. Act, vol. 654, , 2009,
pp. 141-147.

[101] D. Zhang, X. Song, J. Su, Isolation, identification and structure elucidation of

two novel process-related impurities of retigabine, J. Pharma. Biomed. Ana,
vol. 99, , 2014, pp. 22-27.

[102] T. Raj, C. Bharathi, M. Kumar, et al. Identification, isolation and

characterization of process-related impurities in Rizatriptan benzoate, J.
Pharma. Biomed. Ana, vol. 49, , 2009, pp. 156-162.

[103] B. Jancic-Stojanovic, A. Malenovic, D. Ivanovic, T. Rakic, M. Medenica,

Chemometrical evaluation of ropinirole and its impurity's chromatographic
behavior, J. chromatogr. A, vol. 1216, , 2009, pp. 1263-1269.

[104] S. Sait, G. Vasudevmurthy, M. Natarajan, V. Prasad, S. Reddy, Impurities

profiling method and degradation studies for Sumatriptan succinate in
Sumatriptan succinate and Naproxen sodium tablets, J. Chem. Pharma. Res,
vol. 4, no. 6, 2012, pp. 3263-3274

[105] M. Łaszcz, M. Kubiszewski, L. Jedynak, et al, Identification and

Physicochemical Characteristics of Temozolomide Process-Related Impurities,
Molecules, vol. 18, no. 12, 2013, pp. 15344-15356.

[106] T. Raju, R. Seshadri, S. Arutla, T. Mohan, I. Rao, S. Nittala, Development and

Validation of a Precise, Single HPLC Method for the Determination of
Tolperisone Impurities in API and Pharmaceutical Dosage Forms, Sci. Pharma,
vol. 81,no. 1, 2013, pp. 123-138.

[107] B. Sivakumar, R. Murugan, A. Baskaran, B. Khadangale, S. Murugan, U.

Senthilkumar, Identification and Characterization of Process-Related
Impurities of Trans-Resveratrol, Sci. Pharm., vol. 81, no. 3, 2013, pp. 683-
696.

[108] G. Lehr, T. Barry, G. Petzinger, G. Hanna, S. Zito, Isolation and identification

of process impurities in trimethoprim drug substance by highperformance
liquid chromatography, atmospheric pressure chemical ionization liquid
chromatography/mass spectrometry and nuclear magnetic resonance
spectroscopy J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 19, 1999, pp. 373-38.
[109] B. Satheesh, K. Ganesh, D. Saravanan, Identification, Isolation and
Characterization of an Unknown Impurity of Varenicline, Sci. Pharmac., vol.
80, no. 2, 2012, pp. 329-336.

[110] Pharmacopoeia, B. British Pharmacopoeia Commission Secretariat, part of the

Medicines and Healthcare products Regulatory Agency, 2014.

[111] Pharmacopoeia, I. Ghaziabad: Indian Pharmacopoeial Commission. Govt. of

India-Ministry of Health and Family Welfare, 1948, 2014.

[112] Pharmacopeia, U.S. US Pharmacopeial convention, Asian edition, 12601 Twin

brook, Rockville, MD 20852, 32, 39, 2014.

[113] H. Inoue,Y. Iwata, K. Kuwayama, Identification and Physicochemical

Characteristics of MethamphetamineProcess-Related Impurities, J. Hea. Sci.,
vol. 54, 2008, pp. 615-620.

[114] P. Horvath, G. Balogh, J. Brlik, et al. Estimation of impurity profiles of drugs

and related materials Part 16: Identification of the side-products of the
ethinylation step in the synthesis of contraceptive gestogens, J. Pharma.
Biomed. Ana, vol. 15, no. 9-10, 1997, pp. 1343-1349.

[115] M. Wedig, N. Novatchev, T. Worch, S. Laug, U. Holzgrabe, Evaluation of the

impurity profile of alcuronium by means of capillary electrophoresis J.Pharma.
Biomed. Ana, vol. 28, 2002, pp. 983-990.

[116] C. Flurer, Electrophoresis, Analysis of antibiotics by capillary electrophoresis,

vol. 24, 2003, pp. 4116-4127.

[117] G. Penalvo, E. Julien, H. Fabre, Cross validation of capillary electrophoresis

and high-performance liquid chromatography for cefotaxime and related
impurities Chromatographia, vol. 42, 1996, pp. 159-164

[118] P. Emaldi, S. Fapanni, A. Baldini, Validation of a capillary electrophoresis

method for the determination of cephradine and its related impurities J. Chrom
A, vol. 711, 1995, pp. 339-346.

[119] M. Hilhorst, G. Somsen, G. De Jong, Choice of capillary electrophoresis

systems for the impurity profiling of drugs, J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 16,
no.7, 1998, pp. 1251-1260.
[120] S. Ahuja, M. Jimidar, Capillary electrophoresis methods for pharmaceutical
analysis, Elsevier, 2011.

[121] C. Flurer, Electrophesis, Analysis of antibiotics by capillary electrophoresis,

vol. 22, no. 19, 2001, pp. 4249-4261.

[122] Z. Fu, L. Wang, Y. Wang, Capillary electrophoresis-electrochemiluminescent

detection of N,N-dimethyl ethanolamine and its application in impurity
profiling and stability investigation of meclophenoxate. Anal. Chim. Act, vol.
638, no. 2, 2009, pp. 220-224.

[123] Y. Li, A. Van Schepdael, E. Roets, J. Hoogmartens, Capillary zone

electrophoresis of minocycline J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 14, 1996, pp.
1095-1099.

[124] M. Khan, S. Sinha, M. Todkar, V. Parashar, K. Reddy, U. Kulkarni, Validated

HPLC-UV method for simultaneous estimation of Deferasirox and its
impurities Int. J. Pharm, vol. 2, 2011, pp. 128-134.

[125] E. Nicolas, T. Scholz, Active drug substance impurity profiling: Part II.
LC/MS/MS fingerprinting J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 16, 1998, pp. 825-
836.

[126] P. Kovaříková, K. Vávrová, K., Tomalová, et al., HPLC-DAD and MS/MS

analysis of novel drug candidates from the group of aromatic hydrazones
revealing the presence of geometric isomers, J. Pharma. Biomed. Ana, vol. 48,
2008, pp. 295-302.

[127] F. Qiu, D. Norwod, Identification of Pharmaceutical Impurities, J. Liq.

Chroma.Rel.Techn, vol. 30, no. 5-8, 2007, pp. 877-935.

[128] C. Walker, D. Cowan, V. James, J. Lau, A. Kicman, Doping in sport—2.

Quantification of the impurity 19-norandrostenedione in pharmaceutical
preparations of norethisterone, Steroids, vol. 74, no. 3, 2009, pp. 335-340.

[129] S. Chopra, M. Pendela, J. Hoogmartens, A. Van Schepdael, E. Adams,

Impurity profiling of capreomycin using dual liquid chromatography coupled
to mass spectrometry, Talanta, vol. 100, 2012, pp. 113-122

[130] Pharmacopoeia, B. British Pharmacopoeia Commission Secretariat, part of the

Medicines and Healthcare products Regulatory Agency, 2014.
[131] A. Protić, L. Zivanovic, M. Radišić, M. Lušević, Impurity profiling of
mycophenolate mofetil with the assistance of desirability function in method
development, J. Liq. Chrom. Rel. Techn, vol. 34, no. 12, 2011, pp. 1014-1035.

[132] O. Denk, G. Skellern, D. Watson, Impurity profiling of pholcodine by liquid

chromatography electrospray ionization mass spectrometry (LCESI-MS), J.
Pharm. Pharmcol, vol. 54, 2002, pp. 87-98.

[133] M. Bragieri, A. Liverani, M. Zanotti, et al, GCFID/MS method for the impurity
profiling of synthetic d-allethrin J. Sep. Sci. , vol. 27, 2004, pp. 89-95.

[134] L. Sridhar, P. Goutami, D. Darshan, K. Ramakrishna, R. Rao, S. Prabhakar,

LC-ESIMS/MS studies on saxagliptin and its forced degradation products
Anal. Methods, vol. 6, 2014, pp. 8212-8221.

[135] R. Rao, B. Ramachandra, R. Vali, S. Raju, LC–MS/MS studies of ritonavir and

its forced degradation products, J. Pharm. Biomed. Ana, vol. 53, 2010, pp. 833-
842.

[136] G. Bansal, P. Maddhesia, Y. Bansal, MS2/TOF and LC-MS/TOF studies on

toremifene to characterize its forced degradation products, Analyst, vol. 136,
2011, pp. 5218-5228.