Professional Documents
Culture Documents
TCVN13263-5 2020 919019
TCVN13263-5 2020 919019
TCVN 13263-5:2020
Xuat bàn Ian 1
PHÂN BÓN -
PHÁN 5: XÁC **!NH HÀM LV@NG NHÓM AUXIN
BÁNG PHV@NG PHÁP SÁC K"É LÓNG HI§U NÁNG CAO
Ferti//zers - Pan 5: Dstermindtion of auxin group content by high pe/Yormarlce liquid
cfiromafographic mefhod
HÀ Nal - 2020
TCVH 13263-5 : 2020
Phân bón — Phan 5: Xác d!^h hàm lazing nhóm auxin bâng
phu›ong pháp sac kÿ lèng hięu năng cao
Fe/fi/izers — Pad 5: Oe/erminafion of auxin group content by high performance liquid
chromatographic method
1 Phąm vi áp dung
Tièu churn này quy Penh phizong pháp xác Minh hàm Iu'png chit diáu hòa sinh tru'õng nhóm auxin thee
vat: indoIe-3-axetic acid (IAA), indole-3-butyric acid (IBA), indole-3-propionic acid (IPA), indoIe-3-
carboxyI¡c acid (ICA) vã auxin ting hop: Naphthalene axetic acid (NAA), Haphthoxy axetic acid (NOA),
Sodium-5-Nitroguaiacolate, Sodium-O-NitrophenoIate, Sodium-P-NitrophenoIate trong phân bón bàng
såc ky Iông hiğu nàng cao (HPLC).
Thông tin giôi thițu hogt chát nhóm auxin xem Phv Ivc A.
Các tài liğu vięn dån sau Iâ rát sån thiát cho iêc ép dung tièu chuån này. Ovi vôi càc tãi lieu vițn dán
ghi nàm công bó thì áp dyng phiên bán huge néu. Bgi vói tài lieu viyn dån không ghi mm còng bó thì
áp dung phién bàn md nhåt, bao góm că cźc sù'a dói {náu có).
TCVN 4851 (ISO 369ô), Nuóc dùng 6é ph8n tlch trong phbng Chi nghiğm — Yëu cåu kÿ thuğt vä
phuong phăp łhtr
TCVN 10683.2015, Phân bón run - Phuang pháp chuan b¡ mău de « dinh các chl ãfiu hóa hgc vä vat
3 Nguyên tae
Cãc auxin I/ong phân bón dupe chiét báng metanol. Sau dó huge xãc djnh báng prong pháp sác kÿ long
hi4u nàng cao (HPLC), sù ding cğt pha duo vói detector tú' ngaąi (DAD, MWD, PDF... h@c tUong
düong). Các chit dupe nhțn biêt dna vão thòi gian lou và au9c xác &tnh bàng pŁuong pháp
duóng
TCVN 132t3-5 : 2020
4 Thuoc thu
Chl sč' dqng các thuóc Iżič' tîr›h khiát phán tich, nuó'c dùrg trong qué trinh phtn tich det loai 3 cùa TCVN
4851 (ISO 3696) hațc có 6ğ Dnh khigt tu'ong üoong, æu üày ggi Ià nu'ôc.
4.1 Chat chuan indołe-3-axetic acid (IAA), 6ă biát hàm lupng, dupe criúnp nhàn.
4.2Chat churn indoIe-3-butyńc acid (IBA), dâ biêt hàm Iwg'ng, dopc chú’ng nhțn.
4.3Chat chuan indoIe-3-propionic acid (IPA), dă biát hàm Iu'png. d e• chùng nhțn.
4.4Chat chuan indoIe-3-carboxylic acid (ICA), õã biÁt ham lupng, õu’pc Wúng nhán.
4.5Chát chuan Naphthalene axetic acid (NAV), dâ biÁt hám lugng, üu'pc chú'ng nhân.
4.6CŁiåt chuan Naphthoxy axetic acid (NOA), dä biét hâm luqng, dope chúng nhțn.
Dùng pipet {5.3) Ivy g ml axit axetic bãng (4.12) cho vào etc dung tich 1000 ml (5.1) c6 chú'a sgn 992
ml nu'óc cát. Siêu ám 10 min, dá nguği dgn nhi4t óğ phòrig.
4.14.1 Dung dțch chuán géc IAA, nòng dğ khoăng 1000 ppm
Dùng cãn phân tich (5.7) cãn khoáng 0,01 g chát chuån IAA {4.1), chlnh xác din 0,00001 g vâo bình
óinh múc dung tich 10 ml (5.2), hoã tan v Huh mú'c din vąch bÈng metanol (4.11), siéu âm łrong 5
min, dÈ nguôi Mán nhițt dğ phông.
4.14.2 Dung dich chuÂn goc IBA, ning õğ khoång 100 ppm
6
TCVN 13263-5 : 2020
Dùng cán phán tich (5.7) căn khoàng 0,01 g chat chuan IBA (4.2), chinh xác ten 0,00001 g vào binh
üinh mú’C dung tich 100 ml (5.2), hoá tan vś dinh mú’c den vach bäng metanol (4.11), siéu àm trong 5
mm, gê hguği din nhiçt dğ phông.
4.14.3 Dung dich chuän g6c IPA, ning dğ khoång 1000 ppm
Dúng cãn phân tích (5.7) cån khoáng 0,01 g chåt chuan IPA (4.3), chinh xác den 0,00001 g Rao binh
dinh mú'c dung tech 10 ml (5.2), hoà tan và dinh mú’c üén vych bang metanol (4.11), siêu ãm trong 5
min, dé nguói din nhiíșt dğ phòng.
4.14.4 Dung d(ch chuan goc ICA, ning õğ khoàng 500 ppm
Dùng can phân tích (5.7) cån khoàng 0,01 p chåt chuån ICA (4.4), chinh xác Mán 0.00001 g vào bình
Minh mú'c dung tích 20 mí (5.2), hoã tan vã Minh mú’c üen vach bang metanol (4.11), siêu åm wrong 5
min, dé ngugi den nhiet g4 phóng.
4.14.5 Dung dich chuan goc NAA, nong dğ khoång 1000 mg/I
Dùng cân phân tich (5.7) cån khoàng 0 01 g chit chum NAA (4.5), chinh xác din 0.00001 g vào binh
!nh mú'c dung tich 10 ml (5.2), hoà tan và dinh mú'c den vąch bang metanol (4.1 J), siêu âm trong 5
min, üe nguęi din nhiğt dț phông.
4.14.6 Dung dich chuan gôc NOA, nòng dô khoång 1000 ppm
Dùng cãn phân tích (5.7) can khoàng 0,01 g chát chuan NOA (4.6), chinh xác üen 0,00001 g vao binh
dinh múc dung tích 10 ml (5.2), hoã tan và di.nh mú’c den vąch bång metanol (4.11), siêu ãm trong 5
min, de nguôi üÁn nhiğt gğ phòng.
4.14.7 Dung d|ch chuån gÓc sodium-5-NitroguaiacoIate, ning do khoàng 500 ppm
Dùng cån phân tîch (5.7) can khoâng 0,01 g chit chuan sodium-5-Nłtroguiaicolate (4.7), chinh xác dèn
0,00001 g vào binh !nh mù’c dung tich 20 ml (5.2), hca tan và 8¡nh mú'c din vąch bàng metanol
(4.11), siéu âm trong 5 min, dá nguòi din nhițt dğ phông.
4.14.8 Dung dich chuán góc sodium-O-NitrophenoIate, nòng dô khoáng 500 ppm
Dùng cãn phãn tech (5.7) càn khoáng 0,01 g chit chum sodium-0-NitrophenoIate (4.8), chinh xãc dèn
0,00001 g vào binh dtnh mùc dung rich 20 ml (5.2), hoś tan và Minh múc den vach bang metanol
(4.11), sièu âm trong 5 min, üá nguği gin nhițt õğ phòng.
7
4.14.9 Dung dlch chuan góc sodium-P-NItrophenoIate, nòng 4ğ khoáng 1000 ppm
Dùng càn phán tich (5.7) can khoång 0,01 g chit chu4n sodium-P-NitrophenoIate (4.9), chinh xãc din
0,00O01 g vào binh Minh múc dung tfch 10 ml (5.2), hoà tan và 8jnh mú'c ten vąch bang metanol
(4.11), siéu ãm thong 5 min, dé nguği din nhięt dğ phóng.
4.15.1 Oung d¡ich chuan hin hpp trung gian IAA, IBA, IPA, ICA
Dùng pipet (5.3) táy chinh xác 2 ml các dung dich chuan góc L4A (4.14.1), DBA (4.1t.2), lP/\ (4.14.3),
ICA (4.14,4) vào binh Minh múc dung tích 20 ml, hoà tan và Minh rnùc Mén vąch bàng rnetanol (4.11),lac
deu, Nông dò căc dung dich chuan trung gian IAA, IBA, IPA, ICA üu'o'c the hien trong báng 1.
Bång 1: Nong do tu'ong õái các dung d!ch chuan trung gian IDA, IBA, IPA, ICA
Dung d|ch chuân goc Pipet (ml) Binh óinh mp, ml Nong dg tu’ong doi (ppm)
IAA 2 100
IBA 2 10
20
IPA 2 100
ICA 2 50
4.15 ,2 Dung dich chuan han hę'p trung gian NAA, NOA, sodium-5-NitrogualacoIate, sodium-
O- Nitrophenolate, sodium-P-Nitrophenolate
Oùng pìpet (5.3) Ivy chinh xác 2 ml các dung dich chuan góc NAA (4.14.5), NOA (4.14.6), sodium-
5- Nitroguaiacolate (4.14.7), sodium-0-Nitrophenolate (4.14.8), sodium-P-NitrophenoIate (4.14.9) vào
binh
!nh múc dung tech 20 ml, hoâ tan vã dinh mč'c den vąch bâng metanol (4.11), lac õéu. Nông gğ các
dung d¡ch Chuan trung gian NAA, NOA, sodium-5-Nitroguaiacolate, sodium-0-Nitrophenolate, sodium- P-
NitrophenoIate du’g'c the hiçn trong bàng 2.
Báng 2' Hong üğ t\zo'ng doi các dung dich chuan trung gian NAA, NOA, sodium-5-MitroguaiacoIate,
sodium-O-Nitrophenałate, sodium-P-NitrophenoIate
Dung dich chum góc Pİpet (ml) Binh dinh mú'c, ml Ning dô tvong Bói (ppm)
NAA 2 100
NOA 2 100
sodium-5-NitroguaiacoIate 2 20 50
sodium-O-Nitrophenolate 2 50
sodium-P-NitrophenoIate 2 100
TCVN 13263-5 : 2020
4.16.1 Dáy dung d!Ch chuan Tàrn vięc IAA, IBA, IPA, ICA
Dùng pipet (5.3) Iáy chinh xác 0,5, 1, 2; 5; 8 ml dung d¡ch chuan trung gian IAA, IBA, IPA, ICA (4.15.1)
văo IånlœŒ6binh nh mrcdung tch 10ml,Ónh múcdenvpch băng methanol(4 11,I4cdâu. Mông
óo cãc dung dich chum Iãm vice IAA, IBA, IPA, ICA õu'gc the hięn trong bång 3.
Bàng 3' Ning dğ tu’ ng dòi các dung dich chuan Iàm vi9c IAA, IBA, IPA, MCA
4.16.2 Dãy dung djch chuan làm viec NAA, NOA, Sodium-5-NitroguaiacoIate, sodium-O-
Nitrophenolate, sodium-P•Nitrophenolate
Dúng pipet (5.3) lày chinh xác 0,5; 1; 2; 5, 8 ml dung dich chum trung gian NAA, NOA, sodium-5-
Nitroguaiacolate, sodium-O-Nitrophenola\e. sodium-P-Nitrophenolate (4.15.2) vśo Iàn lu'çrt 5 bình dinh
mú‘c dung tích 10 ml, Ònh múc din vąch bàng nu'óc, lac õeu. Ning dğ các dung dich chum Iàm viec
NAA, NOA, sodium-5-Nitroguaiacolate, sodium-O-NitrophenoIate, sodium-P-Nitrophenofate üu'g'c the
hièn trong báng 4.
Bàng 4: Ning üo tu’ong doi các dung di«h chuan Iàm viec NAA, NOA, sodium-5-NitroguaiacoIate,
sodium-0-NitrophenoIate, sodium-P-Nitrophenolate
1) Dung dich chuåm üu'ç/c I\tu giù trong binh lvi mãu vè bão quãn met łù 2 ‘C Own 4 °C
9
2) Dung dich chum góc năn sù dung hang vóng m0t tłidng kÈ lù' khi pha, dung d|ch chum łãm vigc nčn dúng ngay sau khi phs
4) Néu sú dung căn ca a0 chinh xtc 0,00g1 gram Ihl lupng cm cúa chuån vâ måu phsi tãng łèn 10 Iàn
Sù dUng các thiát bi, dvng cq thóng thu'dng cúa phông thú‘ nghiem cv thè nhu' sau:
5.1 Coc thuy tinh. dung tich 50 ml, 100 ml; 1000 ml.
5.2 Bình d! Ł'ïh mú’c, dung tich 10 ml; 20 ml; 50 mi; 100 ml.
5.3 Pipet chia vąch, dung tich 0,5 mT; 1 ml; 2 ml; 5 mî; 10 ml.
5.4 Xyranh bo'm måu, dung tlcã 50 ç, chia vąch dén 1 yl. hoăc born måu (\r õong
5.6 Be siêu ãm, tân so siéu am tù' 40 kHz din 100 kHz
5.9 Mźy do pH, khoàng do pH: tù 0,0 Min 14,0, dğ phán giài: 0,1 pH
5.10Coi nghien mau, bang sú' hoac vât lięu tu'ong du’ong
5.11Thiet b{ loc
Dùng du'pc cho màng Igc dung mõi du'òng kính 13 mm, õu'ông kính lÕ 0,45 ym õê Igc pha dğng cùa
CHÚ TŁłlCH 2: Łęc pha dung qua mârig lțc bu'óc khl dúng dê kśe dái lhòi gian sù dynp cúa cțL
5.12Thiet bsl sae kÿ lòng hiğu nãng cao, du'gc trang b| nhu' sau:
- Cğt RP C18, dái 250 mm, du'òng kính 4,6 mm, cõ hąt pha tînh 5 km hoàc loci tu’ong du'ong;
- Cğt Chifalpak IG, dài 150 mm, dvõng kTnh 4,6 mm, cõ hat pha tînh 5 ym hoãc Ioai tu'ong õu'ong'
- Bğ born måu tș gğng hoțc bo'm m5u bang tay.
OFì Y ’Eli måu phån bón thizòng. Iáy mau theo TCVN 9486 : 2018. O6i vôi m4u phãn bón vi sinh, Iáy mŽu
theo TCVN 12105 : 2018
6.2Chuan bj mau
Nghiên mäu bàng cii sú' hoçc v?t lięu tuo'ng du'ong vã tron lai. Ctn thqc him các bięn pháp
nhu' Iśm fąnh so' bö tru'ôc kh! nghièn mau de tránh mau b¡ tiep xúc vói nhiğt õğ cao trong thõi
gian dái.
- Chum b| mau trong diÂu kiğn tránh tic tiep ánh sáng mğt tròi
Mâu dąng Iônp, dąng huyen phù thì phåi lac dòng nhát tru'ôc khi sàn,
Cźc diêu ki4n van hành sác kÿ sau dây dugc cho Ià thích hgp:
Cğt phàn tich: Cğt RP C18, dài 250 mm, duóng kình 4,6 mm, cõ hąt pha tinh 5 pm hoac loai
tu’ong du'ong
Bu'ôc sóng:
280 nm
Tóc õo dòng:
1 ml/min
The tích born mau: 20 II
?.2.2 Oieu kiğn phãn tech nhom IAA, NOA, sodium-5-HìtroguiaicoIate, Sodium-O-
Nitropherionate, sodium-P•Nitrophenolate
Ty ig pha dong:
0 35 65
1 35 6ô
4 g5
7 5 95
70 30
16 70 30
18 35 65
Cğł phán tich: Cğt Chiratpak IG, dài 150 mm, õ\zòng kính 4.6 mm, có' hot pea łins 5 gm hoțc
loąi tu'crng du'ong
Bu'ôc song:
254 nm
Nhițt üo bu ng cöt: 25 0C
Dùng õu'ông chum cúa tù'ng chat (tu’ong quan giú'a dien tich pic và nong dğ chat chum) cúa hoat
chat tąi 5 diâm co nÒng õğ two’ng úng dung dich chum làm vięc (4.16).
Dùng xyranh (5,4) born 1 dung dich chuan co nông õö thap nhåt trong dăy dung d!ch Chuan łàm vięc
(4. J6) cho õen khi sá do dięn tich cúa pic chum thay d6i không Ió'n how 3 °/ . Sau dô, born Ibn hoot các
dung d!Ch chuan łàm viêc (4.16) nòng dö tù tháp din cao và dung d|ch máu thč' (7.1). Néu nông d4 cúa
måu thù' nåm ngoái üu'òng chuän the &iêu chinh bang căch pha loáng dung dlch mäu thú' bang metanol
(4.11).
Ham Iu’gng cùa ting loąi auxin trong mau, X„ bieu thi bang miligam trèn kitogam (mg/kg), du'gc tinh
theo công łhùc 1:
Hám Iu'ong auxin ting só trong máu 1a ting ham hong càc loąi auxin ducrc qui dinh trong muc 1, X,
bieu thj bang miligam trén kilogam (mg/kg), d ęc tinh theo công thúc 2:
trong dô!
la lã nÔng dğ cúa cãc chat auxìn trong måu tinh theo üuòng chuan, tfnh Eng miligam kên lit (mg/I);
Két quà thù nghiğm thu 8uoc, låy hai chú’ só sau dáu phay.
a) mgi thông tin cm thiát ve vițc nhțn biÉt diy õú mÁu thń';
d) mqi thao Iác khóng dcc quy dinh trong tièu chuan này, hoãc nhú'ng dieu 8ogc coi là to ch9n, và
bat ky chi tilt nào có ành hu'ông tói ket quå;
PhulycA
{Thamkhà»)
OH
Oo hôa tan: Không tan trong nuòc; tan trong ethanol: 50 mg/ml
OH
NH
15
TCVIJ 13263-5 : 2020
17
A.5 Giôi thlęu hoąt chát 1-naphtfiaIeneacetic acid (NAA)
Cüng thùc cáu tąo:
D
- Nhi9t dğ nông chày' US C
- Dó hôa tan: Tan txt trong alcohol, ether, axelic acid vå dimethyl sulfoxide. It tan trong nvòc
20
A.8 Gió'i thiğu hoat chát Sodium-0-NItrophenoIate
Công thč’c cáu tąo:
• Hiçu suit thu h$I cúa phu'ong phźp: tù' 80 e/ dśn 110 °ó.
- IAA: 50 mg/kg
- IBA: 20 mg/kg
- IPA: 50 mg/kg
- ICA: 50 mg/kg
- NAV: 50 mg/kg
- NOA: 50 mgAg
- Sodium-5-NitroguiaicoIate: 50 mg/kg
- Sodium-O-NitroguiaicoIate: 50 mgAg
- Sodium-P-Nitroguiaicolate: 50 mg/kg
23
Phd lyc B
(Tham kfiáo)
10 15
TCVX 13263-5 : 2020
25