Frågor på biokemisk metodik (beräkningsuppgifter)

1. Hur mycket pyruvat skall jag väga upp för att göra 15 mL 5 mM pyruvatlösning.
Molvikten för pyruvat är 110 g/mol.
0,015 x 5 x 10-3 x 110 g = 8.25 10-3 g = 8,25 mg.

2. Beräkna mängden NADH Du skall väga upp för att tillverka 40 ml 5 mM NADH-
lösning. Preparationen visar sig innehålla 1,5 mol vatten per mol NADH.
Molvikten för NADH är 660 g/mol. Renheten på NADH-preparationen är 97%.
Svar: Antal mol N= 0,040 x 5 . 10-3 = 0,2 mmol. Molvikt 660 + 1,5x18 = 687
g/mol. Den är ej helt ren – dvs om du väger 1 gram finns bara 0,97 g NADH.
Därför måste man väga in lite mera. Och hur mycket skall man väga upp? Jo,
0,2mmol x 687g /0,97 = 0,142 gram, dvs 142 mg

3. Beräkna hur mycket isättika Du skall mäta upp för att göra 800 ml 0,1 M
acetatbuffert, pH 4,8. Isättika har molvikten 60,0 g/mol. Den är en vätska med
densiteten 1,050 g/ml.
Mät upp – alltså volymen skall anges. 0,8 x 0,1 mol= 0,08 mol ättiksyra. Molvikt
60 g/ml ger 0,08 x 60 g = 4,8 gram. 1 ml väger 1.050 gram, 4,8 gram är således
4,57 mL

4. Du skall tillverka en 0,1 M fosfatbuffert, pH 7,0. Denna buffert skall vara 0,25 M
map NaCl. Hur förfar Du för att tillverka denna buffert?
Det finns lite olika sätt att tillverka en buffert. Om det finns stamlösningar av
NaH2PO4 och Na2HPO4 så kan man göra enligt metoden som är beskriven i fråga
18. Om det inte finns kan man väga upp 0,1 x 120 x 1 =12,0 g NaH2PO4 och lösa i
ca 800 mL vatten. pH ställs med NaOH (1 M) till 7,0. Sedan vägs önskad mängd
NaCl upp; 0,25 x 58,44 x1 = 14,6 gram. Blanda buffert och salt och späd så att
slutvolymen blir 1,00 L (mätkolv).

5. Du skall tillverka 50 ml 0,1 M pyruvatlösning. Hur mycket pyruvat skall Du väga

upp om dess molmassa är 110 g/mol och preparationen är 96 % ren?
Se fråga 2 ovan. Svaret är 0,57 gram

6. Du skall göra en enzymlösning med 50 U/ml. Du väger upp enzymet från en

preparation somhar koncentrationen 5000 U/mg. Hur mycket substans skall Du
väga in?
1 mg innehåller 5000 U. Du behöver 50 U för att göra 1 ml enzymlösning. 50 U
finns i 0,01 mg (50 U x 1mg /5000 U). Alltså skall du väga = 0,01 mg.

7. Du har l ml av en stamlösning som är 0,5 M. Du skall göra 4 ml av en lösning,

som är 0,05 M. Hur förfar Du?
Du skall ju späda lösningen 10x. Och du behöver minst 4 mL. Då tar du 400 uL
av stamlösningen och tillsätter 3,60 mL vatten – du får 4,0 mL och du har då en
konc av 0,05 M

8. Du skall späda 5 ml 0,8 M NaCl 4 gånger. Hur förfar Du och vad blir slutkonc.?
Om du späder 5 mL 4 ggr skall slutvolymen bli 5x4 = 20 mL. Din lösning blir då
4 ggr svagare, dvs 0,2 M.

1
9. Du tar 30 l lösning och späder den 100 gånger. Hur gör Du?
Slutvolym: 30 l x 100 = 3000 l blir sluvolymen. Alltså skall du tillsätta 2970
l av vatten/buffert.

10. Hur mycket väger 1 ml destvatten? Hur mycket väger 550 µl destvatten? Hur
mycket väger 550 µl isättika (se 2 ovan).
Om vi gör det lätt för oss och säger att det är 4oC så väger 1 mL vatten 1,0 gram.
550 l väger då 0,55 gram. 550 l isättika väger 0,550 x 1,050 gram, dvs 0,5775
gram.

11. Vi skall göra 3 L fysiologisk koksaltlösning som är 0,9% NaCl. Hur mycket salt
skall vägas upp?
0,9% = 9 g/L. Du tar alltså 3 x 9 = 27 g

12. Vi skall späda en 3M NaCl-lösning så att vi får 2 liter 0,15 M NaCl. Hur mycket
skall vi ta av den koncentrerade saltlösningen?
För att göra en 0,15 M lösning från en 3 M lösning skall vi späda 20 ggr. För att
göra 2 L 0,15 M så skall vi därför ta 100 ml 3 M lösning.

13. Vilket pH har en 0,0025 M HCl-lösning?

HCl dissocierar helt därför blir [H+] = 0,0025; pH = - log [H+] = -log0,0025 = 2,6

14. Vad menas med en syras pKa värde?

pKa är ett mått på hur stark en syra är. Det är jämviktskonstanten för syra-bas
reaktionen.

15. Varför ändras inte protonkoncentrationen = pH när man tillsätter ex lite NaOH till
en buffert?
Bufferten har en viss kapacitet att ta omhand om H+- eller OH—joner utan att pH
ändras.

16. Beskriv hur du gör 250 ml 25 mM Tris-HCl buffert pH 8.0, 5 mM MgCl2.

Till ditt förfogande har du Tris (s), FW: 121,14 g/mol
MgCl2 · 6H2O, FW: 95,2 (anhydr.)
1M NaOH, 1M HCl, pH-meter, omrörare, och glasutensilier.

Bestäm massan Tris: n = c ∙ V; m=M ∙ n; n = 0,76 gr (0,025mol/l ∙ 0,25 l ∙121,14 g/mol)

Bestäm massan MgCl2: m = 1,27 g (0,25 l ∙ 0,005 mol/l ∙ (95,2 + 6 ∙ 18) = 0.25 g)
Lös 0,76 gr Tris i ca 200 ml H2O i 300 ml bägare.
Kalibrera pH-meter, justera pH mha 1 M HCl till nära 8,0 (ca 8,2) tillsätt och lös 0,25 g
MgCl2 · 6H2O, tillsätt H2O till nära 250 ml, justera pH till 8,0 överför till mätkolv (helst)
eller mätcylinder, justera volymen till 250 ml. Kontrollera slutligen att pH stämmer.

Kommentar:
Tris (hydroxymethyl)aminomethane)-buffertar skiljer sig från andra buffertar
genom att de bereds genom att man tar Tris (kallas också Tris base eftersom det
är en primär amin) och ställer pH med HCl och man får då en ”Tris-HCl-
buffert”. Det kan vara värt att notera att jonstyrkan hos en Trisbuffert (av en viss

2
 koncentration) kommer att variera beroende på pH, eftersom en större mängd
HCl måste tillsättas för att få ett lågt pH. Detta kan i regel försummas, men kan
vara bra at ha i åtanke om man jämför försök vid olika pH i en Tris-buffert.

17. Du ska tillverka 1000 ml av en 0,1 M natrium-fosfatbuffert pH 7,4 innehållande

0,5 M NaCl. Du har tillgång till en kalibrerad pH-meter och nedanstående
kemikalier. Beskriv utförligt hur du går tillväga.

Du har tillgång till följande kemikalier:

1 liter 0,4 M Na2HPO4

400 ml 0,4 M NaH2PO4
NaCl: 58,44 g/mol
2 M HCl
3 M NaOH

Då önskat pH är över pKa, tas ca 200 ml av 0,4 M stamlösningen av Na2HPO4 och

0,4 M NaH2PO4 adderas tills pH = 7,5 (volymen måste bli över 250 ml). pH mäts
mha kalibrerad pH-meter. För att få rätt koncentration så ska lösning spädas med
vatten. Ta 250 ml av den pH-justerade lösningen (om större mängd gjordes vid
pH-justeringen så får detta slängas). Till detta adderas 29,2 gram NaCl (n= c ∙V;
m = M ∙ n) och volymen justeras till 1 L genom tillsats av vatten. Detta blandas
tills saltet löst sig. NaCl innehåller inga protoner och ska inte påverka pH. pH bör
inte heller påverkas av att lösningen späds från 0,4 M till 0,1 M. För säkerhets
skull kan man dock kontrollera pH på den färdiga lösningen är rätt.