TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG Bài 6: Điểm

KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHỬ THEO PHƯƠNG
BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HÓA SINH PHÁP 3,5-
1.Trần Ái Ngân(618H0041) – N5 DINITROSALISYLIC(DNS)
2.Ngô Phương Thanh(618H0197) – N5 Ngày TN: 20/09/2019

Nội dung bài báo cáo gồm:

I. Nguyên tắc:
-Phương pháp dựa trên cơ sở phản ứng tạo màu giữa đường khử với thuốc thử acid
-3,5dinitrosalicylic (DNS). Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với nồng
độ đường khử trong phạm vi nhất định. Dựa theo đồ thị chuẩn của glucose tinh khiết
với thuốc thử DNS sẽ tính được hàm lượng đường khử của mẫu nghiên cứu.
II. Tiến hành:
 Trích đường:
-Cân 10g thơm, nghiền cẩn thận, cho vào một becher và thêm vào 20 mL cồn 96°. Đun
cách thủy cho sôi 3 lần, khuấy đều. Để nguội, gạn phần cồn lọc qua giấy, chừa lại phần
bã. Sau đó lại cho thêm 10 mL cồn 80° vào cốc đựng bã, khuấy đều, đun cách thủy cho
sôi 2 lần, lọc giống như trên, rửa bã 2 – 3 lần bằng cồn 80° nóng ( rửa từng ít một). Dồn
tất cả những phàn cồn thu được rồi cho bay hơi ở nhiệt độ phòng hoặc chưng cách thủy.
-Sau đó thêm vào khoảng 40 mL nước cất và 2 – 3 giọt đỏ methyl, trung hòa bằng dung
dịch NaOH 0,1N (hoặc KOH) tới khi dung dịch trung tính hoặc hơi kiềm (dung dịch xuất
hiện màu vàng nhạt). Chuyển toàn bộ vào bình định mức 100mL, thêm nước cất đến
vạch. Dung dịch này được gọi là dung dịch nghiên cứu (dung dịch đường chưa biết nồng
độ)
 Dựng đường chuẩn:
-Vì các sản phẩm của quá trình thuỷ phân trong dịch nha (dung dịch trích đường) chủ yếu
là đường maltose, glucose, fructose nên có thể sử dụng dung dịch chuẩn là cả ba loại
đường kể trên với tỷ lệ khác nhau tuỳ thuộc tỷ lệ chúng trong dịch nha. Trong thí nghiệm
này chúng ta chọn dung dịch đường glucose làm dung dịch đường chuẩn.
- Pha dung dịch chuẩn glucose với 4 loại nồng độ 0,5; 1; 1,5 và 2 g/L. Chuẩn bị dãy các
ống nghiệm sau:
 Ống DD đường DD đường DD đường DD đường DD đường DNS
nghiệm 0g/L 0.5g/L 1g/L 1.5g/L 2g/L
1 1 ml 1 ml
2 1 ml 1 ml
3 1 ml 1 ml
4 1 ml 1 ml
5 1 ml 1 ml
Đậy kín ống nghiệm và đun sôi cách thủy 5 phút
Làm nguội nhanh về nhiệt độ phòng
Thêm 10 mL nước cất, lắc đều đến khi không còn phân lớp
- Đem tất cả các ống nghiệm đi đo độ hấp thu ở bước sóng 540 nm
- Chuẩn bị ống nghiệm kiểm chứng (thay dung dịch trích đường bằng nước cất)
- Lập đường chuẩn A=f(C).Với trục tung là giá trị OD (mật độ quang) đo được và trục
hoành là nồng độ chất chuẩn (Glucose)

1.2
1.05
1 f(x) = 0.52 x − 0.02
R² = 1
0.8 0.75
Delta OD

0.6 0.5

0.4
0.24
0.2
0
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Glucose (g/L)

OD of sample (wine) : ODX=0.675

y=∆ ODX= ODX – OD0= 0.675 – 0.024 = 0.651
y = ax + b = 0.5228x - 0.0154
 x = (0.651 + 0.0154) / 0.5228=1.27
 Sugar in wine : (1,27 × 100) / 10 = 12.7 (g/g)