INTRODUCCION

Las técnicas microbiológicas en el sector de los alimentos están dirigidas con mayor
frecuencia a la detección de microorganismos indicadores de la posible presencia de
patógenos o alterantes, los métodos convencionales de detección de microorganismos como
la técnica del NMP, filtración por membrana, siembra en profundidad o vertido en placa,
requieren en primer lugar que el microorganismo objeto del análisis firme una colonia en
un medio de cultivo lo cual implica su preparación, esterilización de material, mano de obra
suficiente, periodos de incubación relativamente largos, el empleo de cultivos de
enriquecimiento o de recuperación y se debe disponer de equipos necesarios como
incubadoras y neveras

Puesto que los procedimientos tradicionales son laboriosos y requieren de mucho tiempo,
para evitarlo se han desarrollado numerosas técnicas de recuento rápido y efectivo en las
cuales se busca utilizar el menor número de procedimientos y ensayos posibles. Como las
técnicas de recuento en placa como Petrifilm, Ridacount, Simplate, medios cromogénicos y
fluorogénicos y dipslides.

(Poveda Sanchez & Alonso, 2008)

OBJETIVOS

 Llevar a cabo el método de conteo por placa utilizando el programa ImagenJ

 Realizar un cultivo de MO Siguiendo las debidas instrucciones evitando factores
que causen efectos negativos en la practica
 Adquirir conocimientos referentes a realizar y analizar un cultivo de MO
MARCO TEORICO

En la industria de alimentos, varios métodos y técnicas tienen como guía el codex

alimentarius, el cual es una recopilación de códigos, normas y directrices, siendo el
organismo internacional más relevante en normas de alimentos. Este es subsidiario de la
Organización Mundial de la Salud (OMS); adopta las normas, directrices y códigos de
comportamiento recomendados por este organismo. Estas recomendaciones, son para el
etiquetado, empleo de aditivos, sistemas de inspección y certificación de alimentos.

Asi mismo en esta industria, se emplean métodos tradicionales que han sido estandarizados
por la ISO, con el objetivo de brindar fiabilidad en los análisis y que estos sean aceptados a
nivel internacional para la obtención de resultados equivalentes en los diferentes
laboratorios, por lo cual los métodos tradicionales son considerados como referentes ya que
permiten cuantificar, detectar, o identificar el tipo de microorganismos presentes, con el fin
de facilitar el monitoreo en algunos procesos, como la elaboración de alimentos y bebidas.
Sin embargo, estos métodos requieren de otras pruebas para la confirmación de un análisis
y en ocasiones la interpretación del resultado obtenido es dificil, lo que impide que sean
utilizados por la administración de control oficial de alimentos. Por tal razón, se ha iniciado
la implementación de técnicas fluorimetricas, inmunológicas, cléctricas y colorimétricas,
para la detección y cuantificación microbiológica en alimentos ya que son rápidas y pueden
ser utilizadas en varias fases del proceso de elaboración de un alimento .Una de las técnicas
que cumple con las caracteristicas descritas anteriormente, es la filtración por membrana
utilizando como producto el petrifilm, que se utiliza para monitorear la población
microbiológica en el procesamiento de alimentos y los productos finales. Al mismo tiempo,
se emplea la microscopia de epifluorescencia para detectar y cuantificar bacterias viables en
superficies de supermercados, en los procesos de limpieza y desinfección, lo que permite
realizar correcciones inmediatas a este tipo de programas, previrtiendo así la contaminación
cruzada entre las superficies y los productos alimenticios

( Acosta Diaz & Leguizamo González, 2020)

MATERIALES

 Paquete de fundas ziploc grande

 Agua destilada 1 lts
 Guantes
 Mechero
 Jeringas de 5 ml (4 unidades)
 Muestrario de orina estéril (3 unidades)
 Marcador

PROCEDIMIENTO:

Preparación de la muestra

1. De cada proyecto se tomará 15 gramos y se colocaran en una funda Ziploc grande.

Se le adicionara 250 ml de agua destilada y se cierra herméticamente.

Ilustración 1

2. Con las manos se procederá a remover la muestra sumergida en el agua durante 5

min descasamos 5 min y nuevamente hasta completar 25 min.

Ilustración 2
3. Con la ayuda de una jeringa de 5 ml tomaremos una muestra del líquido que se
mezcló en la funda ziploc

Ilustración 3

4. En un recoge muestras de orina estéril colocaremos 1ml de la muestra y 9 ml de

agua destilada. Realizando la primera dilución 10-1

Ilustración 4
5. Luego de esa dilución (10-1) tomaremos con otra jeringa 1 ml y añadiremos 9 ml de
agua obteniendo la dilución 10-2

Ilustración 5

6. Luego de esa dilución (10-2) tomaremos con otra jeringa 1 ml y añadiremos 9 ml de

agua obteniendo la dilución 10-3

Ilustración 6

7. Coloque la placa petrifilm en una superficie plana

Ilustración 7
8. En forma perpendicular a la placa petrifilm coloque 1mL de la disolución de la
muestra en el centro de la película cuadriculada inferior

Ilustración 8

9. Baje la película superior dejándola caer sobre la muestra

Ilustración 9

10. Con el lado liso hacia abajo colocar el dispersor en la película superior sobre el
inoculo

Ilustración 10
11. Presione suavemente el dispersor para distribuir el inoculo sobre el área circular

Ilustración 11

12. Levante el dispersor y esperar al menos un minuto hasta que el gel se solidifique

Ilustración 12

13. Incubar las placas con la cara arriba, puede ser necesario humectar el ambiente
donde se incubará.

Ilustración 13
 14. Las placas petrifil pueden ser leídas con luz indirecta en un contador de colonias
estándar o una fuente de luz con aumento

Ilustración 14

RESULTADOS

RECOMENDACIONES

 Se recomienda usar protecciones, como guantes, mascarillas y gafas para evitar que
organismos no deseados ingresen en la muestra
 No deslizar la película por ningún motivo, o esto perjudicara el resultado final de la
muestra
 Se recomienda que el ambiente dentro de la incubadora se mantenga humectado,
preferiblemente usar agua estéril para ello
 Mantener una composición química estable e iniciar el cultivo con una actividad de
agua optima que permita un crecimiento adecuado de MO
CONCLUSIONES

En un balance general se puede decir que dependiendo del tipo de microorganismo que se
vaya a cultivar, se debe investigar acerca de cuál método presenta mejores características
para un recuento sin tanto margen de error, que sea de manera fácil y económica.

Se pudo determinar que un buen seguimiento del instructivo, da como resultado un

experimento exitoso

De acuerdo a los resultados obtenidos se pudo cuantificar la cantidad de microorganismos

de acuerdo a su color, como sabemos cuándo existe una concentración alta de bacterias,
hongos o levaduras se realizan disoluciones con la finalidad de disminuir el número de
bacterias presentes que consiste en llevar a cabo diluciones de 1:10 y entenderlas a 0,1 mL
por placa

BIBLIOGRAFIA

Acosta Diaz, A., & Leguizamo González, E. J. (23 de Noviembre de 2020).

repository.javeriana.edu.co. Obtenido de https://n9.cl/0zpgi

Poveda Sanchez, A., & Alonso, X. (09 de Diciembre de 2008). repository.javeriana.

Recuperado el 01 de Marzo de 2022, de
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/8238/tesis230.pdf

ANEXOS