QÜESTIONARI

DETERMINACIÓ DE LA ACTIVITAT PIRUVAT QUINASA DE

MÚSCUL I FETGE DE RATA.

1. La mesura de l’activitat de la piruvat quinasa de múscul i fetge de rata es

realitza per espectrofotometria a 340 nm. Raonar la presència de tots els
components presents a les barreges de reacció. Descriure les reaccions que hi
tenen lloc.

2. Representació de les gràfiques en les que s’obtenen les activitats PK de

múscul i fetge a les concentracions determinades pel teu grup de pràctiques.
Representar les velocitats en unitats d’absorbància a 340 nm/min.mL de barreja
de reacció

Entenem per activitat com la relació absorbància vs temps.

FETGE

activitat fetge
1.5
1.45
1.4
1.35
Abs (0,5)
absorbància

1.3
Linear (Abs (0,5))
1.25
Abs (0,2)
1.2
Linear (Abs (0,2))
1.15
1.1
1.05
1
10 20 30 40 50 60 70
temps (s)

1
MÚSCUL

activitat múscul
1
0.98
0.96
0.94 Abs (0,4)
0.92 Linear (Abs (0,4))
0.9
Abs (0,3)
Linear (Abs (0,3))
0.88
0.86
0.84
0.82
0.8
10 20 30 40 50 60 70

3. Determinació dels paràmetres cinètics (KM i Vm) de l’enzim PK de múscul,

indicant les taules [PEP] vs v (nmol NADH/minut.mL de barreja de reacció),
posant en comú totes les velocitats obtingudes per tots els grups. El coeficient
d’extinció molar del NADH a 340 nm és de 6,2.103 M-1·cm-1.

2
4. Estimació de la S0.5, de la Vmax i del coeficient de Hill (h) de la PK de fetge
amb la corba obtinguda posant en comú totes les velocitats obtingudes per tots
els grups.

Hem estimat la Vmax posant una velocitat lleugerament superior a la velocitat més alta
observada (0’000463), i un valor de K0,5 proper a la concentració de PEP a la que la
velocitat seria la meitat, 0’5.

El coeficient de Hill no varia del valor inicial que li vam posar al principi, 1. Pensem que
això és degut a la nostra SSR inicial, 2’76*10^(-08), ja és suficientment mínima, i per
això el sistema no necesita modificar la ‘’h’’.

5.00E-04
4.50E-04
4.00E-04
3.50E-04
velocitat (mM/s)

3.00E-04
2.50E-04
2.00E-04 Vel exp (mM/s)
Vfit vs [PEP]
1.50E-04
1.00E-04
5.00E-05
0.00E+00
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
concentració de PEP (mM)

3
DETERMINACIÓ DE LA CONCENTRACIÓ DE PROTEÏNA PER UN
MÈTODE COLORIMÈTRIC.

5. Representar la recta de regressió a partir de les mostres de proteïna patró i

estimar la concentració de proteïna als homogenats de fetge i múscul. Fer la
representació gràfica. Es segueix una relació lineal? Per què?

6. Expressar el nombre d’Unitats de PK per mg de proteïna presents en els

extractes de múscul i de fetge de rata. Expressar també les Unitats per g de teixit
fresc.