Laboratorio 2:

Cinética enzimática
MSc. Jorge Trevejo Pinedo

11 de marzo de 2022

Instrucciones: A partir del problema resuelto, resuelvan los

problemas propuestos de forma grupal.

Problema resuelto
Un químico midió la velocidad inicial de la reacción cataliza-
da por enzima en ausencia y en presencia de un inhibidor A,
y en un procedimiento separado, inhibidor B. En cada caso,
la concentración del ihibidor fue de 8,0 mM (8,0 × 10−3 M). Se
obtuvieron los siguientes datos:
v0 /(M/s) v0 /(M/s) v0 /(M/s)
[S]/ M Sin inhibidor Inhibidor A Inhibidor B
5,0 × 10−4 1,25 × 10−6 5,8 × 10−7 3,8 × 10−7
1,0 × 10−3 2,0 × 10−6 1,04 × 10−6 6,3 × 10−7
2,5 × 10−3 3,13 × 10−6 2,00 × 10−6 1,00 × 10−6
5,0 × 10−3 3,85 × 10−6 2,78 × 10−6 1,25 × 10−6
1,0 × 10−2 4,55 × 10−6 3,57 × 10−6 1,43 × 10−6

Determine los valores de K M y Vmax de la enzima, el tipo

de inhibición generada por los inhibidores A y B, y el valor
de KI para cada caso.

1
Resolución
El primer paso es convertir los datos de la tabla a 1/[S] y
1/v0 :
(1/v0 )/(M/s) (1/v0 )/(M/s) (1/v0 )/(M/s)
(1/[S])/(1/M) Sin inhibidor Inhibidor A Inhibidor B
2,0 × 103 8,0 × 105 1,72 × 106 2,63 × 106
1,0 × 103 5,0 × 105 9,6 × 105 1,60 × 106
4,0 × 102 3,2 × 105 5,0 × 105 1,00 × 106
2,0 × 102 2,6 × 105 3,6 × 105 8,0 × 105
1,0 × 102 2,2 × 105 2,8 × 105 7,0 × 105

Ahora dibujamos el gráfico de Lineweaver-Burk para es-

tos tres juegos de datos cinéticos, como se muestran en la
siguiente figura. Por comparación con las gráficas vistas en
clase, vemos que A es un inhibidor competitivo y B es un
inhibidor no competitivo.

El ajuste lineal para la reacción no inhibida es

1 1
= 302,6 + 1,96 × 105
v0 [S]

2
por lo que
1
= 1,96 × 105 s/M
Vmax
o
Vmax = 5,1 × 10−6 M/s
De la pendiente de la recta,

KM
302,5 s =
Vmax
por lo que

K M = (302,6 s)(5,1 × 10−6 M/s) = 1,5 × 10−3 M

Por lo tanto, el ajuste lineal para la inhibición A es:

1 1
= 757,8 + 2,03 × 105
v0 [S]
Por comparación con la ecuación de Lineweaver-Burk pa-
ra la inhibición competitiva,
 
1 KM [I] 1 1
= 1+ +
v0 Vmax KI [S] Vmax
la pendiente de la recta es:

 
KM [I]
757,8 s = 1+
Vmax KI
1,5 × 10−3 M
 
[I]
= 1+
5,1 × 10−6 M/s KI

Dado que [I] = 8,0 × 10−3 M,

KI = 5,1 × 10−3 M

3
 El ajuste lineal para la inhibición B es
1 1
= 1015,3 + 5,95 × 105
v0 [S]
Por comparación con la ecuación de Lineweaver-Burk pa-
ra la inhibición no competitiva,
   
1 KM [I] 1 1 [I]
= 1+ + 1+
v0 Vmax KI [S] Vmax KI
la pendiente de la recta es:

 
KM [I]
1015,3 s = 1+
Vmax KI
−3
1,5 × 10 M

[I]

= 1+
5,1 × 10−6 M/s KI

Dado que [I] = 8,0 × 10−3 M, se obtiene que

KI = 3,3 × 10−3 M

Preguntas propuestas
Explique detalladamente cómo consiguió las respuestas a las
siguientes preguntas.

1. Explique por qué un catalizador afecta tanto la veloci-

dad de la reacción directa como de la reacción inversa.

2. La hidrólisis de acetilcolina es catalizada por la enzima

acetilcolinesterasa, que tiene una tasa de recambio de
25 000 s−1 . Calcule cuánto tiempo le toma a la enzima
romper una molécula de acetilcolina.

4
3. Explique cómo se obtienen los valores de K M y Vmax de
forma gráfica a partir de la siguiente ecuación:

1 KM 1
= +
v0 Vmax [S] Vmax

4. La hidrólisis de la N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida
(GPNA) a p-nitroanilina y N-glutaril-L-fenilalanina es
catalizada por la α-quimotripsina. Los siguientes datos
son obtenidos para la reacción cinética:

[S]/10−4 M 2,5 5,0 10,0 15,0

v0 /(10−6 M/min) 2,2 3,8 5,9 7,1

donde [S] = GPNA. Asumiendo la cinética de Michaelis-

Menten, calcule los valores de Vmax y K M .

5. A continuación se presentan las velocidades iniciales

de un reacción catalizada por una enzima a varias con-
centraciones del sustrato:

[S]/ M v0 /(10−6 M/min)

2,5 × 10−5 38,0
4,00 × 10−5 53,4
6,00 × 10−5 68,6
8,00 × 10−5 80,0
16,0 × 10−5 106,8
20,0 × 10−5 114,0

(a) ¿Sigue esta reacción una cinética de Michaelis-Menten?

(b) Calcule el valor de Vmax de la reacción. (c) Calcule el
valor de K M de la reacción. (d) Calcule las velocidades
iniciales a [S] = 5,00 × 10−5 M y [S] = 3,00 × 10−1 M.

5
 6. Una enzima tiene un valor de K M de 2,8 × 10−5 M y un
valor de Vmax de 53 µM/min. Calcule el valor de v0 si
[S] = 3,7 × 10−4 M y [I] = 4,8 × 10−4 M para (a) un inhi-
bidor competitivo, (b) un inhibidor no competitivo y (c)
un inhibidor acompetitivo. (Considere KI = 1,7 × 10−5 M
para los tres casos.)
7. ¿Por qué la unión del 50 % de la hemoglobina humana
con monóxido de carbono es fatal mientras que la dis-
minución a la mitad del contenido de hemoglobina por
anemia no lo es?
8. En el cuento de Lewis Carrol “Alicia en el país de las
maravillas”, Alicia se pregunta si la leche del otro lado
del espejo sería apta para beber. ¿Qué opina al respec-
to?
9. El envenenamiento por etilenglicol genera acidosis me-
tabólica por cómo se degrada esta molécula en el orga-
nismo. El tratamiento en estos casos consiste en corre-
gir la acidosis, eliminar el exceso de etilenglicol y admi-
nistrar un inhibidor de alcohol deshidrogenasa (ADH).
Esto debido a que esta enzima oxida al etilenglicol a
ácidos orgánicos, los cuales son los causantes de la aci-
dosis. El etanol es un inhibidor de dicha la ADH y es
usado como inhibidor para tratar el envenenamiento
por etilenglicol. A continuación se muestran los resul-
tados experimentales. Según estos datos, ¿qué tipo de
inhibición causa el etanol?
10. La ADH requiere dinucleótido de nicotinamida y ade-
nina oxidado (NAD+) para su actividad catalítica. En
la reacción catalizada por esta enzima, un alcohol es
oxidado a aldehído conforme el NAD+ es reducido a
NADH y se disocia de la enzima. ¿Qué función está
cumpliendo el NAD+ en esta reacción?

6
 [S] Vel. de rx [S] Vel. de rxn
con etanol (mol/(L.S)) sin etanol (mol/(L.S))
5 mM 3E-7 5 mM 8E-7
10 mM 5E-7 10 mM 1,2E-6
20 mM 1,0E-6 20 mM 1.8E-6
40 mM 1.6E-6 40 mM 1.9E-6
80 mM 2,0E-6 80 mM 2.0E-6

11. En el siguiente gráfico en el que se muestran los cam-

bios de energía libre para el proceso de conversión de
reactivo a producto en ausencia y presencia de una en-
zima, identifique qué representa cada letra (A-D).