IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS

ORGÁNICOS MEDIANTE
CROMATOGRAFÍA Y ENSAYOS
PRELIMINARES
J ULIÁN T ORRADO, C RISTIAN B URGOS
Universidad Nacional de Colombia
jtorrado@unal.edu.co, cburgoss@unal.edu.co

9 de febrero de 2022
Resumen

Mediante el uso de un patrón cafeína previamente purificada como patrón se realizó la identeficación de esta en dos
bebidas que indican contener cafeína, Coca-Cola® y té negro de la marca Hindú® mediante la medición de su factor
de retención.

Por otra parte se determinó los grupos funcionales de dos muestras desconocidas, una sólida (muestra 11) y una
líquida (muestra 4) mediante el uso de reacciones que permiten la determinación cualitativa de estos en una molécula.

Palabras Claves: Cromatografía en capa fina, Eluyente, Fase estacionaria, Grupo funcional.

I. I NTRODUCCIÓN
La determinación de determinado compuesto ha jugado un rol importante en el laboratorio de química, para
ello se han contemplado diferentes técnicas que permitan dilucidar los rasgos característicos para cada especie. La
cromatografía es una técnica física la cual permite la separación, identificación y purificación de componentes en una
mezcla de componentes basada en la afinidad de los componentes por la fase estacionaria y móvil, donde sustancias
poco polares, con poca afinidad a la fase estacionaria, son más fácilmente transportadas por el eluyente (fase móvil)
mientras que sustancias más afines a la fase estacionaria son retenidas por esta por una mayor cantidad de tiempo [1].

La cromatografía en capa fina, donde la fase estacionaria es un sólido, como alumina, sílica gel o celulosa, y el
eluyente es un líquido, es una técnica cualitativa que permite la determinación de la pureza de un compuesto, al notar
diferentes o una sola mancha revelada, y seguimiento de reacción, al comparar el área de los productos y de los reactivos
[2]. Esta cromatografía ha resultado ser una herramienta muy valiosa en química y bioquímica para la separación
y análisis cualitativo de una amplia variedad de mezclas de compuestos, al permitir separar de iones inorgánicos,
moléculas orgánicas y compuestos biorgánicos tales como pigmentos, lípidos, aminoácidos, nucleótidos y azúcares [3].

Los ensayos preliminares, como su nombre lo indica, son pruebas introductorias muy sencillas que se realizan con
el fin de tener un conocimiento general de la muestra que se está investigando. Los resultados y posteriores conclusiones
que se obtengan de este análisis permitirán establecer las características de la sustancia, si esta llega a ser orgánica o
inorgánica y en lo posible, relacionar el compuesto orgánico con algún grupo funcional presente en la molécula [4]. La
química hace posible un contraste entre las diferentes especies existentes gracias a la gran variedad de comportamientos
que adoptan frente a determinado ambiente o estímulo proveniente de su entorno, haciendo posible clasificar cada
especie dentro de un selecto grupo con características propias.

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II. O BJETIVOS
Comprender los principales aspectos teóricos y experimentales de la cromatografía en capa delgada.
Identificar los grupos funcionales de una sustancia orgánica desconocida utilizando los ensayos preliminares.
Identificar la presencia de cafeína mediante CCD en extractos de alimentos
Determinar como la fase móvil afecta el factor de retención de una sustancia.

III. M ETODOLOGÍA

I. Cromatografía en capa fina

Se realizó una infusión de 2 sobres de Té negro de la marca Hindú® en 50 mL de agua, de igual forma se
procedió a desgasificar la bebida gaseosa Coca-Cola® mediante el calentamiento de esta con agitación magnética. De
estas disoluciones se tomaron 25 mL e individualmente se pasaron a un embudo de decantación para la separación
de la cafeína mediante la implementación de 10 mL tetracloruro de carbono (CCl4 ) como solvente orgánico, este
procedimiento se realizó 3 veces para obtener la mayor cantidad de cafeina disuelta en el CCl4 posible, a la par se
generó una disolución de un patrón de cafeina en tetracloruro de carbono. Una vez se realizó la disolución de la cafeína
de la muestra en CCl4 se marcó una linea en 0,5cm sobre el límite inferior de la placa, en esta se colocaron una pequeña
cantidad de la disolución de la cafeína proveniente del té en el lado izquierdo, una pequeña cantidad de la disolución
de la cafeína proveniente del patrón en el lado derecho de la linea y una mezcla de estos dos en el centro de tres
placas cubiertas por la fase estacionaria. Una vez secas las placas, se colocaron las tres placas en tres cubetas de vidrio
diferentes con diferentes eluyentes (AcOEt, 50 % AcOEt / 25 % H2 O / 25 % MeOH y 81 % AcOH / 8 % / H2 O / 11 %
MeOH).

II . Realización de pruebas preliminares

Se realizarón las pruebas preliminares para dos muestras de compuestos rotulados como 4 y 11 realizando 8 pruebas
diferentes para la determinación de grupos funcionales, prueba de ignición, de pH mediante el uso de papel universal e
indicador rojo congo, de acidez, mediante el uso de bicarbonato de sodio, de insaturaciones activas, mediante el uso de
bromo y permanganato potásico, de aromaticidad mediante el uso de cloruro de plata, de fenoles, mediante el uso de
cloruro férrico y el ensayo con ácido sulfúrico.

IV. DATOS OBTENIDOS

I. Cromatografía en capa fina

Se determinaron los factores de retención de las moléculas presentes en las muestras, estos se muestran en la tabla 1,

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Frente de Factor de retención Método

Muestra Eluyente† Mancha
eluyente Patrón de cafeína Mezcla Muestra de revelado
Cafeína 0,1667 0,1667 0,1667 UV
100/0/0 6,0 cm
Frente de aroma - 0,967 0,950 KI/I2 HCl
Cafeína 0,8958 0,8958 0,8750 UV
Té negro 50/25/25 4,8 cm
Frente de aroma - 0,9792 0,9792 KI/I2 HCl
Cafeína 0,5893 0,5714 0,5893 UV
81/11/8 5,6 cm
Frente de aroma - 0,9643 0,9821 KI/I2 HCl
Cafeína 0,1822 0,1822 0,1822 UV
100/0/0 5,5 cm
Frente aromático - 0,7224 0,7224 KI/I2 HCl
Cafeína 0,5376 0,5376 0,5250 UV
Coca-Cola 50/25/25 5,7 cm
Frente aromático - 0,7324 0,7324 KI/I2 HCl
Cafeína 0,5216 0,5216 0,4122 UV
81/11/8 5,8 cm
Frente aromático - 0,7396 0,7396 KI/I2 HCl

† Expresado en %AcOEt/ %MeOH/ %H2 O

Tabla 1: Resultados de la cromatografía de capa fina para Té negro y Coca-cola

II . Ensayos preliminares

Muestra Prueba Observaciones Resultado

Llama roja anaranjada
Ignición Aromático
Genera una gran cantidad de hollín
Papel Indicador universal Cambio de color pH≈ 6
Rojo congo Sin cambio de color pH>4,8
Bicarbonato de sodio Sin efervescencia No muy ácido
Muestra 11 Formación de precipitado negro con Positivo para
Br2 en CCl4
desprendimiento de gases ácidos sustitución
KMnO4 Cambio de color a rojo oscuro Positivo
FeCl3 Solución azul muy oscuro Positivo fenol
AlCl3 Formación color marrón oscuro-negro Positivo
Formación de color rojo/violeta intenso
H2 SO4 Positivo
Al calentar forma precipitado negro
Ignición Llama amarilla alta, no desprende vapores
Papel indicador universal Cambio de color pH≈ 6
Rojo congo Sin cambio de color pH>4,8
Bicarbonato de sodio Sin efervescencia No muy ácido
Muestra 4 Br2 en CCl4 Sin reacción Negativo
KMnO4 Cambio de color a marrón Positivo
AlCl3 Sin reacción Negativo aromático activo
FeCl3 Solución roja pálida Negativo fenol
Formación de color rojo negraseo
H2 SO4 Positivo
Al calentar forma precipitado negro

Tabla 2: Resultados para los ensayos preliminares para la muestra 11 y 4

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V. Á NALISIS DE DATOS

I. Cromatografía en capa fina

En ambos casos se identificó la cafeína de las muestras usadas a partir de la mancha de la cafeína patrón usada, como
se puede notar en la tabla 1, entre mayor cantidad de acetato de etilo (AcOEt) menor será el factor de retención, esto es
debido a que el acetato de etilo es un solvente muy poco polar, mientras que la fase estacionaria es demasiado polar,
haciendo que la cafeína se vea retenida mayoritariamente por la fase estacionaria que por la fase móvil, generando así
un menor coeficiente de retención, en comparación, al aumentar la cantidad de agua y metanol en el eluyente, el factor
de retención aumenta, debido a que la afinidad por el eluyente aumenta, por otra parte, debido a la pobre interacción del
acetato de etilo con la fase .[3]

Tanto el Té Hindú como la Coca Cola poseen cafeína como uno de sus principales componentes, sin embargo,
difieren presentan diferencias en gran parte de su composición química. El Té Hindú presenta una mayor proporción de
compuestos aromáticos, como los flavonoides [5], mientras que la coca cola posee un mayor número de componentes
polares como azúcares o ácido fosfórico, así como compuestos aromáticos poco solubles en agua, como el aspartame[6].
Las características mencionadas anteriormente explican las manchas aparecidas en la cromatografía, el té, por ejemplo,
al tener una gran cantidad de compuestos apolares, los cuales son solubles en tetracloruro de carbono, son facilmente
arrastrados por el eluyente generando el “frente aromático”, de igual forma la Coca-Cola presenta un frente aromático
debido a la existencia de sustancias poco polares presentes en esta.

II . Ensayos preliminares
Con base a la prueba de ignición, donde se obtuvo una gran cantidad de hollín liberado, se pudo elucidar que el
compuesto de la muestra 11 es aromático, sospecha que se confirma mediante la prueba con tricloruro de aluminio, la
prueba de bromo en tetracloruro de carbono, donde se generan vapores ácidos, y la prueba de tricloruro de hierro, la
cual dió positivo para fenol y, con esto, se confirma la ausencia de grupos fuertemente desactivantes. Debido al pH
medido con el papel universal (pH≈ 6), se evidencia que el compuesto estudiado es un ácido muy débil, lo cual es
concordante con un fenol, además, debido a la reacción positiva del permanganato de potasio, el cual oxída el fenol,
formando p-benzoquinona, p-hidroxiquinona o catecol, además las pruebas con permanganato potásico, el cual oxida el
fenol a quinona [6], y ácido sulfúrico concentrado, el cual reacciona con el fenol para generar el ácido o-fenolsulfónico
como producto principal a 25°C y, a temperaturas elevadas, se genera el p-fenolsulfónico [7] se puede concluir que el
compuesto estudiado es un fenol. Comparando las constantes físicas de varios fenoles, se ha encontrado un compuesto
con constantes físicas similares, el p-cresol (4-metilfenol) [8], sus constantes físicas son presentados en la tabla 3.

Punto de Punto de
Sustancia Densidad
fusión ebullición
p-Cresol (34,77±0,05)°C (201,9±0,1)°C 1,0185 g/cm3 (40°C)
Muestra 43°C 200°C 1,05 g/cm3
Cambio relativo 19,14 % 0,95 % 3,00 %

Tabla 3: Constantes físicas del p-Cresol y de la muestra 11

Como se puede notar, aunque para la densidad y punto de ebullición el p-Cresol es un compuesto que se ajusta a las
consntantes físicas medidas para la muestra, en el caso del punto de fusión no se ajusta, pues su diferencia relativa, en
comparación al valor de la muestra, es muy grande, por tal motivo el p-Cresol puede no ser el compuesto estudiado.

La muestra 4, por el contrario, no presenta comportamientos aromáticos, además de no tratarse de un fenol, debido a que
no logró corroborar el test positivo frente a ensayos de aromaticidad y presencia de fenoles con reactivos como el cloruro
de aluminio y cloruro férrico respectivamente. Sin embargo, debido a la característica de la llama, se puede elucidar un

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compuesto hidrocarbonado o un derivado de este, además, con base a las reacciones positivas con permanganato de
potásio y ácido sulfúrico, y sus constantes físicas [9] se encontró un posible compuesto, la acetilacetona, donde, a pesar
de ser una cetona, es oxidable por la adición de permanganato de potásio [10] para la muestra 4.

Punto de
Sustancia Densidad
ebullición
Acetilacetona 140,4°C 0,975 g/cm3 (25°C)
Muestra 140°C 0,9800 g/cm3
Cambio relativo 0,29 % 0,51 %

Tabla 4: Constantes físicas de la Acetilacetona y de la muestra 4

Como se puede notar en la tabla 4, las constantes físicas de la muestra y el compuesto propuesto son muy cercanas,
con esto, es muy probable que la muestra sea acetilacetona.

VI. C ONCLUSIONES
Mediante la aplicación de ensayos preliminares junto con información de constantes físicas características, se
logró determinar posibles compuestos para muestras problema 11 y 4 (p-Cresol y Acetilacetona respectivamente)
Haciendo uso de la cromatografía de capa delgada, se identificó la presencia de cafeína para 2 soluciones mediante
el uso de diferentes proporciones de sustancias como eluyentes contando con herramientas como luz UV y
solución reveladora.
Se evaluó la efectividad de la polaridad del eluyente en la separación de sustancias en una solución de té negro y
Coca-Cola.

R EFERENCIAS
[1] Ozlem Coskun. “Separation Tecniques: CHROMATOGRAPHY”. En: Northern Clinics of Istanbul (2016). ISSN:
21484902. DOI: 10.14744/nci.2016.32757. URL: https://www.journalagent.com/nci/pdfs/NCI_3_
2_156_160.pdf (visitado 05-02-2022).
[2] Halilovic Namir y col. “Application of thin layer chromatography for qualitative analysis of gunpowder in purpose
of life prediction of ammunition”. En: International Journal of Biosensors & Bioelectronics 5.1 (2019). ISSN:
25732838. DOI: 10.15406/ijbsbe.2019.05.00144. URL: https://medcraveonline.com/IJBSBE/
application-of-thin-layer-chromatography-for-qualitative-analysis-of-gunpowder-in-
purpose-of-life-prediction-of-ammunition.html (visitado 07-02-2022).
[3] Sigma Aldrich. Thin Layer Chromatography. 2021. URL: https : / / www . sigmaaldrich . com / CO / es /
applications / analytical - chemistry / thin - layer - chromatography # Applications - of - TLC
(visitado 05-02-2022).
[4] “ENSAYOS PRELIMINARES Y CLASIFICACIÓN DE COMPUESTOS POR SUBILIDAD”. En: Journal of
Chemical Information and Modeling 53.9 (2013), págs. 1689-1699. URL: http://avalon.utadeo.edu.co/
comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organica/guia_2.pdf.
[5] Lorena Zapata. “ESTUDIO COMPARATIVO DE TÉS NEGROS (BOLSITAS Y A GRANEL)”. En: (), pág. 24.
URL : https://www.odecu.cl/wp-content/uploads/2017/12/2013-estudio-tenegro.pdf (visitado
07-02-2022).
[6] Iquímicas. Componentes Químicos de la Coca Cola. 2 de feb. de 2017. URL : https://iquimicas.com/
componentes-quimicos-de-la-coca-cola/ (visitado 08-02-2022).
[7] Dr Parixit Bhandurge. Qualitative Analysis of Organic Compounds (Chart). URL: http://klepharm.edu/
media/uploads/qualitative_analysis_of_organic_compounds_(chart)_- _pjb.pdf (visitado
08-02-2022).

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[8] Robert Calvin Weast, ed. CRC handbook of chemistry and physics. A ready-reference book of chemical and
physical data. 59. ed. Boca Raton: CRC P, 1979. 2492 págs. ISBN: 978-0-8493-0459-0.
[9] Sigma Aldrich. Acetylacetone | Sigma-Aldrich. URL: https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/
sigma/a3511 (visitado 09-02-2022).
[10] Miklós Jáky, János Szammer y Edit Simon-Trompler. “Kinetics and mechanism of the oxidation of acetylacetone
by permanganate ion”. En: International Journal of Chemical Kinetics 38.7 (jul. de 2006), págs. 444-450. ISSN:
0538-8066, 1097-4601. DOI: 10.1002/kin.20177. URL: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.
1002/kin.20177 (visitado 09-02-2022).