Wiener lab.
VB12
Vitamin B12(CLIA)
Intended Use
Chemiluminescent Immunoassay (CLIA) for the
quantitative determination of vitamin B12
(VB12) in serum or plasma.
Summary
Vitamin B12, also named cobalamin, refers to a
group of cobalt-containing vitamin compounds
containing methylcobalamin,
5-deoxyadenosine cobalamin, cyanocobalamin
e.g. The predominant form in serum is
methylcobalamin while the predominant
cellular form is 5’-deoxyadenosyl cobalamin.
Cyanocobalamin is the most stable form which
is used as a reference compound for measuring
serum cobalamin concentrations.
Cobalamins are mainly obtained from animal
products such as meat, eggs, milk, and other
dairy products. When ingested, VB12 is bound
to intrinsic factor in the stomach and then
absorbed in the ileum. After absorbed, VB12
will be transported to liver.
VB12 is a coenzyme involved in two metabolic
pathway: 1) the synthesis of methionine from
homocysteine, and 2) the conversion of
methylmalonyl CoA to succinyl CoA. Deficiency
of VB12 will lead to megaloblastic anemia (MA)
and severe neurological problems. The
relationship between VB12 levels and MA is not
always clear in that some individuals with MA
will have normal VB12 levels, conversely, many
individuals with VB12 deficiency are not
afflicted with MA. To diagnose whether VB12 is
deficiency, patients with anemic symptoms
should be further evaluated with tests for
homocysteine and methylmalonic acid.
VB12 is well involved in the metabolism of folate
acid. Deficiency of VB12 prevents the
5’-N-methy-tetrahydrofolic acid transforming to
tetrahydrofolic acid resulting in the decreased
capacity for DNA synthesis. Take this into
consideration, it’s necessary to measure both
VB12 and folate acid in a clinical workup.
several reasons could cause VB12 deficiency,
including vegetarianism, partial gastrectomy,
pregnancy, oral contraception, advancing age,
autoantibody, and mutation of genes associated
to the absorb or transportation of VB12.
Elevation of serum VB12 levels includes renal
failure, liver disease, and myeloproliferative
diseases.
Principle
Vitamin B12 (CLIA) is a competitive binding
immunoenzymatic assay with an automated
sample pretreatment to quantitatively
determine the level of VB12 in serum or plasma.
In the first step, sample, pre-treatment reagent
1 (PT1) and pre-treatment reagent 2 (PT2) are
added into a reaction cuvette. After incubation,
VB12 is released from its binding protein.
In the second step, the pre-treated sample is
transferred into a new reaction cuvette,
incubated with intrinsic factor-alkaline
phosphatase conjugate. After incubation, VB12
in the sample binds to intrinsic factor-alkaline
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010130-00(1.0)
phosphatase-labeled conjugate.
In the third step, paramagnetic microparticles
coated with biotinylated VB12 are added,
leading the competitive binding of biotinylated
VB12 to alkaline phosphatase labeled intrinsic
factor. After incubation, microparticles are
magnetically captured. Unbound substances
are removed by washing.
Lastly, the Substrate Solution is added to the
reaction cuvette. The resulting
chemiluminescent reaction is measured as
relative light units (RLUs). The amount of VB12
in the sample is inversely proportional to the
relative light units (RLUs) generated during the
reaction. The VB12 concentration can be
determined via a calibration curve.
Provided Reagents
Paramagnetic microparticles coated
Ra
with VB12 in TRIS buffer.
Intrinsic factor-alkaline phosphatase
Rb
conjugate in PBS buffer.
PT1 Dithiothreitol in sodium citrate buffer.
Potassium ferricyanide in sodium
PT2
hydroxide
The position of each reagent component is
shown in the figure below：
Non-provided Reagents
- VB12 Calibrators
- Metabolic Multi Control (L)
- Metabolic Multi Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
The reagents are provided separately by Wiener
lab.
Instructions for use
The reagents are ready to use
Warnings
- For “in vitro” diagnostic use.
- Always keep the reagent kit in the upright
position to ensure no microparticle has been
lost prior to use.
- Do not use reagents from other source.
- Do not use reagents beyond the expiration
date.
- Do not exchange reagents from different lots.
- All patient samples should be handled as
capable of transmitting infection.
- Use the reagents following the usual work
precautions in the clinical laboratory.
- All reagents and samples should be discarded
in accordance with the local regulations.
Stability and Storage Instructions
The kit is stable at 2-8°C up to the expiration
date stated on the box.
Required Material (non-provided)
Wiener lab. CLIA series chemiluminescence
analyzer
Sample
Serum or plasma
a) Collection: obtain sample in the usual way.
Avoid using strongly hemolized or
heat-inactivated samples.
b) Additives: the use of EDTA, sodium heparin
or lithium heparin is recommended as
anticoagulants.
c) Centrifuge the samples and separate serum
or plasma within two hours.
d) Stability and Storage Instructions:
samples should be preferably fresh. If not
processed within 8 hours, samples should be
stored at 2-8°C. Thus, they are stable for 48
hours refrigerated at 2-8°C, of for 2 month
frozen at -20°C. Avoid repeated freezing and
thawing cycles.
Procedure
Before loading the reagents kit on the
instrument for the first time, unopened reagent
bottle should be inverted gently for at least 30
times to resuspend the microparticles that have
settled during storage. Visually inspect the
bottle to ensure the microparticles have been
resuspended. If the microparticles remain
adhered to the bottle, continue inverting until
the microparticles have been completely
resuspended. If the microparticles cannot be
resuspended, it is recommended to discard the
bottle.
This assay requires 50 μL sample. This volume
does not include the dead volume of the sample
container.
Calibration
The Vitamin B12 (CLIA) kit from Wiener lab.
has been standardized against a commercial
VB12 test (CLIA).
The specific information of the master
calibration curve is included in the
bidimensional code provided. It’s used in
combination with the calibrators for the
calibration of the specific reagent lot. When
performing the calibration, scan the information
of the master calibration curve from the
bidimensional code into the system first, and
then use the calibrators at three levels. Valid
calibration curve is required before any VB12
test. Recalibration is recommended every 4
weeks, or when a new reagent lot is used, or the
quality controls are out of specified range. For
detailed instruction of calibration, refer to the
analyzer operation manual.
Quality Control
Metabolic Multi Control (L) and Metabolic
Multi Control (H) from Wiener lab.
Calculation
1/2
The analyzer automatically calculates the
analyte concentration of each sample on the
master calibration curve read from the
bidimensional code, and a 4-Parameter Logistic
Curve Fitting (4PLC) with the relative light units
(RLUs) generated from the 3 calibrator levels.
The results are shown in pg/mL.
Conversion factors:
pmol/L x 1.36 = pg/mL
pg/mL x 0.738 = pmol/L
Expected values
In a study of a population of 138 healthy
individuals the following reference range was
obtained:
Category N 2,5-97,5% Percentile
Healthy individuals 138 180-916 pg/mL
It is recommended that each laboratory
establish its own reference range.
Procedure Limitations
The upper limit of this assay is 2000 pg/mL. A
sample with VB12 concentration lower than the
upper limit can be quantitatively determined,
while the sample with a concentration higher
than the upper limit will be reported as >2000
pg/mL.
The concentration of VB12 in a sample
determined with assays from different
commercial kits can vary due to differences in
assay methods, calibration, and reagent
specificity. The assay results should be used in
conjunction with other data to make clinical
decisions, such as symptoms, results of other
tests, clinical history.
Sample from individuals who have been
exposed to mouse monoclonal antibodies may
contain human anti-mouse antibodies (HAMA).
Such samples may show either falsely elevated
or falsely depressed values with assay kits
employing mouse monoclonal antibodies.
However, no obvious interference of HAMA has
been observed in this assay.
Performance
a) Analytical Sensitivity: ≤ 50 pg/mL
b) Measuring Range: 50-2000 pg/mL.
c) Specificity:
- No interference is observed by hemoglobin up
to 1000 mg/dL, bilirubin up to 60 mg/dL,
triglycerides up to 1500 mg/dL, total protein up
to 9 g/dL, rheumatoid factor up to 200 IU/mL or
antinuclear antibody.
- Calibrator C0 of VB12 Calibrators from
Wiener lab. was spiked with dicyanocobinamide.
No obvious cross reactivity was observed as all
the results were ≤0.5%. The results are
summarized in the table below.
Substance
Concentration Cross
(ng/mL) Reactivity
dicyanocobinamide 200 0.11%
English-1
 Wiener lab.
d) Accuracy: Primary Care Physician. Arch Intern Med. 2000 Rosario - Argentina
Two controls with traceable and defined values 1999; 159:1289-98.
were used to verify the accuracy of this assay. http://www.wiener-lab.com
- Carethers M. Diagnosing Vitamin B12
The results showed that the relative deviations Deficiency, A Common Geriatric Disorder. A.N.M.A.T. Registered product
were less than ±10%. The results are Geriatrics 1988; 43(3):89-112.
summarized in the table below. PM-1102-145.
- Herbert V. Five Possible Causes of All Nutrient
Measured Defined Relative
Deficiency: Illustrated by Deficiencies of Tech.Dir.: Viviana E. Cétola
Sample Value Value Deviation Vitamin B12 and Folic Acid. Am J Clin Nutr
(pg/mL) (pg/mL) Biochemist
1973; 26:77-86.
Level 1 243.55 252.19 -3.43%
- Pratt JJ, Woldring MG. Radioassay of Vitamin
Level 2 630.58 608.61 3.61% B12 and Other Corrinoids. Methods Enzymol
1982; 84:369-406.
- Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic
f) Precision: antibodies: a problem for all immunoassays.
Precision was determined by following National Clin Chem 1988; 34:27-33.
Committee for Clinical Laboratory Standards
(NCCLS) Protocol EP5-A2. Two levels of quality - Kricka L. Interferences in immunoassays -
controls were tested in duplicate in two still a threat. Clin Chem 2000; 46:
separate runs per day, for a total of 20 days. 1037–1038.
- Bjerner J, et al. Immunometric assay
Sample Mean Intra- Inter- Total CV interference: incidence and prevention. Clin
(pg/mL) assay CV assay CV Chem 2002; 48: 613–621.
1 251.24 3.63% 2.07% 3.68%
2 600.01 3.56% 2.21% 3.56% SYMBOLS

C This product fulfills the requirements of the

g) Linearity: the reaction is linear in the range
European Directive 98/79 EC for "in vitro"
of 50 pg/mL to 2000 pg/mL.
diagnostic medical devices

h) Correlation:
The Vitamin B12 (CLIA) kit from Wiener lab.
P Authorized representative in the
European Community
was compared to a commercially available
diagnostic kit with similar features, using 306
serum samples. The statistical data obtained M Manufactured by:
are summarized in the table below.
V "In vitro" diagnostic medical device
Concentration Slope Intercept Correlation
Range（pg/mL） Coefficient
i Consult instructions for use
50 ~ 2000 0.9932 5.6632 0.9917
U This side up
Wiener lab. provides l Temperature limitation (store at)
- 2 x 50 tests (code 1001183) g Batch code
- 2 x 100 tests (code 1001184)
H Use by
References h Catalog number
- Nelson DA and Davey FR. In Clinical diagnosis
and management by laboratory methods. F Biological risks
Erythrocytic disorders 1991; 627-635.
Cont. Contents
- Chararin I. Megaloblastic Anemia, Cobalamin
and Folate. J Clin Pathol 1987; 40:978-84.
- Hoffbrand AV. Vitamin B12 and folate M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
metabolism: the megaloblastic anæmias and ELECTRONICS CO., LTD.
other nutritional anæmias. In Blood and its
disorders, 1982; 199-263.
Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
- Beuerlein FJ. Testing Strategies for Anemias.
Lab Mgmnt 1988;Dec:23-9. Industrial Park.
- Klee GC. Cobalamin and Folate Evaluation:
Measurement of Methylmalonic Acid and
Homocysteine vs. Vitamin B12 and Folate. Manufactured for:
Clin Chem 46; 2000:1277-83.
Wiener Laboratorios S.A.I.C.
- Snow CF. Laboratory Diagnosis of Vitamin
B12 and Folate Deficiency: A Guide for the Riobamba 2944

v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010130-00(1.0) 2/2 English-1

 Wiener lab.
VB12
Vitamin B12 (CLIA)
Uso pretendido
Imunoensaio quimioluminescente (CLIA) para a
determinação quantitativa da vitamina B12 (VB12)
em soro ou plasma.
Significado clí
nico
A vitamina B12, também chamada de cobalamina,
refere-se a um grupo de compostos de vitamí nico
contendo cobalto, metilcobalamina,
5-desoxiadenosina cobalamina, cianocobalamina,
por exemplo. A forma predominante no soro é a
metilcobalamina, enquanto que a forma celular
predominante é a 5’-desoxiadenosila cobalamina. A
cianocobalamina é a forma mais estável, que é
utilizada como composto de referência para medição
das concentrações de cobalamina sérica.
As cobalaminas são principalmente obtidas a partir
de produtos de origem animal, tais como carne, ovos,
leite e outros produtos lácteos. Quando ingerida, a
VB12 éligada ao fator intrí nseco no estômago e, em
seguida, absorvida no í leo. Após absorvida, a VB12
serátransportada atéo fí gado.
A VB12 é uma coenzima envolvida em duas vias
metabólicas: 1) a sí ntese de metionina a partir da
homocisteí na e 2) a conversão de metilmalonil-CoA
parasuccinil-CoA. A deficiência de VB12 resultaráem
anemia megaloblástica (MA) e problemas
neurológicos graves. A relação entre os ní veis de VB12
e a MA nem sempre éclara; alguns indiví duos com MA
apresentarão ní veis normais de VB12; de maneira
oposta, muitos indiví duos com deficiência de VB12
não apresentam MA. Para diagnosticar a deficiência de
VB12, pacientes com sintomas anêmicos devem ser
adicionalmente avaliados com testes para
homocisteí na e ácido metilmalônico.
A VB12 está muito envolvida no metabolismo do
ácido fólico. A deficiência de VB12 impede que o
ácido 5’-N-metil-tetrahidrofólico se transforme em
ácido tetrahidrofólico, resultando na redução da
capacidade de sí ntese de DNA. Levando isso em
consideração, é necessário medir tanto a VB12
quando o ácido fólico na avaliação clí nica.
Podem resultar na deficiência de VB12: o
vegetarianismo, gastrectomia parcial, gestação,
contracepção oral, idade avançada, autoanticorpo e
mutação de genes associados à absorção ou
transporte da VB12. Elevação dos ní veis de VB12
sérica inclui insuficiência renal, doença hepática e
doenças mieloproliferativas.
Fundamento do método
O Vitamin B12 (CLIA) éum imunoensaio
competitivo com um pré-tratamento automatizado
de amostra para determinar o ní vel de VB12.
No primeiro passo são acrescentados a uma cubeta
de reação: a amostra, o reagente de pré-tratamento
1 (PT1) e o reagente de pré-tratamento (PT2). Após
a incubação, a VB12 éliberada da sua proteí na de
transporte.
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010130-00(1.0)
No segundo passo, a amostra pré-tratada é - Todas as amostras de pacientes devem ser
manipuladas como se fossem capazes de transmitir
bidimensional no sistema, e, em seguida, use os
calibradores em três níveis. Uma curva de calibração
transferida para uma nova cubeta de reação e
incubada com o conjugado de fator a infecção. válida énecessária antes de qualquer teste de VB12
intrí
nseco-fosfatase alcalina. Após a incubação, a - Todos os reagentes e as amostras devem-se A recalibração érecomendada a cada quatro
VB12 na amostra se liga ao conjugado. descartar conforme àregulação local vigente. semanas, ou quando um novo lote de reagentes
- Utilizar os reagentes observando as precauções for usado, ou quando os controles de qualidade
No terceiro passo, são adicionadas micropartí culas
habituais de trabalho no laboratório bioquí
mico. estiverem fora do intervalo especificado. Para
paramagnéticas revestidas com VB12 biotinilada,
instruções detalhadas de calibração, consulte
levando a ligação competitiva da VB12 biotinilada ao
Estabilidae e instruções de armazenamento o manual de operações do sistema.
conjugado de fator intrí nseco-fosfatase alcalina.
O kit éestável a 2-8°C atéa data de validade
Após a incubação, as micropartículas são capturadas
indicada na embalagem.
magneticamente, enquanto outras substâncias não Controle de qualidade
vinculadas são removidas por lavagem.
Metabolic Multi Control (L) e Metabolic Multi
Finalmente, a solução de substrato (Substrate Material necessário (não fornecido) Control (H) da Wiener lab.
Solution) éadicionada àcubeta de reaç ão. A reação
Analisador de quimioluminscência Wiener lab. CLIA
de quimioluminescência produzida por o conjugado é
series.
medida como unidades relativas de luz (RLU). A Cálculo dos resultados
quantidade de VB12 presente na amostra é O analisador calcula automaticamente a
inversamente proporcional às RLU geradas durante a Amostra concentração do analito de cada amostra na curva
reação. A concentração de VB12 é determinada mestre de calibração lida a partir do código
Soro ou plasma
através de uma curva de calibração. bidimensional, e um ajuste da curva logí stica de 4
a) Coleta: obter a amostra da maneira habitual.
Não use amostas fortemente hemolisadas, nem parâmetros (4PLC) com as RLU geradas a partir dos
três ní
veis de calibradores. Os resultados são
Reagentes fornecidos inativadas por calor.
mostrados em pg/mL.
b) Aditivos: se a amostra for plasma é Fatores de conversão:
recomendado o uso de EDTA, heparina lí tica e ou pmol/L x 1,36 = pg/mL
Micropartí
culas paramagnéticas revestidas com
Ra sódica como anticoagulantes. pg/mL x 0,738 = pmol/L
VB12 em tampão TRIS.
c) Centrifugue as amostras e separe o soro ou o
Conjugado de fator intrí
nseco-fosfatase alcalina em
Rb plasma dentro das duas horas.
tampão PBS.
d) Estabilidade e instruções de Valores esperados
PT1 Ditiotreitol em tampão citrato de sódio.
armazenamento: as amostras devem ser Um estudo realizado em uma população de 138
PT2 Ferricianeto de potássio em hidróxido de sódio.
preferívelmente frescas. Caso não forem indivíduos saudáveis determinou o seguinte
processadas antes das 8 horas da coleta, as intervalo de referência:
A posição de cada componente do reagente é amostras devem ser refrigeradas a 2-8°C. Assim, as
mostrada na figura: amostras são estáveis até48 horas a 2-8ºC ou até2 Número de
meses congeladas a -20°C ou menos. Categoria Percentil 2,5-97,5%
amostras
Evite ciclos de congelamento e descongelamento Indiví
duos saudáveis 138 180-916 pg/mL
repetidos.
Érecomendável que cada laboratório estabeleça seu
Procedimento próprio intervalo de referência.
Antes de carregar os reagentes no analisador pela
primeira vez, devem ser invertidos suavemente por
pelo menos 30 vezes para ressuspender as Limitações do procedimento
micropartículas que se assentaram durante o
Reagentes não fornecidos O limite superior do ensaio é2000 pg/mL. Uma
armazenamento. Inspecione visualmente o frasco
- VB12 Calibrators amostra com uma concentração de VB12 menor do
- Metabolic Multi Control (L) para assegurar que as micropartí culas foram que o limite superior pode ser determinada
- Metabolic Multi Control (H) ressuspensas. Se as mesmas permanecerem quantitativamente, enquanto que uma amostra com
- Wash Buffer aderidas ao frasco, continue invertendo atéque as uma concentração maior do que o limite superior
- Substrate Solution micropartículas sejam completamente seráreportada como >2000 pg/mL.
Estes reagentes são fornecidos por separado pela ressuspendidas. Se as micropartí culas não puderem A concentração de VB12 numa dada amostra,
Wiener lab. ser novamente ressuspensas, recomenda-se não determinada com ensaios de diferentes fabricantes,
usar este frasco de reagente. Este ensaio necessita pode variar devido a diferenças nos métodos de
de 50 μL de amostra para um único teste. Esse ensaio, calibração e especificidade dos reagentes. Os
Instruções de uso volume não inclui o volume morto do recipiente da
Os reagentes são prontos para uso. resultados do ensaio devem ser utilizados em
amostra. conjunto com outros dados, tais como sintomas,
resultados de outros testes, histórico clínico, etc.
Precauções
Calibração Amostras de indiví duos que foram expostos a
- Para uso diagnóstico “in vitro”. anticorpos monoclonais de rato podem conter
- Manter o kit de reagentes na posição vertical a fim O kit Vitamin B12 (CLIA) foi padronizado em
anticorpos humanos anti-rato (HAMA). Estas
de garantir que não sejam perdas as micropartí culas conformidade com um teste de VB12 comercial
amostras podem apresentar valores falsamente
antes do seu uso. (CLIA).
elevados ou baixos com kits de ensaio empregando
- Não utilizar reagentes de outra origem. A informação especí fica da curva mestre de
anticorpos monoclonais de rato. No entanto,
calibração écontida no código bidimensional
- Não utilizar os reagentes após a data de validade. nenhuma interferência evidente de HAMA foi
fornecido. Éusado em conjunto com os calibradores
- Não intercambiar reagentes de distintos lotes. observada neste ensaio.
para a calibração do lote de reagentes especí fico. Ao
realizar a calibração, primeiro digitalize a informação
da curva mestre de calibração a partir do código Caracterí
sticas de desempenho
1/2 Português-2
 Wiener lab.
a) Sensibilidade analí
tica: ≤50 pg/mL. Referências
b) Faixa de medição: 50-2000 pg/mL. - Nelson DA y Davey FR. In Clinical diagnosis and Cont. Conteúdo
management by laboratory methods. Erythrocytic
c) Especificidade:
- Não foram observadas interferências por
hemoglobina até1000 mg/dL, bilirrubina até60
disorders 1991; 627-635.
- Chararin I. Megaloblastic Anemia, Cobalamin y
M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
ELECTRONICS CO., LTD.
mg/dL, triglicerí
deos até1500 mg/dL, proteí nas Folate. J Clin Pathol 1987; 40:978-84.
Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
totais até9,0 g/dL, fator reumatóide até200 UI/mL, - Hoffbrand AV. Vitamin B12 and folate metabolism: Industrial Park.
nem anticorpo anti-núcleo. the megaloblastic anæmias and other nutritional
- O calibrador C0 de VB12 Calibrators foi anæmias. In Blood and its disorders, 1982; Fabricado para:
adicionado com dicianocobinamida. Não foi 199-263.
Wiener Laboratorios S.A.I.C.
observada reatividade cruzada evidente, posto que - Beuerlein FJ. Testing Strategies for Anemias. Lab Riobamba 2944
os resultados foram ≤ 0,5%. Os resultados estão Mgmnt 1988; dic:23-9. 2000 Rosario - Argentina
resumidos na tabela abaixo. http://www.wiener-lab.com
- Klee GC. Cobalamin and Folate Evaluation:
Measurement of Methylmalonic Acid and Producto Autorizado por A.N.M.A.T.
Concentração Reatividade Homocysteine vs. Vitamin B12 and Folate. Clin PM-1102-145.
Substância
(ng/mL) cruzada Chem 46; 2000:1277-83. Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
dicianocobinamida 200 0,11% - Snow CF. Laboratory Diagnosis of Vitamin B12 and Bioquí mica
Folate Deficiency: A Guide for the Primary Care
d) Exatidão: Physician. Arch Intern Med. 1999; 159:1289-98.
Dois controles de veracidade com valores rastreáveis - Carethers M. Diagnosing Vitamin B12 Deficiency,
e definidos foram usados para verificar a exatidão A Common Geriatric Disorder. Geriatrics 1988;
desse ensaio. Os resultados mostraram que os 43(3):89-112.
desvios relativos foram menores que ±10%. Os - Herbert V. Five Possible Causes of All Nutrient
resultados estão resumidos na tabela abaixo. Deficiency: Illustrated by Deficiencies of Vitamin
B12 and Folic Acid. Am J Clin Nutr 1973;
VB12 VB12
26:77-86.
Desvio
Amostra Medida Definida - Pratt JJ, Woldring MG. Radioassay of Vitamin B12
relativo
(pg/mL) (pg/mL) and Other Corrinoids. Methods Enzymol 1982;
84:369-406.
Ní
vel 1 243,55 252,19 -3,43%
Ní
vel 2 630,58 608,61 3,61% - Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
problem for all immunoassays. Clin Chem 1988;
34:27-33.
e) Precisão:
A precisão foi determinada de acordo com o - Kricka L. Interferences in immunoassays - still a
threat. Clin Chem 2000; 46: 1037-1038.
Protocolo EP5-A2 do ComitéNacional para Padrões
de Laboratório Clínico (NCCLS). Dois níveis de - Bjerner J y otros. Immunometric assay
controles de qualidade foram testados em duplicado interference: incidence and prevention. Clin Chem
em duas séries separadas por dia, por um total de 20 2002; 48: 613-621.
dias
SÍMBOLOS
Valor CV CV
Amostr
médio intra-ens inter-ens CV total C Este produto preenche os requisitos da
a
(pg/mL) aio aio Diretiva Europeia 98/79 CE para dispositivos
1 251,24 3,63% 2,07% 3,68% médicos de diagnóstico "in vitro"
2 600,01 3,56% 2,21% 3,56%
P Representante autorizado na
Comunidade Européia
f) Linearidade: a reação élinear na faixa 50 e 2000
pg/mL
g) Correlação:
M Elaborado por
O kit Vitamin B12 (CLIA) da Wiener lab. foi
comparado com um kit comercial de caracterí sticas
V Uso médico-diagnóstico "in vitro"
semelhantes, utilizando 306 amostras. Os dados
estatísticos obtidos são mostrados na tabela abaixo.
i Consultar instrucciones de uso
U Este lado para cima
Intervalo de Coeficiente
Penden Inters
concentração
(pg/mL)
te eção
de
correlação
l Limite de temperatura (conservar a)
50 ~ 2000 0,9932 5,6632 0,9917 g Número de lote
H Data de validade
Apresentação
- 2 x 50 testes (cód. 1001183) h Número de catálogo
- 2 x 100 testes (cód. 1001184)
F Risco biológico

v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010130-00(1.0) 2/2 Português-2

 Wiener lab.
VB12
Vitamin B12 (CLIA)
Uso previsto
Inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA)
para la determinación cuantitativa de vitamina
B12 (VB12) en suero o plasma
Significación clí nica
La vitamina B12, también denominada
cobalamina, es la denominación de un grupo de
compuestos vitamí nicos que contienen cobalto,
metilcobalamina, 5-deoxiadenosina cobalamina,
cianocobalamina, por ejemplo. La forma
predominante en el suero es la metilcobalamina,
mientras la forma celular predominante es la 5'
desoxiadenosilcobalamina. La cianocobalamina
es la forma más estable que se usa como un
compuesto de referencia para medir las
concentraciones de cobalamina sérica.
Las cobalaminas se obtienen principalmente de
productos de origen animal como carne, huevos,
leche y otros productos lácteos. Cuando se
ingiere, la VB12 se vincula con el factor
intrí
nseco en el estómago y luego es absorbida
en el í leon. Una vez absorbida, la VB12 será
transportada al hí gado.
La VB12 es una coenzima que participa en dos
vías metabólica: 1) la sí ntesis de metionina a
partir de la homocisteí na, y 2) la conversión de
metilmalonil CoA a succinil CoA. Deficiencia de
VB12 generará anemia megaloblástica (MA) y
problemas neurológicos severos. La relación
entre los niveles de VB12 y MA no siempre está
clara, ya que algunos individuos con MA tendrán
niveles normales de VB12 y, por el contrario,
muchos individuos con deficiencia de vitamina
B12 no padecen MA. Para diagnosticar si la VB12
se encuentra deficiente, los pacientes con
síntomas de anemia deberí an ser evaluados con
las pruebas para homocisteí na y ácido
metilmalónico.
La VB12 está estrechamente relacionada con el
metabolismo del ácido fólico. La deficiencia de
VB12 impide la transformación de
5'-N-metil-ácido tetrahidrofólico en ácido
tetrahidrofólico, lo que tiene como consecuencia
la disminución de la capacidad de sí ntesis de
ADN. Teniendo en cuesta esto, es necesario
medir tanto la VB12 como el ácido fólico en una
evaluación clí nica.
Pueden causar deficiencia de VB12: el
vegetarianismo, la gastrectomí a parcial, el
embarazo, los anticonceptivos orales, la edad
avanzada, los autoanticuerpos y la mutación de
genes asociados a la absorción o transporte de
VB12. La elevación de los niveles séricos de
VB12 tiene como consecuencia, entre otras,
insuficiencia renal, enfermedad hepática y
enfermedades mieloproliferativas.
Fundamentos del método
Vitamin B12 (CLIA) es un inmunoensayo
competitivo con pretratamiento de muestra
automatizado para la determinación cuantitativa
de VB12 en suero o plasma.
En el primer paso se agrega a una cubeta de
reacción la muestra, el reactivo de
v. 000 URAA/MM/DD P/N:046-010130-00(1.0)
pretratamiento 1 (PT1) y reactivo de vencimiento.
pretratamiento 2 (PT2). Luego de la incubación - No intercambiar reactivos de distintos lotes.
la VB12 es liberada de su proteína - Todas las muestras de pacientes deben
transportadora. manipularse como si fueran capaces de
En el segundo paso, la muestra pre-tratada se transmitir infección.
transfiere a una nueva cubeta de reacción y se
- Utilizar los reactivos respetando las
incuba con el conjugado de factor
precauciones habituales de trabajo en el
intrínseco–fosfatasa alkalina. Luego de la
laboratorio bioquí mico.
incubación, la VB12 de la muestra se une al
- Todos los reactivos y las muestras deben
conjugado. descartarse de acuerdo a la normativa local
En el tercer paso, se agregan las partí culas
vigente.
paramagnéticas cubiertas con VB12 biotinilada,
produciéndose una unión competitiva con el
conjugado factor intrí nseco-fosfatasa alcalina. Estabilidad e instrucciones de
Luego de la incubación las micropartí culas se almacenamiento
capturan magnéticamente. Las sustancias no El kit es estable a 2-8ºC hasta la fecha de
unidas se remueven por lavado. vencimiento indicada en la caja.
Por último, se añade la solución de sustrato
(Substrate Solution) a la cubeta de reacción. La
Material requerido (no provisto)
reacción quimioluminiscente producida por el
conjugado se mide como unidades relativas de Analizador de quimioluminiscencia Wiener lab.
luz (RLU). La cantidad de VB12 presente en la CLIA series
muestra es inversamente proporcional a la RLU
generadas durante la reacción. La concentración
de VB12 se determina mediante una curva de Muestra
calibración. Suero o plasma
a) Recolección: obtener la muestra de la
manera habitual. No utilizar muestras
Reactivos provistos
fuertemente hemolizadas ni inactivadas por
calor.
Micropartí
culas paramagnéticas recubiertas con b) Aditivos: en caso de utilizar plasma se
Ra
VB12 en buffer TRIS. recomienda el uso de EDTA, heparina sódica o
heparina de litio como anticoagulantes.
Conjugado de factor intrí
nseco y fosfatasa alcalina
Rb c) Centrifugar las muestras y separar el suero o
en buffer PBS.
plasma antes de las dos horas.
PT1 Ditiotreitol en buffer de citrato de sodio.
d) Estabilidad e instrucciones de
PT2 Ferricianuro de potasio en hidróxido de sodio. almacenamiento: las muestras deben ser
preferentemente frescas. Si no se procesan
dentro de las 8 horas posteriores a la recolección,
La posición de los componentes del kit se
las muestras deben conservarse a 2-8ºC. De
muestra en la siguiente figura:
esta manera, son estables hasta 48 horas
refrigeradas a 2-8°C, o hasta 2 meses
congeladas a -20°C o menos.
Evitar los ciclos de congelado y descongelado.
Procedimiento
Antes de cargar los reactivos en el analizador se
debe invertir suavemente el frasco de reactivos
sin abrir por lo menos 30 veces para
resuspender las micropartí culas sedimentadas
Reactivos no provistos durante el almacenamiento. Realizar una
.- VB12 Calibrators inspección visual del frasco para asegurar la
- Metabolic Multi Control (L) resuspensión de las micropartí culas. Si las
- Metabolic Multi Control (H) mismas continúan adheridas al frasco, seguir
- Wash Buffer invirtiéndolo hasta su resuspensión completa. Si
- Substrate Solution aún asílas micropartí culas no se resuspenden,
se recomienda desechar el frasco.
Estos reactivos son provistos separadamente El ensayo requiere 50 μL de muestra. En este
por Wiener lab. volumen no se incluye el volumen muerto del
contenedor de muestras.
Instrucciones para su uso
Los reactivos son listos para usar Calibración
El kit Vitamin B12 (CLIA) de Wiener lab. ha
Precauciones sido estandarizado con un ensayo comercial de
VB12 (CLIA).
- Para uso diagnóstico “in vitro”.
La información especí fica de la curva maestra de
- Mantener el kit de reactivos en posición vertical calibración está contenida en el código
para asegurar que no se pierdan micropartí culas bidimensional provisto. Se utiliza junto con los
antes del uso.
calibradores para la calibración del lote de
- No utilizar reactivos de otro origen. reactivo específico. Al realizar la calibración, se
- No utilizar reactivos después de la fecha de
1 /2
debe escanear primero la información de la
curva maestra de calibración del código
bidimensional en el sistema. A continuación,
utilizar los calibradores a tres niveles. Se
requiere una curva de calibración válida antes de
cualquier prueba de VB12. Se recomienda una
recalibración cada 4 semanas, cuando se utilice
un nuevo lote de reactivos o los controles de
calidad no se encuentren dentro de los intervalos
especificados. Para obtener información
detallada sobre la calibración, consulte el
manual de funcionamiento del analizador.
Control de calidad
Metabolic Multi Control (L) y Metabolic
Multi Control (H) de Wiener lab.
Cálculo de los resultados
El analizador calcula automáticamente la
concentración de analito de cada muestra a
partir de la curva maestra de calibración leí
da del
código bidimensional y un ajuste de la curva
logí
stica de 4 parámetros (4PLC) con las RLU
generadas por los 3 niveles de calibradores. Los
resultados se muestran en pg/mL.
Factores de conversión:
pmol/L x 1,36 = pg/mL
pg/mL x 0,738 = pmol/L
Valores esperados
En un estudio realizado sobre una población de
138 individuos sanos se obtuvo el siguiente
intervalo de referencia:
Número de
Categorí
a Percentilo 2,5-97,5%
muestras
Individuos sanos 138 180-916 pg/mL
Se recomienda que cada laboratorio establezca
su propio intervalo de referencia.
Limitaciones del procedimiento
El límite superior del ensayo es de 2000 pg/mL.
Se puede determinar cuantitativamente una
muestra con una concentración de VB12 inferior
al límite superior, pero una muestra con una
concentración mayor que el lí mite superior se
informarácomo >2000 pg/mL.
La concentración de VB12 en una muestra
ensayada con distintos kits comerciales, puede
variar debido a diferencias en los métodos de
ensayo, calibración y especificidad de los
reactivos. Los resultados del ensayo se deben
utilizar junto con otros datos, como sí ntomas,
resultados de otras pruebas, historia clí
nica, etc.
Muestras de individuos expuestos a anticuerpos
monoclonales de ratón pueden contener
anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA). Estas
muestras pueden mostrar valores falsamente
elevados o bajos con kits que utilicen
anticuerpos de ratones monoclonales. Sin
embargo, no se observaron interferencias
evidentes de HAMA en este ensayo.
Performance
a) Sensibilidad analí
tica: ≤ 50 pg/mL
b) Rango de medición: 50-2000 pg/mL.
Español-3
 Wiener lab.
c) Especificidad: and management by laboratory methods. F Riesgo biológico
- No se observan interferencias por hemoglobina Erythrocytic disorders 1991; 627-635.
hasta 1000 mg/dL, bilirrubina hasta 60 mg/dL, - Chararin I. Megaloblastic Anemia, Cobalamin
triglicéridos hasta 1500 mg/dL, proteínas y Folate. J Clin Pathol 1987; 40:978-84. Contenido
totales hasta 9,0 g/dL, factor reumatoide hasta Cont.
200 UI/mL ni anticuerpo antinuclear. - Hoffbrand AV. Vitamin B12 and folate
metabolism: the megaloblastic anæmias and
- El calibrador C0 de VB12 Calibrators se
enriqueció con dicianocobinamida. No se
other nutritional anæmias. In Blood and its
disorders, 1982; 199-263.
M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
observóreactividad cruzada significativa ya que ELECTRONICS CO., LTD.
- Beuerlein FJ. Testing Strategies for Anemias. Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
todos los resultados fueron ≤0,5%. Los
Lab Mgmnt 1988; dic:23-9. Industrial Park.
resultados se resumen en la siguiente tabla.
- Klee GC. Cobalamin and Folate Evaluation:
Fabricado para:
Measurement of Methylmalonic Acid and
Concentración Reactividad Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Sustancia Homocysteine vs. Vitamin B12 and Folate. Clin
(ng/mL) cruzada Riobamba 2944
Chem 46; 2000:1277-83.
dicianocobinamida 200 0,11% 2000 Rosario - Argentina
- Snow CF. Laboratory Diagnosis of Vitamin B12 http://www.wiener-lab.com
and Folate Deficiency: A Guide for the Primary Producto Autorizado por A.N.M.A.T.
d) Exactitud: Care Physician. Arch Intern Med. 1999; PM-1102-145.
Se usaron dos controles con valores trazables y 159:1289-98. Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
predefinidos para verificar la exactitud de este Bioquí mica
- Carethers M. Diagnosing Vitamin B12
ensayo. Los resultados demostraron que las
Deficiency, A Common Geriatric Disorder.
desviaciones relativas eran inferiores a ±10 %. Geriatrics 1988; 43(3):89-112.
Los resultados se resumen en la siguiente tabla.
- Herbert V. Five Possible Causes of All Nutrient
Deficiency: Illustrated by Deficiencies of
VB12 VB12 Vitamin B12 and Folic Acid. Am J Clin Nutr
Desví
o
Muestra medida predefinida
relativo
1973; 26:77-86.
(pg/mL) (pg/mL)
- Pratt JJ, Woldring MG. Radioassay of Vitamin
Nivel 1 243,55 252,19 -3,43% B12 and Other Corrinoids. Methods Enzymol
Nivel 2 630,58 608,61 3,61% 1982; 84:369-406.
- Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic
e) Precisión: antibodies: a problem for all immunoassays.
La precisión se determinómediante el protocolo Clin Chem 1988; 34:27-33.
EP5-A2 del Comité Nacional de Estándares de
Laboratorio Clínico (NCCLS). Se probaron dos - Kricka L. Interferences in immunoassays - still
niveles de controles de calidad por duplicado en a threat. Clin Chem 2000; 46: 1037-1038.
dos series independientes por dí a, durante un - Bjerner J y otros. Immunometric assay
total de 20 días. interference: incidence and prevention. Clin
Chem 2002; 48: 613-621.
Valor CV CV
Muestr
medio intraensa interensa CV total
a SÍMBOLOS
(pg/mL) yo yo
1 251.24 3.63 % 2.07 % 3.68 %
2 600.01 3.56 % 2.21 % 3.56 % C Este producto cumple con los
requerimientos previstos por la Directiva
f) Linealidad: la reacción es lineal entre 50 y Europea 98/79 CE de productos sanitarios para
2000 pg/mL el diagnóstico "in vitro"
g) Correlación:
El ensayo de Vitamin B12 (CLIA) de Wiener
lab. se comparó con un kit de diagnóstico
P Representante autorizado en la
Comunidad Europea
disponible comercialmente en un estudio de
correlación con unas 306 muestras de suero. Los M Elaborado por
datos estadí sticos obtenidos se resumen en la
siguiente tabla.
V Uso diagnóstico "in vitro"
Intervalo de
Coeficiente de i Consultar instrucciones de uso
Concentración Pendiente Intersección
correlación
(pg/mL) U Este lado arriba
50 ~ 2000 0,9932 5,6632 0,9917

l Límite de temperatura (conservar a)

Presentaciones
- 2 x 50 tests (cód. 1001183)
g Número de lote
- 2 x 100 tests (cód. 1001184) H Fecha de caducidad
Referencias h Número de catálogo
- Nelson DA y Davey FR. In Clinical diagnosis
v. 000 URAA/MM/DD P/N:046-010130-00(1.0) 2 /2 Español-3