Artikel Penelitian

Respon fitoplankton terhadap perubahan suhu dan nutrisi jangka pendek

Abstrak
Peristiwa ekstrim meteorologi (curah hujan lebat, gelombang panas) dapat menyebabkan
perubahan cepat dalam beban nutrisi dan suhu air di danau beriklim sedang. Kami melakukan
percobaan laboratorium dengan komunitas fitoplankton buatan untuk meniru peningkatan suhu
yang cepat (dari 21  °C menjadi 29  °C) pada tingkat nutrisi rendah ('skenario gelombang panas'),
masing-masing penurunan suhu (dari 21  °C menjadi 16 °C ). °C) dan peningkatan beban nutrisi
('skenario hujan lebat'). Kami berhipotesis bahwa ada takson spesifik nutrisi x interaksi suhu,
yang mengarah ke perubahan yang signifikan dalam komposisi komunitas fitoplankton ketika
kedua variabel berubah. Untuk memisahkan efek suhu dari efek nutrisi, kami melakukan
serangkaian eksperimen lain pada suhu yang dikurangi tetapi tanpa penambahan nutrisi. Seperti
yang diharapkan, efek nutrisi secara keseluruhan lebih penting daripada suhu dan secara
signifikan mempengaruhi kelima taksa yang diuji yang mewakili kelas alga yang
berbeda. Namun, suhu juga memainkan peran penting untuk komposisi komunitas, karena
cryptophyte Cryptomonas sp. dan Peridinium dinoflagellatasp. mencapai biovolume secara
signifikan lebih tinggi pada suhu yang lebih rendah. Interaksi nutrisi x suhu signifikan pada alga
hijau Scenedesmus obliquus . Temuan ini menunjukkan bahwa hasil eksperimen kami tidak
dapat ditafsirkan terutama oleh kompetisi spesies untuk nutrisi. Bakteri heterotrofik hadir di
semua percobaan. Biomassa bakteri secara signifikan berhubungan positif dengan suhu dan
nutrisi. Namun, relatif terhadap biovolume fitoplankton, biovolume bakteri menurun di bawah
kondisi penuh nutrisi. Kesimpulannya, hasil kami menunjukkan bahwa perubahan lingkungan
jangka pendek dapat secara signifikan mempengaruhi komunitas fitoplankton (dalam hal
dominasi spesies dan biomassa total) dan rasio antara autotrof danheterotrof di danau beriklim
sedang.

Kata kunci
Bakteri, Perubahan iklim, Peristiwa ekstrim, Nutrisi, fitoplankton, Suhu
1 . PENGANTAR
Dekade terakhir telah menyaksikan sejumlah luar biasa peristiwa cuaca ekstrem yang belum
pernah terjadi sebelumnya seperti gelombang panas dan hujan lebat di belahan bumi utara
( Coumou dan Rahmstorf, 2012; Coumou et al., 2014  ). Tingkat pembilasan yang tinggi setelah
curah hujan yang ekstrim dapat secara signifikan meningkatkan beban nutrisi ke danau, sehingga
merangsang pertumbuhan fitoplankton , tetapi juga dapat mengurangi biomassa fitoplankton
karena penghilangan atau pengenceran ( Znachor et al., 2008 ). Efek terakhir telah dipelajari
secara eksperimental dengan plankton laut dan air tawar menguji hipotesis gangguan
menengah ( Gaedeke dan Sommer, 1986 , Sommer, 1995 ).
Berbeda dengan hujan lebat, periode cuaca hangat yang tidak biasa (gelombang panas) dengan
curah hujan rendah mengurangi beban nutrisi yang berasal dari debit sungai tetapi dapat
mempengaruhi ekosistem dengan berbagai efek terkait suhu. Respon fitoplankton terhadap suhu
telah dipelajari secara intensif di laboratorium dan diketahui sejak lama bersifat spesifik spesies
(ditinjau oleh Reynolds, 1984 ). Interaksi suhu dengan suplai nutrisi diketahui dari studi empiris
dan penyelidikan eksperimental dengan berbagai ganggang laut dan air tawar (misalnya Deng et
al., 2014 , Malik dan Saros, 2016 , Rhee dan Gotham, 1981 , Yvon-Durocher et al., 2015). Hal
ini karena suhu tidak hanya mempengaruhi fotosintesis dan laju pertumbuhan alga, tetapi
juga komposisi biokimia dan kebutuhan nutrisinya (ditinjau oleh Juneja et al., 2013 ). Di alam,
kondisi sangat bervariasi, dan efek terkait suhu kompleks dan seringkali tidak langsung,
misalnya melalui perubahan komposisi zooplankton dan tekanan
penggembalaan ( Lewandowska et al., 2014 ). Hasil pemodelan
dari eksperimen mikrokosmos ( Montagnes et al., 2008 ) menunjukkan bahwa fluktuasi suhu
jangka pendek berkisar antara 2 hingga 10 °C dapat berdampak signifikan terhadap fluks
karbon air tawar ; produksi karbon memuncak pada 20  °C dan menurun dengan cepat di atas dan
di bawah maksimum ini. Efek signifikan dari gelombang panas musim panas 2003 dan 2006
telah dicatat untuk komposisi dan keanekaragaman fitoplankton dan zooplankton di beberapa
danau Eropa tengah (diringkas oleh De Senerpont Domis et al., 2013 ). Fluktuasi suhu yang
besar selama periode yang relatif singkat tampaknya menjadi aturan daripada
pengecualian. Misalnya, perubahan suhu air bulanan >15  °C terjadi secara teratur di Danau
Mondsee, Austria tengah, selama musim panas (Hydrographische Jahrbücher von sterreich,
tersedia di http://www.bmlfuw.gv.at/wasser/wasser-oesterreich/
wasserkreislauf/hydrographische_daten/jahrbuecher/ ). Suhu air pantai yang tercatat di danau ini
selama gelombang panas terakhir pada Agustus 2015, meningkat dari 20,8 °C (direkam pada 3
Agustus hingga 27,4  °C (direkam pada 13 Agustus; memiliki data yang tidak
dipublikasikan). Bahkan perubahan moderat pada suhu air permukaan sebesar 4-6  °C dalam
beberapa minggu disertai dengan perubahan signifikan dalam komunitas fitoplankton danau ini
selama musim panas ( Gröschl, 2013 ). Karena frekuensi pengambilan sampel yang terbatas
(biasanya setiap tiga bulan hingga bulanan) dari sebagian besar program pemantauan, hampir
tidak mungkin untuk membedakan antara efek interaktif jangka pendek nutrisi dan suhu dari
studi lapangan.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memberikan perkiraan pertama tentang potensi
signifikansi kejadian ekstrim meteorologi, yang menyebabkan perubahan mendadak dalam beban
nutrisi dan suhu, untuk komunitas fitoplankton di danau beriklim oligo-mesotrofik seperti L.
Mondsee. Gelombang panas dan curah hujan lebat biasanya terjadi selama musim
panas. Biomassa fitoplankton musim panas di L. Mondsee didominasi oleh
diatom, dinoflagellata dan kriptofit; chrysophytes dan cyanobacteria kolonial selain
dari Planktothrix rubescens yang hidup dalam tidak terlalu penting ( Dokulil dan Teubner,
2012 ). Cyanobacteria kaya phycoerythrin bersel tunggal terjadi dalam jumlah tinggi (>
105 sel mL  1 ) diepilimnion selama musim panas ( Crosbie et al., 2003b ; T. Weisse, unpubl.
data).
Bersama dengan nutrisi dan suhu ( Salmaso et al., 2012 ), cahaya adalah variabel kunci yang
mengendalikan perkembangan fitoplankton di danau. Tingkat cahaya permukaan juga dapat
berubah selama peristiwa meteorologi ekstrim, yaitu mereka cenderung meningkat selama
gelombang panas dan biasanya menurun selama peristiwa hujan lebat ( Elber dan Schanz,
1990 , Weyhenmeyer et al., 2004).). Di kolom air, atenuasi, yang merupakan proses fisik
kompleks yang berinteraksi dengan sifat biologis (biomassa fitoplankton dan absorbansi cahaya),
menentukan energi cahaya yang tersedia untuk fotosintesis. Namun, karena pengetahuan kami
tentang efek peristiwa ekstrem meteorologis pada iklim ringan di danau beriklim sedang masih
dalam tahap awal, kami tidak membahas efek perubahan tingkat cahaya dalam penelitian ini dan
melakukan eksperimen pada intensitas cahaya sedang (∼110  E  m 2 s 1 ) yang biasanya
ditemukan pada kedalaman air beberapa m di danau beriklim mesotrofik selama musim panas . 
Kami berhipotesis bahwa ada efek spesifik takson dari nutrisi, suhu, dan interaksi nutrisi x suhu,
yang mengarah ke perubahan signifikan dalam komposisi komunitas fitoplankton ketika kedua
variabel berubah. Untuk tujuan ini, kami melakukan percobaan laboratorium dengan komunitas
fitoplankton buatan untuk meniru peningkatan suhu yang cepat (dari 21  °C menjadi 29  °C) pada
tingkat nutrisi rendah ('skenario gelombang panas'), masing-masing penurunan suhu (dari 21  °C
menjadi 16 °C ).  °C) dan peningkatan beban nutrisi ('skenario hujan lebat'). Untuk memisahkan
suhu dari efek nutrisi, kami melakukan rangkaian percobaan ketiga pada suhu yang dikurangi
tetapi tanpa penambahan nutrisi.
Terutama karena kultur fitoplankton kami adalah non-axenic dan bakteri bersaing dengan
fitoplankton untuk nutrisi ( Bratbak dan Thingsstad, 1985 ), kami memantau tingkat bakteri di
semua percobaan. Kami juga ingin menguji asumsi bahwa laju pertumbuhan bakteri di danau
tidak bergantung pada suhu pada suhu  >16  °C ( Felip et al., 1996 ).

2 . BAHAN DAN METODE

2.1 . Desain eksperimental
Tiga dari lima spesies fitoplankton yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari
Eksperimental Phycology and Culture Collection of Algae di University of Göttingen
(SAG): Fragilaria  crotonensis (SAG strain #28.96), Peridinium sp. (SAG strain #2017),
dan Cryptomonas sp. (SAG strain #26.80). Scenedesmus obliquus chlorophyte berasal dari
koleksi budaya mantan Max-Planck-Institute for Limnology di Plön,
Jerman. Synechococcus sp. (strain MH33B4) sebelumnya diisolasi dari Danau Mondsee, sebuah
danau oligomesotrofik yang dalam di Austria tengah ( Crosbie et al., 2003a); strain ini mewakili
cyanobacterium chroococoid khas yang kaya fikoeritrin di danau ( Crosbie et al.,
2003b ). Diatom F. crotonensis disimpan dalam media diatom asli yang digunakan oleh SAG
(tersedia di http://sagdb.uni-goettingen.de/detailedList.php? str_number  = 28.96); kultur stok
dari semua galur lain disimpan dalam media WC yang dimodifikasi sesuai dengan resep Koleksi
Kultur Alga dan Protozoa di Oban, Inggris (www.ccap.ac.uk). Semua strain fitoplankton adalah
monokultur non-axenic dan dipelihara dalam labu kultur jaringan 50-200  volume ml. Mereka
disimpan sebagai kultur batch semi-kontinyu; inokula baru disiapkan sekali seminggu. Jumlah
sel diukur secara rutin dengan penghitung partikel elektronik (CASY 1-Model TTC, Sistem
Schärfe) yang menghasilkan perkiraan yang akurat tentang kelimpahan dan biovolume
dalam kultur alga hidup  yang padat (>10.000 sel mL 1 ( Weisse
) 
dan Kirchhoff,
1997 ). Synechococcus  sp. dan dinoflagellata Peridinium sp. disimpan di bawah cahaya terus
menerus pada 15 °C, strain lain di bawah 16:8 jam kondisi terang:gelap (L:D) pada
21 °C. Intensitas cahaya dalam kultur rutin adalah 110 mol m 2 s       1 . Kultur stok dan semua
botol percobaan disimpan dalam dua inkubator (Model KBK/LS 4330, Ehret, Jerman) dengan
resolusi suhu 0,1 °C. Untuk percobaan, kami menggunakan fotoperiode 16:8 jam (L:D) dan
mensimulasikan siklus cahaya alami dengan meningkatkan intensitas cahaya dari
68 mol m 2 s 1 pada awal periode cahaya menjadi 99 mol m 2 s 1 setelah 1 jam dan kemudian
menjadi 120 mol m 2 s 1 setelah 2 jam ; intensitas cahaya ini dipertahankan selama 10 jam dan
kemudian secara bertahap dikurangi menjadi 68 mol                m 2  s 1 pada akhir periode
cahaya. Terintegrasi selama periode cahaya, cahaya rata-rata berjumlah
108  mol  m 2  s 1 . Pencahayaan disediakan oleh lampu siang hari (OSRAM TUBE L 30W/840
LUMILUX COOL WHITE). Intensitas cahaya diukur di setiap inkubator dengan sensor kuantum
(Model Q 38487, LI-COR Biosciences, Lincoln, USA) dan pencatat data (LI-COR, Model Li-
1400); intensitas cahaya diukur pada tujuh posisi pada shaker yang digunakan untuk percobaan
dan rata-rata untuk setiap intensitas cahaya.
Untuk percobaan, media diganti dengan air tua dari Danau Mondsee; air dikumpulkan
dari  kedalaman 1 m di lokasi terdalam danau pada beberapa kesempatan selama akhir musim
gugur dan awal musim semi. Segera setelah pengambilan sampel, air steril disaring melalui filter
Millipore (Express™PLUS, ukuran pori 0,22  m), dituangkan ke dalam beberapa labu Schott 2-L
yang diautoklaf dan dimasukkan ke microwave pada 900W selama 7,5  menit. Air yang disaring
steril disimpan dalam gelap pada 8 °  C sampai awal percobaan.
Percobaan dilakukan dalam botol Erlenmeyer  volume 1.000 mL (Exps 1B-3) atau labu kultur
250  mL (Exp. 1A). Eksperimen pertama (Eks. 1A) berfungsi untuk memeriksa kemungkinan
'efek botol' khusus takson. Kami memaparkan budaya spesies tunggal (monokultur) dan
kumpulan alga campuran yang terdiri dari kelima spesies ke peningkatan suhu bertahap dari
21  °C menjadi 29  °C (lihat di bawah, 'skenario gelombang panas' ); semua perlakuan dilakukan
dalam rangkap tiga. Hasil yang dilaporkan dalam gambar mewakili nilai rata-rata  ±  SD. Karena
pembatasan CO2 berpotensi mempengaruhi hasil eksperimen, kami memantau pH di setiap labu
di awal dan pada empat kesempatan pengambilan sampel lagi selama eksperimen ini .
Masing-masing percobaan berikut (Exps 1B-3) terdiri dari tiga labu percobaan pada suhu
variabel dan tiga kontrol pada suhu awal dan konstan. Volume yang lebih besar (3,5 L) disiapkan
untuk setiap seri percobaan dan diinokulasi dengan beberapa mL setiap kultur alga dari kultur
stok padat untuk menghasilkan kelimpahan target eksperimental untuk setiap takson (lihat detail
di bawah). Dua jam setelah inokulasi terakhir , volume ini dibagi menjadi tiga percobaan
ditambah tiga botol kontrol masing-masing 550 mL; sisa air digunakan untuk analisis nutrisi
awal. Semua botol dikocok sedang pada suhu 40   rpm selama percobaan, yang berlangsung
selama tiga minggu. Untuk memastikan pasokan cahaya rata-rata ke setiap wadah, botol
Erlenmeyer diputar searah jarum jam setiap 24  jam. Subsampel untuk analisis fitoplankton
diambil dua hari sekali.
Kelimpahan fitoplankton target adalah 108
 sel L 1 untuk Synechococcus sp., 106 sel L 1 untuk Cryptomonas sp., S.
hingga 109
obliquus dan F.
crotonensis , dan 10 4 sel L 1 untuk Peridinium sp . Kami bertujuan untuk mencapai biovolume awal
0,2-1,0 mm 3 L -1 untuk setiap takson.     
Tingkat nutrisi awal diperkenalkan dengan Synechococcus sp. pada percobaan pendahuluan
(Exp. 1A) relatif tinggi (Tambahan Tabel S1). Oleh karena itu, kami mengurangi jumlah sel awal
dalam percobaan berikut (Exp. 1B). Namun, karena biomassa Synechococcus sp. lebih dari satu
urutan besarnya lebih rendah daripada semua taksa lain dalam percobaan ini (Exp. 1B, Tabel
S2), kami kembali ke tingkat target 109  sel L  1 untuk Synechococcus sp. dalam percobaan
berikut. Jumlah sel awal yang sebenarnya dan biovolume yang sesuai dari keempat percobaan
dilaporkan dalam Tabel S2.
Dalam Eks. 1A, bakteri heterotrofik dalam kultur sel tunggal Synechococcus sp. dan kumpulan
ganggang campuran dianalisis bersama dengan fitoplankton setiap hari kedua. Pada semua
perlakuan lainnya, bakteri heterotrofik dianalisis pada setiap hari keempat percobaan. Wadah
dikocok dengan lembut dengan tangan sebelum pengambilan sampel. Untuk analisis
fitoplankton, 6,86  mL sampel difiksasi dengan 0,14  mL larutan Lugol (2% volume
akhir). Sampel bakteri (4,84  mL) difiksasi dengan formalin (0,16  mL, 3,2% volume
akhir). Karena subsampling, volume percobaan awal (550  mL) dikurangi menjadi 330 mL pada
akhir percobaan. Nutrisi diukur dengan kromatografi ion (NO 3 , NH 4 + ; Dionex ICS-1100,
Thermo Fisher Scientific Inc, USA), masing-masing metode spektrofotometri (NO 2 , fosfor
reaktif terlarut [SRP], dan silikon reaktif terlarut [DRSi]) setelah penyaringan 0,2-μm
menggunakan prosedur operasi standar ( Bendschneider dan Robinson, 1952 , Vogler,
1966 , Smith dan Milne, 1981 ) di awal dan setelahnya setiap hari ketujuh percobaan. Untuk
analisis nutrisi, 50 mL diambil dari setiap wadah percobaan dan botol kontrol dan dikumpulkan
dalam labu polietilen yang dibilas dengan asam sulfat 10%. untuk menghasilkan satu sampel
150-mL komposit untuk setiap perlakuan. Untuk menghindari pengurangan yang kuat dari
volume percobaan, volume (50  mL) yang diekstraksi untuk analisis nutrisi diganti dengan air
Danau Mondsee yang disaring steril segera setelah setiap subsampling.
Dalam seri percobaan pertama ( 'skenario gelombang panas' , Exps 1A dan 1B), kami
meningkatkan suhu dalam botol percobaan secara bertahap (1  °C per hari) dari 21  °C menjadi
29  °C, yaitu suhu percobaan akhir tercapai 8 d setelah awal percobaan dan kemudian dijaga
konstan sampai akhir; di Eks. 1B, kontrol disimpan secara permanen pada 21  °C. Kami tidak
menambahkan nutrisi (kecuali untuk jumlah kecil yang dimasukkan oleh air Danau Mondsee
yang disaring steril setelah setiap subsampling, lihat di atas) ke rangkaian percobaan pertama ini,
yaitu tingkat nutrisi relatif rendah selama percobaan ini (Tabel S1).
Dalam seri percobaan kedua ( 'skenario hujan lebat' ), kami menurunkan suhu dalam botol
percobaan secara bertahap (1  °C per hari) dari 21  °C menjadi 16  °C, yaitu suhu percobaan
akhir dicapai 5 hari setelah awal percobaan dan kemudian dijaga konstan sampai akhir; kontrol
secara permanen disimpan pada 21  ° C. Nutrisi ditambahkan di awal dan kemudian dalam
interval mingguan selama percobaan ini (Tabel S1). Target tingkat nutrisi adalah 10  g  L 1 SRP
dan 700  g  L 1 NO 3  N (nitrat).
Seri percobaan ketiga mengulangi yang sebelumnya tetapi tanpa penambahan nutrisi. Tujuannya
adalah untuk memisahkan efek suhu dari efek nutrisi ketika suhu percobaan dikurangi secara
moderat.
Kami mengukur jumlah sel ganggang eukariotik dengan mikroskop terbalik di ruang sedimentasi
3-mL (eksperimen multispesies), masing-masing di ruang penghitungan kasau Sedgewick 1-mL
(monokultur). Nomor sel cyanobacterium Synechococcus sp. dan bakteri heterotrofik ditentukan
dalam sampel yang difiksasi formalin menggunakan mikroskop epifluoresensi dan
pewarnaan DAPI pada perbesaran 1.250x ( Porter dan Feig, 1980 ). Kami menentukan ukuran sel
semua taksa alga dalam sampel tetap Lugol dengan analisis gambar dan menghitung biovolume
masing-masing untuk setiap takson menggunakan rumus geometris yang sesuai ( Hoehn et al.,
1984 , Carvalho et al., 2007). Kami mengelompokkan bakteri ke dalam beberapa kelas ukuran
selama penghitungan mikroskop epifluoresensi dan memperkirakan volume rata-rata untuk
setiap kelas ukuran dengan asumsi bentuk silinder.
Demi perbandingan, kami juga melaporkan hasil yang tidak dipublikasikan dari eksperimen
tingkat pertumbuhan dengan Cryptomonas sp. regangan 26,80 diperoleh sebelumnya di
laboratorium kami ( Weisse et al., 2002 ) di bawah intensitas cahaya yang sedikit lebih rendah
tetapi terus menerus (∼70  mmol foton m 2  s -1 ); media itu identik dengan yang digunakan
dalam penelitian ini. Pada percobaan sebelumnya Cryptomonas sp. dipertahankan pada 15  ° C
dan, mirip dengan penyelidikan ini, bertahap menyesuaikan diri dengan suhu eksperimental
mulai dari 9 hingga 24  ° C selama 5-7 hari ( Weisse et al., 2002 ). Hasil tidak dilaporkan dalam
penelitian sebelumnya karena fokusnya adalah pada ciliates yangCryptomonas sp. ditawarkan
sebagai makanan.
2.2 . Analisis statistik
Perbedaan antara botol eksperimen dan kontrol diuji dengan analisis varians satu arah (ANOVA)
untuk semua, masing-masing dengan uji- t siswa untuk taksa individu (misalnya,
biomassa Cryptomonas sp. dalam botol eksperimen vs. kontrol). Analisis varians dua arah dan
uji Tukey's Posthoc digunakan untuk menguji pengaruh (interaktif) nutrisi dan suhu terhadap
biovolume alga dan untuk mengisolasi perlakuan mana yang berbeda. Data mentah
ditransformasi log dalam S. obliquus dan F. crotonensis untuk memenuhi asumsi ANOVA
normalitas dan varians yang sama. Untuk bakteri heterotrofik, kami menguji apakah tiga suhu
percobaan akhir yang berbeda (16  °C, 21  °C, dan 29 °C) dan manipulasi nutrisi (dengan vs
tanpa penambahan nutrisi) secara signifikan mempengaruhi hasil (ANOVA dua arah). Hasil
dianggap signifikan jika P < 0,05.

3 . HASIL
Seri eksperimental pertama ( 'skenario gelombang panas' ) menyelidiki respons
komunitas fitoplankton buatan kami terhadap peningkatan suhu air pada tingkat nutrisi
sedang. Untuk mengesampingkan bahwa efek botol khusus takson mengganggu hasil, pertama-
tama kami menguji apakah ganggang merespons dengan cara yang sama dalam kultur
monokultur dan multispesies. Kecenderungan umum adalah identik pada kedua perlakuan:
Biovolume dua dari lima spesies yang diselidiki, klorofit S. obliquus ( Gbr. 1 b) dan diatom F.
crotonensis ( Gbr. 1 e), meningkat secara signifikan selama periode percobaan, keduanya dalam
percobaan monokultur dan multispesies (Gambar 1 d). Dalam yang terakhir, biomassa S.
obliquus lebih tinggi dari biomassa gabungan dari semua spesies lain pada akhir percobaan
( Gbr. 1 d). Cyanobacterium Synechococcus sp . ( Gbr. 1 a) hampir punah selama
percobaan. Biomassa Cryptomonas sp. dua kali lipat selama empat hari pertama tetapi menurun
ke tingkat yang tidak terdeteksi ketika suhu eksperimental maksimum (29  °C) tercapai ( Gbr.
1 c). Biomassa dinoflagellata Peridinium sp. tetap relatif konstan selama percobaan ( Gbr.
1F); biomassa dinoflagellata akhir 26% lebih rendah dari biomassa awalnya.

Gambar 1 . Respon lima spesies fitoplankton dan flora bakteri yang menyertainya terhadap

peningkatan suhu bertahap (1  °C per hari) dari 21 menjadi 29  °C ( 'skenario gelombang
panas' ) dalam monokultur (a–f) dan dalam budaya multispesies (d). Perhatikan bahwa skala
sumbu Y dari (d) berbeda. Simbol menunjukkan nilai rata-rata rangkap tiga, bilah kesalahan
menunjukkan 1  SD. Batang horizontal menunjukkan periode ketika suhu eksperimental tertinggi
tercapai.

Jumlah sel bakteri dan biomassa (Gambar Tambahan S1) rendah pada semua perlakuan dengan
dua pengecualian; bakteri meningkat dari
< 2  ×  106 sel mL 1 menjadi 15 × 106 sel mL 1 baik di  Synechococcus sp . monokultur (Gbr. S1a) dan
dalam perlakuan multispesies (Gbr. S1d). Namun, hanya dalam biomassa bakteri monokultur
meningkat kuat (sampai 14,0 mm 3 L -1, Gambar. S1a ); dalam pengobatan multispesies biomassa
bakteri memuncak pada 2,7 mm 3 L 1          17 hari setelah awal percobaan (Gbr. S1d). Perbedaan
ini disebabkan rata-rata ukuran sel bakteri yang meningkat dari 0,24  m 3 menjadi
0,77  m 3 pada Synechococcus sp. pengobatan tetapi tetap konstan (0,19  ±  0,04  m 3 ) dalam
wadah multispesies (data tidak ditampilkan). Biomassa bakteri jauh melebihi biomassa
cyanobacterial dalam monokultur (lih. Gambar 1a dan Gambar. S1a). Biomassa bakteri juga
lebih tinggi dibandingkan biomassa Cryptomonas sp. selama minggu terakhir percobaan (lih .
Gambar 1 c dan S1c); namun, biomassa bakteri akhir jauh lebih rendah (<2  mm 3  L 1)
dibandingkan dengan perawatan cyanobaterial (Gbr. S1a). Dalam perlakuan lain dengan alga
eukariotik tunggal, biomassa bakteri secara konstan <0,7  mm 3  L -1 (Gbr. S1b, e, f).
Perubahan tingkat pH di antara 18 botol percobaan secara keseluruhan kecil (berkisar 8,50-8,78,
n  =  90) dan hampir konstan di setiap ulangan (SD pH rata-rata  <  0,04). Kami tidak mengukur
spesies nitrogen selain nitrat dalam percobaan awal (Exp. 1A). Meskipun rasio N:P dihitung dari
NO3N dan  SRP (Tabel S1, nilai yang ditandai dengan tanda bintang) oleh karena itu
meremehkan rasio molar yang sebenarnya, rasio tinggi (>35–534) yang dilaporkan pada Tabel
S1 menunjukkan bahwa fosfor adalah makronutrien yang membatasi dalam semua
perawatan. Silikon reaktif terlarut (DRSi) menurun selama percobaan hanya dalam botol di
mana F. crotonensishadir (perlakuan monokultur dan multispesies; nilai DRSi terendah
dilaporkan pada Tabel S1 untuk Exp. 1A).
Eksperimen 'skenario gelombang panas' kedua (Exp. 1B) menghasilkan hasil yang serupa. Rasio
N:P (33-736) menunjukkan bahwa fosfor adalah makronutrien yang membatasi selama
percobaan ini (Tabel S1). Namun, kadar SRP, NO 2  N, dan NH 4 + -N semuanya lebih tinggi
satu minggu setelah awal percobaan daripada di awal. Biovolume S. obliquus ( Gbr. 2 b) dan F.
crotonensis ( Gbr. 2d), meningkat secara signifikan selama periode percobaan, baik dalam botol
percobaan pada suhu tinggi dan kontrol pada suhu konstan. Biovolume akhir diatom melebihi
volume gabungan dari empat spesies lainnya, terlepas dari perlakuan
suhu. Cyanobacterium Synechococcus sp. ( Gambar 2 a) dan dinoflagellata Peridinium sp. ( Gbr.
2 e) menurun di semua labu. Biomassa Cryptomonas sp. meningkat tajam selama sembilan hari
pertama dan kemudian menurun ( Gbr. 2 c); penurunan ini lebih kuat pada suhu yang lebih
tinggi, yaitu biomassa Cryptomonas sp. secara signifikan lebih rendah ( t -test, P <  0,001) dalam
labu percobaan pada 29  °C dibandingkan dengan botol kontrol pada 21  °C selama minggu
terakhir percobaan.

Gambar 2 . Respons biovolume lima spesies fitoplankton terhadap peningkatan suhu dari 21

menjadi 29  °C (segitiga terisi) pada tingkat nutrisi rendah ( 'skenario gelombang
panas' ). Kontrol (lingkaran terbuka) dijaga konstan pada 21  °C. Perhatikan bahwa karena
biomassa adalah spesies yang sangat bervariasi, skala sumbu Y berbeda di beberapa
panel. Simbol menunjukkan nilai rata-rata rangkap tiga, bilah kesalahan menunjukkan
1  SD. Batang horizontal menunjukkan periode ketika suhu eksperimental tertinggi tercapai.

Seri percobaan berikutnya ( 'skenario curah hujan lebat' ) menyelidiki respon fitoplankton
terhadap penurunan suhu air di bawah sebagian besar kondisi penuh nutrisi ( Gbr. 3 , Tabel
S1). Konsentrasi fosfor reaktif terlarut berada di atas batas deteksi pada akhir minggu pertama
(1,2-2,9  g  L -1 ) tetapi mendekati nol dua minggu setelah awal percobaan ini. Penambahan hara
pada hari ke-14 diikuti dengan peningkatan biomassa S.
obliquus ( Gambar 3b ), Cryptomonas sp. ( Gbr. 3 c) dan F. crotonensis ( Gbr. 3d) di semua
botol percobaan. Spesies nitrogen dan SRP habis pada akhir percobaan, dan, berbeda dari semua
percobaan lainnya, pembatasan nitrogen mungkin terjadi dalam labu percobaan selama hari-hari
terakhir (rasio N:P akhir 1,9). Serupa dengan eksperimen sebelumnya, biomassa S.
obliquus ( Gbr. 3 b) dan F. crotonensis ( Gbr. 3 d) meningkat secara signifikan selama periode
eksperimen. Namun, berbeda dengan percobaan sebelumnya, biomassa akhir alga hijau lebih
tinggi daripada diatom, baik dalam botol percobaan maupun dalam
kontrol. Biomassa Synechococcus sp. runtuh selama empat hari pertama percobaan ( Gbr. 3a),
sedangkan ukuran populasi Peridinium sp. dua kali lipat selama minggu pertama dan kemudian
tetap stabil ( Gbr. 3 e). Suhu berpengaruh negatif terhadap Peridinium sp. biomassa; biovolume
akhir dari dinoflagellata dan juga Cryptomonas sp. ( Gbr. 3 c) secara signifikan lebih tinggi pada
perlakuan eksperimental pada suhu yang dikurangi dibandingkan dengan kontrol. Biovolume
akhir rata-rata kumulatif dari semua spesies yang dicapai dalam kontrol (130,6  mm 3  L -1 )
adalah biomassa fitoplankton tertinggi yang diukur dalam percobaan kami. Dalam wadah
eksperimental, rata-rata biovolume akhir gabungan adalah 103,7  mm 3  L 1, yaitu sekitar lima
kali lipat lebih tinggi dari percobaan sebelumnya (22,3  mm 3  L 1 ).

Gambar 3 . Respon lima spesies fitoplankton terhadap penurunan suhu dari 21 menjadi 16  °C

(segitiga terisi) di bawah kondisi penuh nutrisi (yaitu, dengan penambahan nutrisi berulang yang
ditunjukkan oleh garis vertikal putus-putus) ( 'skenario hujan lebat' ). Kontrol (lingkaran
terbuka) dijaga konstan pada 21  °C. Perhatikan bahwa karena biomassa adalah spesies yang
sangat bervariasi, skala sumbu Y berbeda di beberapa panel. Simbol menunjukkan nilai rata-rata
rangkap tiga, bilah kesalahan menunjukkan 1  SD.

Seri percobaan terakhir menyelidiki respon fitoplankton terhadap penurunan suhu air di bawah
kondisi kekurangan nutrisi ( Gbr. 4 , Tabel S1); tingkat SRP akhir berada di bawah batas deteksi,
dan, karena rasio N:P >60 selama percobaan ini, kemungkinan pembatasan P permanen. Seperti
pada percobaan sebelumnya, populasi Synechococcus sp. runtuh selama empat hari pertama
percobaan ( Gbr. 4 a). Empat taksa lainnya merespon spesies-khusus untuk perawatan. Dalam S.
obliquus ( Gbr. 4 b) dan Cryptomonas sp. ( Gbr. 4c), biomassa akhir secara signifikan lebih
tinggi dalam wadah eksperimental pada suhu yang dikurangi daripada di kontrol suhu
konstan. Manipulasi suhu tidak berpengaruh pada F. crotonensis ( Gbr. 4 d)
dan Peridinium sp. ( Gbr. 4 e). Biomassa akhir dinoflagellata adalah 1,77x lebih tinggi dari
biomassa awal dalam botol percobaan, masing-masing 1,61x lebih tinggi pada kontrol; ini
sebanding dengan seri percobaan ketiga dengan penambahan nutrisi (peningkatan biomassa
dengan faktor 1,73 dalam percobaan, masing-masing 1,61 pada kontrol).

Gambar 4 . Respon lima spesies fitoplankton terhadap penurunan suhu dari 21 menjadi 16  °C

(segitiga terisi) pada tingkat nutrisi rendah (yaitu, tanpa penambahan nutrisi). Kontrol (lingkaran
terbuka) dijaga konstan pada 21  °C. Perhatikan bahwa karena biomassa adalah spesies yang
sangat bervariasi, skala sumbu Y berbeda di beberapa panel. Simbol menunjukkan nilai rata-rata
rangkap tiga, bilah kesalahan menunjukkan 1  SD.

Sensitivitas Cryptomonas sp. regangan 26,80 ke suhu tinggi yang diamati dalam penelitian ini

sesuai dengan hasil sebelumnya yang diperoleh di laboratorium kami ( Weisse et al., 2002 ) di
bawah intensitas cahaya yang sedikit lebih rendah tetapi terus menerus (∼70  mmol foton m 2  s -
1
 ). Laju pertumbuhan Cryptomonas sp. relatif tinggi dalam penelitian sebelumnya pada suhu
mulai dari 12 hingga 18  °C (dan tidak berbeda secara signifikan dari penelitian ini) dan menurun
baik pada suhu yang lebih rendah dan lebih tinggi ( Gbr. 5 ).

Gambar 5 . Laju pertumbuhan Cryptomonas sp. regangan 26,80 di bawah intensitas

cahaya kontinu (70  mmol foton m 2  s 1 ). Simbol menunjukkan nilai rata-rata rangkap tiga, bilah
kesalahan menunjukkan 1  SD.

3.1 . Analisis statistik interaksi nutrisi x suhu

ANOVA dua arah terungkap untuk semua taksa kecuali Synechococcus sp. efek nutrisi yang
signifikan; untuk cyanobacterium, efek nutrisinya tidak jelas (P  =  0,053). Pengaruh suhu
signifikan pada Cryptomonas sp. (P  <  0,001) dan Peridinium sp. (P  =  0,034), tetapi interaksi
suhu x nutrisi tidak signifikan dalam kedua kasus (P  =  0,096 di Cryptomonas , masing-masing
P  = 0,180  di Peridinium ). Mirip dengan efek nutrisi, suhu x interaksi nutrisi sangat signifikan
(P  <  0,001) di S. obliquus, sedangkan suhu saja tidak mempengaruhi biovolume alga hijau
(P  =  0,732).
3.2 . Bakteri heterotrof
Biomassa bakteri heterotrofik meningkat pada semua perlakuan selama dua minggu pertama
percobaan ( Gbr. 6 a,b). Karena artefak fiksasi, tidak ada data bakteri yang tersedia untuk hari
ke-4 di Exp. 2. Perbedaan berpasangan antara wadah eksperimental pada variabel ( Gbr. 6 a) dan
kontrol pada suhu konstan ( Gbr. 6 b) tidak signifikan di masing-masing dari tiga
percobaan. Namun, jika data dikumpulkan, suhu (P  =  0,032) dan penambahan nutrisi
(P  =  0,016) berpengaruh nyata terhadap biomassa bakteri (ANOVA dua arah). Kami tidak dapat
menguji suhu  × interaksi nutrisi karena ada sel kosong dalam desain ANOVA kami (misalnya,
kami tidak menambahkan nutrisi dalam skenario gelombang panas).

Gambar 6 . Biomassa bakteri heterotrofik dalam labu percobaan (a) dan kontrol (b). Bilah
kesalahan dalam (a) dan (b) menunjukkan 1  SD dari nilai rata-rata.

Pasokan nutrisi disukai biomassa alga, relatif terhadap biomassa bakteri ( Gbr. 7 ). Di akhir
Exp. 2, kontribusi bakteri relatif terhadap total biomassa plankton hanya mencapai 2,8%
(kontrol), masing-masing 3,4% (botol percobaan). Demikian pula, biomassa bakteri adalah 4,6%
pada akhir percobaan awal (Exp. 1A) di mana nitrat awal dan tingkat SRP dalam pengobatan
multispesies tinggi (Tabel S1). Dalam percobaan lain, bakteri menyumbang sekitar 20% pada
biomassa plankton akhir.

Gambar 7 . Rata-rata total biomassa plankton  akhir (dalam mm  L −1 ) dalam empat seri

percobaan. Untuk Eks. 1A, hanya hasil dari pengobatan multispesies yang ditampilkan. Dalam
semua percobaan lain, suhu dalam labu percobaan diubah selama percobaan seperti yang
ditunjukkan di sebelah kiri diagram lingkaran, sementara suhu dijaga konstan dalam labu
kontrol. Ukuran diagram lingkaran diskalakan; nilai biomassa diberikan di bawah setiap diagram
lingkaran.
4 . DISKUSI
Kami melakukan percobaan laboratorium untuk mensimulasikan respon
komunitas fitoplankton terhadap perubahan lingkungan jangka pendek yang disebabkan oleh
curah hujan yang tinggi, masing-masing gelombang panas, yang cenderung meningkat di Eropa
tengah karena perubahan iklim ( Meehl dan Tebaldi, 2004 , IPCC, 2013 ) . Dalam beberapa
kasus, efek dari kejadian ekstrim meteorologi dapat disimpulkan dari data pemantauan jangka
panjang yang tersedia untuk banyak danau di Eropa ( Anneville et al., 2004 , Weyhenmeyer et
al., 2004 , Adrian et al., 2009 ). Lebih sering, kemungkinan konsekuensi dari perubahan
lingkungan dipelajari dalam eksperimen kandang yang serupa dengan penelitian ini (De
Senerpont Domis et al., 2007 , Feuchtmayr et al., 2010 , Burgmer dan Hillebrand, 2011 , zen et
al., 2013 ).
Analisis statistik dari pemantauan jangka panjang dapat mengungkapkan tren umum seperti
respons komunitas fitoplankton yang terdokumentasi dengan baik terhadap oligotrofikasi ulang
di danau Eropa tengah ( Sommer et al., 1993 , Jeppesen et al., 2005 ) tetapi biasanya gagal
mendeteksi respons untuk efek jangka pendek seperti peningkatan beban nutrisi selama kejadian
hujan lebat. Efek ekologis dari episode tersebut didokumentasikan di Danau Mälaren Swedia, di
mana sifat fisik (pH, konduktivitas, penyerapan cahaya), kimia (nutrisi, warna air), dan biologis
(biomassa kriptofit dan diatom) berubah secara signifikan setelah peristiwa curah hujan ekstrem
( Weyhenmeyer dkk., 2004 ). Pengamatan serupa dilakukan di Waduk ímov eutrofik, Republik
Ceko (Znachor et al., 2008 ). Efek gabungan dari ketersediaan nutrisi dan suhu baru-baru ini
disimpulkan dari analisis data jangka panjang dari beberapa danau peri-alpine yang dalam
( Anneville et al., 2004 , Salmaso, 2010 , Salmaso et al., 2012 ). Namun, karena frekuensi
pengambilan sampel yang rendah dari sebagian besar program pemantauan, sulit untuk
menguraikan dampak nutrisi (SRP) dan suhu dari data lapangan jangka pendek. Meningkatkan
analisis statistik memerlukan baik frekuensi pengambilan sampel yang meningkat secara drastis
dalam waktu dan ruang (untuk memperhitungkan efek variabel lokal di seberang danau) atau
pendekatan eksperimental seperti dalam penelitian ini.
Jelas bahwa eksperimen enklosur berukuran kecil seperti kami berpotensi dibiaskan oleh
serangkaian artefak yang secara kolektif dikenal sebagai efek botol. Hasil dari percobaan
pendahuluan kami (Exp. 1A) menunjukkan bahwa spesies yang kami gunakan merespon dengan
cara yang sama terhadap perubahan suhu dan nutrisi dalam monokultur dan
multikultur. Perubahan kecil pada tingkat cahaya sebenarnya dalam setiap wadah eksperimental
mungkin telah terjadi tetapi diminimalkan karena kami memutar wadah eksperimental selama
percobaan. Turbulensi dan pencampuran adalah parameter fisik yang sangat sulit untuk
disimulasikan dalam selungkup kecil. Selain itu, seperti yang biasa dilakukan dalam
eksperimen mikrokosmos , kami menggunakan satu galur tertentu dari setiap
takson. Namun, ceruk ekologisdapat bervariasi di antara bahkan dalam takson
nominal. Pentingnya perbedaan ekofisiologi spesifik intraspesifik, strain atau ekotipe baru-baru
ini ditunjukkan untuk beberapa taksa cyanobacterial dan protista ( Boenigk et al., 2005,Weisse et
al., 2008,Moser et al., 2009,Weisse et al., 2011) . Kesimpulannya, pendekatan lapangan dan
laboratorium tidak saling eksklusif; keduanya memiliki keterbatasan tetapi harus saling
melengkapi. Dalam kedua kasus tersebut, tujuan utamanya adalah untuk memprediksi
kemungkinan perubahan komposisi komunitas fitoplankton dan dinamika musim dalam
kaitannya dengan perubahan iklim.
4.1 . Respon fitoplankton terhadap peningkatan suhu yang cepat ('skenario gelombang
panas')
Dalam percobaan meniru skenario gelombang panas (Exps 1A dan 1B), dua spesies
( Synechococcus sp., Peridinium sp.) menurun, dua spesies lainnya ( S. obliquus , F.
crotonensis ) meningkat baik dalam wadah percobaan pada suhu yang meningkat dan dalam
kontrol pada suhu konstan, yaitu keempat spesies ini tampak tidak terpengaruh oleh perbedaan
suhu. Kami menyimpulkan bahwa alga hijau S. obliquus dan diatom F. crotonensisdapat
mentolerir suhu tinggi. Kedua, meskipun kami tidak menambahkan nutrisi selama percobaan 1A
dan 1B dan pembatasan P kemungkinan besar, SRP hadir dalam jumlah yang dapat diukur pada
akhir minggu pertama (dan, dalam kontrol, juga kedua) percobaan 1B (Tabel S1 ). Batas deteksi
metode spektrofotometri yang digunakan untuk menganalisis konsentrasi SRP adalah 1  g  L 1 ,
yaitu nilai di bawah ambang batas ini tidak akurat. Karena fakta ini dan karena kami tidak
menggunakan teknik kultur berkelanjutan untuk mendefinisikan batasan nutrisi dengan benar,
kami hanya dapat menyimpulkan batasan nutrisi secara tidak langsung dari percobaan
kami. Tujuh hari setelah awal percobaan, kadar SRP dan dua spesies nitrogen (NO 2  N dan
NH 4 +-N) lebih tinggi dari konsentrasi awal, baik dalam wadah percobaan maupun
kontrol. Tampaknya masuk akal bahwa nutrisi dilepaskan karena memudarnya spesies lain (lisis
sel Synechococcus sp. dan kurang jelas, Peridinium sp.) dan regenerasi nutrisi bakteri selama
minggu pertama.
Mirip dengan dinoflagellata ( Peridinium sp.), efek suhu secara signifikan negatif
untuk flagellata cryptomonad . Cryptomonas sp . strain 26,80 yang digunakan dalam percobaan
kami tampaknya tidak mentolerir suhu> 25  ° C (Gambar 1 c, 2 c, 5 ), yang sesuai dengan
penyelidikan sebelumnya dengan spesies terkait. Suhu optimum C. ovata yang diukur di
laboratorium adalah antara 20 dan 26  °C, di mana penghambatan suhu menjadi jelas ( Cloern,
1977 ). Demikian pula, tingkat pertumbuhan C. erosa memuncak pada 23,5 °C, menurun tajam
pada suhu yang lebih tinggi ( Morgan dan Kalff, 1979 ). Pertumbuhan C. marssonii tertinggi
antara 11 dan 17  °C, dan spesies ini tidak mentolerir 30  °C ( Butterwick et al., 2005 ).
Penurunan Synechococcus sp. yang kami amati di semua perlakuan eksperimental, terlepas dari
suhu dan efek nutrisi, tidak terduga. Cyanobacterium yang diisolasi dari Danau Mondsee lebih
dari sepuluh tahun yang lalu ( Crosbie et al., 2003a ) dan secara rutin disimpan di laboratorium
kami pada suhu 15  °C telah disesuaikan dengan kondisi percobaan. Di L. Mondsee,
picocyanobacteria kaya PE seperti strain ini memuncak di musim panas pada tingkat radiasi dan
suhu yang tinggi ( Crosbie et al., 2003b ). Dinoflagellata Peridinium sp. dan/atau
cryptophyte Cryptomonas sp., yang keduanya berpotensi spesies mixotrophic ( Porter,
1988 ,Gast et al., 2009 ), mungkin telah merumput pada Synechococcus sp. dan beberapa bakteri
heterotrofik dalam percobaan kami. Karena kami secara teratur mengamati bakteri berfilamen
panjang (data tidak ditampilkan), bakteri heterotrofik mungkin telah menanggapi
beberapa tekanan penggembalaan dengan membentuk filamen tahan penggembalaan ( Hahn et
al., 1999 ). Fenomena ini dan fakta bahwa biomassa bakteri umumnya meningkat dalam
perlakuan multispesies selama percobaan kami ( Gbr. 6 ) menunjukkan bahwa bakteri
heterotrofik hanya sedikit atau tidak tertelan sama sekali, masing-masing bahwa tingkat
pertumbuhan mereka jauh melebihi tingkat kehilangan penggembalaan. Penurunan yang diamati
dalam jumlah sel Synechococcussp. selama minggu pertama percobaan 1B ( Gbr. 1 a) akan
membutuhkan bahwa setiap Peridinium sp. tertelan, rata-rata, 7-8 sel Synechococcus  h 1 ; tingkat
penggembalaan seperti itu tampak sangat tinggi untuk Peridinium ( Porter,
1988 ). Penggembalaan oleh Cryptomonas sp lebih banyak. ( Gbr. 1 c) dapat menyebabkan
penurunan Synechococcus sp. jika flagellata menelan, rata-rata, 0.2 sel cyanobacterial per kapita
h 1 , yang berada dalam kisaran tingkat konsumsi yang dilaporkan dari dua
spesies Cryptomonas lainnya (Porter, 1988 ). Namun, kami tidak
mengamati Synechococcus sp. sel dalam vakuola makanan Cryptomonas sp. selama percobaan
kami. Lebih penting lagi, penurunan Synechococcus juga jelas tanpa adanya penggembala
potensial (Exp. 1A, Gbr. 1 a). Kami menyimpulkan bahwa Synechococcus dikalahkan oleh
bakteri heterotrofik. Dengan tidak adanya pesaing eukariota biomassa bakteri meningkat dengan
mengorbankan Synechococcus sp. ( Gbr. 1a ); jika ganggang eukariotik hadir dan bersaing
dengan bakteri untuk mendapatkan nutrisi, biomassa bakteri relatif rendah
(Gbr. 1 b, 7). Kemungkinan besar, persaingan kuat oleh bakteri heterotrofik dalam percobaan
kami menutupi efek nutrisi dan suhu pada Synechococcus sp. Picocyanobacteria umumnya
disukai oleh suhu air yang tinggi di L. Mondsee ( Crosbie et al., 2003b ) dan di tempat lain
(ditinjau oleh Weisse, 1993 ).
4.2 . Respon fitoplankton terhadap penurunan suhu di bawah kondisi penuh nutrisi
('skenario curah hujan lebat')
Penambahan berulang nutrisi kemungkinan besar menyebabkan total biomassa fitoplankton yang
jauh lebih tinggi dalam percobaan ini dibandingkan dengan dua seri percobaan lainnya di mana
kami menggunakan kontrol pada suhu konstan. Perbedaan kecil antara wadah eksperimental dan
kontrol di akhir Exp. 2 ( Gbr. 7 ) dan fakta bahwa biomassa fitoplankton akhir juga relatif tinggi
pada 29  °C dalam percobaan awal 1A yang menerima tingkat nitrat dan SRP awal tertinggi
( Gbr. 7 dan Tabel S1) menunjukkan bahwa, seperti yang diharapkan, daya dukung sangat
tergantung pada nutrisi tetapi hanya sedikit dipengaruhi oleh suhu.
Perkembangan populasi Cryptomonas sp. sesuai dengan respon suhu umum yang ditunjukkan
pada Gambar. 5 , yaitu strain ini mencapai biomassa yang lebih tinggi pada suhu eksperimental
yang lebih rendah (16  °C) dibandingkan dengan kontrol yang dipertahankan pada 21  °C
( Gbr. 3c). Dinoflagellata Peridinium sp. juga diuntungkan dari penurunan suhu eksperimental
( Gbr. 3 e). Mempertimbangkan seluruh kumpulan data dari ketiga percobaan, kedua spesies
flagellata secara signifikan, dan berbanding terbalik dengan suhu, berbeda dengan alga
pembentuk koloni. Di antara yang terakhir, pertumbuhan alga hijau S. obliquus lebih kuat
dirangsang oleh penambahan nutrisi (Gambar 3 b) dibandingkan dengan diatom pennate F.
crotonensis ( Gambar 3 d). Ketika nutrisi ditambahkan, efek suhu tidak penting pada kedua
spesies.
4.3 . Respon fitoplankton terhadap penurunan suhu dalam kondisi kekurangan nutrisi
Eksperimen terakhir membantu memisahkan nutrisi dari efek suhu dengan lebih jelas. Tanpa
penambahan nutrisi, biomassa akhir S. obliquus tiga puluh kali lipat lebih rendah daripada di
bawah kondisi penuh nutrisi (lih. Gambar 3 b dan 4 b). Pembatasan hara (yaitu P) mungkin lebih
kuat pada kontrol pada 21  °C daripada di wadah eksperimental pada suhu yang dikurangi dan
mungkin telah menyebabkan penurunan biomassa S. obliquus yang diamati pada kontrol 12 hari
setelah awal percobaan ( Gbr. 4 B). Biomassa akhir F. crotonensis diukur dalam kondisi
kekurangan nutrisi ( Gbr. 4d) sebesar sepertiga dari nilai yang dicapai pada percobaan
sebelumnya dengan penambahan nutrisi ( Gambar 3 d), yaitu efek nutrisi hanya sedikit, relatif
terhadap alga hijau. Hasil ini tidak mengejutkan, karena kumpulan fitoplankton, kemungkinan
besar, terbatas P selama percobaan ini (Tabel S1). Konstanta setengah saturasi ( K s ) dari
serapan P terlarut untuk pertumbuhan alga adalah urutan besarnya lebih rendah di F.
crotonensis dan diatom pennate lainnya daripada di alga hijau S. obliquus ( Rhee, 1973 , Tilman
et al., 1982 , Martínez et al., 1999 ). Dengan nilai K s  khas 0,01  M (∼  0,3 g P  L 1 ); F.
crotonensis adalah pesaing P yang sangat baik ( Saros et al., 2005 , Michel et al., 2006 ) dan
relatif kurang terpengaruh oleh penipisan P di Exp. 3 dari S. obliquus .
Total biovolume fitoplankton akhir (16,0  mm 3  L -1 dalam kontrol, masing-masing
17,6  mm 3  L -1 dalam labu percobaan) lebih rendah daripada di percobaan lain, menggambarkan
efek penipisan nutrisi pada suhu eksperimental moderat.
4.4 . Biomassa autotrofik vs. heterotrofik
Biomassa bakteri heterotrofik meningkat secara signifikan dengan suhu dan nutrisi. Apakah ini
efek langsung atau tidak langsung (yaitu melalui stimulasi atau penghambatan taksa fitoplankton
yang memasok bahan organik ke heterotrof) atau kombinasi keduanya tetap terbuka. Namun,
pengaruh positif suhu bertentangan dengan asumsi bahwa laju pertumbuhan bakteri di danau
tidak bergantung pada suhu jika suhu melebihi 16  °C ( Felip et al., 1996 ). Pomeroy dan Wiebe
(2001) menyimpulkan untuk bakteri laut bahwa interaksi konsentrasi substrat dengan suhu
mempengaruhi laju pertumbuhan bakteri di semua tingkatan. Vrede (2005) melaporkan
kompleks langsung dan tidak langsung (suhu  × interaksi fosfor) efek suhu dari eksperimen
mikrokosmos dengan komunitas bakteri dari danau yang kontras. Karena komposisi taksonomi
bakteri tetap tidak diketahui dalam percobaan kami, kami berhati-hati dalam menarik kesimpulan
umum tentang pengaruh variabel lingkungan pada laju pertumbuhan bakteri dan
biomassa. Namun, jelas bahwa efek nutrisi jauh lebih kuat pada alga daripada bakteri
heterotrofik dalam percobaan kami. Dengan demikian, kontribusi relatif bakteri terhadap total
biomassa plankton menurun di bawah kondisi penuh nutrisi. Kami menyimpulkan bahwa
'skenario curah hujan lebat' yang khas dapat mengubah biomassa plankton di danau
menjadi autotrof, asalkan tidak ada aliran besar bakteri allochthonous dari tangkapan ke
danau. Relatif sedikit yang diketahui tentang kelangsungan hidup bakteri allochthonous dalam
sistem perairan ( Barcina et al., 1997 ), dan proses mengimpor bakteri dari daerah tangkapan
menunggu studi lebih lanjut di danau beriklim sedang.
5 . KESIMPULAN
Meskipun hasil yang disajikan di sini hanyalah langkah pertama dalam analisis eksperimental
potensi perubahan iklim yang disebabkan oleh komunitas fitoplankton buatan , mereka
menunjukkan bahwa perubahan lingkungan jangka pendek dapat secara signifikan
mempengaruhi komposisi fitoplankton (yaitu, dominasi spesies dan biomassa total) dan rasio
antara autotrof dan heterotrof di danau beriklim sedang.
Studi kami mengkonfirmasi dugaan umum bahwa, secara keseluruhan, pasokan nutrisi
mengontrol pertumbuhan alga lebih kuat daripada suhu. Untuk memperkirakan kekuatan efek
nutrisi pada berbagai spesies alga memerlukan eksperimen kultur berkelanjutan pada tingkat
pasokan nutrisi yang berbeda, yang tidak layak dalam penyelidikan ini. Namun, penelitian kami
menunjukkan bahwa efek suhu signifikan pada Cryptomonas sp. dan Peridinium sp. Interaksi
suhu x nutrisi sangat signifikan pada S. obliquus , mendukung penelitian sebelumnya
dengan Scenedesmus sp. ( Rhee dan Gotham , 1981 ) dan penelitian terbaru dengan diatom
sentris ( Malik dan Saros , 2016). Temuan ini juga menunjukkan bahwa hasil eksperimen kami
tidak dapat ditafsirkan terutama oleh kompetisi spesies untuk nutrisi. Hasil eksperimen
kemungkinan mencerminkan pertumbuhan optimal dan kondisi penggandaan dalam kondisi
sedang ( Cryptomonas sp. dan Peridinium sp.) atau hangat ( S. obliquus ), kaya nutrisi, terlepas
dari kompetisi spesies di antara taksa yang dipelajari. Ini adalah pertanyaan terbuka jika
perubahan jangka pendek seperti itu diterjemahkan menjadi perubahan permanen dalam
komunitas fitoplankton jika terjadi lebih sering, seperti yang diasumsikan saat ini ( Hofstätter et
al., 2010 , IPCC, 2013). Studi kami mengkonfirmasi gagasan umum bahwa nutrisi, secara
keseluruhan, lebih penting daripada suhu untuk perkembangan fitoplankton di danau ( Reynolds,
1984 , Padisák, 2003 , Salmaso, 2010 ). Namun, hasil kami juga menunjukkan bahwa suhu
mungkin merupakan faktor langsung yang penting untuk beberapa taksa fitoplankton yang
membatasi laju pertumbuhannya pada suhu yang lebih tinggi. Fakta bahwa dua dari empat
spesies alga eukariotik yang kami selidiki, Cryptomonas  sp. dan dinoflagellata Peridinium sp.,
merespons secara sensitif terhadap suhu air yang tinggi dapat berfungsi sebagai pertanda
perubahan masa depan yang diharapkan di danau-danau Eropa tengah selama pemanasan danau
yang sedang berlangsung.