Machine Translated by Google

Sắc ký lớp mỏng.

Sắc ký lớp mỏng, hay TLC, là một phương pháp phân tích hỗn hợp bằng cách tách các hợp chất
trong hỗn hợp. TLC có thể được sử dụng để giúp xác định số lượng các thành phần trong một hỗn
hợp, danh tính của các hợp chất và độ tinh khiết của một hợp chất. Bằng cách quan sát sự xuất hiện
của một sản phẩm hoặc sự biến mất của chất phản ứng, nó cũng có thể được sử dụng để theo dõi tiến
trình của phản ứng. TLC là một kỹ thuật nhạy cảm - lượng microgram (0,000001 g) có thể được phân tích
bằng TLC - và cần rất ít thời gian để phân tích (khoảng 5-10 phút).

TLC bao gồm ba bước - phát hiện, phát triển và hình dung. Hình ảnh của từng bước được hiển thị trên
trang web của khóa học. Đầu tiên, mẫu cần phân tích được hòa tan trong dung môi dễ bay hơi (dễ bay
hơi) để tạo ra dung dịch rất loãng (khoảng 1%). Chấm bao gồm việc sử dụng một pipet siêu nhỏ để chuyển
một lượng nhỏ dung dịch loãng này vào một đầu của tấm TLC, trong trường hợp này là một lớp mỏng silica
gel đã được phủ lên một tấm nhựa. Dung môi tạo đốm nhanh chóng bay hơi và để lại một vết nhỏ trên vật
liệu.

Quá trình phát triển bao gồm việc đặt đáy tấm TLC vào một vũng cạn dung môi phát triển, sau đó dung
môi này sẽ di chuyển lên tấm bằng tác động của mao dẫn. Khi dung môi di chuyển lên đĩa, nó sẽ di
chuyển qua vị trí ban đầu. Một cuộc cạnh tranh được thiết lập giữa tấm silica gel và dung môi phát
triển cho vật liệu đốm. Silica gel rất phân cực cố gắng giữ vết ở vị trí ban đầu và dung môi cố gắng
di chuyển vết cùng với nó khi nó di chuyển lên đĩa. Kết quả phụ thuộc vào sự cân bằng giữa ba cực -
của tấm, dung môi phát triển và vật liệu tại chỗ. Nếu dung môi phát triển đủ phân cực, vết này sẽ di
chuyển một khoảng so với vị trí ban đầu của nó. Các thành phần khác nhau trong vị trí ban đầu, có các
phân cực khác nhau, sẽ di chuyển các khoảng cách khác nhau từ vị trí ban đầu và hiển thị dưới dạng các
điểm riêng biệt. Khi dung môi đã đi gần hết đến đầu đĩa, đĩa được lấy ra, đánh dấu mặt trước của dung
môi bằng bút chì và dung môi được phép bay hơi.

Việc hình dung các hợp chất có màu rất đơn giản - có thể quan sát trực tiếp các đốm sau
khi phát triển. Tuy nhiên, vì hầu hết các hợp chất đều không màu nên cần có phương pháp trực quan hóa.
Silica gel trên tấm TLC được ngâm tẩm bằng vật liệu huỳnh quang phát sáng dưới tia cực tím
(UV). Một điểm sẽ cản trở sự phát huỳnh quang và xuất hiện dưới dạng một điểm tối trên nền phát
sáng. Trong khi chiếu dưới tia UV, các điểm có thể được phác thảo bằng bút chì để đánh dấu vị trí của
chúng. Phương pháp hình dung thứ hai được thực hiện bằng cách đặt đĩa vào hơi iốt trong vài phút. Hầu
hết các hợp chất hữu cơ sẽ tạo phức có màu sẫm với iot. Thực hành tốt là sử dụng ít nhất hai kỹ thuật
trực quan trong trường hợp một hợp chất không hiển thị bằng một phương pháp cụ thể.

Giá trị Rf được sử dụng để định lượng chuyển động của các vật liệu dọc theo tấm. Rf bằng quãng
đường đi được của chất chia cho quãng đường đi được của dung môi. Giá trị của nó luôn nằm trong
khoảng từ 0 đến 1. Một phân tích TLC có thể được tóm tắt như sau, "Sử dụng một đĩa silica gel và etyl
axetat làm dung môi khai triển, hỗn hợp X chưa biết cho thấy ba điểm có Rf là 0,12, 0,25 và 0,87". So
sánh các Rf này với Rf của các hợp chất đã biết có thể cho phép xác định dự kiến. Lưu ý rằng việc quan
sát ba điểm chỉ có nghĩa là có ít nhất ba thành phần trong hỗn hợp. Một số thành phần có thể có các
phân cực tương tự đến mức chúng xuất hiện dưới một điểm sau khi phát triển.

1
Machine Translated by Google

Rf = Y / X (luôn luôn ≤ 1)

Nếu sử dụng dung môi phát triển có độ phân cực quá cao, tất cả các thành phần trong hỗn hợp sẽ di
chuyển cùng với dung môi và không quan sát thấy sự phân tách (Rf sẽ quá lớn). Nếu dung môi có độ
phân cực quá thấp, các thành phần sẽ không di chuyển đủ, và một lần nữa sự phân tách sẽ không xảy
ra (Rf sẽ quá nhỏ). Trong thực tế, các dung môi hoặc hỗn hợp dung môi khác nhau được thử cho đến khi
quan sát thấy sự phân tách tốt. Thông thường, dung môi hiệu quả là dung môi có Rf trong khoảng 0,3 - 0,7.

Lưu ý rằng dung môi chấm chỉ đơn giản được sử dụng như một phương tiện để chuyển vật liệu cần phân
tích sang tấm TLC. Khi quá trình chuyển được thực hiện, dung môi chấm sẽ bay hơi. Nó không ảnh hưởng
đến sự phân tách. Nó là dung môi phát triển có tác dụng phân tách.

Điều gì đang xảy ra ở cấp độ phân tử trong quá trình phát triển? Có ba thành phần trong TLC: (1)
tấm TLC (pha tĩnh), dung môi khai triển (pha động) và mẫu cần phân tích (chất tan). Trong thí nghiệm
của chúng tôi, tấm TLC bao gồm một tấm nhựa mỏng được phủ bởi một lớp mỏng silica gel, một phần cấu
trúc của tấm này được hiển thị bên dưới.

Ồ Ồ Ồ

Si O Si Ô Si O

O O O

Si Si Si O

O O

Silica gel bao gồm một mạng lưới ba chiều gồm hàng nghìn liên kết silicon và oxy xen kẽ, với các
nhóm OH ở bề mặt bên ngoài. Silica gel chỉ đơn giản là cát rất mịn được nghiền rất nhuyễn. Cần lưu
ý rằng silica gel rất phân cực và có khả năng tạo liên kết hydro.

Hãy xem xét góc nhìn trực diện về sự phát triển của tấm TLC bên dưới. Khi dung môi di chuyển lên
đĩa, tại chỗ, một trạng thái cân bằng được thiết lập, khi dung môi phát triển cạnh tranh với đĩa TLC
về chất hòa tan. Silica gel liên kết với chất tan và dung môi phát triển cố gắng hòa tan nó, mang
theo (các) chất tan khi dung môi di chuyển lên đĩa.

2
Machine Translated by Google

Cân bằng lực giữa các phân tử xác định vị trí cân bằng và do đó khả năng di chuyển chất tan lên đĩa
của dung môi. Nói cách khác, liệu vết đó có thích bị dính lại trên đĩa hay không hay sẽ thích di
chuyển theo dung môi hơn.

Sự cân bằng phụ thuộc vào (1) độ phân cực của tấm TLC (không đổi và cao), (2) độ phân cực của dung
môi khai triển (có thể thay đổi bằng cách sử dụng các dung môi khác nhau) và (3) độ phân cực của các
hợp chất tại chỗ (điều này thay đổi tùy thuộc vào những hợp chất có trong vị trí). Ví dụ, nếu một
mẫu bao gồm hai thành phần, một phân cực nhiều hơn thành phần kia, thì càng nhiều cực sẽ có xu hướng
bám chặt hơn vào bản và thành phần ít phân cực sẽ có xu hướng di chuyển tự do hơn với dung môi. Sử
dụng dung môi phát triển phân cực hơn sẽ khiến cả hai di chuyển xa hơn. Nếu cấu trúc gần đúng của
các chất tan được biết, có thể đưa ra một phỏng đoán có học về dung môi hoặc hỗn hợp dung môi sẽ sử
dụng. Tuy nhiên, trong thực tế, đối với một hỗn hợp hợp chất nhất định cần phân tích, dung môi hoặc
hỗn hợp dung môi được lựa chọn theo phương pháp thử và sai để tạo ra sự phân tách tốt nhất. ( Lưu ý:
lập luận phân cực hữu ích trong việc hiểu các nguyên tắc của TLC. Bởi vì hầu hết các hợp chất có một
số cực nên lập luận hoạt động tốt. Tuy nhiên, đối với các hợp chất có độ phân cực rất thấp, dung môi
có độ phân cực thấp hơn có thể hiệu quả hơn trong việc di chuyển chất tan lên đĩa ăn.)

Để minh họa một thí nghiệm TLC, hãy xem xét ví dụ sau về phân tích hỗn hợp hai thành phần.

3
Machine Translated by Google

Độ phân cực của các phân tử, chất tan và dung môi giống nhau, được sắp xếp như sau, từ cực nhỏ đến cực nhất:

Ankan (ít phân cực), ankyl halogenua, anken, hiđrocacbon thơm, ete, este, xeton, anđehit, amin, rượu và axit

cacboxylic (đa cực). Tuy nhiên, lưu ý rằng nhiều phân tử chứa nhiều nhóm chức và độ phân cực tổng thể sẽ được xác

định bởi tất cả các nhóm.

Quy trình thí nghiệm. (phiên bản 01/08)

Thí nghiệm này bao gồm hai phần: (1) phân tích hai loại thuốc giảm đau khác nhau để xác định số lượng hợp chất

trong mỗi loại và đặc điểm nhận dạng của các hợp chất đó và (2) nghiên cứu ảnh hưởng của độ phân cực của dung môi

đến Rf. Xem qua các bức ảnh hiển thị TLC trên trang web của khóa học.

(1.) Phân tích TLC của thuốc giảm đau.

Đốm. Mặt bột của tấm silica gel, không phải mặt nhựa, sáng bóng là mặt có đốm. Nhẹ nhàng vẽ một đường bút chì

khoảng 1 cm từ cuối của một tấm. Dùng bút chì, không phải bút mực và cẩn thận để không làm xước bề mặt đĩa quá sâu.

Các tấm có kích thước đến mức chỉ có thể chạy ba đốm trên mỗi tấm. Sử dụng một pipet mới cho mỗi điểm. Làm cho mỗi

điểm càng nhỏ càng tốt (đường kính nhỏ hơn khoảng 1 mm). Sau khi dán, hãy kiểm tra chúng dưới đèn UV để xem chúng có

kích thước hợp lý hay không. Phải để đèn UV gần tấm kính để có thể nhìn thấy các vết (THẬN TRỌNG: không nhìn thẳng vào

tia UV.) Nếu vết quá lớn, hãy chuẩn bị một tấm mới. Nếu một vết quá nhỏ, hãy thêm nhiều dung dịch hơn. Phân tích hai

loại thuốc giảm đau chưa biết theo cách sau: hai trong ba hợp chất đã biết (tài liệu tham khảo) cộng với thuốc giảm

đau đầu tiên được phân tích (chưa biết 1) sẽ được phát hiện trên một đĩa, hai bí quyết giống nhau cộng với thuốc giảm

đau thứ hai (chưa biết 2) sẽ được được phát hiện trên đĩa thứ hai, và cả thuốc giảm đau 1 và thuốc giảm đau 2 cùng với

hợp chất đã biết thứ ba sẽ được phát hiện trên đĩa thứ ba (xem Hình bên dưới). (Nếu các tấm

4
Machine Translated by Google

rộng hơn, bạn có thể phân tích từng điều chưa biết chỉ trên một đĩa.) Để lấy một mẫu của một
dung dịch đã biết, hãy mang một micropipet đến dung dịch mẫu ở băng ghế bên cạnh, nhúng nó vào
dung dịch để lấp đầy nó, sau đó đưa nó trở lại không gian làm việc của bạn để lấy mẫu (Chỉ sử
dụng micropipet để lấy mẫu; không sử dụng pipet Pasteur để lấy lượng mẫu lớn hơn - có thể dẫn
đến nhiễm bẩn). Cố gắng giảm thiểu lưu lượng truy cập ở băng ghế bên cạnh và cẩn thận để không
làm ô nhiễm dung dịch bằng bộ micro đã được sử dụng. Mục đích của thí nghiệm là để xác định
những hợp chất đã biết nào có trong thuốc giảm đau mà bạn đã chọn để phân tích. Dung dịch của
các hợp chất đã biết sẽ được tạo ra. Bạn phải pha 1% dung dịch thuốc giảm đau không rõ nguồn
gốc. Để làm điều này, lấy một phần nhỏ của viên nén và thêm đủ etanol để tạo thành dung dịch
khoảng 1% (rất gần đúng - không cân mẫu). Khoảng 1 mg trong vài giọt dung môi sẽ tạo ra dung
dịch xấp xỉ 1%. Thuốc giảm đau có chứa chất kết dính không hòa tan nên không phải chất nào cũng
tan.

Sự phát triển. Buồng phát triển là một bình nhỏ có nắp vặn với một giấy lọc 5,5 cm được đặt
vào đó để đảm bảo rằng bầu khí quyển được bão hòa hơi. Mỗi lần chạy tương đối ngắn vì vậy vui
lòng chỉ sử dụng một buồng phát triển ethyl acetate. Nếu không có thể không có đủ cho tất cả
mọi người. Cho khoảng 2 mL etyl axetat vào khoang (2 mL là một lần bóp đầy bầu bằng pipet
Pasteur). Đặt tấm TLC vào bình có vết đốm ở đáy. Luôn đậy nắp lọ trừ khi đặt đĩa vào hoặc lấy
đĩa ra khỏi lọ.
Chú ý những điều sau: dung môi phải ở dưới mức của các vết hoặc vật liệu có vết sẽ hòa tan trong
dung môi phát triển; tấm phải đứng thẳng đứng trong bể và silica gel không được chạm vào giấy
lọc; Không được để dung môi chảy hết đến đầu đĩa; Phải chấm đúng số lượng vật liệu (kiểm tra
dưới tia UV trước khi phát triển có thể hữu ích - nếu vết quá lớn, có thể làm tấm khác - nếu vết
quá nhỏ, nhiều vật liệu hơn có thể được phát hiện). Quá trình phát triển mất ít thời gian nên
nếu một tấm ra không tốt, một tấm khác có thể dễ dàng được thực hiện. Sau khi dung môi gần như
lên đến đỉnh đĩa, đĩa được lấy ra và đánh dấu vị trí của mặt trước dung môi trước khi dung môi
bay hơi. Sau đó đĩa được để khô trong tủ hút. Luôn luôn để dung môi phát triển chạy gần như hoàn
toàn đến đầu đĩa. Điều này sẽ sử dụng toàn bộ tấm và cho phép phân tách tốt nhất có thể.

Hình dung. Điều này được thực hiện bằng hai phương pháp. Đầu tiên, bằng ánh sáng tia cực tím
ngắn. (THẬN TRỌNG: không được nhìn thẳng vào đèn.) Đèn phải được giữ gần tấm kính để nhìn rõ
các vết. Một số điểm có thể rất mờ. Các điểm quan sát được nên được phác thảo bằng bút chì. Sau
đó, đĩa được đặt vào lọ chứa tinh thể iốt trong vài phút. Đậy nắp lọ i-ốt và trong tủ hút. Các
đốm có thể xuất hiện khác với những đốm được hiển thị bằng đèn UV. Chúng cũng nên được khoanh
tròn. Có thể thực hiện so sánh hai kỹ thuật hình ảnh hóa và có thể giúp

5
Machine Translated by Google

xác định những điểm chưa biết. Phương pháp iot phải được thực hiện sau phương pháp UV vì hợp chất có thể phản ứng

với iot, có thể thay đổi kết quả.

Tính giá trị Rf cho các hợp chất đã biết và cho tất cả các thành phần của thuốc giảm đau. Từ kết quả của bạn, hãy

xác định những thành phần nào có trong một loại thuốc giảm đau cụ thể. Một số thành phần có thể có Rf rất giống

nhau trong những điều kiện này. Tuy nhiên, các đốm của chúng có thể trông khác khi điều trị bằng i-ốt và điều này

có thể cho phép phân biệt. Lưu ý rằng caffeine có với một lượng nhỏ và có thể không hiển thị tốt. Việc cố tình quá tải

một chỗ có thể giúp hiển thị một thành phần có mặt với số lượng nhỏ.

Bạn có thể chọn trong số các loại thuốc giảm đau sau: Anacin, Extra Strength Excedrin, Extra Strength Tylenol, và

Thuốc giảm đau CVS Super Strength. Bạn cũng có thể phân tích loại thuốc giảm đau hợp pháp ưa thích của cá nhân mình

nếu bạn muốn. Chỉ cần mang một máy tính bảng đến phòng thí nghiệm.

(2.) Ảnh hưởng của dung môi đến giá trị Rf. Ba hợp chất đã biết, anthracene, benzil và

triphenylmethanol, sẽ được phát triển trong hai dung môi khác nhau. Chuẩn bị hai đĩa giống hệt nhau, có chấm từng hợp

chất đó và khai triển một đĩa trong etyl axetat và đĩa kia trong hỗn hợp 95% hexan và 5% t-butyl metyl ete (bạn có thể

sử dụng ngăn thứ hai cho hỗn hợp dung môi này).

Tính toán các giá trị Rf, và trong bài viết sau phòng thí nghiệm, thảo luận về ảnh hưởng của dung môi đối với Rf,

ghi nhớ cấu trúc và độ phân cực của các hợp chất và dung môi.

Ồ
O

Anthracen Benzil Triphenylmetanol

AN TOÀN: Lưu ý cẩn thận cảnh báo về kính trượt ở trên. Không nhìn chằm chằm vào đèn UV.

TRƯỚC KHI BẠN Rời khỏi tủ: tắt mọi thiết bị điện mà bạn có thể đã sử dụng, cất thiết bị của bạn và khóa ngăn kéo, dọn

dẹp khu vực làm việc của bạn, đóng cửa tủ hút hoàn toàn và yêu cầu TA của bạn cho chữ ký của cô ấy hoặc anh ta. Nói

chung, hãy cố gắng giữ phòng thí nghiệm trong tình trạng tốt như bạn đã tìm thấy. Nếu bạn thấy nắp chai bị bong ra,

hãy thay nắp. Nếu bạn thấy hóa chất rơi vãi, hãy dọn sạch chúng hoặc ít nhất là báo cho TA của bạn.

RÁC THẢI: Không bao giờ vứt rác thủy tinh vào thùng rác thông thường. Người trông coi có thể bị thương.

Vứt bỏ tất cả rác thải thủy tinh trong các hộp "Chỉ Thủy tinh" bằng bìa cứng. Các ống mao dẫn đã qua sử dụng cũng có

thể được đặt vào các hộp đó hoặc vào các đĩa đặt xung quanh phòng thí nghiệm cho mục đích đó. Vứt bỏ tất cả các dung

dịch và dung môi đang phát triển trong thùng chứa CHẤT THẢI CHẤT LỎNG HỮU CƠ trong mui xe. Khi hoàn tất, đổ càng nhiều

dung môi càng tốt vào thùng chứa chất thải và để các lọ có nắp vặn mở trong mui xe để chúng khô. Để giấy lọc trong các

lọ.

6
Machine Translated by Google

Câu hỏi Postlab

1.) Sắp xếp các hợp chất sau theo thứ tự tăng dần Rf trong một phân tích CTPT: axit benzoic,
benzen, 3-heptanone, nonane và xiclohexanol.

2.) Tại sao điểm phải được áp dụng cho tấm TLC trên mức dung môi phát triển?

3.) Kết quả của việc thêm quá nhiều mẫu vào đĩa TLC sẽ như thế nào?

4.) Trong phân tích TLC của thuốc giảm đau, kết quả sẽ như thế nào nếu dung môi có độ phân cực quá thấp được sử

dụng để phát triển mảng này?

5.) Rf của ibuprofen được tìm thấy là 0,32 khi t-butyl metyl ete được sử dụng làm
dung môi khai triển. Sẽ có ảnh hưởng gì đến Rf của ibuprofen nếu aceton đã được sử dụng để
phát triển tấm TLC?