Professional Documents
Culture Documents
Ballaaa
Ballaaa
وفقًا لمعايير تشخيص تسوس األسنان لمنظمة الصحة العالمية ،تم تقييم
حالة صحة الفم السريرية ،ولوحظ تسوس ( ، )Dوفقدان بسبب تسوس األسنان ( )Mواألسنان المملوءة (.)DMFT( )T
أجرى أحد الفاحصين الفحص السريري باستخدام معيار .DMFTتم الحصول على صورة شعاعية لجناح لدغة لكل موضوع
لتأكيد Iعمق اآلفة.
بعد الفحص السريري ،تم إجراء مقابالت مع جميع األشخاص حول عاداتهم اليومية لصحة الفم .استخدمت هذه الدراسة
استبيان استبيان مقتبس من دراسات سابقة .تم سؤال المفحوصين عن ممارسة نظافة الفم وتكرار استهالك السكر.
تم استخراج عشرين عينة من أسنان نخرية ألفراد CAباستخدام حفارة ملعقة أسنان حادة ومعقمة .تم حفر اآلفة في كل سن ،
وتعليقها في الكحول ،وحفظها عند 20-درجة مئوية حتى االستخدام .تم وزن جرام واحد من قطعة العاج المسوسة وتم تفريقها
يدويًا في البداية عن طريق التدوير لمدة 20ثانية قبل استخراج الحمض النووي البكتيري.
تم جمع أربعين عينة من اللعاب لهذه الدراسة 20 ،عينة من أفراد التليف الكيسي و 20عينة من موضوعات .CAكان من
المقرر جمع اللعاب في الصباح الباكر في بداية اليوم السابق لتناول اإلفطار للمرضى .طُلب من كل مريض ابتالع لعاب موجود
مسبقًا ثم مضغ قطعة قياسية من شمع البارافين ،وتم جمع 5مل من اللعاب المحفز في أنبوب معقم سعة 50مل ،والذي تم نقله
بعد ذلك مباشرةً إلى المختبر وحفظه عند درجة 20درجة مئوية C .حتى تم استخدامه .ثم تم استخراج الحمض النووي الجيني
البكتيري الكلي من كل عينة لعاب باستخدام تعديل بنا ًء على تعليمات دراسة منشورة.
السالالت بكتيرية
لوحظ في هذه الدراسة عدد السالالت البكتيرية الفموية من نوعين من أنواع الضوابط الداخلية إلنشاء منحنى معياري كمي .تم
عزل SMو LBsوتحديدهما وتأكيدهما عن طريق اختبار PCRالتقليدي.
في PCRالمستهدف على أداة S rRNAللجين qPCR 16لتقدير المستوى اإلجمالي للعينات البكتيرية ،تم الحصول على
في حجم تفاعل إجمالي قدره ) 20كاليفورنيا ،الواليات المتحدة ABI 7000 (Applied Biosystems ،الوقت الحقيقي
ميكرولتر .تم وصف البادئات األمامية والعكسية المحددة المستخدمة في هذه الدراسة والتحقق من صحتها في مكان آخر .تم
× Eva Greenفي الوقت الفعلي بحجم إجمالي قدره 20ميكرولتر يتكون من 10ميكرولتر من PCR 2إجراء اختبار
2ميكرومتر لكل تمهيدي أمامي وعكسي 5 ،ميكرولتر من ) ،إستونيا qPCR Mix Plus ROX (Solis Bio Dyne ،
تم اختبار كل عينة مرتين .تم تعيين Iشروط التدوير DNA / RNAse.و 3ميكرولتر من الماء الخالي من DNAقالب
على النحو التالي :دورة واحدة عند 95درجة مئوية لمدة 15دقيقة ،تليها 40دورة من qPCRالحراري لجميع فحوصات
LBs ،و SMالتمسخ لمدة 15ثانية عند 95درجة مئوية ،والتلدين التمهيدي Iلمدة 20ثانية عند 60درجة مئوية لـ
qPCRلبناء منحنيات قياسية القياس ،احتوى خليط تفاعل LBs.و SMواالستطالة لمدة 20ثانية عند 72درجة مئوية لـ
× Eva Green qPCR Mix Plus ROX (Solis Bioعلى حجم إجمالي قدره 20ميكرولتر ،والذي يتكون من 10
الجينومي من السالالت 2 DNAميكرومتر لكل من التمهيدي األمامي والعكسي 5 ،ميكرولتر من قالب ) ،إستونيا Dyne ،
البكتيرية المذكورة أعاله و 3ميكرولتر من الماء الخالي من الحمض النووي /الحمض النووي الريبي (تراوح التركيز من 10
نانوغرام /م