Bươ c Thủ tục

Thu hoạch lên đến 2-109tế bào vi khuẩn trong ống ly tâm siêu nhỏ 1,5 hoặc 2
1
mL bằng cách ly tâm trong 10 phút ở 5000 ˟ g. Đổ bỏ phần nổi phía trên.
Sử dụng lại viên trong 180 μL dung dịch đệm ly giải vi khuẩn Gram dương. Ủ
2
trong 30 phút ở 37 ° C.
Thêm 200 μL Dung dịch Ly giải và 20 μL Proteinase K. Trộn kỹ bằng cách
3
xoáy hoặc dùng pipet để thu được hỗn dịch đồng nhất.
Ủ mẫu ở 56 ° C trong khi thỉnh thoảng quay xoáy hoặc sử dụng nồi cách thủy
4 lắc, bệ rung hoặc máy trộn nhiệt cho đến khi các tế bào được ly giải hoàn toàn
(khoảng 30 phút).
Thêm 20 μL dung dịch RNase A, trộn bằng cách xoáy và ủ hỗn hợp trong 10
5
phút ở nhiệt độ phòng.
6 Thêm 400 μL etanol 50% và trộn bằng pipet hoặc xoáy.
Chuyển dịch ly giải đã chuẩn bị vào Cột tinh sạch DNA bộ gen GeneJET
được đưa vào trong ống thu nhận. Ly tâm cột trong 1 phút ở 6000 ˟ g. Bỏ
7 ống thu chứa dung dịch đã chảy qua. Đặt Cột tinh sạch DNA bộ gen GeneJET
vào một ống thu thập 2 mL mới (bao gồm).
Ghi chú. Đóng chặt túi bằng Cột tinh lọc DNA bộ gen GeneJET sau mỗi
lần sử dụng!

Thêm 500 μL đệm rửa I (có thêm etanol). Ly tâm trong 1 phút ở 8000 ˟
8 g. Loại bỏ dòng chảy qua và đặt cột tinh chế trở lại ống thu nhận.

Thêm 500 μL đệm rửa II (có thêm etanol) vào Cột tinh sạch DNA bộ gen

GeneJET. Ly tâm trong 3 phút ở tốc độ tối đa (≥12000 ˟ g). Không bắt buộc.
Nếu thấy dung dịch còn lại trong cột tinh chế, thì đổ hết ống thu vào và
9 quay lại cột trong 1 phút. ở tốc độ tối đa.
Bỏ ống thu có chứa dung dịch chảy qua và chuyển Cột tinh sạch DNA bộ gen
GeneJET sang ống ly tâm siêu nhỏ 1,5 mL vô trùng (không bao gồm).
Thêm 200 μL Dung dịch đệm rửa giải vào trung tâm của màng Cột làm sạch
DNA bộ gen GeneJET để rửa giải DNA bộ gen. Ủ trong 2 phút ở nhiệt độ
 phòng và ly tâm trong 1 phút ở 8000 ˟ g.
10 Ghi chú
• Để có hiệu suất DNA tối đa, lặp lại bước rửa giải với 200 μL Dung
dịch đệm rửa giải bổ sung.
PCR Premix (15u/pu) X1 X4
Nếu cần
Water , nuclease-free
• DNA đậm đặc hơn
5,5 hoặc DNA 22được phân lập từ một lượng
Ba-sea F nhỏ nguyên liệu ban đầu, thể0,5tích của Elution
2 Buffer được thêm vào cột có
Ba-sea R thể giảm xuống còn 50-1000,5 μL. Xin lưu ý rằng
2 thể tích nhỏ hơn của Bộ
Dreamtag đệm
GreenrửaMM
giải sẽ dẫn đến lượng
7,5 ADN rửa giải30 cuối cùng nhỏ hơn.
Sum 14 56
Bỏ cột thanh lọc. Sử dụng DNA tinh khiết ngay lập tức trong các ứng dụng hạ
11
lưu hoặc bảo quản ở -20 ° C.

Chia đều 14 μL / phản ứng + 2 μL DNA

PCR condition
95° C 2 min
95° C 10 sec
30
cycles
72° C 30 sec
72° C 5 min
4° C ₀₀