Ulotka techniczna nr 4

Usugi firmy ChromaDexTM - HPLC

Oferta firmy ChromaDexTM na usugi analityczne ronie bardzo szybko. Wybr przez zleceniodawc waciwego oznaczenia oraz raportu ma kluczowe znaczenie dla systemu zapewnienia jakoci i procesu badania produktu. Celem niniejszej ulotki jest przedstawienie oglnych zasad analizy metod HPLC. Prosimy o kontakt z lokalnym przedstawicielem firmy ChromDex jeeli potrzebne bd konsultacje w sprawie wyboru najwaciwszej metody analizy dla rozwizania Pastwa problemu.

Podstawy HPLC

HPLC (High Performance Liquid Chromatography, wysokosprawna chromatografia cieczowa) to technika powstaa w latach 60 XX w. Znajduje wiele rozmaitych zastosowa, midzy innymi w analizie produktw naturalnych, kosmetykw, zwizkw leczniczych, produktw petrochemicznych, ywnociowych itp. W typowej procedurze HPLC wieloskadnikowa prbka zostaje rozpuszczona w odpowiednim rozpuszczalniku i wprowadzona do aparatu. Wdozowana prbka zostaje przeniesiona w strumieniu ciekej fazy ruchomej do kolumny chromatograficznej ze staym wypenieniem (faza stacjonarna). Do przeprowadzania rnych oznacze stosuje si specjalnie dobierane pod tym ktem kolumny HPLC. W trakcie przemieszczania si przez kolumn skadniki prbki ulegaj rozdziaowi. Rne zwizki chemiczne (anality) migruj przez kolumn wolniej lub szybciej w zalenoci od ich natury chemicznej i powinowactwa do fazy stacjonarnej i ruchomej. Dziki temu tworz odseparowane od siebie pasma poszczeglnych substancji. Rysunek poniej ilustruje podstawy HPLC.
Opis rysunku: Wprowadzona prbka (wygld: czarna, skada si z niebieskiej, czerwonej i tej) Czas zero Faza ruchoma

Czas: 10 min Faza ruchoma Strefy analitw

Parametry analizy HPLC (w tym skad fazy ruchomej, wypenienie kolumny, czas trwania procesu itp.) dopasowywane s do specyfiki prbki i analizowanych substancji. Po opuszczeniu kolumny rozdzielone substancje trafiaj do detektora, gdzie generuj sygnay rejestrowane w postaci pikw. Istnieje wiele rnych technik detekcji i rodzaj detektora musi by odpowiedni do wykrywania analitw.

10005 Muirlands Blvd. Suite G First Floor Irvine, CA 92618 Phone 949.419.0288 Fax 949.419.0294 email sales@chromadex.com

Wynikiem analizy HPLC jest wygenerowanie chromatogramu, ktrego piki reprezentuj poszczeglne rozdzielone i wykryte substancje. Identyfikacj substancji przeprowadzi mona porwnujc czasy retencji uzyskanych z czasami retencji wzorcw a pole powierzchni piku jest miar zawartoci substancji w badanej prbce. Naley podkreli, e na poprawne wykonanie analizy metod HPLC i co za tym idzie uzyskanie prawidowego wyniku ilociowego w sposb zasadniczy zaley od wyboru waciwych warunkw analizy. Wybr waciwej aparatury, kolumny, sposobu przygotowania prbki, zastosowanych materiaw odniesienia (wzorcw), jak rwnie dowiadczenie analityka to wszystko wpywa na wynik kocowy. Integralno danych wyjciowych z procesu HPLC zaley bezporednio od kadej zmiany w tym procesie. Bez przywizywania naleytej wagi do kadego szczegu mona uzyska bdne lub niewaciwe wyniki. Przykadowy chromatogram
DAD1 B, Sig=250,80 Ref=400,100 (G:\1\DATA\I0705\I0705_40.D) 1 1 .4 2 1 - 8 -De so xyg a rta n in mAU 1 8 .1 0 3 - 9 -Hyd ro xyca la b a xa n th o n e 1 5 .2 2 5 - a lp h a -M a n g o stin

HPLC jest doskona metod analizy skomplikowanych mieszanin, odpowiednio stosowana moe take suy do potwierdzania identycznoci botanicznej materiau. Do tego samego celu suy moe take HP-TLC (wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa). Wszelkich informacji na temat zastosowania HPLC i HP-TLC do badania identycznoci moe udzieli lokalny reprezentant firmy ChromaDexTM.

Zalety raportw analitycznych firmy ChromaDex

ChromaDex oferuje dwa rodzaje raportowania wynikw analiz metod HPLC. Pierwszy z nich to tzw. Analytical Test Report (ATR), czyli szczegowy raport opisujcy wyczerpujco metod analizy oraz zawierajcy wszystkie wyniki. W ATR umieszczone s wszystkie chromatogramy prbek i materiaw odniesienia, jak rwnie opis sposobu przygotowania prbki a take parametry pracy aparatw. Raport przedstawia take sposoby obliczania wynikw oraz pen ich tabel, jest wic kompletnym rdem udokumentowanej informacji o badanych prbkach. Drugi rodzaj raportw, tzw. Analytical Results Sheet (ARS) jest jedynie podstawow informacj i zawiera tylko wynik lub list wynikw. ARS jest rozwizaniem ekonomicznie uzasadnionym w przypadku badania prbek rutynowych, nadaje si szczeglnie do stosowania w analizach, dla ktrych sposb postpowania ustalono wykonujc ATR.

300

250 8 .2 1 3 - 3 -Iso ma n g o stin

150

100

50

0 0 5 10 15 20 25

1 9 .1 9 3 - b e ta -Ma n g o stin

200

1 4 .1 3 8 - G a rta n in

Badanie czystoci i inne zastosowania

W zwizku ze skomplikowanym skadem produktw pochodzenia naturalnego HPLC nadaje si znakomicie do badania ich skadu. Dotyczy to analizy jakociowej i ilociowej poszczeglnych substancji, jak i grup zwizkw o zblionych waciwociach. Kluczowym elementem warunkujcym wysok jako wynikw otrzymywanych metod HPLC jest waciwe stosowanie w peni scharakteryzowanych materiaw odniesienia (wzorcw analitycznych). Pole powierzchni piku analitu moe by uyte do obliczenia jego zawartoci w prbce tylko w takim przypadku, jeeli w takich samych warunkach chromatograficznych uzyskany zostanie chromatogram odpowiedniego materiau odniesienia. ChromaDexTM to wiodcy wytwrca materiaw odniesienia substancji wyodrbnianych z rolin oferujcy szerok gam takich materiaw odniesienia zaopatrzonych w pen charakterystyk. Odczynniki lub czyste substancje nie s materiaami odniesienia i nie powinny by stosowane jako wzorce przy okrelaniu zawartoci lub czystoci analitw, nie s bowiem przebadane metodami chromatograficznymi (HPLC/GC), nie maj take okrelonej zawartoci zanieczyszcze, takich jak woda lub pozostaoci rozpuszczalnikw. Tylko rzeczywiste materiay odniesienia powinny by stosowane jako wzorce, lokalny reprezentant firmy ChromaDexTM udzieli wszystkich informacji niezbdnych do wybrania najwaciwszego materiau odniesienia do danej analizy.

Przedstawiciel firmy ChromaDex suy zawsze pomoc w wyborze najlepszego sposobu postpowania i metody raportowania, przedstawi take przykadowe raporty obydwu typw.

min

Wykorzystanie HPLC w systemach zapewnienia jakoci

Badanie czystoci to jeden z kluczowych punktw systemu jakoci w kadym laboratorium a HPLC jest optymaln metod do sprawdzania czystoci zarwno materiau wyjciowego, jak i produktw kocowych. Dziki waciwemu zintegrowaniu testw wykonywanych metod HPLC z systemem zapewnienia jakoci mona zoptymalizowa zarwno jako wytwarzanych produktw, jak i sprawno dziaania a take wzmocni argumenty marketingowe. Najlepsz praktyk jest analiza wszystkich partii surowcw i produktw kocowych metod HPLC Sprawdzaj czysto i identycznos wszystkich dostarczanych partii surowcw Badaj produkty finalne i weryfikuj zgodno wynikw z treci etykiet Badaj surowce i produkty finalne pod ktem rozkadu w czasie lub przypadkowego zanieczyszczenia Sprawdzaj zmienno skadu surowcw i produktw kocowych Przeprowadzaj testy stabilnoci dla surowcw i produktw Wymagaj dostarczenia raportw firmy ChromaDex od dostawcw surowcw

Wszelkich informacji na temat zastosowania HPLC i HP-TLC do badania identycznoci moe udzieli lokalny reprezentant firmy ChromaDexTM.

10005 Muirlands Blvd. Suite G First Floor Irvine, CA 92618 Phone 949.419.0288 Fax 949.419.0294 email sales@chromadex.com