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CULTIVO DE PROTOCORMOS DE Mormodes maculata var. unicolor L.O.

WILLIAMS (ORCHIDACEAE)

Article · January 2007

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David Moreno Martínez Rebeca Menchaca

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Foresta Veracruzana
Universidad Veracruzana
lmendizabal@uv.mx
ISSN (Versión impresa): 1405-7247
MÉXICO

2007
Sandra Real Carrasco / David Moreno Martínez / Rebeca A. Menchaca García
CULTIVO DE PROTOCORMOS DE MORMODES MACULATA VAR. UNICOLOR L.
O. WILLIAMS (ORCHIDACEAE)
Foresta Veracruzana, año/vol. 9, número 001
Universidad Veracruzana
Xalapa, México
pp. 55-59

Red de Revistas Científicas de América Latina y el Caribe, España y Portugal

Universidad Autónoma del Estado de México

http://redalyc.uaemex.mx
Foresta Veracruzana 9(1):55-58. 2007. 55

CULTIVO DE PROTOCORMOS DE Mormodes maculata var. unicolor L.O. WILLIAMS (ORCHIDACEAE)

Sandra Real Carrasco1, David Moreno Martínez2 y Rebeca A. Menchaca García2

Resumen

Se realizó la micropropagación de Mormodes maculata var. unicolor (Hook.) L.O. Williams (especie
amenazada NOM 059-SEMARNAT-2001) a través del cultivo in vitro de protocormos, se establecieron seis
tratamientos en el medio nutritivo Murashige & Skoog (1962), adicionado con concentraciones diferentes de 6-
benzilaminopurina (6-BAP). El análisis de varianza mostró diferencias significativas entre los tratamientos. La
prueba de Duncan de comparación de medias señaló que el medio de cultivo MS+ BAP.5 mg/l presentó el
mayor número de formación de PLBs no presentando diferencias significativas con el medio que contenía 2 mg/l
de BAP.

Abstract

The micropropagation of Mormodes maculata var. unicolor (Hook.) L.O. Williams (threatened species
NOM 059-SEMARNAT-2001) was made through the culture in vitro of protocorms, six treatments in the
culture medium Murashige & Skoog (1962) were established, with different concentrations from 6-
benzilaminopurina (6-BAP). The variance analysis showed significant differences between the treatments.
The Duncan test indicated that the culture medium MS+ BAP.5 mg/l showed the greater number of formation
of PLBs not presenting significant differences with the medium that contained 2 mg/l of BAP.

Palabras clave: Orquídeas, cultivo in vitro, protocormos, PLBs, Mormodes maculata.

Key words: Orchids, cultura in vitro, protocorms, PLBs, Mormodes maculata.

Introducción (Ackerman, J. D, 1998), por lo que es necesario

conocer con precisión los status de conservación
La familia Orchidaceae es una de las más de las orquídeas para dedicarles esfuerzos a la
diversas ya que cuenta con 30 000 especies a nivel taxa crítica (Hágsater y Soto, 1998).
mundial, siendo México un país megadiverso se
registran más de 1 200 de ellas. Sin embargo, la La especie en estudio, es una orquídea silvestre
alteración que muestran los ambientes naturales con un amplio potencial ornamental, altamente
del país por la presión humana ejercida sobre ellos, demandada y comercializada en el mercado ilegal
por el mal uso y el abuso de los recursos naturales por el gran tamaño de sus inflorescencias y su gran
ha sido muy notoria afectando los hábitat naturales belleza, ya que presenta racimos de hasta 30 flores
de las orquídeas (Hágsater et al., 2005). de color amarillo intenso con un suave aroma
cítrico.
Por otro lado, del saqueo de éstas para su venta
como ornamentales en el comercio ilegal han
colocado a 180 especies en alguna categoría de
riesgo en la NOM-059-SEMARNAT-2001
encontrándose entre ellas como especie
amenazada Mormodes maculata var. unicolor que
es endémica de los estados de Hidalgo, Puebla,
Veracruz (Vovides et al., 1997) así como de
Oaxaca (Acosta, 2002).

Aunado a esta problemática, la falta de la

polinización natural, la escasa germinación, y baja
tasa de reclutamiento, son factores que afectan la
conservación y sobrevivencia de estas especies
1
Estudiante del ITAO. Correo electrónico: noesdy_48@hotmail.com
2
Orquidarios CITRO, Universidad Veracruzana. Correo electrónico: ornamentales130@yahoo.com.mx.
56 Real y col. Cultivo de protocormos de Mormodes maculata
Figura 1. Inflorescencia de Mormodes maculata var.
unicolor.
Las orquídeas al tener un gran potencial
ornamental, pueden ser una alternativa de
generación de ingresos para las comunidades,
como un producto forestal no maderable, por lo que
es necesario encontrar efectivos métodos de
propagación siendo el cultivo in vitro una alternativa
ya que esta técnica puede contribuir a mejorar los
porcentajes de germinación (Iriondo, 2001), ocurre
a microescalas sobre superficies menores, se
optimizan las condiciones ambientales, permite la
obtención masiva de plantas para su
comercialización reduciendo el saqueo de su hábitat.
El termino protocormo fue acuñado por Noe
Bernard 1909 (citado por Pierik, 1990) para
designar una etapa esférica que se presenta en el
desarrollo de los embriones durante la germinación
de las orquídeas. Estas estructuras poseen un alto
grado de totipotentencialidad, por lo que se puede
inducir la brotación múltiple obteniendo varias
plantas que se generan a partir de un sola semilla
con un alto grado de estabilidad genética, estos
brotes esféricos nuevos son llamados PLBs
(Protocorm-like Bodies por sus siglas en inglés).La
inducción de estos brotes se obtiene agregando un
regulador de crecimiento en diversas
concentraciones ya sean auxinas o citocininas. Esta
técnica está justificadada en especies amenazadas
con restringido material para ser propagadas, como
la especie en estudio.
Bajo estos antecedentes, en el presente trabajo,
se planteó evaluar el Medio MS (Murashige & Skoog,
1962) a diferentes concentraciones de BAP (6-
benzilaminopurina) en la formación de PLBs
(Protocorm- like Bodies) a partir de protocormos de
Mormodes maculata var. unicolor, cuantificar el número
de PLBs formados en cada tratamiento y determinar la
concentración adecuada de BAP para su propagación.
Material y métodos
En el presente experimento se consideraron dos
fases: a) Fase de germinación y b) Fase de cultivo
de protocormos (proliferación).
a) Las semillas de Mormodes maculata var.
unicolor fueron obtenidas de un ejemplar procedente
de la localidad de Cosautlán, Veracruz resguardado
en la colección de orquídeas de la Universidad
Veracruzana (Orquidario-UV). El fruto fue obtenido
por polinización natural, presentando una madurez
de 9 meses al momento de la siembra.
Las semillas microscópicas se desinfectaron en
una solución de hipoclorito de sodio al 2% durante
6 minutos para posteriormente ser enjuagadas tres
veces con agua destilada estéril.
La siembra se realizó en condiciones asépticas
en una campana de flujo laminar colocando las
semillas en frascos de vidrio con el medio Seed
Sowing Orchid (Phytotechnology® No. Cat P 723)
ajustado a un pH de 5.6, solidificado con gelrite (2
g/l) y esterilizado en un autoclave a 15 libras de
presión durante 15 minutos.
Se tomaron 10 muestras al azar del total de
frascos, se trazaron áreas de un cm2 dentro del
frasco y se contabilizaron las semillas presentes
por medio del microscopio, obteniéndose un
promedio de 10 semillas/cm2 ya que el área total de
la superficie del medio de cultivo en el frasco fue de
26.4 cm2, se consideró un aproximado de 250
semillas por frasco para su evaluación según lo
recomendado por Hicks (2004). Posteriormente, se
colocaron en un área de incubación a una
temperatura controlada de 25 oC ± 2.
Una vez germinadas, las semillas se
transfirieron a un área iluminada con luz fría de 39
w con un fotoperiodo de 16/8 hrs. y a una
temperatura controlada de 25 ± 2 oC.
b) Se seleccionaron aquellos protocormos
obtenidos en la fase de germinación, mayores a 3
mm, de estructura esférica con rizoides, sin
diferenciación de raíces ni primordios foliares.
Para los tratamientos se tomó como base el
medio básico MS (1962) adicionado con 5
concentraciones diferentes de 6-benzil amino purina
(6-BAP):
1. MS base (control)
2. MS+0.1 mg/l de BAP
3. MS+0.5 mg/l de BAP
4. MS+1 mg/l de BAP
5. MS+2 mg/l de BAP
6. MS+5 mg/l de BAP
La siembra de los protocormos se realizó bajo
condiciones de esterilidad en una campana de flujo
laminar y entre 2 mecheros Bunsen, colocando con unas
pinzas de disección 3 explantes por frasco de cultivo.
Los protocormos fueron cultivados en un cuarto
con 4 lámparas de luz fría de 55 W a una distancia
de 50 cm con un fotoperiodo de 16/8 hrs. y a una
temperatura controlada de 25 oC ±2.
Para el análisis de los datos se utilizó la técnica
de análisis de varianza “ANOVA” y la prueba de
diferencia entre las medias fue calculada
empleando la prueba de rangos múltiples de
Foresta Veracruzana 9(1):55-58. 2007. 57

Duncan (p< 0,05), utilizando para ello el programa _________________________________

STATISTICA 6.0 (Statsoft. Inc., 1996). ______

Se utilizó un diseño experimental El tratamiento que presentó los valores mas

completamente al azar (DCA), en el cual la unidad bajos en cuanto a número de PLBs fue el
experimental estuvo constituida por tres tratamiento 1 correspondiente al medio básico
protocormos en 1 frasco de cultivo y 10 Murashige & Skoog sin adición de 6- BAP (control),
repeticiones, teniendo un total de 30 observaciones con una media de 2.3 mostrando diferencias
por tratamiento. Se seleccionó este tipo de diseño significativas con los demás tratamientos.
debido a las condiciones controladas de intensidad Respecto al No. de PLBs formados a través del
luminosa, temperatura y humedad relativa, lo que tiempo, se observó que la proliferación se presentó a
limitaba las fuentes de variación. partir del día 13 y fue aumentando, siendo a los 16
días cuando se disparó la producción en la mayoría
La variable respuesta fue el número de PLBs de los tratamientos a excepción del trat.1 donde no
formados, considerando como PLB a toda se agrego BAP, aunque a pesar de carecer del
estructura esférica que se desarrollaba mediante complemento hormonal, si presentó proliferación de
morfogénesis directa a partir del protocormo PLBs debido a la alta totipotencialidad del protocormo
verdadero obtenido por germinación. de germinación, aunque de forma más lenta y en
menor número que en los demás tratamientos.
Resultados
Tabla 4. Promedios de producción de PLBs en cada
tratamiento a través del tiempo.
En la fase de germinación, la respuesta se DÍAS
presentó en promedio a los 76 ± 6 días. La semilla 13 16 19 23 26
TRATAMIENTOS
se consideró germinada cuando presentó la ruptura 1.-MS basal 0.0 0.4 1.6 2.2 2.3
de la testa y el embrión emergió de la cubierta 2.-MS+0.1mg./ lde BAP 0.7 2.4 2.9 3.1 3.3
seminal. 3.-MS+0.5mg./l de BAP 1.0 2.9 3.9 4.3 4.6
4.-MS+1 mg./l de BAP 0.3 2.5 3.4 3.6 3.7
En la segunda fase, la proliferación de PBL se 5.-MS+2 mg./l de BAP 0.5 2.9 3.9 4 4.2
presentó a partir del día 13 de incubación, cuando 6.-MS+5 mg./l de BAP 0.0 2.9 3.6 3.7 4.0
se observó la emergencia de estructuras esféricas
En la figura 2 se muestra la curva de
generadas a partir del protocormo inicial. El número
crecimiento que representa el aumento del número
de PLBs presentado en cada tratamiento mostró
de protocormos en un periodo de 33 días a partir
diferencias de acuerdo a la concentración de 6-
de la siembra, en cada tratamiento.
BAP adicionada al medio de cultivo.
Figura 2. Número de PLBs formados a través del tiempo
El análisis de varianza mostró la existencia de por tratamientos.
diferencias significativas entre los tratamientos.
6 1
Tabla 2. Análisis de varianza para formación de PLBs por
tratamiento 5
2
Nivel de significancía < .0500 4
PLBs

3 3
Fde V Gde L C. Med. S de C F p
2 4
Trat. 5 18.79 93.96 6.2 .000022**
1
5
0
La prueba de Duncan de agrupación de medias, 6
mostró los siguientes resultados: 13 16 19 23 26 33
El medio de cultivo Murashige & Skoog TIEMPO (dias)
adicionado con 0.5 mg/l de BAP (tratamiento 3)
presentó la media más alta en cuanto a la formación En la figura 3 se expresan las medias y
de PLBs con un valor de 4.6, este medio de cultivo desviaciones estándar presentadas en cada
no presentó diferencias significativas con el tratamiento.
tratamiento 5 (Murashige Skoog adicionado con 2
mg/l de BAP) el cual presentó una media de 4.3. Figura 3. Cajas de alambre de medias y desviaciones
estándar en cada tratamiento.
Tabla 3. Prueba de Duncan de agrupación de medias.
3 5 6 4 2 1
(4.6) (4.3) (4.0) (3.7) (3.3) (2.3)
_______________
58
GRAFICA DE CAJAS Y ALAMBRES QUE MUESTRA
LA PRODUCCION DE PLBs POR TRATAMIENTOS
7.5
6.5
5.5
4.5
PLBS
3.5
2.5
1.5
0.5
1 2 3 4 5 6
TRATAMIENTOS
Figura 4. Imagen que muestra los brotes generados a
partir de PLBs formados en los tratamientos que
mostraron las medias más altas.
Trat.3.MS+0.5mg./l BAP Trat5.-MS+2 mg./lBAP
Los brotes obtenidos a partir de los PLBs mostraron
un crecimiento vigoroso, por lo que podrán ser
divididos para la posterior fase de liberación a
invernadero.
Discusión
Los resultados, demuestran el papel de la
citocinina Bencilaminopurina en la promoción de
morfogénesis directa de PLBs tal como lo ha
demostrado Park (2001), sin presentarse una fase de
callo intermediaria, es decir por organogénesis
directa.
En cuanto a la velocidad de respuesta presentada
en cada medio de cultivo, se observó que los medios
adicionados con el fitorregulador BAP mostraron una
mayor velocidad a la respuesta para la formación de
PLBs respecto al medio MS básico, estos resultados
coinciden con Santos 2005, quien obtuvo
proliferación directa de PLBs en un medio adicionado
con este regulador y difieren en cuanto la velocidad
de formación ya que en Laelia albida se presentaron
a los 28 días, mientras que en la especie del
presente estudio (Mormodes maculata) los PLBs se
presentaron a partir del día 13 de incubación.
Conclusiones
Los resultados obtenidos en el presente trabajo,
al obtener proliferación de hasta 12 PLBs por una
sola semilla en 33 dias, pueden ser aplicados para
el establecimiento de un banco de germoplasma de
la especie como una alternativa de conservación
“ex situ” de Mormodes maculata (especie
amenazada NOM 059-SEMARNAT-2001).
Real y col. Cultivo de protocormos de Mormodes maculata
El establecimiento de un programa de
micropropagación de la especie, a través de la
proliferación de PLBs puede considerarse importante
como una alternativa de producción de esta especie
con gran potencial ornamental, lo que se verá
reflejado en disminuir la presión sobre las poblaciones
silvestres, y podría considerarse su comercialización a
través de Unidades de Manejo Ambiental como una
alternativa económica para los poseedores de este
±Std. Dev. recurso.
±Std. Err.
Mean
Agradecimientos
El presente trabajo es resultado parcial del
proyecto “Micropropagación de Orquídeas una
estrategia para revalorizarlas como un recurso forestal
no maderable” asignado con la clave: 2003-C03
10703 Financiado por el fondo sectorial CONAFOR-
CONACYT.
Literatura citada
ACKERMAN, J. D, 1998 Evolutionary potencial in
orchids: patterns and strategies for
conservation. Selbyana. 19(1) 4-8
ACOSTA-CASTELLANOS 2002, Plantas
vasculares raras, amenazadas o en peligro de
extinción del estado de Oaxaca, un panorama
preliminar. PolibotánicaNo. 13:47-82.
HAGSATER, E., M. A. SOTO-ARENAS, SALAZAR-
CHÁVEZ G., JIMENEZ MACHORRO, LOPEZ
ROSAS M. A. & R. L. DRESSLER. 2005. Las
orquídeas de México, Instituto Chinoin, México.
HICKS, A.J. 2004. Asimbiotic technique of orchid
seed germination. The orchid seedbank proyect.
USA.
IRIONDO-ALEGRIA, J.M. 2001. Conservación de
Germoplasma de especies raras y amenazadas.
MURASHIGE, T and F. SKOOG. 1962. A revised
medium for rapid growth and bioassays with
tobacco tissue culture. Physiol. Plant. 15:473:479.
PARK-SO, Y,H.N. MURTHY & PAEK, K.Y. 2001.
Mass multiplication of protocorm-like bodies
using bioreactor system and subsecuent plant
regeneration in Phalaenopsis. Plant cell, Tissue
and Organ Culture 6 3 No. 1:67-72.
PIERIK R. L. M. 1990. Cultivo in vitro de las plantas
superiores. Ediciones Mundi-Prensa, Madrid.
SANTOS-HERRERA, L., M. MARTINEZ-GARCIA
2005. In Vitro Propagación de Laelia albida
 Foresta Veracruzana 9(1):55-58. 2007.
(Orchidaceae) for conservación and Ornamental
Porposes in México.HortSince 40(2):439-442
SEMARNAT (Secretaría de Medio Ambiente y
Recursos Naturales) 2001.Norma Oficial
Mexicana, NOM-059-SEMARNAT 2001 en línea
http:/www.ine.gob.mx/ueajei/norma59.a.html
STATSOFT INC (1996), STATISTICA Versión 6.
Tulsa, OK, USA.
View publication stats
59
VOVIDES, P.A, V. LUNA & MEDINA 1997.Relación
de algunas plantas y hongos mexicanos raros
amenazados o en peligro de extinción,
sugerencias para su conservación. Acta Botánica,
Julio No. 039. 39:1-42.
Recibido en agosto de 2006
Aceptado en diciembre de 2006