Ingeniería Química

Asignatura: Microbiología

Práctica: Preparación De Un

Medio de Cultivo

Alumno: Resendiz Mendoza Angel Olaf

Profesora: Nadia Jazmín González González

Grupo: 5IQ11

Periodo: Primer Parcial

Objetivo General.
Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y practicar
los métodos de esterilización apropiados.
Marco Teórico.
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en los que es posible cultivarlos
bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. Una de
las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en transferir una
muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que
permite obtener cultivos microbianos. A l efectuar este procedimiento, es necesario
considerar que, en el área de trabajo, existen muchos otros microorganismos;
debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y
contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el
aspecto nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitat natural,
por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentración de sales y
durante la incubación condiciones tales como la temperatura, aireación la
luminosidad.

La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos

en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros,
facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y control de estos.
La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y
propósito específico del estudio.

Un medio de cultivo es un material principalmente orgánico que provea el conjunto

de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes necesarios para la
proliferación de microorganismos en él. Para que las bacterias crezcan
adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un
medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores decrecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

Para impedir la contaminación de los cultivos, es necesario tener plena conciencia

de la ubicuidad de los microorganismos, lo que determina que el aíre y todas las
superficies estén densamente pobladas por microorganismos, de este modo en la
transferencia de una muestra microbiológica a otro recipiente, se deben tener una
serie de cuidados que eliminen los riesgos de contaminación. Estos incluyen el área
de trabajo, el lavado de las manos, la esterilización de todos los utensilios y medios
de cultivo a emplear y realizar la transferencia del microorganismo en una zona
estéril, la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero. Al conjunto de
procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama
técnica aséptica; el seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes

La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de

nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del
equilibrio osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un
agar o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos.
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el
control regular de los microorganismos descomponedores y patógenos en las
muestras microbiológicas.

Clasificación de medios de cultivo microbiológico por composición química

Medio sintético (definido), es un medio con un compuesto químico definido
utilizado habitualmente para cultivar fotoautótrofos, como las cianobacterias y los
protistas fotosintéticos. Se utiliza mucho en investigación para estudiar el
metabolismo de los microorganismos.

Medios complejos, son medios que poseen componentes químicos no definidos,

como peptonas, extracto de carne y extracto de levadura, que satisfacen los
requerimientos nutricionales de diferentes microorganismos. Se utilizan para cultivar
microorganismos exigentes con requerimientos nutricionales complejos.
Medios de cultivo microbiológico en función de su característica física
En los medios sólidos se utiliza agar-agar al 1-7 % o gelatina al 10-20 % para
solidificar el caldo líquido. Los medios sólidos se utilizan para aislar diferentes
microorganismos entre sí, aislar cultivos puros, realizar ágares inclinados y ágares
para siembra por punción en profundidad.

Los medios líquidos no contienen productos solidificantes. Después de la

inoculación y la incubación, las células se hacen visibles en forma de una pequeña
masa o de un enturbiamiento del caldo.

Medios de cultivo microbiológico según el método de preparación

Los medios listos para usar son medios sólidos o líquidos suministrados en
placas, frascos, tubos u otros recipientes listos para ser utilizados o para utilizarse
después de fundir y enriquecer.

Los medios preparados a partir de formulaciones comerciales deshidratadas

son medios en forma seca que requieren rehidratación y procesamiento antes de su
uso, lo que produce un medio completo o bien un medio incompleto al que se
añaden suplementos antes de su utilización.

Los medios preparados a partir de cada uno de sus componentes son medios
producidos por un laboratorio de microbiología por completo a partir de cada uno de
sus ingredientes.

Los medios a voluntad se producen mediante un sistema que mantiene el medio

de cultivo estéril muy concentrado disponible en un laboratorio durante varios días.
Por dilución con agua estéril, puede producir una cantidad requerida de medio listo
para usar a voluntad, sin que haya que esterilizarlo en autoclave.

Material:
Instrumental

- Recipientes de plástico o de vidrio con tapa

 - 2 velas
- Papel aluminio
- Cuchara o agitador
- Paño seco y limpio
- Masking tape

Reactivos

- Cubito de caldo de pollo o de res comercial

- Grenetina
- Agua purificada o embotellada
- Alcohol etílico

Equipo de seguridad:

- Guantes
- Cubrebocas
-

Procedimiento:
1. Determinar los envases a utilizar, si son de plástico deben encontrarse en su
empaque original, sin abrir y sin rasguños. Si son de vidrio se seguirá el
proceso de esterilización descrito a continuación:
a. Deben lavarse con agua y jabón y dejar secar
b. Con ayuda de una olla exprés se hervirán por 20 minutos a baño maría
y fuego medio. O en una olla común con agua que no cubra de
ninguna forma los recipientes se hervirán por al menos 5 minutos con
tapa cerrada, de manera que el vapor esterilice los recipientes (en
ambos casos, los frascos deben tener la tapa sobrepuesta, no
totalmente cerrada).
c. En caso de poseer esterilizadores de biberones, pueden utilizarse
siguiendo las instrucciones de estos.
d. Dejar secar completamente los frascos por fuera y por dentro
2. Medir en un envase ejemplo la cantidad de agua aproximada necesaria para
realizar 3 repeticiones.
3. Calentar el agua purificada o embotellada en un recipiente previamente
lavado y esterilizado con alcohol etílico, hasta punto de ebullición.
4. Disolver en el agua 1 cubo de caldo de pollo o res, utilizando la cuchara o el
agitador previamente lavado y esterilizado con alcohol etílico.
5. Una vez disuelto el cubo de caldo, disolver grenetina en la mezcla de acuerdo
con la cantidad de agua total (7 gr aproximadamente por cada 60 ml de
agua).
6. Cubrir la preparación con papel aluminio para evitar contaminaciones y dejar
enfriar.
7. Esterilizar el área de trabajo; rociar alcohol etílico y limpiar el excedente con
un paño seco y limpio.
8. Definir un espacio de 12 cm aproximadamente en el que se colocarán las 2
velas encendidas, esta será el área estéril para trabajar.
9. Con las medidas de sanidad y seguridad, traer el medio preparado y los
recipientes a utilizar, asegurando que el área este lo más limpia posible y sin
perturbaciones en el ambiente como flujo de personas o fuertes corrientes de
aire.
10. Retirar el aluminio del medio, abrir la tapa del recipiente a 45 Grados y vaciar
el medio en el recipiente hasta 1 cm de altura, posteriormente cerrar
completamente la tapa (en caso de que la tapa no selle por si sola, utilizar
masking tape). Este será el “control”.
11. Repetir el paso en otros 2 recipientes más, los cuales se nombrarán “Cultivo
1” y “Cultivo 2”.
12. Esperar a que se enfríen y se solidifique el medio.
13. Colocar el recipiente “Control “en un lugar fresco que ocasionalmente reciba
la luz del sol (no de manera directa) por 3 días. Los medios “cultivo 1” y
“cultivo 2” colocarlos en un lugar fresco, seco y sin luz. A la espera de una
posible aparición de crecimientos en el medio control, lo cual indicará una
contaminación
14. Repetir el proceso si el recipiente “control” resulta contaminado, afinando los
detalles de sanidad y técnica de manejo del equipo que pudiesen haber
ocasionado una contaminación
Resultados.
El procedimiento se siguió al pie de la letra tomando en cuenta las medidas
sanitarias pertinentes. Con un tiempo de realización de la práctica de 2 horas que
incluyeron limpieza del área y preparación de esta, preparación del medio de cultivo,
espera para enfriar el medio y vaciado.
Análisis de resultados.
Pasados los 3 días a la espera de algún crecimiento ocurrieron los siguientes
acontecimientos.

 El frasco de control conservó su consistencia sólida la mayor parte del

tiempo, al estar expuesto al sol en varias ocasiones manchó un poco las
paredes del frasco, pero al pasar de los días se observa un crecimiento de
sectores blancos en un par de puntos del cultivo. Lo que seguramente indica
el desarrollo de alguna bacteria.
 Los frascos de “cultivo 1” y “cultivo 2” perdieron consistencia sólida y
terminaron con una parte superficial bastante líquida, y aun sin estar
expuestos a la luz solar directa en ningún momento también desarrollaron
sectores de color blanco que indican un desarrollo bacteriano.
Conclusiones.
La práctica fue exitosa en cuanto al ensayo del proceso de preparación, pero falló al
conseguir medios de cultivo libres de proliferación bacteriana. Lo que sirve para
confirmar la importancia de un cuidado meticuloso con las medidas sanitarias y de
esterilización del área e instrumental. De igual modo da una lección para afinar la
técnica de preparación, evaluar y pulir detalles de limpieza y metodología, además
de una primera muestra de como se observa un crecimiento bacteriano en un medio
fértil e idóneo.

Observaciones y sugerencias.
Se puede afirmar que el proceso de preparación tuvo sus errores técnicos en la
preparación, y en base a la identificación de estos se enlistan a continuación
algunas sugerencias para una repetición de preparación:

 El proceso de esterilización de los frascos se debe realizar en la olla exprés

para una mayor eficacia
 Se debe esperar a que la mezcla se enfríe a temperatura ambiente antes de
vaciar en los recipientes, esto para evitar condensación de vapor en el interior
de estos y que se dificulte la observación
 Se debe calentar el agua en un recipiente con tapa, bien esterilizado y con la
cocina lo más limpia posible
 La forma de levantar la tapa de los frascos sellados ha de ser en un ángulo
de no más de 45° a fin de evitar una total apertura por el que ingresen
microrganismos
 Abrir el medio preparado y los frascos únicamente en el área estéril de la
llama de las velas y el tiempo justo para realizar el vaciado.

Poniendo en práctica estas sugerencias y con práctica se puede conseguir un medio

libre de contaminación bacteriana y en consecuencia una práctica 100 por 100
exitosa.

Bibliografía
DIRECCIÓN DE BROMATOLOGÍA DE NEUQUEN. (Julio de 2021). Procedimientos
De Microbiología general. Obtenido de www.saludneuquen.gob.ar:
https://www.saludneuquen.gob.ar/wp-content/uploads/2021/08/ANAL-005-
Microbiologia-general.pdf

Hernández., M. d. (Mayo de 2017`). 2.1 Métodos y técnicas de cultivo.