ĆELIJSKI I MOLEKULARNI PUTEVI KOJI

KONTROLIŠU VELIČINU MIŠIĆA KAO

ODGOVOR NA VEŽBANJE
Student:David Drakul
■ Od otkrića ATP-a i motornih proteina do sinaptičkih neurotransmitera i kontrole faktora rasta diferencijacije ćelija,
skeletni mišići su obezbedili ekstremni model sistema u kome se razumeju aspekti funkcije tkiva.
■ Mišić je jedno od retkih tkiva koje se može povećati i smanjiti tokom svakodnevnog života. Veličina mišića zavisi od
njegove kontraktilne aktivnosti, ali precizan ćelijski i molekularni put(i) kojim stimulans aktivnosti utiče na veličinu i
snagu mišića ostaju nejasni.
■ Četiri korelata mišićne kontrakcije mogu, u teoriji, da regulišu rast mišića: signali izvedeni iz nerava, dinamika
citoplazmatskog kalcijuma, brzina potrošnje ATP-a i fizička sila.
■ Ovde sumiramo dokaze zai protiv svakog stimulusa i onoga što je poznato ili ostaje nejasno u vezi sa njihovim putevima
molekularne transdukcije signala i ćelijskim efektima.
■ Skeletni mišići mogu rasti na tri načina, stvaranjem novih sincicijskih vlakana, dodavanjem jezgra iz mišićnih matičnih
ćelija postojećim vlaknima ili povećanjem citoplazmatskog volumena/jezgra.
■ Dokazi sugerišu da poslednja dva procesa doprinose rastu izazvanom vežbanjem.
■ Rast vlakana zahteva povećanje površine sarkolema i zapremine citoplazme različitim brzinama.
■ Odavno je poznato da je vežba velike sile posebno efikasan stimulans rasta, ali kako se ovaj stimulans oseća i pokreće
koordinisan rast koji je na odgovarajući način skaliran preko organela ostaje misterija.
■ Regulacija veličine ćelije je fundamentalni aspekt biologije, ali je i dalje slabo shvaćena.
■ Važnost kontrole veličine ćelije je naglašena evolutivno očuvanim mehanizmima koji
regulišu rast ćelija, a poremećaji u kojima se javlja bolest.
■ Putevi rasta se aktiviraju tokom razvoja iu odraslom dobu poučnim signalima hormona i
dodatnih faktora koji mogu uticati na ove mehanizme, kao što su hranljive materije i
mehaničko opterećenje.

Kod odraslih, mnoge ćelije održavaju svoju veličinu godinama, ali zadržavaju sposobnost
proliferacije i formiranja novog tkiva.
Neke ćelije, međutim, mogu da promene svoju veličinu nakon trajnog povlačenja iz ćelijskog
ciklusa.
Zrelo skeletno mišićno vlakno je jedan takav primer ćelije koja se ne deli koja može dramatično
da promeni svoju veličinu.
Posle vežbanja, posebno vežbi velike sile, mišić odraslih će rasti usled povećanja postojećih
mišićnih vlakana
Nasuprot tome, tokom perioda neaktivnosti, kao što je odmor u krevetu ili izlaganje
bestežinskom okruženju, pojedinačna mišićna vlakna atrofiraju
■ Rast celog mišića može nastati usled povećanja veličine postojećih mišićnih vlakana
(tj. hipertrofije) i/ili formiranja novih vlakana (tj. hiperplazije).

Direktno prebrojavanje mišićnih vlakana korišćenjem tehnika

varenja azotne kiseline, gde se svako vlakno razdvaja i
pojedinačno prebrojava, nije otkrilo nikakve dokaze o
hiperplaziji nakon preopterećenja ili samo malo (9%)
povećanje u formiranju broja vlakana (tj. hiperplazija)

Svako mišićno vlakno je multinukleatna
sincicijalna ćelija, nastala fuzijom
prekursorskih miocita.
Ovo zapažanje daje verodostojnost hipotezi o
Hipertrofični rast mišićnih vlakana kao odgovor
mionuklearnom domenu, koja kaže da svako
na preopterećenje je praćen povećanjem
jezgro može da podrži konačan maksimalni
mionuklearnog sadržaja za koji se veruje da ga
volumen citoplazme i da rast iznad određene
doniraju satelitske ćelije, rezidentne mišićne
granice zahteva nuklearnu donaciju iz fuzije
matične ćelije ograničene na tkivo (MuSC).
mioblasta u rastuće vlakno
 Osnovno pitanje na koje ostaje da se odgovori je upravo kako vežbanje u početku pokreće aktivaciju ovih puteva za
kontrolu rasta vlakana?

početni pokretač rasta može nastati u bilo kom od sledećih glavnih koraka u kaskadi ekscitacije-kontrakcije:

(i) obrazac mišićnog akcionog potencijala, iniciran delovanjem neurotransmitera usled akcionog potencijala u motornom nervu, (

ii) porast slobodnog kalcijuma u citoplazmi (Ca2+ ) koncentracija nakon oslobađanja iz sarkoplazmatskog retikuluma (SR),

(iii) konformaciona promena na tankom filamentu koja dozvoljava aktivaciju aktomiozinske ATPaze i olakšava cikluse poprečnog
mosta,
(iv) stvaranje mehaničke sile koja proizvodi mišićni rad ili

(v) Ponovno preuzimanje Ca2+ u SR koje pokreće SERCA, katalizujući dalji ATP promet

Rešavanje pokretača (okidača) rasta mišića zahteva pažljivo eliminisanje

specifičnih elemenata neuromišićne aktivnosti da bi se kontrolisao i izolovao
uticaj svakog aspekta procesa ekscitacije-kontrakcije .
■ Mehanički faktori se skoro nikada ne kontrolišu nezavisno od drugih korelata neuromišićne
aktivacije.
■ Složen odnos između akcionih potencijala, citoplazmatskog Ca2+ statusa, mehaničke sile i
korišćenja energije otežava odvajanje mehanizama mehanotransdukcije iz šireg konteksta
elektrofiziologije i biohemije mišićnih vlakana.
■ Kao primer, kontrakcije mišića velike sile su snažniji stimulans rasta od kontrakcija male sile,
ali to ne mora nužno da govori o važnosti sile same po sebi jer je veličina izlazne sile čvrsto
kontrolisana promenama u motornoj jedinici regrutovanje i učestalost otpuštanja.
 Sistemska u odnosu na lokalnu kontrolu veličine skeletnih mišića

■ Hormoni i hranljive materije u cirkulaciji utiču na rast i razvoj mišića tokom života.
■ Primer takve sistemske kontrole je gladovanje, gde adaptivni hormonski i metabolički odgovori pokreću
oslobađanje glukoneogenih amino kiselina iz mišića za proizvodnju glukoze u jetri i bubrezima, na kraju
obezbeđujući gorivo za vitalne organe.

karakteristika gladovanja je gubitak mišića, ali nije samo u

ekstremnim scenarijima da se mišićna masa kontroliše sistemskim
uticajem.

Tokom razvoja, odgovarajući balans cirkulišućih faktora rasta,

mitogena i hranljivih materija utiče na mišićnu masu i funkciju.

Hormoni i dostupnost hranljivih materija nastavljaju da

kontrolišu rast tokom postnatalnog razvoja i u odraslom dobu
■ Kada se razmatra specifičan efekat vežbanja, pretpostavlja se stabilno osnovno
stabilno stanje, u kome je sinteza proteina uravnotežena degradacijom; Smatra se
da ovaj stabilni obrt olakšava popravku i adaptaciju.
■ Međutim, barem kod odraslih, samo inhibicija degradacije proteina u stabilnom
stanju nije dovoljna da bi se objasnila brza hipertrofija mišića u scenarijima rasta
izazvanih vežbanjem .
■ Stoga, dok promene u kataboličkim putevima mogu doprineti rastu izazvanom
vežbanjem, mi se fokusiramo na anaboličke puteve kao glavne pokretače rasta.
■ Katabolički putevi, koji se mogu visoko aktivirati uatrofična stanja kao što su
denervacija, odmor u krevetu, kaheksija od raka ili slabost mišića stečena na
intenzivnoj nezi, detaljno su pregledana na drugim mestima
Kako sistemski signali kontrolišu mišićnu masu

■ Na ćelijskom nivou, nije jasno kako se kontroliše rast.

■ Često se pretpostavlja da rast jednostavno zahteva više sinteze ćelijskih
komponenti, a primarni fokus je bio na proteinima.
■ Da bi ćelije rasle, moraju povećati svoju površinu plazma membrane, sadržaj lipida i
ravnotežu između ćelijske površine i unutrašnjih membrana.
■ Moguće je da se događaj koji pokreće rast poveća u ćelijskoj zapremini i da se
metabolizam proteina zatim prilagođava da ispuni proširenu citoplazmu sadržajem,
baš kao što je kupovina ograničena veličinom nečije korpe.
■ Neto gubitak ili dobitak mišićnog proteina zavisi od ravnoteže između stopa sinteze proteina i degradacije proteina.
■ Neto dobitak mišićnih proteina (npr. tokom rasta ) nastaje kada sinteza premašuje degradaciju, dok neto gubitak
mišićnih proteina (npr. tokom gladovanja) nastaje kada razgradnja premašuje sintezu.
■ Na metabolizam mišićnih proteina utiču različiti faktori, uključujući doba dana, hranjenje, bolest i starenje.
■ Delovanje cirkulišućih hormona je ključni kontrolor prometa proteina u svakoj situaciji.

Poznati hormonski faktori uključeni u kontrolu veličine mišića uključuju

testosteron
, insulin i faktor rasta
1 sličan insulinu (IGF-1),
miostatin,
b-adrenergičku signalizaciju i glukagon
IGF-1/PI3K/Akt/TOR
■ Put IGF-1 inicira se ligandima sličnim IGF-1 koji se vezuju za svoje receptore, koji zauzvrat indukuju transfosforilaciju receptora i regrutovanje supstrata
insulinskog receptora 1 (IRS1) .
■ Nizvodno od ovog mehanizma je PI3K/Akt put, čija jedna od grana uključuje aktivaciju TOR signalizacije.
■ Prekomerna ekspresija IGF-1 ili Akt dovodi do hipertrofije skeletnih mišića i povećanja izlazne sile.
■ Smatra se da su ovi efekti u velikoj meri posredovani preko TOR, evolutivno očuvane serin/treonin kinaze koja se nalazi u dva kompleksa, TORC1 i
TORC2. Dok poslediceTORC2 signalizacije tek počinju da se otkrivaju .
■ TORC1 je poznat kao ključni regulator rasta ćelija, prvenstveno stimulisanjem sinteze proteina.
IGF-1/PI3K/Akt/TOR

■ Glavni nizvodni TORC1 mete u ovom pogledu su 70 kD ribosomalni protein S6

kinaza 1 (p70S6k1) i eukariotski faktor inicijacije 4E-vezujući proteini (4EBP).
■ TOR je neophodan tokom razvoja, pošto globalni nokaut miševi umiru tokom rane
embriogeneze
■ Miševi kojima nedostaje TOR specifično u mišićima od rođenja su održivi, ali
pokazuju tešku miopatiju i preranu smrt.
Miostatin je negativan regulator veličine mišića
■ Miostatin, član transformišućeg faktora
rasta-b (TGF-b), je negativan regulator
mišićne mase.
■ Prirodne genetske mutacije u miostatinu
dovode do dubokog hipertrofičnog fenotipa
koji je očuvan kod više vrsta
■ Kod zrelih životinja, prolazna prekomerna
ekspresija miostatina dovodi do atrofije
skeletnih mišića dok njegova inhibicija
proizvodi hipertrofiju .
■ Mehanički, miostatin se vezuje za
aktivinski receptor IIB (ActRIIB), što dovodi
do iniciranja intracelularne signalizacije
putem fosforilacije i aktivacije faktora
transkripcije Smad2 i Smad3 .
■ Kada se aktiviraju, Smad2 i
Smad3translociraju u jezgro da inhibiraju
faktor transkripcije JunB, pozitivan
regulator rasta mišića .
■ Iako precizan mehanizam regulacije
mišićne mase nije dobro shvaćen, neki
dokazi ukazuju da signalizacija miostatina
utiče na Akt/ TOR put .
■ Dakle, može postojati više signalnih
puteva, koji međusobno deluju kako bi
kontrolisali rast.
■ Mišićna aktivnost kao ključni lokalni regulator veličine mišića .
■ Stepen hipertrofije kao odgovor na manipulaciju sistemskim signalima razlikuje se
između različitih mišića.
■ Na primer, nedostatak miostatina prvenstveno dovodi do hipertrofije mišića brzog
tipa. Ipak, signal miostatina je uklonjen iz svih mišića tela, postavljajući pitanje:
Zašto su različiti mišići pogođeni različito?

Uloga cirkulirajućih signala u lokalnom rastu mišića

može biti dopuštena, a ne poučna, što je u skladu
sa dokazima da je potreban minimalni bazalni nivo
testosterona da bi se podržala lokalna mišićna
hipertrofija kao odgovor na preopterećenje.
■ Opšti telesni hormonski status može da moduliše povećanje osetljivosti mišića na
promene u lokalnim signalima koji su suštinski vođeni spajanjem ekscitacije i
kontrakcije vežbanog mišića.
■ Čini se da sistemski i lokalni inputi dele slične ciljeve, posebno TOR put, što ukazuje
na kritičnu kontrolnu tačku u regulaciji veličine. Ovo može biti zato što se određeni
faktori rasta za koje se zna da regulišu TOR, kao što je IGF-1, takođe proizvode
lokalno , što sugeriše autokrinu/parakrinu kontrolu veličine mišića.
 ■ Inhibiciono dejstvo rapamicina na rast stimulisanu aktivnošću i sintezu mišićnih proteina kasnije je
potvrđeno u nezavisnim laboratorijama .
■ Niske doze rapamicina su na sličan način sprečile sintezu mišićnog proteina izazvanu vežbanjem
otpora kod ljudi .Genetska inhibicija TORC1 uslovnom delecijom raptora specifičnom za mišiće
smanjila je hipertrofiju mišića izazvanu sinergističkom ablacijom kod miševa.
■ TORC1 se smatra neophodnim za hipertrofiju mišića izazvanu vežbanjem, iako ostaje neodređeno
da li je TOR aktivacija ključni uzročni put rasta

Za razliku od modela preopterećenja sinergističke ablacije,

rast vlakana kao odgovor na trening električne stimulacije je
samo delimično (50%) blokiran tretmanom rapamicinom
■ Jedna od mogućnosti je aktivnost puta(a) protein kinaze aktivirane mitogenom (MAPK) kao odgovor na
vežbanje.
■ MAPK su porodica evolucijski očuvanih serin/treonin kinaza podeljenih u tri glavne klase: kinaze 1 i 2
regulisane ekstracelularnim signalom (ERK1/ 2), c-Jun N-terminalne kinaze (JNK) i p38-MAPK (p38).
■ Jedan od najranijih prijavljenih odgovora nizvodno od mišićne aktivnosti u hipertrofičnom odgovoru bila je
regulacija c-Fos i c-Jun protoonkogena .
■ Poznato je da takvi 'neposredni-rani' odgovori nastaju signalizacijom preko AP1 proteina, koji je sam dimer
c-Fos i c-Jun proteina [95,96].
■ Dakle, ovi rani podaci sugerišu aktivacijuMAPK put(i). Vežbanje je snažan stimulans za ERK1/2 i JNK1/2
fosforilaciju (aktivaciju) kod životinja i ljudi .
■ U prilog ulozi u mišićnoj hipertrofiji, gubitak JNK1 i JNK2 iz skeletnih mišića u potpunosti sprečava rast
mišićnih vlakana kao odgovor na preopterećenje sinergističkom ablacijom, što pokazuje da je potreban
određeni nivo JNK aktivnosti .
■ Jednom aktiviran, postoji nekoliko potencijalnih mehanizama pomoću kojih JNK može da izazove
hipertrofiju skeletnih mišića, uključujući aktivaciju transkripcionih faktora koji imaju ulogu u rastu mišića i
preslušavanje sa TOR signalizacijom
■ Dakle, koordinirana JNK/TOR signalizacija može pozitivno regulisati hipertrofiju mišića kao odgovor na
vežbanje
■ Još jedan put od mogućeg značaja je Hiporelirano mehanosensing .
■ Signalizacija na putu nilskog konja preko proteina Iap i Vvtr1/Taz može da moduliše različite faktore
transkripcije aktivnih mišića, kao što su Tead proteini koji su prvobitno opisani kao regulatori zajedničkog
motiva u regulatornim elementima gena specifičnih za mišiće .
■ Jap aktivnost je neophodna za normalno ponašanje MuSC i C2C12 mioblasta i može biti pozitivan
regulator veličine mišićnih vlakana [107,108], verovatno delujući kroz održavanje neuromišićnog spoja .
■ Funkcija Vvtr1 u kontroli veličine mišića ostaje da se istraži. Kod Drosophile, gubitak funkcije jedinog
Iap/Vvtr1 ortologa Iorkie-a smanjuje mišiće za letenjeveličina vlakana
Kalcijumova signalizacija kao okidač hipertrofije
Ca2+ je glavni citoplazmatski drugi glasnik u svim eukariotskim ćelijama i ima različite efekte u zavisnosti od tipa ćelije, razvojnog stadijuma i fiziološkog stanja.

U skeletnim mišićima, proliferacija mioblasta, apoptoza, karakter diferenciranih vlakana i kontrakcija su regulisani Ca2+ .

U uslovima mirovanja, citosolna koncentracija Ca2+ merena u pojedinačnim mišićnim vlaknima je 30–50 nM .

Depolarizacija membrane Ttubule izazvana akcionim potencijalom izaziva strukturne promene na napon-osetljivim dihidropiridinskim receptorima (DHPR) koje dovode
do otvaranja fizičkihpovezani rijanodinski receptori u sarkoplazmatskom retikulumu, koji oslobađaju uskladišteni Ca2+ .

Svaki akcioni potencijal takođe aktivira mali priliv Ca2+ preko površine ćelije iz vanćelijskog prostora [123]. Ovi mehanizmi dozvoljavaju masivno (~100 puta) povećanje
koncentracije slobodnog Ca2+ u citoplazmi što rezultira brzim vezivanjem Ca2+ za troponin C na tankom filamentu i aktivacijom kontrakcije aktomiozina.
■ Pored svog direktnog učešća u komandi
ekscitacije-kontrakcije, Ca2+ je kritična
komponenta brojnih signalnih puteva,
kontrolišući aktivnost različitih nizvodnih
efektora koji regulišu ekspresiju gena .
■ Ove signalne kaskade će verovatno biti
centralne za održavanje fenotipova u
brzim i sporim mišićnim vlaknima.

■ određivanje da li je sam Ca2+ dovoljan

da izazove rast mišića zahteva normalno,
kontrakcijom vođeno oslobađanje Ca2+
bez zbunjujućih efekata kontrakcije
aktomiozina.
■ Vredan pristup u ovom pogledu je
upotreba određenih inhibitora miozina
malih molekula, koji blokiraju kontrakciju
aktomiozina, a time i razvoj tenzije, bez
uticaja na Ca2+ tranzijente
■ Različiti obrasci pečenja uzrokuju različite dinamičke obrasce porasta Ca2+ u vlaknima
■ . Kako različiti obrasci porasta Ca2+ utiču na nizvodnu signalizaciju u mišićnim vlaknima
odraslih, generalno, slabo je poznato. Štaviše, studije na ljudima i životinjskim modelima
sugerišu da su ponovljeni napadi velike sile, „ponavljanja“, ključni za pokretanje rasta
mišića .
■ Intenzivno paljenje potrebno da se kontrakcije velike sile dovedu blizu tetanije koje
tipično stimulišu hipertrofiju mišića izazivaju produženi visoki nivo Ca2+ tokom stvarne
kontrakcije, ali ipak traju kratki apsolutni periodi od sekundi do minuta.
■ Ca2+ se brzo vraća na početnu vrednost kada kontrakcija prestane; pa kako je
pokrenuta signalizacija traje satima do danima kako bi podstakla rast je ključni aspekt
problema rasta.
■ U skeletnim mišićima su identifikovani različiti ciljevi osetljivi na Ca2+ koji bi mogli da
snime prethodne Ca2+ signale, od kojih su neki bili umešani u hipertrofiju mišića
■ Mef2 i drugi faktori transkripcije regulisani Ca2+, kao što su NFAT, deluju kooperativno kako bi aktivirali transkripciju gama koaktivatora 1
alfa receptora aktiviranog proliferatorom peroksizoma (PGC-1a), glavnog transkripcionog koaktivatora uključenog u adaptaciju na vežbanje
izdržljivosti .
■ Izoforma spoja PGC-1a (PGC-1a4) je uključena u kontrolu veličine mišićnih vlakana, pošto postoji veliko povećanje površine poprečnog
preseka vlakana i snage nakon prekomerne ekspresije PGC-1a4 .
■ PGC-1a4 ne reguliše većinu poznatih ciljeva PGC1a uključenih u oksidativni metabolizam, već indukuje IGF-1 preko GPR56 i potiskuje
signalizaciju miostatina.
■ Među različitim načinima vežbanja,aktivacija PGC-1a4 bila je ograničena na protokole treninga tipa otpornosti koji su povezani sa
hipertrofijom mišićnih vlakana .
■ PGC-1a4 je sam regulisan MEK/ ERK signalizacijom koja se aktivira tokom vežbe otpora .
■ Uloga PGC-1a4 izgleda složenija nego što je prvobitno opisano i potisnuta je interleukinom-6 (IL-6)
■ Mef2 -PGC-1a može povezati Ca2+ signalizaciju sa rastom mišića izazvanim preopterećenjem
 Aktivnost kalcineurina/NFAT kao kandidata za
hipertrofiju.

Jedan od najviše proučavanih Ca2+ efektorskih molekula

u mišićima je kalcineurin, Ca2+ /kalmodulin(CaM)
zavisna serin/treonin fosfataza

Kalcineurin postoji u citoplazmi kao heterodimer dve

podjedinice, nazvane A i B.

Kalcineurin A ima katalitički domen i tri karboksi-

terminalna regulatorna domena, sa, respektivno,
vezivanjem kalcineurina B, vezivanjem CaM i
autoinhibitornim kapacitetom

Podjedinica kalcineurina B sadrži četiri motiva EF ruke

koja vezuju Ca2+. Nakon povećanja nivoa Ca2+,
vezivanje CaM/Ca2+ izaziva konformacioni pomak koji
pomera autoinhibitorni domen i dozvoljava aktivaciju
fosfataze[155].

Aktivnost kalcineurina mogu da blokiraju dva hemijski

različita imunosupresivna leka, ciklosporin A (CsA) i
FK506, koji se vezuju za ciklofilin i FKBP, respektivno,
formirajući inhibitorne komplekse koji se vezuju za
kalcineurin i blokiraju njegovu aktivnost fosfataze .
■ Kalcineurin je uključen u ekspresiju gena citokina u B i
T ćelijama svojim delovanjem na nuklearni faktor
transkripcionih faktora aktiviranih T-ćelija (NFAT) .
■ U bazalnim uslovima, NFAT su lokalizovani u citoplazmi
u fosforilisanom stanju. Povećanje intracelularnog Ca2+
aktivira aktivnost kalcineurina fosfataze, koja
defosforiliše članove porodice NFAT, između ostalih
proteina, i olakšava njihovu brzu translokaciju u jezgro .
■ Jednom u jezgru, NFAT se kooperativno vezuju sa
drugim transkripcionim faktorima kako bi kontrolisali
produženu ekspresiju gena koja nadživljava Ca2+
stimulus u više tipova ćelija .
■ Kalcineurin i razni NFATizoforme su obilno eksprimirane
u mišićima , što je dalo prvu indikaciju da sličan
mehanizam može funkcionisati nakon aktivacije mišića
za kontrolu ekspresije i rasta specifičnih za mišiće gena.
Neuspeh rasta sa visokim dozama inhibitora kalcineurina može umesto toga da odražava toksične ili indirektne efekte inhibitornog agensa, posebno
imajući u vidu da CsA i FK506 imaju intracelularne mete koje su nezavisne od kalcineurina i da je kalcineurin prisutan u nemišićnim tkivima, kao
npr. neurona .

Interesantna dodatna mogućnost je da uloga signalizacije kalcineurina zavisi od tipa mišića i scenarija rasta. Mitchell i saradnici su pokazali da je
inhibicija kalcineurina od strane CsA potpuno sprečila ponovni rast plantaris mišića nakon perioda pražnjenja zadnjeg ekstremiteta, dok se većina
ponovnog rasta soleusa odvijala normalno .

Genetska manipulacija signalizacijom kalcineurina ukontekst ponovnog rasta je potreban da bi se potvrdilo da li je plantaris posebno osetljiv na
signalizaciju kalcineurina nakon perioda neupotrebe.

Sve u svemu, osim scenarija ponovnog rasta, dokazi nisu dovoljno jaki da bi se zaključilo da je signalizacija kalcineurina potrebna za hipertrofiju
mišića izazvanu vežbanjem.

Budući rad bi trebao istražiti genetski gubitak kalcineurina tokom fiziološki relevantnijih postavki preopterećenja, jer su skoro sve studije koristile
model ekstremne sinergističke ablacije. Obrazac mišićne kontrakcije, a samim tim i dinamika Ca2+ , tokom hronične sinergističke ablacije je
verovatno veoma različit od onog kod vežbi sa otporom.

Ovo je kritična tačka sobzirom na potencijal za divergentne mehanizme signalizacije rasta između hirurških metoda preopterećenja i modela koji
oponašaju vežbu otpora
■ Dodatni putevi zavisni od Ca2+ su nedovoljno istraženi
■ Većina radova na Ca2+ -regulisanom rastu mišića fokusirala se na signalizaciju kalcineurina.
■ Međutim, drugi molekuli zavisni od Ca2+ takođe mogu biti važni, uključujući CaMK i protein kinazu C
(PKC). CaMK su porodica serin/treonin protein kinaza koje se aktiviraju na način zavisan od Ca2+ i CaM.
Identifikovano je nekoliko CaMK izoforma, iako se čini da je CaMKII glavna izoforma izražena u skeletnim
mišićima .
■ CaMKII ima 12 podjedinica raspoređenih kao dva prstena od šest podjedinica u konformaciji čvorišta i
krakova.
■ Nakon vezivanja Ca2+ /CaM kompleksa zaCaM-vezujući domen CaMKII, aktivira se autofosforilacijom i
tada je aktivan nezavisno od povišene koncentracije Ca2+, najmanje u periodu od 2-3 min .

Jednom aktiviran, CaMKII dovodi do transkripcije posredovane Mef2, bilo

direktno deaktivacijom HDAC4 [184] ili inhibicijom GSK3b [185].
CaMKII takođe aktivira SRF [148]. Transkripcionu aktivnost preko p38 MAPK
takođe može da pokrene CaMKII kao odgovor na povećanje citosolnog Ca2+ .
■ PKC su porodica enzima uključenih u metabolizam, diferencijaciju i ćelijski rast. U skeletnim
mišićima pacova, PKC se aktivira kao odgovor na električnu stimulaciju in vivo .
■ Kompenzatorna hipertrofija usled preopterećenja sinergističkom ablacijom je praćena povećanom
aktivnošću PKC .
■ Uprkos ovim korelacijama, međutim, ulozi PKC-a u pokretanju mišićne hipertrofije je posvećeno
malo pažnje. Jedna nedavna studija je umešala PKC u hipertrofiju mišića kroz mehanizam koji
uključuje Gai2 .
■ Pokazalo se da rapamicin i PKC inhibitori sprečavaju hipertrofiju mišića izazvanu konstitutivno
aktivnim Gai2.
■ Ovi nalazi su u skladu sa studijom ohipertrofija srčanog mišića kod transgenih miševa sa srčano
specifičnom prekomernom ekspresijom konstitutivno aktivnog mutanta PKC, u kojoj je srčana
masa povećana za 28% sa normalnom srčanom funkcijom.
■ Dakle, PKC može imati ulogu u stimulaciji hipertrofije skeletnih mišića kao odgovor na vežbanje
Energetski stres kao hipertrofični stimulus

■ Aktivacija mišića je izuzetno energetska, sa stopom obrtanja ATP-a koja se povećava 100 puta tokom maksimalnog vežbanja .

■ Dve glavne potrebe za energijom tokom maksimalne vežbe su miozinska ATPaza, koja obezbeđuje neposredan izvor energije za biciklizam preko
mosta i smatra se da koristi oko 50–70% ATP-a i SERCA, koja je neophodna za pumpanje Ca2+ nazad u sarkoplazmatski retikulum i koristi 30–50%
ATP-a .
■ Pošto se početni ATP troši u roku od nekoliko sekundi, metabolizam kreatin fosfata, glikogena i lipida se sukcesivno koristi za regeneraciju ATP-a i
održavanje snabdevanja energijom.Prateće metaboličke promene, uključujući povećanje AMP i akumulacije metabolita, mogu poslužiti kao okidači
zavisni od aktivnosti za uporne promene u mišićima, uključujući hipertrofiju .
■ Važno je da u eksperimentima gde je funkcija miozina blokirana inhibitorima malih molekula da bi se odvojili efekti kalcijuma i sile ,bilo koji efekti
inhibitora miozina na rast mišića mogli bi biti sekundarni u odnosu na inhibiciju korišćenja ATP-a miozinskom ATPazom.
■ Kontrola pomoću koncentracije AMP [ili odnosa AMP/ATP ]
■ Dok je ADP direktan proizvod hidrolize ATP-a, da bi se maksimizirala dostupnost ATP-a, ADP se brzo pretvara
u AMP reakcijom adenilat kinaze (2ADP ↔ ATP + AMP). U vežbanju mišića, povišenje AMP aktivira enzim
koji se zove AMP-aktivirana protein kinaza (AMPK), koji se smatra 'energetskim senzorom' ćelije. AMPK je
heterotrimerni protein koji se sastoji od katalitičke podjedinice
■ (a) i dve regulatorne podjedinice (b i c).
■ Njegova aktivacija uključuje vezivanje AMP ili ADP za regulatornu c-podjedinicu, što rezultira
konformacionim promenama koje izazivaju alosterijsku aktivaciju, kao i olakšavaju fosforilaciju(i aktivacija)
katalitičke podjedinice različitim uzvodnim kinazama.
■ Kao prvi u liniji senzor povećanog ATP obrta, AMPK ima potencijal da bude brz regulator adaptacije mišića
AMPKa1-null miševi imaju manje mišiće, što ukazuje na potrebu za AMPK u
razvoju mišića.

Tačna uloga AMPK u otupljivanju sinteze mišićnih proteina in vivo izazvane

preopterećenjem je takođe dovedena u pitanje. Nedavna studija je pokazala
da je sinteza proteina bila prigušena kod AMPKa2-null miševa koji su bili
podvrgnuti ponovljenim mišićnim kontrakcijama .

TOR-p70S6K signalizacija je koaktivirana sa AMPKa2 odmah nakon

kontrakcije, pojačavajući prethodni rad koji pokazuje da TOR aktivnost i
aktivnost AMPK nisu međusobno isključive kao što je prvobitno bilo
• Pretpostavlja se da bi nagomilavanje metabolita, kao što su laktat i reaktivne vrste kiseonika (ROS), moglo
da posluži kao pokretač rasta mišića .

• Indirektni dokazi za ovu hipotezu potiču od metoda treninga koje preuveličavaju metabolički stres, kao što je
ograničenje protoka krvi (BFR). BFR trening uključuje okluziju kako bi se ograničio venski povratak i smanjio
dotok krvi tokom vežbanja (npr. primenom podveza oko proksimalnog kraja ekstremiteta).

• Okluzija tokom preopterećenja pojačava metabolički „stres“ kroz dva mehanizma, prvo povećanjem
oslanjanja na glikolitički metabolizam zbog lokalizovane hipoksije, a drugo tako što ometauklanjanje
metaboličkih nusproizvoda kroz venski odliv, što dovodi do pojačane akumulacije i hvatanja metabolita .

• Više puta je primećeno da BFR povećava hipertrofiju mišića kao odgovor na vežbe sa malim opterećenjem
,efekat za koji se sugeriše da je rezultat anaboličkog efekta nagomilavanja metabolita .
Čini se da laktat ima najveći potencijal kao molekul koji može da izazove hipertrofiju mišića.
Dodatak C2C12 ćelijama laktatom povećava signalizaciju preko TORC1 i stimuliše diferencijaciju miotube i hipertrofiju .
In vivo, suplementacija laktatom je poboljšala regeneraciju nakon oštećenja mišića i stimulisala hipertrofiju mišića u odsustvu vežbanja
možda aktiviranjem TOR signalizacije.
Jedan problem je što ne postoje poznati načini za ćelije da osete laktat; umesto toga, pošto ćelije sa kiseonikom mogu da koriste laktat za
generisanje ATP-a, moguće je da anabolički efekti primećeni in vitro mogu jednostavno da odražavaju veću količinu hranljivih materija nakon
izlaganja laktatu .
Reaktivne vrste kiseonika (ROS), koje se mogu podstaći aktivnošću laktata ,takođe su uključene u rast mišića
Metaboliti kao indirektni, a ne direktni, kontrolori rasta

• Alternativna hipoteza je da metaboliti indirektno promovišu rast mišića potencirajući regrutaciju

motornih jedinica.Akumulacija metabolita stvara kiselu intramuskularnu sredinu, koja služi kao
stimulans za metaboreceptore i aferentna vlakna grupe III i IV .

• Uz dovoljnu senzornu stimulaciju, može doći do neto inhibitornog efekta na aktivne alfa motorne
neurone , što dovodi do povećanog angažovanja motornih neurona kako bi se minimiziralo
funkcionalno slabljenje .
• Ova hipoteza je podržana činjenicom da BFR u kombinaciji sa vežbama sa malim opterećenjem
povećava amplitudu elektromiografije ciljnog mišića.

• Dakle, povećanjem neuromišićne aktivacije, metabolički stresori mogu da stimulišu rast ne direktnim
efektom, već indirektno aktiviranjem većeg dela mišićnih vlakana, čime se povećava obim
potencijalnog remodeliranja u celom mišiću .
• Ipak, izvesna neizvesnost ostaje. Na primer, nedavno je pokazano da BFR trening je selektivno
hipertrofirao mišićna vlakna tipa I,što je nalaz koji je u suprotnosti sa hipotezom da metabolički
molekuli jednostavno služe da povećaju brzu aktivaciju motornih jedinica visokog praga.
 Mehanosignalizacija kao hipertrofični stimulus
• Visoko koordinirana interakcija između mehaničkih i
biohemijskih inputa kontroliše oblik i veličinu tkiva tokom razvoja
i u odraslom dobu.

• Mehanotransdukcija je posebno relevantna u

mišićno-skeletnom sistemu, gde mehanički
stimulansi, bilo da su primenjene spolja ili
iznutra generisane sile, izazivaju adaptivne
odgovore za održavanje normalne homeostaze
tkiva.
• Primer takve adaptacije je veća veličina
kostiju u dominantnoj ruci tenisera
uzrokovana mehaničkim naporima
ponavljajućih teniskih udaraca

Mehanizam rasta koji se kontroliše silom ima evolucioni smisao, s obzirom da je proizvodnja
sile glavni cilj aktivacije mišića i da je mišićna masa snažno povezana sa maksimalnom
izlaznom silom; spajanje sile sa rastom omogućava kontrolu povratne sprege da zadovolji
zahteve funkcionalne potražnje
• Istezanje mišića je specifičan mehanički stimulus i loš model vežbanja

• Rani dokazi za mehaničku kontrolu veličine mišića došli su iz zapažanja da istezanje miotuba u kulturi stimuliše
hipertrofiju, atrofija imobilizacije može biti oslabljena kada se atrofirajući mišić istegne ,čime se čuva mišićna
masa, površina poprečnog preseka vlakana, dužina vlakana i ukupan sadržaj proteina .
• Čak je prijavljeno da istezanje imobilisanog mišića izaziva hipertrofiju nakon ~ 1 nedelje,iako je ovaj efekat
prolazan, a mišići na kraju pokazuju ukupnu atrofiju
• Ipak, hipertrofija može usleditiistezanje u neatrofirajućim mišićima;
• Kumulativni dokazi iz nekoliko laboratorija su pokazali da in vivo istezanje mišića krila ptica dovodi do izražene
hipertrofije mišića

Istezanje mišića tokom nekoliko dana se duboko razlikuje od

povremenih napada vežbanja koji se izvode kod ljudi ili
životinjskih modela treninga otpora. Važno je napraviti razliku
između mehaničkog naprezanja, odnosno sile koja se stvara.
Kosti se izdužuju tokom razvoja, istezanje jasno povećava mišićnu
masu dodavanjem jezgara i sarkomera na krajevima vlakana , što
je sasvim različit ćelijski način rasta od povećanja širine vlakana
primećenog posle treninga.

U situaciji pasivnog istezanja, da bi se stvorile uporedive količine

stresa kao kod aktivne kontrakcije, mišić se mora istegnuti preko
fiziološki relevantne udaljenosti i postoji potencijal da odgovor na
strukturno oštećenje ometa interpretaciju signalnih mehanizama.

Rast mišića može nastati kao odgovor na izometrijske kontrakcije,

gde se ne dešavaju promene u dužini mišića
 Potencijalni mehanizmi
mehanosensinga u skeletnim
mišićima

Mišićna vlakna prenose silu od

sarkomera do sarkomera, a zatim i
bočno kroz Z-linije i linearno na
krajevima vlakana do
ekstracelularnog matriksa, na kraju
povlačeći tetivu.

Ove opsežne i složene

mehanohemijske veze između
sarkomera koji proizvodi silu i
ostatka mišićne ćelije predstavljaju
izazov kada se pokušavaju
identifikovati pojedinačne
komponente u putu transdukcije sile
koje su odgovorne za detekciju
mehaničkih signala i stimulisanje
rasta.
Integrini i drugi senzori sile na sarkolemi Integrini, sastavljeni od heterodimera a i b podjedinica koji
obuhvataju ćelijsku membranu, imaju ključnu ulogu u dvosmernom prenosu fizičkih sila između aktinskog
citoskeleta i ekstracelularnog matriksa radi regulisanja različitih funkcija ćelije .

Preovlađujući integrin u zrelim skeletnim mišićima je a7b1 integrin, koji je obogaćen na miotendinoznim i
neuromuskularnim spojevima i na kostamerima, proteinskim sklopovima koji povezuju Z-disk sa
ekstracelularnim matriksom.

Moguća je uloga a7b1 integrina u hipertrofiji mišića posredovanoj opterećenjem , jer transgena
prekomerna ekspresija a7 u vlaknima povećava TOR signalizaciju i rast mišića uodgovor na trčanje nizbrdo
kod miševa
■ Fokalna adheziona kinaza (FAK), tirozin kinaza
koja se vezuje za citoplazmatski deo b1
integrina, je možda najbolji kandidat za
posrednika mehanosignalizacije preko
integrina u skeletnim mišićima.
■ Obaranje FAK-a u C2C12 miotubama smanjilo
je rast stimulisan IGF-1, što je koreliralo sa
smanjenjem TSC2/TOR/p70S6K1 puta [265].
In vivo analiza uloge FAK-a je ograničena jer su
FAK nulti miševi embrionalno smrtonosni .
■ Bez obzira na to, in vivo dokazi o anaboličkoj
ulozi FAK signalizacije potiču iz nalaza da
prekomerna ekspresija FAK-a nakon
transfekcije pCMV:FAK dovodi do preterane
TORC1 signalizacije izazvane opterećenjem.
■ Ovi nalazi pružaju neke dokaze da je
mehanizam mehanotransdukcije posredovan
integrinFAK-om povezan sa TORC1
signalizacijom.
 MS kanali su obilno izraženi u skeletnim
mišićima u svim fazama razvoja i mogu
imati ulogu u otkrivanju fizičke aktivnosti.

Zaista, hipertrofija mišića i aktivacija

TORC1 su sprečeni kada se preopterećeni
miševi leče streptomicinom, antibiotikom
koji može da inhibira aktivaciju nekoliko
tipova jonskih kanala MS.

Kandidati za MS kanale sa osetljivošću na

streptomicin su Piezo proteini, gigantski • Piezo1 se eksprimuje u skeletnim mišićima, gde njegova
Ca2+ kanali koji imaju jasne aktivacija i kasniji priliv Ca2+ promovišu sklopove aktomiozina
mehanosenzorne funkcije u nizu tipova posredovane RhoA/ROCK tokom formiranja miotube
ćelija
■ Titin – senzor sile u sarkomeru
■ Ne samo mišićna membrana doživljava sile. Kada se mišić steže, može se ili skratiti,
stvarajući ubrzanje, ali malu silu, ili proizvesti veliku silu u opterećenom izometrijskom
stanju kada se mišić kontrahuje. Smatra se da velika sila izaziva hipertrofiju.
■ Pošto svi sarkomeri unutar miofibrila generišu silu u istom pravcu i raspoređeni su po
celoj dužini vlakna, oni su glavni kandidat da sadrže senzor sile koji može da izazove
hipertrofiju.
■ Titin, džinovski protein koji je sastavni deo miofibrila i koji se proteže preko cele polovine
sarkomera, kandidat je za takvu mehanosenzitivnost.
■ Drugi domen titina, region N2A, je još jedan pretpostavljeni pretvarač mehanosignala.
■ Ponovljeni proteini ankirina mišića (MARP) su porodica molekula povezanih s titinom, koja se sastoji od tri
člana: srčani protein ponavljanja ankirina (CARP), domen ankirinskog ponavljanja 2/ankirin ponavljajući
protein sa PEST i regionom bogatim prolinom (Ankrd2/Arpp) i protein ankirin ponavljanja (DARP) povezan
sa dijabetesom.
■ Ultrastrukturne tehnike u tkivu srčanog mišića su pokazale da se sva tri MARP proteina vezuju za I-pojas
epitopa titin N2A i da pasivno istezanje dovodi do akumulacije CARP-a i DARP-a u .

Sve veći broj dokaza u srčanom mišiću ukazuje na proteinske strukture

unutar Z-diska i I-pojasa u mehanosenziranju koji kontroliše nizvodne
efekte, uključujući one koji regulišu ekspresiju gena i sintezu mišićnih
proteina .
Na primer, poput titina, mišićni LIM protein (MLP) lociran na Z-disku
interaguje sa raznim drugim proteinima i formira signalozom koji je
uključen u mehanotransdukciju i puteve hipertrofije
Uloga MLP-a u otkrivanju sile skeletnih mišića je uglavnom
neistražena, iako je pokazano da miševi kojima nedostaje MLP
pokazuju odloženu regeneraciju skeletnih mišića kao odgovor na
ekscentrične vežbe, povezane sa zaostajanjem u ekspresij MioD-a.
■ Ispitivanje signalnih puteva mehanotransdukcije zahteva nove tehnike se mehanički stimulansi
prenose u signalne puteve koji kontrolišu veličinu mišićnih vlakana ostaje nepotpuno shvaćeno.
■ Potreban je budući rad na obezbeđivanju detalja o mehanotransdukcionoj mreži, uključujući
potencijalnu mehaničku osetljivost MuSC i jezgara mišićnih vlakana, koji ostaju uglavnom
neistraženi.
■ Alati za bioinženjering, kao što je tehnologija mikrofabrikacije, mogu poslužiti kao korisni modeli
biofizičkih svojstava mišića za proučavanje mehanosignalizacije na MuSC
■ Jedna poteškoća je u tome što navodni mehanosenzorni elementi u mišićnim vlaknima takođe
igraju važnu strukturnu ulogu; genetski poremećajovi strukturni elementi rezultiraju bolestima, kao
što su mišićne distrofije, ograničavajući primenljivost pristupa gubitka funkcije za proučavanje
signalnih uloga strukturnih karakteristika.
■ Novi molekularni alati koji se ranije nisu koristili u mišićnoj biologiji mogu pomoći u rešavanju ovih
problema, kao što je primena lokalnog stresa na sarkolemu pomoću magnetnih perli ili precizna
mutageneza signalnih regiona strukturnih proteina uređena genomom.
Pojašnjenje definicije i složenosti hipertrofije skeletnih
mišića

Rast ćelija je mnogo komplikovaniji od ravnoteže između stopa sinteze

i degradacije ćelijskih sastojaka

. Višestruki aspekti rasta moraju se kontrolisati istovremeno ,

uključujući ne samo sintezu i akumulaciju različitih makromolekula i
proteina, već i njihovu preciznu lokalizaciju i organizaciju unutar ćelije.
Centralna oblast
za budući rad je Sadržaj tečnosti u ćeliji se mora istovremeno regulisati, što zahteva
proučavanje strogu kontrolu osmotskog pritiska.
načina na koji
se sastavlja U skeletnim mišićima situacija je još složenija je veličina vlakana se
rastući mišić. može povećati i radijalnim rastom i rastom elongacije, sa različitim
efektima na funkciju mišića.
■ Sarkomerni materijal se može dodati paralelno ili u seriji unutar
postojećih miofibrila ili se mogu sintetizovati potpuno nove
miofibrile (tj. miofibrilogeneza).
■ Povećanje ćelijske mase dodatno uključuje ekspanziju
nekontraktilnih ćelijskih sastojaka, kao što su sarkoplazmatski
retikulum, t-tubul, plazma membrana i sarkoplazma.
■ Određeni napredak je postignut u ovom pogledu, na primer
potencijalna uloga mišićnog agrina u regulaciji kostamernog
citoskeleta rastućeg mišićnog vlakna , zavisnoj od aktivnosti .
■ Važno je napomenuti da se tokom radijalnog rasta različite
ćelijske komponente ne povećavaju u direktnoj proporciji jedna
prema drugoj; površina se povećava direktno proporcionalno
poluprečniku, dok površina poprečnog preseka vlakna, a samim
tim i zapremina, raste kao kvadrat poluprečnika .
■ Rast ćelija uključuje složen i koordinisan proces sklapanja ;
izazov je odrediti koji signali regulišu koji aspekt i kako ti signali
međusobno deluju tokom rasta.
Zaključak
Kako skeletni mišići osećaju aktivnost da bi pokrenuli odgovore izazvane vežbanjem, uključujući rast, osnovno je
pitanje na koje ostaje slabo odgovoreno. Za to postoje možda četiri razloga.

Prvo, postoji nedostatak ubedljivog dokaza za koji „uzrok(i) kontrakcije“ (fluks kalcijuma, promena ATP-a, mehanički
stres) daju signal za rast i/ili druge adaptacije. Ovo je prvenstveno zbog poteškoća u pronalaženju sistema u kojima se
svaka komponenta aktivnosti može nezavisno kontrolisati.
Drugo, dok mišićna vlakna imaju više senzora za svaki 'uzrok kontrakcije', ostaje nejasno koji su od suštinskog
značaja za posredovanje u sistemu koji reguliše veličinu mišića.

Treće, iako postojije dokaz da višestruki intracelularni signalni putevi (npr. TORC1, MAPK, Smad2/3) mogu uticati na
rast mišića, nejasno je kako ovi putevi sarađuju u ukupnoj šemi kontrole veličine.

Na kraju, iako je po našem mišljenju verovatno da se sensing vrši unutar samih mišićnih vlakana, hipertrofični
odgovori uključuju regrutovanje jezgara iz MuSC (i, diskutabilno, gubitak jezgara iz vlakana tokom atrofije) i kako je to
usklađeno sa regulacijom veličine vlakana je nerešen.
■ Mehanički stimulansi su možda najbolji kandidati za okidače mišićne hipertrofije, iako
mehanizmi mehanosenziranja u mišićima tek počinju da se razjašnjavaju.
■ Verovatno je da mehanički signali ne funkcionišu izolovano i da su deo složenog
višestrukog signalnog sistema sa redundantnošću i preslušavanjem.
■ Kalcijumska signalizacija može delovati kao uzvodni regulator rasta mišića, radeći u
skladu sa mehaničkim signalima za pokretanje anabolizma kao odgovor na
preopterećenje mišića .
■ Povećana potrošnja energije aktivnih mišića, uključujući upotrebu ATP-a i akumulaciju
metabolita, može indirektno da olakša rast povećanjem neuromišićne aktivnosti, iako je
malodokaz o energetskoj potražnji kao direktnom pokretaču hipertrofije.
■ Vrlo je verovatno da hormonska ravnoteža celog tela ima osnovnu permisivnu ulogu u
kontroli veličine mišića, ali izgleda da je malo verovatno da će ciljati određene mišiće.
■ Mogućnost neelektrične nervne regulacije rasta ne može se u potpunosti isključiti,
iako je sigurno da električna aktivacija mišića igra fundamentalnu ulogu u mišićnoj
hipertrofiji. Izazov za naučnike budućnosti je da razjasne kako svaki od ovih
pokretača rasta reaguje kako bi kontrolisao sklapanje fascinantne i moćne
molekularne mašine koja je funkcionalno hipertrofirano mišićno vlakno.
■ Razumevanje mehanizama rasta mišića je kritično za razvoj terapijskih strategija za
sprečavanje slabljenja u gubitku mišića koji je povezan sa starenjem,
kardiovaskularnim bolestima, kaheksijom i drugim bolestima koje utiču na mišiće.