Professional Documents
Culture Documents
15047-Article Text-47183-2-10-20200418
15047-Article Text-47183-2-10-20200418
15047-Article Text-47183-2-10-20200418
ABSTRACT. Isolation and identification of secondary metabolite of ethyl acetate extract of jackfruit stem
(Artocarpus heterophyllus Lmk.) as well as its activity as antibacterial have been carried out. The purpose of this
study was to know the characterization and antibacterial activity of secondary metabolites from ethyl acetate
extract of the Jackfruit stem. Ethyl acetate extract was fractionated and purified using several chromatographic
techniques. The identification of the isolated compound was elucidated by spectroscopic UV-Vis, IR, and NMR.
Based on data analysis of UV, IR, and NMR spectra showed that the isolated compound was a flavonoid
derivative. Antibacterial activity test of the isolated compound to Escherichia coli and Staphylococcus aureus was
done by a well diffusion method. The inhibitory zone values of flavonoid compound in concentration series of
1000 µg/ml, 3000 µg/ml, and 5000 µg/ml against E. coli were 9.65 mm, 10.25 mm, and 11.00 mm, respectively.
While, the inhibitory zone values in the same concentration series against S. aureus were 9.00 mm, 10.75 mm,
and 11.38 mm.
Keywords: Jackfruit, Artocarpus heterophyllus Lmk., flavonoid, antibacterial activity.
ABSTRAK. Telah dilakukan isolasi dan identifikasi metabolit sekunder dari ekstrak etil asetat batang nangka
(Artocarpus heterophyllus Lmk.).serta aktivitasnya sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui
karakteristik dan aktivitas antibakteri metabolit sekunder ekstrak etil asetat batang nangka. Ekstrak etil asetat
batang nangka difraksinasi dan dimurnikan menggunakan berbagai teknik kromatografi. Identifikasi senyawa
isolasi dilakukan dengan teknik spektroskopi UV-Vis, FTIR, dan NMR. Berdasarkan analisis data spektrum UV,
IR dan NMR senyawa isolasi adalah turunan flavonoid. Uji antibakteri senyawa isolasi terhadap bakteri
Escherecia coli dan Staphylococcus aureus dilakukan mengunakan metode sumur difusi. Nilai zona hambat
senyawa turunan flavonoid pada seri konsentrasi 1000 µg/ml, 3000 µg/ml, dan 5000 µg/ml terhadap bakteri E.
coli yakni 9,65 mm, 10,25 mm, dan 11,00 mm, secara berturut-turut. Sedangkan zona hambat pada seri
konsentasi yang sama terhadap S. aureus yakni 9,00 mm, 10,75 mm, dan 11,38 mm.
Kata Kunci : Nangka, Artocarpus heterophyllus Lmk., flavonoid, aktivitas antibakteri.
famili Moraceae yang terdiri dari 50 spesies Bakteri Escherichia coli dan
dan tersebar dari Asia Selatan, Asia Tenggara Staphylococcus aureus merupakan bakteri
Australia Utara, dan Amerika Tengah E. coli dapat menginfeksi saluran kencing
(Kochummen 1987; Verheij & Coronel, 1992). (Jawetz et al., 2005), infeksi selaput pada otak
hutan tropis Indonesia (Heyne, 1987). buntu dan infeksi pada luka pasca operasi
tersebar di Asia Tenggara digunakan sebagai Bakteri lain yang dapat menyebabkan
obat tradisional (Perry, 1980; Heyne, 1987), infeksi adalah bakteri Staphylococcus aureus.
salah satu diantaranya adalah Artocarpus Jenis penyakit yang ditimbulkan oleh S.
A. heterophyllus atau yang dikenal darah manusia atau istilah medis yaitu
dengan nama lokal nangka telah dimanfaatkan bacteremia, penyakit endocarditis yaitu infeksi
sebagai obat diare, demam, perangsang pada bagian lapisan dalam jantung manusia
produksi air susu pada wanita dan hewan, (Lowy, 1998), infeksi pada paru-paru
antisifilis, obat cacing, penyembuhan abses, (pneumonia) (Kollef et al., 2005), serta dapat
anemia, asma, dermatitis, dan batuk (Balbach pada manusia ataupun hewan (Quinn, 2002).
golongan flavonoid, terpenoid, neolignan, 10000 ppm dengan nilai zona hambat 10,50
stilbenoid, dan arilbenzofuran (Hakim, 2010). mm untuk fraksi FA dan 7,25 mm untuk fraksi
ekstrak dari A. hetephyllus memiliki berbagai mg/ml dan 100 mg/ml ekstrak metanol, etanol,
(Ko et al., 1998 ) antiinflamasi (Wei et al., mampu menghambat bakteri E. coli
al., 2006), antidiabetes (Fernando et al., dan 15.3±1.52, secara berturut-turut (Madhavi
1991), antikariogenik (Sato et al.,1996), et al., 2013). Penelitian yang telah dilakukan
antifungi dan antibakteri (Khan et al., 2003). Loizzo et al. (2010) menunjukkan bahwa
merupakan spektrum yang paling luas dalam mampu menghambat E. coli dengan nilai MIC
(Minimum Inhibitor Concentration) 225.6±4.5 Merck 60 GF254 (ukuran silika > 200 mesh)
µg/mL dan diameter zona hambatnya 9.5±1 untuk KVC, silika gel Merck (35-70 Mesh)
mm, sedangkan nilai MIC untuk S. aureus untuk KKG dan plat KLT silika gel Merck
sebesar 221.9±2.8 µg/mL dan diameter zona kiesegal 60 F254 0,25 mm untuk KLT. Bahan
hambatnya 12±1 mm. Secara berturut-turut lain yang umum digunakan sebagai uji
nilai zona hambat fraksi etil asetat pada kulit aktivitas antibakteri seperti Nutrien Agar,
batang, empulur batang, kulit akar, empulur Lactose Broth, bakteri S.aureus, E.coli,
akar, buah, daun, dan biji A. heterophyllus DMSO, kloramfenikol, dan alkohol 70%.
pada konsentrasi 4 mg/disk terhadap S. Alat yang digunakan dalam penelitian ini
aureus, yaitu 20 mm, 10 mm, 16 mm, 18 mm, antara lain rotary vacum evaporator, neraca
18 mm, 12 mm, dan 16 mm serta untuk E. coli, analitik, satu set alat kromatografi vakum cair
yaitu 14 mm, 12 mm, 16 mm, 14 mm, 16 mm, (KVC), kromatografi kolom gravitasi, lampu
16 mm, dan 18 (Khan et al., 2003). UV, kuvet, serta alat-alat gelas yang umun
Sejauh ini uji aktivitas antibakteri digunakan dalam penelitian kimia organik.
terhadap tumbuhan A. heterophyllus hanya Untuk analisis senyawa hasil isolasi digunakan
pada ekstrak kasar ataupun fraksi saja, oleh instrumen UV-Vis, FTIR, dan NMR.
karena itu untuk lebih mengetahui bioaktivitas
Prosedur Penelitian
metabolit sekunder maka akan dilakukan
Ekstraksi dan isolasi
isolasi dan identifikasi senyawa metabolit
Ekstraksi sampel dilakukan dengan
sekunder ekstrak etil asetat batang nangka,
maserasi menggunakan pelarut metanol.
serta uji aktivitas antibakteri melalui tahapan
Serbuk batang nangka sebanyak 4 kg
ekstraksi, fraksinasi, dan pemurnian.
dimaserasi menggunakan metanol selama 3 x
Identifikasi senyawa akan dilakukan melalui
24 jam. Ekstrak metanol dipekatkan dengan
analisa hasil UV-Vis, FTIR, dan NMR.
rotary vacum evaporator. Ekstrak metanol
pekat dipartisi berturut-turut dengan n-heksan
METODE PENELITIAN
dan etilasetat. Ekstrak etilasetat yang
Bahan dan Peralatan diperoleh diuapkan pelarutnya sampai kering.
Bahan dasar yang digunakan dalam Ekstrak etil asetat sebanyak 40 g difraksinasi
penelitian ini yaitu batang nangka yang diambil menggunakan kolom kromatografi vakum cair
dari Perumahan Untad, Kelurahan Tondo, (KVC) dengan eluen (heksan : etil asetat)
Kecamatan Mantikulore, Palu, Sulawesi pada perbandingan 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8,
Tengah. Pelarut yang digunakan untuk 1:9, dan 100% etil asetat. Hasil fraksinasi
ekstraksi dan kromatografi berkualitas teknis dianalisis dengan Kromatografi Lapis Tipis
sedangkan untuk analisis spektrofotometer (KLT). Hasil analisis diperoleh 17 subfraksi
berkualitas pro-analisis (p.a). Bahan-bahan yang dibagi menjadi 2 fraksi utama yakni fraksi
yang digunakan antara lain metanol, n- A (0.038 g) dan fraksi B (9.3 g). Fraksi B
heksan, akuades, etil asetat (EtOAc), dilakukan fraksinasi dan diperoleh fraksi Ba
kloroform, kertas saring Whattman, silika gel (450 mg) dan Bb (71 mg). Fraksi Ba
Merck 60 (70-200 mesh) untuk kromatografi difraksinasi lebih lanjut menggunakan teknik
kolom gravitasi dan impregnasi, silika gel kromatografi kolom gravitasi dengn campuran
pelarut. eluen (heksan : aseton) pada Setelah itu, dibuat sumuran dengan
perbandingan 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, dan 100% diameter ±8 mm dengan menggunakan alat
aseton dan menghasilkan fraksi Ba1 (39 mg), pelubang media. Sampel senyawa, kontrol
Ba2 (80 mg) dan Ba3 (223 mg) . Fraksinasi positif kloramfenikol dan kontrol negatif
Ba2 secara berulang diperoleh senyawa DMSO dimasukkan dalam masing-masing
dengan noda tunggal, yang selanjutnya diuji lubang dalam cawan petri yaitu sebanyak
dengan dua sistem eluen yang berbeda yakni 50 µL dan diinkubasi selama 24 jam pada
o
campuran heksan-etil asetat (7:3) dan suhu 37 C, kemudian diamati untuk
campuran heksan : aseton (7,5:2,5). melihat zona hambatnya (Normayunita,
Senyawa yang diperoleh dilakukan 2015).
identifikasi menggunakan spektrofotometer
UV, IR, dan NMR. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian aktivitas antibakteri Senyawa isolasi yang diperoleh berupa
1. Persiapan bahan uji antibakteri padatan berwarna kuning pucat sebanyak 13
Nutrien agar (NA) dilarutkan sebanyak mg. Hasil uji KLT dengan 2 sistem eluen yang
5 gram dalam 250 ml akuades, kemudian berbeda yaitu (heksan : etil asetat) (7:3) (1)
disterilkan ke dalam autoklaf pada suhu dan (heksan : aseton) (7,5:2,5) (2)
o
121 C dengan tekanan 1 atm selama 15 memperlihatkan noda tunggal dengan nilai Rf
menit (Fitrial, 2009). masing-masing adalah 0,5 dan 0,3 (Gambar 1).
2. Pembuatan suspensi bakteri uji
Satu mata ose bakteri diambil dari
biakan agar miring dan diinokulasikan ke
dalam media cair steril Lactose Broth,
kemudian diinkubasi selama 18-24 jam
o
pada suhu 37 C.Kultur bakteri siap
digunakan untuk pengujian aktivitas
antibakteri (Fitrial, 2009).
3. Pengujian aktivitas antibakteri metode 1 2
difusi sumur Gambar 1. Kromatogram KLT senyawa hasil
Senyawa hasil isolasi yang berasal isolasi
dari tumbuhan nangka dilakukan
Senyawa Hasil Isolasi
pengujian aktivitas antibakteri menggunaka
metode difusi sumur. Sebanyak tiga variasi Hasil identifikasi senyawa dengan UV-Vis
konsentrasi yaitu 1000 µg/ml, 3000 µg/ml, Senyawa hasil isolasi diidentifikasi
dan 5000 µg/ml, sampel uji dalam pelarut menggunakan UV-Vis, untuk melihat adanya
cawan petri kemudian dimasukkan bakteri kisaran sinar dengan panjang gelombang 200-
media dan didiamkan hingga memadat. merupakan dasar dari analisis kuantitatif
karena setiap senyawa yang mengandung adanya transisi dari π π* dari ikatan
kromofor dan berwarna memiliki panjang rangkap C=C. Pola spektrum UV-Vis tersebut
gelombang maksimum yang spesifik (Ibrahim menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi
dan Marham, 2013). spesifik untuk pola kromofor senyawa flavon.
Spektrum UV senyawa hasil isolasi Pita I menunjukan adanya kromofor sinamoil
dalam pelarut metanol memberikan serapan (340-380 nm), dan pita II menunjukan adanya
maksimum pada pita I λmaks = 344 nm dan kromofor benzoil (250-280 nm) (Markham,
pada pita II λmaks = 288 nm yang menunjukkan 1998).
Hasil identifikasi senyawa dengan memberikan serapan lebar yang terjadi lebih
spektroskopi Inframerah ke kanan pada 3500 cm
-1 -1
hingga 3200 cm ,
Senyawa hasil isolasi menunjukkan kadang-kadang saling tumpang tindih dengan
beberapa gugus fungsi. Serapan lebar pada serapan rentangan C–H (Sastrohamidjojo,
-1
3402,43 cm menunjukkan adanya gugus 2013).
hidroksil (O–H) (Gambar 3). Alkohol dan fenol
1/cm
Hasil identifikasi senyawa dengan penguatan hasil analisis IR, agar dapat
spektroskopi NMR memastikan golongan dari senyawa hasil
13 1
Data C dan H NMR di bawah ini hanya isolasi.
dijelaskan secara parsial sebagai data
13
Gambar 4. Spektrum C-NMR senyawa isolat
13 1
Spektra C-NMR menunjukkan Spektra H-NMR memperlihatkan adanya
kedudukan pergeseran kimia 183,3316 sinyal yang berada pada pergeseran kimia (δ)
merupakan kedudukan yang khas sebagai 6-8 ppm, yang merupakan ciri khas
serapan karbonil (C=O) (Gambar 4). Hal ini pergeseran untuk senyawa-senyawa aromatik
sekaligus menguatkan bahwa serapan (Gambar 5). Berdasarkan data spektra UV-
-1
1620,21 cm pada data IR benar Vis, IR, dan NMR isolat batang nangka (A.
menunjukkan keberadaan gugus karbonil. heterophyllus Lmk) yang diperoleh merupakan
senyawa turunan flavonoid.
1
Gambar 5. Spektrum H-NMR senyawa isolat
Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi 1000 ppm dengan nilai zona hambat 9,65 mm,
Sumur serta terhadap S. aureus penghambatan
Hasil uji antivitas antibakteri senyawa tertinggi pada konsentrasi 5000 ppm dengan
isolat menunjukkan penghambatan pada nilai zona hambat 11,38 mm dan terendah
semua konsentrasi terhadap E. coli dan S. pada konsentrasi 1000 ppm dengan nilai zona
aureus, seperti yang terlihat pada tabel 1. hambat 9 mm. Hal ini membuktikan bahwa
Penghambatan tertinggi terhadap E. coli yaitu senyawa turunan flavonoid memiliki aktivitas
pada konsentrasi 5000 ppm dengan nilai zona antibakteri.
hambat 11 mm dan terendah pada konsentrasi
Tabel 1. Diameter zona hambat isolat, kontrol negatif dan kontrol positif pada E. coli dan S. aureus.
Zona hambat (E. coli) (mm) Zona hambat (S. aureus) (mm)
Konsentrasi
(µg/ml) Isolat Kontrol Kontrol Isolat Kontrol Kontrol
(AH2) (+)* (-)** (AH2) (+) (-)
1000 9,65 17,50 - 9,00 18,5 -
Balbach, A., Boarim, D.S.F. (1992). As Frutas Khan, M. R., Omoloso, A. D., and Kihara, M.
na Medicina Natural. Editora Missionaria, (2003). Antibacterial activity of Artocarpus
Sao Paulo. heterophyllus. Fitoterapia, 74(5): 501–
505.
Cushnie, T.P.T., and Lamb, A. J. (2005).
Detection of Galangin-Induced Ko, F. N., Cheng, Z. J., Lin, C. N., and Teng,
Cytoplasmic Membrane Damage in C. M. (1998). Scavenger and antioxidant
Staphylococcus aureus by Measuring properties of prenylflavones isolated from
Potassium Loss. Journal of Artocarpus heterophyllus. Free Radical
Ethnopharmacology,101(1-3): 243-245. Biology and Medicine, 25(2): 160–168.
Ibrahim, S. dan Marham, S. (2013). Teknik Perry, L. M. (1980). Medicinal plants of east
Laboatorium Kimia Organik. Garaha Ilmu, and south-east asia attributed properties
Yogyakarta. and uses. MIT-Pres, Cambridge.
Jawetz, E., Melnick, J. L., dan Adelberg, E. A. Quinn, J.P., Annie, W., Michael, L., Lee, D.
(2005). Mikrobilogi Kedokteran. Edisi (2002). Molecular correlation for the
XXII, 327-335, 362-363, Salemba medika, treatment outcomes in bloodstream
Jakarta. Infections caused by Escherichia coli
and Klebsiella pneumoniae with reduced
Kayser, F. H., Bienz, K. A., and Zinkernagel, susceptibility to ceftazidime. Clinical
R.M. (2005). Fungi as human pathogen. Infectious Diseases. 34(2): 135–146
Medical Microbiology. Thieme Sttugart,
New York. Sastrohamidjojo, Hardjono. (2013). Dasar-
dasar Spektroskopi. UGM Press,
Yogyakarta.