NA1; Característiques generals i classificació dels medis de

cultiu

NF3. MEDIS PER AL CULTIU

DE MICROORGANISMES
NF 3. MEDIS DE CULTIU. CLASSIFICACIÓ.

3. 1. INTRODUCCIÓ: cultiu i medi de cultiu

• Finalitats

3. 2. COMPOSICIÓ

3. 3. CLASSIFICACIÓ DELS MEDIS DE CULTIU

• Segons l’estat físic: sòlids, líquids i semisòlides
• Segons l’ús al laboratori

3. 4.CONDICIONS DELS MEDIS DE CULTIU

3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU

 3.1 INTRODUCCIÓ MEDIS DE CULTIU

 Condicions específiques per cada mo

 3.1 INTRODUCCIÓ
Terminologia

 CULTIU: manteniment de mo o cèl·lules

 MEDI DE DULTIU: medi pel desen de mo

 CULTIU PUR: Una sola espècie mo

 3.1 INTRODUCCIÓ
Finalitats
 Separació i aïllament

 Com a pas previ a la identificació

 Metabolisme

 Morfologia colònies

 Antibiogrames.

 CMI
 3.2 COMPOCICIÓ D’UN MEDI DE CULTIU

 Macroelements: C,H,O,N,P,S, K, Mg, Ca i Fe

 Micronutrients o oligoelements; Mn, Mo, Zn, Cu, Co,

Ni, V, B, Cl, Na i Si.
 3.2 COMPOCICIÓ D’UN MEDI DE CULTIU

 Font de C: energètic. etanol, àcid acètic, sucres.

Autòtrofs CO2

 Font de N: menys energètica. proteïnes, peptones o aas.

 Font de S: no energètic. SO4, tiosulfats i d’aa com

metionina.

 Font de P: no energètic. PO4

Energy of green bacteria https://phys.org/news/2011-08-bacteria-energy-
future-video.html/
 3.2 COMPOCICIÓ D’UN MEDI DE CULTIU
 Fluids corporals: Agar sang

 Factors de creixement:
vitamines i suplements

 Factors inhibidors: NaCl,

Azida sòdica...
 3.2 COMPOCICIÓ D’UN MEDI DE CULTIU
 Amortidors de pH: tampons per evitar variacions pH.

 Indicadors de pH: vira de color el medi. Roig fenol

 Agents reductors: microaeròfils o anaerobis. Cisteïna, tioglicolat,

flama consumeix l’O2, cambres d’anaerobiosi

 Agents selectius: cristall violeta, sals biliars, antibiòtics...

 Agents diferencials: cromogènics

3.2 COMPOCICIÓ D’UN MEDI DE CULTIU
 Agents gelificants:
 Agar-agar: gelificant, polisacàrids
d’algues. 45ºC

 Gel de sílice o silicagel: quan medi

àcid o sense components orgànics
 3.3 CLASSIFICACIÓ DELS MEDI DE CULTIU
Segons l’estat físic
 Sòlids: quan hi ha al medi
agents gelificants en suficient
proporció per que solidifiqui
el medi a Tª ambient. Quan hi
ha agar entre 12- 15g/L
 Líquids: aspecte caldós, no hi
ha cap agent gelificant
 Semisòlid: uns 3g/L d’agar li
dona consistència entre líquid
i sòlid
 3.3 CLASSIFICACIÓ DELS MEDI DE CULTIU
Segons l’ús al laboratori
 Medis generals: nutrients bàsics, creixen tots

 Medis enriquits: amb fluids corporals, pels delicats

 agar sang  Staphilococcus

 agar xocolata  Streptococcus

 Medis selectius: només alguns

 agar SS  Salmonella i Shigella

 agar Mc Conckey,  G-

 agar SPS  clostridis

 agar mannitol salat  Staphylococcus

 3.3 CLASSIFICACIÓ DELS MEDI DE CULTIU
Segons l’ús al laboratori
 Medis diferencials: molts amb indicadors de pH
 agar Hektoen, selectiu per Samonella i Sighela, i diferencial per indicadors
de la fermentació de la lactosa i producció d’àcid sulfhídric.

 Chapman o Mannitol salat, amb el roig de fenol canvi de color (de roig a
groc) per disminución pH al fermentar el mannitol. També selectiu per NaCl

 Medis de transport i manteniment: fins ser analitzades al laboratori

 MIF (Mertiolat/Iode/Formol) per femtes

 Formol per mostres biològiques.

 Medis de conservació: per mantenir la viabilitat de les línies cel·lulars

 3.4 CONDICIONS DELS MEDIS DE CULTIU
 Per tal que un microorganisme creixi en un medi de cultiu
és necessari:

 Una T òptima: variable segons spp.

 Grau d’humitat: alt en fongs

 pH: generalment òptim proper 7. En general cal tamponar (buffer)

per evitar grans variacions després de la degradació de nutrients

 Pressió osmòtica: generalment isotònia. Però alguns en grans

concentracions salines (halòfils)

 Oxigen:
 anaerobis estrictes només en atmosfera sense oxigen
 microaeròfils millor en tensió d'oxigen molt reduïda
 anaerobis facultatius capaç d'adaptar-se a qualsevol condició
3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 Segons la seva consistència:
 Medis sòlids (agar)
 Determinar ufc i morfologia colonial
 Obtenir massa bacteriana suficient
 Proves bioquímiques i de sensibilitat
 Medis líquids
 Recuperació de microorganismes presents en petites
quantitats (TSB)
 Proves bioquímiques i de sensibilitat
 Medis semisòlides (poc agar)
 Conservació de soques
 Proves d’identificació a curt termini

 Creixement amb i sense oxigen

3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 Segons la seva especificitat o ús:

 Medis nutritius:

 Simple: Creixement de la majoria dels

microorganismes no exigents (Mueller-Hinton, BHA,
TSA)

 Enriquits o suplementats: Microorganismes

nutricionalment exigents (AS, Axocolate). Poden
incorporar sang, sèrum, vitamines, aminoàcids...
3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU

 Medis selectius:

 Permeten el creixement d’un microorganisme o grup de mo i

inhibeix el creixement de la resta.

 La capacitat selectiva s’aconsegueix modificant

característiques:

 Físiques: Tª selectiva, fred (Listeria) o + calor

(Campylobacter)

 Químiques: pH selectiu (Sabouraud Glucosat Agar) o

condicions osmòtiques (ClNa, agar manitol salat)

 Substàncies inhibitòries: Cristall Violeta, Sals Biliars,

NaCl...
 Antibiòtics: sols permeten créixer als bacteris resistents
 3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU

 Medis diferencials:

 Permeten diferenciar entre diferents mo mitjançant

alguna prova bioquímica. Generalment també són
selectius
 Contenen un substrat metabòlic i un indicador de
pH. Si hi ha ús del substrat + canvi de pH: reacció
colorejada.
 Poden tenir substàncies que precipiten en
presència d’algun metabolit
 3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 Medis diferencials cromogènics:

 Contenen un substrat metabòlic unit a un element

químic incolor. Si es dissocia (ús del substrat) es
dona una reacció colorejada característica.
 Permeten seleccionar ràpidament
microorganismes d’interès
3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 3.5 PRINCIPALS MEDIS DE CULTIU
 Medis de manteniment de soques:

 Ntrients necessaris per mantenir vives les soques

durant molt de temps

 Tª baixa endarrereix creixement

 ACTIVITAT MEDIS DE CULTIU :

1. Busca en els armaris del laboratori un exemple de medi de cultiu; nutritiu

simple, nutritiu enriquit, selectiu, diferencial i diferencial cromogènic.

2. Anota els seus components i identifica quin d’ells li dona la font d’energia als
microorganismes, els requeriments no energètics, la consistència del medi, i sí és
el cas, les substàncies inhibitòries o antibiòtics

3. Recerca informació sobre els següents microorganismes per saber quin medi
empraries per fer créixer cadascun d’ells; Pseudomona, Escherichia coli, Proteus,
Salmonella, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Shigella, Enterococcus faecalis