Journal - Pone.0179245 (1) Aïllament de Bacteriòfags

Machine Translated by Google
Consulteu les discussions, les estadístiques i els perfils d'autor d'aquesta publicació a: https://www.researchgate.net/publication/318991691
Aïllament i avaluació in vitro de bacteriòfags contra aïllats de bacteris

MDR d'infeccions de ferides sèptiques
Article a PLoS ONE · Juliol de 2017
DOI: 10.1371/journal.pone.0179245
CITACIONS LECTURA
79 1.680
5 autors, entre ells:
Pallavali Roja Rani Dakshayani Lomada
Universitat Nacional de Transport de Corea Universitat Yogi Vemana
20 PUBLICACIONS 170 CITACIONS 45 PUBLICACIONS 416 CITACIONS
VEURE PERFIL VEURE PERFIL
Madhava C Reddy
Universitat Yogi Vemana
55 PUBLICACIONS 1.755 CITACIONS
VEURE PERFIL
Alguns dels autors d'aquesta publicació també estan treballant en aquests projectes relacionats:
Projecte d'aplicació de còctels de fags contra biofilms de doble espècie
teràpia amb fags per a bacteris MDR que causen ferides sèptiques. Veure projecte
Tot el contingut següent a aquesta pàgina ha estat carregat per Pallavali Roja Rani el 29 d'agost de 2017.
L'usuari ha sol·licitat la millora del fitxer descarregat.

ARTICLE DE RECERCA
Aïllament i avaluació in vitro de

bacteriòfags contra aïllats de bacteris MDR
d'infeccions de ferides sèptiques
Roja Rani Pallavali1 Vijaya
, Lakshmi Degati1 , Dakshayani Lomada2¤a , Madhava
C. Reddy3¤b , Vijaya Raghava Prasad Durbaka1 *
1 Departament de Microbiologia, Universitat Yogi Vemana, Kadapa, AP, Índia, 2 Departament de Genètica i
Genòmica, Universitat Yogi Vemana, Kadapa, AP, Índia, 3 Departament de Biotecnologia i Bioinformàtica,
a1111111111 Universitat Yogi Vemana, Kadapa, AP, Índia
a1111111111
¤a Adreça actual: Departament de Biotecnologia i Bioinformàtica, Universitat Yogi Vemana, Kadapa, Andhra Pradesh, Índia. ¤b Adreça actual:
a1111111111
Departament de Genètica i Genòmica, Universitat Yogi Vemana, Kadapa, Andhra Pradesh, Índia. * dvrp@yogivemanauniversity.ac.in
a1111111111
a1111111111
Resum
ACCÉS OBERT
La resistència a múltiples fàrmacs s'ha convertit en un problema important per al tractament de les
Citació: Pallavali RR, Degati VL, Lomada D, Reddy MC,
Durbaka VRP (2017) Aïllament i avaluació in vitro de

infeccions bacterianes patògenes. L'ús de bacteriòfags és un enfocament atractiu per superar el
bacteriòfags contra aïllats bacterians MDR d'infeccions de problema de la resistència als medicaments en diversos patògens que causen malalties mortals. El
ferides sèptiques.
nostre estudi tenia com a objectiu aïllar bacteris resistents a múltiples fàrmacs de pacients amb ferides
PLoS ONE 12(7): e0179245. https://doi.org/ 10.1371/
sèptiques i després aïllar i aplicar bacteriòfags in vitro com a agents terapèutics alternatius. Les mostres
journal.pone.0179245
de pus es van recollir de manera asèptica de l'Institut Rajiv Gandhi de Ciències Mèdiques (RIMS),
Editor: Gobardhan Das, Jawaharlal Nehru
Kadapa, AP, i les mostres es van analitzar mitjançant tinció de gram, avaluant les característiques
Universitat, INDIA
morfològiques i mètodes bioquímics. Les soques de bacteris MDR es van recollir mitjançant el mètode
Rebuda: 9 de desembre de 2016
de difusió de disc Kirby-Bauer contra diversos antibiòtics. Els bacteriòfags es van recollir i es van provar
Acceptat: 28 de maig de 2017
in vitro per a l'activitat lítica contra aïllats de bacteris MDR. L'anàlisi de les mostres d'hisop de pus va
Publicat: 18 de juliol de 2017 revelar que la majoria dels aïllats detectats tenien Pseudomonas aeruginosa com a bacteri predominant,
Copyright: © 2017 Pallavali et al. Aquest és un article

seguit de Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae i Escherichia coli. Els nostres resultats van
d'accés obert distribuït sota els termes de la llicència de suggerir que els bacteris gramnegatius eren més predominants que els bacteris grampositius a les
reconeixement de Creative Commons, que permet l'ús,
ferides sèptiques; la majoria d'aquests aïllats eren resistents a l'ampicil·lina, l'amoxicil·lina, la penicil·lina,
la distribució i la reproducció sense restriccions en
la vancomicina i la tetraciclina. Tots els aïllats grampositius (100%) eren resistents a múltiples fàrmacs,
qualsevol mitjà, sempre que s'acreditin l'autor i la font
originals. mentre que el 86% dels aïllats gramnegatius tenien una naturalesa resistent als fàrmacs. Altres
bacterifags aïllats de les aigües residuals van demostrar una activitat lítica perfecta contra els bacteris
Declaració de disponibilitat de dades: les dades a nivell
individual es proporcionen com a informació de suport. resistents a múltiples fàrmacs que causaven ferides sèptiques. L'anàlisi in vitro dels bacteriòfags aïllats
Les dades de seqüenciació es troben dins de va demostrar una lisi perfecta contra els bacteris MDR corresponents, i aquests fags aïllats poden ser
GenBank amb el número d'accés KY018605.
prometedors com a primera opció per a la profilaxi contra la sèpsia de ferides. A més, la teràpia amb
Finançament: l'autor (PRR) agraeix a UGC fags no millora la resistència a múltiples fàrmacs en bacteris i podria funcionar simultàniament en una
el suport financer en forma de JRF i SRF. Els
gran varietat de bacteris MDR quan s'utilitza en un còctel de bacteriòfags. Per tant, els nostres resultats
finançadors no van tenir cap paper en el disseny de
l'estudi, la recollida i l'anàlisi de dades, la decisió de publicar

suggereixen que aquests bacteriòfags podrien ser opcions terapèutiques potencials per tractar ferides
o la preparació del manuscrit. sèptiques causades per P. aeruginosa, S. aureus, K. pneumoniae i E. coli.
Interessos en competència: els autors han declarat que

no existeixen interessos en competència.
PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 1/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques
Introducció
La pell és l'òrgan sensorial més gran i proporciona immunitat innata i protegeix els teixits subjacents del cos humà. La funció
més important de la pell és proporcionar protecció contra els microbis patògens, que envaeixen la pell, i controlar la
colonització bacteriana.
[1]. La pèrdua de la integritat de la pell per qualsevol lesió mecànica exposa els teixits subcutani a la
medi ambient, que condueix a la colonització i proliferació microbiana [2]. La interrupció mecànica de la pell provoca una
ferida i és la principal causa de l'establiment d'infeccions.
per microorganismes que van des de bacteris i fongs fins a paràsits i virus [3]. Les infeccions sèptiques són causades
sobretot per bacteris; trenquen la barrera de protecció [4,5] i poden establir-se
infeccions profundes.
Una ferida sèptica és un tipus d'infecció que pot tenir un impacte antagònic en l'ésser humà
cos, qualitat de vida i sobre la taxa de cicatrització de la ferida. S'informa d'infeccions de ferides a
un terç de les infeccions adquirides hospitalàries entre els pacients quirúrgics i representen entre el 70 i el 80%.
mortalitat. Les infeccions de les ferides són factors primaris en el desenvolupament de la morbiditat i la mortalitat dels pacients,
especialment als països en desenvolupament, independentment de la naturalesa de la ferida.
[6,7]. Les ferides solen proporcionar condicions adequades de calor, humitat i nutrició per afavorir el creixement i la proliferació
de microorganismes [8].
Les infeccions bacterianes en pacients amb ferides són freqüents i difícils de controlar, sobretot
l'entorn hospitalari. Les ferides sèptiques, que alberguen múltiples bacteris patògens, són comunes i provoquen sèpsia [9,10].
El diagnòstic de les infeccions de la ferida és un problema greu que requereix un temps excessivament llarg, normalment
requereix equips de diagnòstic sofisticats o
professionals qualificats [9,11].
Hi ha diferents tipus d'infeccions de ferides, com les infeccions de ferides quirúrgiques, agudes toves
infeccions de teixits, infeccions de ferides per mossegada, infeccions de ferides per cremades i infeccions de ferides
piògenes. És possible que les ferides no desapareguin fàcilment i es poden estendre a causa dels hàbits humans. Ells són
també s'agreuja en pacients amb trastorns com la diabetis, l'obesitat i les malalties cardiovasculars.
Les ferides infeccioses són crítiques, doloroses, oloroses i hipersensibles i provoquen molèsties i
molèsties per als pacients. Diversos estudis realitzats recentment ho van revelar per a la sèptica
ferides, els aïllats més comuns són S. aureus, P. aeruginosa, E. coli, Klebsiella spp. i Aci netobacter spp. [12]. El control de
les infeccions de ferides s'ha tornat difícil a causa de la resistència bacteriana àmpliament estesa als antibiòtics i la major
incidència d'infeccions causades per la flora polimicrobiana [13].
Actualment, una sèrie d'antibiòtics que s'utilitzen actualment s'estan tornant ineficaços per controlar la bac
patògens terials perquè molts bacteris han aconseguit resistència a múltiples fàrmacs. L'ús indiscriminat i generalitzat
d'antibiòtics ha causat resistència als medicaments en bacteris a causa de la
sobre administració, automedicació, prescripció aleatòria de fàrmacs inadequats i prolongats
ús d'antibiòtics [14]. A més, la transferència de gens de resistència als antibiòtics per conjugació condueix a
evolució de microbis resistents [15,16]. Els antibiòtics són fàrmacs meravellosos; tanmateix, a causa de
Emergència de bacteris MDR, és imprescindible desenvolupar mètodes alternatius per tractar els patògens bacterians MDR
[17]. Els "superbacters" resistents als antibiòtics s'han convertit en un dels més importants del món
importants problemes de salut pública. Moltes malalties s'estan tornant cada cop més resistents als antibiòtics d'ús habitual
a causa del nombre elevat de "superbacteris" resistents als antibiòtics. En
Europa, els microorganismes resistents als medicaments causen 25.000 morts a l'any, i als Estats Units,
23.000 morts a l'any estan relacionades amb infeccions bacterianes MDR. Els informes de l'OMS ho demostren
S'ha trobat resistència als medicaments en bacteris a totes les regions del món, que representen aproximadament el 50%
de les infeccions per E. coli, K. pneumoniae, S. aureus i P. aeruginosa que eren resistents.
als antibiòtics més potents, com la cefalosporina, que és un fàrmac de tercera generació que provoca
una alta taxa de mortalitat amb aquests aïllats bacterians resistents als fàrmacs. Davant d'això, l'OMS

el comitè assessor va defensar un nou mètode d'intervenció terapèutica en lloc del tractament antibiòtic. A més,
metges i científics que treballen en aquesta àrea ho han demostrat
interès renovat en la teràpia de fags contra els bacteris MDR [18].
S'han iniciat diversos estudis per estandarditzar les alternatives als antibiòtics que s'utilitzen
nous mecanismes d'acció per aconseguir l'activitat antibacteriana. Aquests enfocaments inclouen la teràpia
bacteriòfag, la teràpia de quelació del ferro, pèptids antimicrobians, vacunació profilàctica, teràpia fotodinàmica i
teràpies basades en òxid nítric (NO) per a la contenció de patògens.
bacteris. Tanmateix, abans d'aplicar clínicament aquestes pràctiques, calen una sèrie d'estandarditzacions
rutinàries, i encara hi ha limitacions que cal abordar en cadascun dels mètodes esmentats.
Un problema crucial amb l'ús d'antibiòtics és l'aparició de bacteris resistents, així que cur
Actualment, se centra molta atenció en l'aplicació dels bacteriòfags com a agents terapèutics
[19]. Curiosament, la teràpia amb bacteriòfags es practicava àmpliament al món oriental abans
descobriment d'antibiòtics, però mai es va establir del tot al món occidental. L'èxit de
La teràpia amb fags depèn d'identificar estratègies per curar les infeccions i reduir-ne l'aparició
de bacteris resistents als fags [20, 21].
Les aigües residuals i els residus hospitalaris són fonts preparades de bacteriòfags; a més, purificació de fags
Els costos de producció i producció són molt més econòmics que els dels antibiòtics. Els bacteriòfags són
virus que infecten bacteris, i són paràsits intracel·lulars obligats que es repliquen dins del
host utilitzant la maquinària enzimàtica de l'hoste. Els bacteriòfags mostren una especificitat extrema de l'hoste,
infectant soques particulars fins i tot entre espècies bacterianes individuals, encara que alguns bacteriòfags
pot infectar diverses espècies [22]. Diversos estudis in vitro han demostrat que els bacteriòfags
tenen el potencial de lisar els patògens bacterians dirigits [23].
El present treball es va dur a terme per investigar la possibilitat d'utilitzar un fag lític
tractar els bacteris MDR que infecten ferides sèptiques. L'estudi va ser dissenyat per determinar la prevalença
de bacteris MDR en aïllats de ferides sèptiques, per aïllar i avaluar l'eficàcia in vitro dels bacteriòfags contra
aïllats de bacteris MDR i per establir una estratègia alternativa.
als antibiòtics per controlar les infeccions de ferides que causen bacteris resistents a múltiples fàrmacs a l'hospital
medi ambient.
Materials i mètodes
Recollida de mostres
Es van recollir un total de 130 mostres de ferides sèptiques de l'Institut Rajiv Gandhi de Ciències Mèdiques
(RIMS), Kadapa, Andhra Pradesh, Índia, i en una hora, les mostres recollides
van ser transportats de manera asèptica. Les mostres es van separar en funció del tipus de malaltia. Les mostres
eren de 49 ferides diabétiques, 69 postoperatòries i 12 cremades. EMB agar era
comprat a Qualigens, Bombai, Índia. Filtres accionats per xeringa (0,45 ÿM), Luria-Bertani
brou i agar, i els antibiòtics amoxicil·lina, ampicil·lina, benzil penicil·lina, estreptomicina, racilina tet, tobramicina,
vancomicina, kanamicina, ciprofloxacina, cefotaxima i gentamicina
es van obtenir de Hi-Media Laboratories, Bombai, Índia.
Cultura i identificació
Les mostres recollides es van inocular en medis selectius (agar sal manitol, agar MacConkey,
agar EMB, agar sang i agar Cetrimide), i després del període d'incubació adequat, el
es van analitzar les característiques morfològiques, fisiològiques i bioquímiques dels cultius. Les proves
bioquímiques van incloure activitat de catalasa, prova d'oxidasa, prova IMVIC, fermentació de carbohidrats
prova, prova de fermentació del manitol, reducció de nitrats, producció d'ureasa i prova de coagulasa.

Prova de susceptibilitat als antibiòtics (AST)

Els aïllats bacterians predominants de pacients amb ferides sèptiques es van provar per als patrons de
susceptibilitat als antibiòtics amb 11 antibiòtics diferents pertanyents a sis classes. Els antibiòtics emprats
per a l'estudi van ser benzil penicil·lina, amoxicil·lina, ampicil·lina, kanamicina, tobramicina, gentamicina
estreptomicina, cefotaxima, vancomicina, tetraciclina i ciprofloxacina. Els patrons de susceptibilitat
antimicrobial es van detectar amb el protocol estàndard [24] Mètode de difusió de disc Kirby-Bauer en agar
Mueller-Hinton. Després del període d'incubació, els diàmetres de la zona d'inhibició al voltant dels discos
es van mesurar mitjançant una regla i després es van classificar com a sensibles, intermedis o resistents,
segons la taula estandarditzada proporcionada per les directrius CLSI [25].
Aïllament dels bacteriòfags Per aïllar
els bacteriòfags lítics contra els bacteris MDR predominants (MDR S. aureus, P. aer uginosa, K. pneumoniae
i E. coli), es van seleccionar colònies i es van recollir de les colònies a partir de nutrients i plaques d'agar
de medi selectiu per a estudi posterior (Fig S1). Els bacteriòfags contra aquestes soques MDR es van
recollir d'aigües residuals crues i estancades de la planta de clavegueram municipal de RIMS mitjançant el
mètode de Smith i Huggins [26]. Aleshores, es va utilitzar el mètode Cerveny per enriquir els bacteriòfags
[27] amb petites modificacions. Les mostres d'aigües residuals recollides es van centrifugar a 5000 g durant
10 minuts, i després es va recollir el sobrenedant i es va filtrar a través de filtres de xeringa de 0, 45 ÿM (Hi-
Media, Mumbai). Després d'això, es van afegir aproximadament 0,5 ml de cloroform a 50 ml del filtrat i
després es van incubar durant 20 minuts [28, 29], i després, 5 ml dels cultius bacterians corresponents (en
la fase inicial de registre, OD a 0,4-0,7) i es van afegir 20 ml de brou 2X LB i després es van incubar durant
la nit a 37 °C. Després de 24 h, els cultius de brou que demostraven una lisi visible es van granular per
centrifugació a 4 °C a 8000 g durant 20 min i es van filtrar a través de filtres de xeringa de 0, 45 ÿM. El
cloroform no afecta l'activitat dels bacteriòfags; a més, mata els bacteris presents als filtrats del fag [28,29].
Les restes de cèl·lules bacterianes es van eliminar per filtració i els filtrats obtinguts es van provar per als
fags lítics mitjançant el mètode d'agar de doble capa d'Adam amb petites modificacions (5% de glicerol) [30]
i assajos puntuals [31]. Els títols de cada fag, aïllats contra els bacteris MDR de les ferides sèptiques, es van
expressar en unitats formadores de placa (PFU-1) i es va avaluar l'eficàcia antibacteriana dels fags aïllats
mitjançant un assaig puntual i pel mètode d'agar de doble capa, com descrit per Sambrook [32].
Mètode d'agar de doble capa Es van
barrejar i incubar 200 ÿL de cultiu bacterian (en fase logarítmica 109 CFU-1) i 100 ÿL de filtrats de fags
purificats (109 PFU-1) i es van incubar durant 5 min per a una correcta adsorció. Més tard, aquests filtrats
de bacteris-fags es van col·locar en un tub estèril barrejat amb 5 ml d'agar tou (0, 7% d'agar) i es van abocar
a l'agar inferior i després es van girar per produir una capa superior uniforme. Les plaques es van incubar a
37 °C durant 24 h per a la formació de plaques. Després de la incubació, la formació de zones netejades
(plaques) va suggerir la presència de fags lítics. Les plaques es van recollir i es van tornar a suspendre en
tampó de sal de magnesi (SM) (Nacl 100 mM, MgSO4 8 mM, Tris-Cl 50 mM (pH 7, 5) i gelatina al 0, 01%) i
després, aquests lisats de fags es van utilitzar per provar el eficàcia lítica dels bacteriòfags in vitro.
Assaig puntual. L'assaig puntual es va utilitzar per examinar la capacitat bactericida dels fags aïllats
[31]. Els aïllats bacterians de ferides sèptiques es van cultivar en brou LB. Després que els cultius arribessin
a la fase de registre primerenca (OD a 600 nm, 0,5–0,7), es van barrejar 200 ÿL de bacteris amb 5 ml d'agar
tou i es van abocar a l'agar inferior per solidificar-se. A continuació, es van recollir 10 ÿL de filtrat de fags i

tacat a l'agar tou amb un títol de 109 PFU-1 en agar LB. Les plaques es van deixar assecar i es van
examinar per detectar zones de lisi o formació de plaques després d'una nit d'incubació a 37 °C.
Teràpia de fags in vitro

Es va seleccionar una placa ben formada que contenia bacteriòfags de cada placa d'agar per a l'assaig
in vitro. Les plaques de les plaques d'agar es van diluir en tampó SM i després es va afegir cloroform
(1%) per eliminar els bacteris. Els lisats de fags es van centrifugar i el sobrenedant es va utilitzar per
provar l'activitat lítica contra soques de bacteris MDR de ferides sèptiques. Les soques MDR de P.
aeruginosa, S. aureus, K. pneumoniae i E. coli (1 mL) es van inocular per separat en dos flascons amb
150 mL de medi LB. Per avaluar l'eficàcia lítica in vitro dels bacteriòfags, es van transferir 500 ÿL de filtrats
de fags de multiplicitat d'infeccions (moi) 1 i 10 a matràs de prova que contenien 150 ml de brou LB amb
bacteris MDR. Paral·lelament, es van establir controls amb matràs que contenien només els respectius
bacteris MDR. Els matràs de prova i control es van incubar en una incubadora agitada a 37 °C a 120 g
durant 24 h. Els valors OD 600 es van registrar després de cada 2 h durant un període de temps de 24 h
mitjançant un espectrofotòmetre UV, i es van comparar els valors obtinguts a moi (multiplicitat d'infecció) 1
i 10 amb els controls. Es van mantenir duplicats per a cada conjunt per analitzar els resultats.
Anàlisi estadística. Es van analitzar les diferències de sexe, el nombre de pacients infectats i no
infectats, els grups d'edat i el nombre de pacients infectats i no infectats, i els tipus de ferides amb aïllats
bacterians gram positius i gramnegatius mitjançant proves de Chi quadrat. Es va considerar
estadísticament significativa una diferència amb P<0,05.
Ètica
Aquest estudi experimental va ser aprovat pel Comitè d'Ètica Institucional per a la Investigació
Humana (IECHR) i tots els procediments es van dur a terme d'acord amb la "Guia per a la cura i l'ús del
laboratori".
Resultats
D'un conjunt de 130 mostres recollides i provades, 102 (78,4%) mostres d'hisop van mostrar un creixement
microbial i no es va notar cap creixement adequat a les 28 mostres restants (21,5%).
Quaranta-nou (37,6%) mostres examinades es van obtenir de subjectes que patien ferides diabètics,
mentre que 12 (9,2%) de les mostres eren de pacients cremats i 69 mostres (53%) eren de ferides
postoperatòries. Els percentatges de mostres recollides a l'hospital seleccionat per a l'estudi van indicar
que hi havia significativament més pacients amb ferides postoperatòries que pacients amb diabètics o
ferides per cremades. El resultat de l'estudi va indicar clarament que el nombre d'infeccions en homes
(69%) era més gran que en dones (31%). Aquestes troballes es van registrar per al grup d'edat format per
subjectes d'entre 8 i 80 anys. La infecció de la ferida és freqüent en pacients grans [33].
Perfil bacterià Entre
130 hisops, 102 (78,4%) eren positius per a patògens bacterians, mentre que 28 (21,5%) eren
bacteriològicament estèrils. Amb més freqüència, només es va aïllar una sola espècie de cada mostra,
representant 95 mostres (93,1%), mentre que més d'una espècie es va aïllar de 7 (6,8%) del total de
mostres positives. Es van obtenir un total de 115 aïllats bacterians, 70 (60,8%) dels quals eren
gramnegatius, mentre que 45 (39,1%) eren grampositius. Pseudomonas aeruginosa va ser el bacteri més
predominant aïllat en 26 (22,6%) mostres, seguit de Staphylococcus aureus en 22 (19,1%), Klebsiella
pneumoniae en 20 (17,3%), Escherichia coli (E. coli) en 19 (16,5%),

Fig 1. Aïllats bacterians predominants de pacients amb ferides sèptiques.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245.g001
Streptococcus pyogenes en 9 (7,8%), Staphylococcus spp. coagulasa negatiu. 8 (6,9%), Enterococcus

spp. 6 (5,2%), Enterobacter spp. 3 (2,6%) i Proteus spp. 2 (1,7%) (Fig 1).
Els resultats indiquen que no hi havia cap associació significativa entre el sexe i la infecció
taxa (P = 0,5447) a P > 0,05 (Taula 1). Hi va haver una major incidència d'infecció de ferides a
el grup d'edat de 60 anys i més, de manera que hi ha una associació significativa entre l'edat i la
incidència d'infecció de la ferida (P = 0,0485) a P <0,05 (Taula 2), i no hi ha significació estadística
entre el tipus de ferida i la tipus de microorganismes aïllats (P = 0,3072) a
P > 0,05 (taula 3).
Patró de susceptibilitat als antibiòtics dels aïllats bacterians

Els cultius bacterians trobats amb més freqüència es van provar amb els 11 fàrmacs antibiòtics
seleccionats pertanyents a sis classes diferents d'antibiòtics basats en l'espectre bacterià.
Taula 1. Distribució per sexe dels aïllats bacterians de les ferides sèptiques.
Sexe Nombre d'infectats Un-Infected No. (%) 17 Núm. total (%) Prova de chi quadrat Vàlvula P
Mascle (%) 73 (18.8%) 11 90 (69,2%)
Dona (81,1%) 29 (27.5%) 28 40 (30,7%) 1.505 P = 0,82
Total (72,5%) 102 (78,4%) (21.5%) 130 (100%)
El valor P es va calcular mitjançant el programari Graph Pad Prism.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245.t001

Taula 2. Distribució per edat dels pacients amb creixement bacterià significatiu.
Grup d'edat Nombre d'infectats Un-Infected No. (%) 0 Núm. total (%) Vàlvula P
0–10 (%) 3 (100%) 8 (0%) 3 (27.2%) 3 (2,3%)
11–20 (72,7%) 7 6 (46.1%) 7 11 (8,4%)
21–30 (53,8%) 12 (36.8%) 10 (40%) 13 (10%)
31–40 (63,1%) 15 (60%) 2 (7.6%) 0 (0%) 19 (14,6%) P = 0,0485
41–50 24 (92,3%) 33 28 (21.5%) 25 (19,2%)
51–60 (100%) 102 26 (20%)
61 i superior (78,4%) 33 (25,3%)
Total 130 (100%)
via d'administració i tipus d'activitat per aïllar soques resistents a múltiples fàrmacs entre els
conjunt de mostres. Els fàrmacs provats tant per a bacteris gramnegatius com grampositius eren gen tamicina (10 ÿg),
estreptomicina (20 ÿg), tetraciclina (20 ÿg), vancomicina (20 ÿg), kanamicina.
(20 ÿg), benzil penicil·lina (30 ÿg), ampicil·lina (40 ÿg), amoxicil·lina (30 ÿg), cefotaxima (30 ÿg),
ciprofloxacina (10 ÿg) i tobramicina (20 ÿg). Aquests antimicrobians es van seleccionar en funció del
disponibilitat i freqüència de prescripció d'aquests fàrmacs a l'àrea d'estudi.
Els resultats es van obtenir, tal com es mostra a la Taula 4, i vam observar que els organismes var
degut a la seva susceptibilitat a tots els fàrmacs antimicrobians utilitzats. La majoria demostrada múltiple
la capacitat de resistència (resistència a dues o més classes d'antimicrobians) (Fig 2) i els patrons de resistència
als antibiòtics dels aïllats cap als antibiòtics es mostren a la figura 2.
Resistència als antibiòtics a benzil penicil·lina (91,9%), amoxicil·lina (90,8%) i ampicil·lina (85%)
es va observar. Gairebé tots els aïllats bacterians eren 100% sensibles a gentamicina i ciprofloxacina quan s'utilitzaven
sols, i eren menys resistents a cefotaxima (9,1%), vancomicina.
(6,8%), tetraciclina (6,8%), kanamicina (4,5%) estreptomicina (3,4%) i tobramicina (1,1%)
(Taula 4). La resistència als medicaments i el patró de sensibilitat dels aïllats van ser determinats per la
Mètode de difusió del disc Kirby-Bauer mitjançant les directrius CLSI 2014. Resistent a múltiples fàrmacs
la naturalesa es va trobar en 80 (91,9%) dels aïllats. Les dades de la taula 4 ho demostren clarament
El 86,1% dels aïllats bacterians gramnegatius van mostrar resistència a múltiples fàrmacs a almenys 5-8 antibiòtics
diferents. A més, el 100% dels aïllats de S. aureus eren resistents a tres antibiòtics
que es van utilitzar per a la prova de susceptibilitat als antibiòtics.
Aïllament de bacteriòfags i eficàcia lítica en condicions in vitro

L'especificitat mostrada pels fags aïllats contra cadascun dels bacteris MDR inclosos en aquest
L' estudi es va provar mitjançant la formació de placa a la placa d'agar de doble capa (Fig 3) El fag aïllat
Taula 3. Tipus de ferida amb tipus bacterià significatiu.
Tipus de ferida Bacteris gram positius Bacteris gram negatius Total Valor P
No % No % No %
Ferides diabètics N = 49 10 28,5% 25 71,4% 35 30,4%
Ferides per cremades N = 12 6 42,8% 8 57,1% 14 12,1% P = 0,3072
Ferides postoperatòries N = 69 29 43,9% 37 56% 66 57,3%

Total 45 100% 70 100% 115 100%

Taula 4. Patró de susceptibilitat als antibiòtics dels aïllats bacterians predominants de les ferides sèptiques a RIMS, Kadapa.
Aïllats bacterians Patró R/S Antibiòtics

BP AM AP KM TM SM GM T VM CF CT
s.aureus S 19 21 22 22 22 20 (90,9%) 22 20
0 (0,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) (86,3%) (95,4%) (100%) (100%) (100%) (100%) (90,9%)
N = 22 R 22 22 22
(100%) (100%) (100%) 3 (13,6%) 1 (4,7%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 2 (9,0%) 0 (0,0%) 2 (9,0%)
P.aeruginosa S 23 26 26 26 23 23 26 16
2 (7,6%) 3 (11,5%) 5 (19,3%) (88,4%) (100%) (100%) (100%) (88,4%) (88,4%) (100%) (61,5%)
N = 26 R 24 23 21 10
(92,3%) (88,4%) (80,7%) 3 (11,3%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 3 (11,3%) 3 (11,3%) 0 (0,0%) (38,5%)
K.pneumoniae S 18 20 20 20 20 19 20 16
3 (15%) 3 (15%) 5 (25%) (90%) (100%) (100%) (100%) (100%) (95%) (100%) (80%)
N = 20 R 17 17 15
(85%) (85%) (75%) 2 (10,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 1 (5%) 0 (0,0%) 4 (20%)
E.coli S 19 19 19 19 19 19
2 (10,5%) 2 (10,5%) 3 (15,7%) (100%) (100%) 11 (57,8%) (100%) 8 (42,1%) (100%) (100%) (100%)
N = 19 R 17 17 16
(89,4%) (89,4%) (84,2%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 8 (42,1%) 0 (0,0%) 11 (57,8%) 0 (0,0%) 0 (0,0%) 0 (0,0%)
Total S 13 83 86 84 87 81 81 (93,1%) 87 79
7 (8,1%) 8 (9,1%) (15%) (95,4%) (98,8%) (96,5%) (100%) (93,1%) (100%) (90,8%)
N = 87 R 80 79 74
(91,9%) (90,8%) (85%) 4 (4,5%) 1 (1,1%) 3 (3,4%) 0 (0,0%) 6 (6,8%) 6 (6,8%) 0 (0,0%) 8 (9,1%)
S-sensible, resistent a R, BP-benzil penicil·lina, AM-ammoxil·lina, AP-ampicil·lina, KM-kanamicina, TM-tobramicina, GM-gentamicina, SM-estreptomicina, CT cefotaxima, VM-vancomicina,
T-tetraciclina, CF- ciprofloxacina.
específic per a E. coli (EC DP3) va formar múltiples plaques allargades petites i irregulars
(Fig 3A); el fag PA DP4 va formar nombroses plaques petites i circulars a la placa DLA (Fig
3B); el fag específic per a K. pneumoniae (KP DP1) va demostrar mides de placa que van de
petites a grans amb formes circulars (Fig 3C); i el fag S. aureus, és a dir, SA DP1, van formar
plaques grans aïllades ben delimitades a la placa d'agar superior (Fig 3D). Els títols dels fags eren
Fig 2. Percentatge de resistència a múltiples fàrmacs contra diversos antibiòtics en bacteris que causen ferides
sèptiques.

Fig 3. Formació de plaques de fags lítics en plaques d'agar de doble capa. Assaig de plaques de fags lítics en una
gespa d'aïllats de bacteris MDR. A. Assaig de placa del fag MDR-SA1 a la gespa de MDR-S. aureus. B.
Assaig de placa del fag MDR-PA4 a la gespa de MDR-P. aeruginosa. C. Assaig de placa del fag MDR-KP1 a la gespa de
MDR-K. Pneumòniae. D. Assaig de placa del fag MDR-EC3 a la gespa de MDR-E. Coli.
determinat mitjançant dilucions logarítmiques del lisat de fags purificat. Aquests fags es van anomenar
PA DP4 (P. aeruginosa), KP DP1 (K. pneumoniae), SA DP1 (S. aureus) i EC DP3 (E. coli), corresponents
a l'hoste, i els títols eren de 3,72 x106 PFU- 1, 1,82 x 106 PFU-1, 2,6 x 10ÿ7 PFU-1 i 4,2 x107 PFU-1,
respectivament.
Es va utilitzar el mètode d'assaig puntual per caracteritzar encara més l'especificitat de l'hoste.
SA DP1 va formar taques irregulars i denses (Fig 4A). El fag PA DP4 va formar taques més grans i
tenia una àrea central a les zones lisades amb gespa bacteriana densa amb vores clares (figura 4B),
mentre que el fag E. coli va formar zones grans i clares juntament amb petites plaques escampades per
la placa d'agar superior (Fig. 4C). En el cas del fag KP DP1, es van observar zones d'inhibició esborrades
amb un nombre limitat de plaques petites a la placa d'agar (Fig 4D) .
Els fags aïllats es van provar més amb aïllats de bacteris MDR de ferides sèptiques mitjançant un
assaig de reducció bacteriana en medi líquid per determinar la funció lítica. La lisi in vitro de bacteris
MDR pels bacteriòfags corresponents es va controlar durant 24 h durant la incubació a 37 °C a 120 xg
en un agitador orbital. L'assaig de reduccions bacterianes per fags es va comparar amb els controls
corresponents. Les infeccions per fags van produir una disminució dràstica dels valors de densitat
òptica bacteriana MDR a moi 1 i 10 en comparació amb els controls corresponents (Fig 5). Els fags
van demostrar una activitat lítica màxima entre 12 i 14 h després de la incubació. KP DP1 (Fig 5A) va
demostrar l'absorbància mínima a les 14 h, és a dir, 0, 05 i 0, 08 a moi 10 i moi 1, respectivament,
mentre que el matràs de control va mostrar una absorbància de 0, 64, cosa que indica una cinètica
normal de creixement bacterià. En el cas del fag SA DP1 (Fig 5B), la DO mínima a les 12 h d'incubació
a moi 10 va ser de 0, 05 i 0, 09 a moi 1, mentre que el matràs de control va demostrar una absorbància
de 0, 51. El fag EC DP3 (Fig 5C) va demostrar una DO mínima a les 14 h i després una DO de 0, 03 i
0, 08 a moi 10 i 1, respectivament, mentre que el control va demostrar un
Fig 4. Assaig puntual de fags lítics sobre els bacteris MDR de ferides sèptiques. Assaig puntual de fags lítics a la
gespa d'aïllats de bacteris MDR. A. Assaig puntual del fag MDR-SA1 a la gespa de S. aureus resistent a múltiples fàrmacs.
B. Assaig puntual del fag MDR-PA4 a la gespa de P. aeruginosa resistent a múltiples fàrmacs. C.
Assaig puntual del fag MDR-KP1 a la gespa de K. pneumoniae resistent a múltiples fàrmacs. D. Assaig puntual del fag
MDR-EC3 a la gespa d'E. coli resistent a múltiples fàrmacs.

Fig 5. Efecte dels bacteriòfags sobre els respectius bacteris in vitro. Reducció del creixement bacterià per
els fags corresponents en comparació amb el control. A. MDR-KP1 (control), fag KP DP1 a moi 1 i 10 (prova). B.
MDR-SA1 (control), fag SA DP1 a moi 1.
DO de 0,64. El fag específic per a P. aeruginosa (Fig 5D) va demostrar una DO mínima a 12
h d'incubació (0, 05) i la DO tant per a moi 1 com per a 10 i el matràs de control es va demostrar que era de 0, 51. Vam
notar una reducció de la densitat de població bacteriana a partir de les 4 h,

que va aconseguir una reducció màxima entre 12 i 14 h per als quatre fags diferents provats en aquest
estudiar. Tanmateix, es van observar augments constants de la densitat bacteriana a OD 600, després de 14-16
h de temps d'incubació, que es va atribuir al creixement de bacteris resistents als fags o al
inactivació dels fags després d'aquest punt de temps.
Discussió
La pell proporciona una barrera immune innata i controla la colonització microbiana a la superfície de la pell, protegint
el teixit subjacent de possibles patògens. La destrucció de la integritat de la pell condueix a ferides. De qui depenen els
microorganismes que infecten les ferides i la pell danyada
els microbis presents al medi ambient, el sistema immunitari de la persona i la profunditat de la
ferida. El risc de ferides sèptiques és ben conegut, i és una de les principals causes d'hospitalització en pacients que
pateixen lesions externes (ferides) i pacients diabètics. Segons
a Tayfour, es van observar entre el 10 i el 33% de les ferides sèptiques a l'Índia [34] i les infeccions de les ferides van ser
causada principalment per diferents microbis, com ara S. aureus, Streptococcus no coagulasa, Entero cocci, E.coli, P.
aeruginosa, K. pneumoniae, Enterobacter, Streptococcus, Candida i Acinetobac ter [35].
L'estudi actual va revelar que la taxa d'infecció de ferides era més freqüent en els homes
(69,2%) que en dones (30,7%). Això està d'acord amb la recerca realitzada en diferents

parts de l'Índia [36] i altres països [37]. Els homes participen en ocupacions com ara l'agricultura, treballs industrials i
treballs de construcció que impliquen riscos professionals on hi ha ferides.
més probable que es produeixi.
Hem observat que el 78,4% de les mostres de pus van demostrar un creixement bacterià en medi selectiu
i medi d'agar; aquesta taxa d'aïllament dels patògens és relativament més alta que les anteriors
informes, 70,5% a [38] i 55,5% a [39]. Del total d'aïllats bacterians, el 61% eren bacteris gramnegatius i el 39%
eren bacteris grampositius. En un tipus d'estudi similar realitzat a
[40], es van trobar predominantment bacteris gramnegatius. La majoria dels informes clínics ho demostren
que els bacteris gramnegatius són més predominants que els bacteris grampositius a la majoria d'entorns basats en
hospitals [41].
Aquest estudi va revelar que el 93% de les ferides positives en cultiu es van demostrar monomicrobianes
creixement i el 7% va demostrar un creixement polimicrobià. De la mateixa manera, s'ha informat d'un alt percentatge
de creixement monomicrobiano a l'Índia i altres països (86-100% a l'Índia, 98% a l'Índia).
Pakistan, 91,6% al sud-oest d'Etiòpia i 53% al Nepal), [42], però aquests resultats contradiuen
informes del Brasil [43].
Entre aquests patògens aïllats, P. aeruginosa va ser el més predominant en total
aïllats (22,6%), com es va informar anteriorment (22%) [44], mentre que S. aureus va ser el segon aïllat més pre
dominant (19,1%). Les nostres observacions demostren un percentatge de prevalença relativament menor que els
informes anteriors (P. aeruginosa (29,9%) i S. aureus (27,5%) de Thanni [45];
en comparació amb els resultats de [40], P. aeruginosa (19%) va ser relativament més alt en els nostres aïllats.
Sankaran va assenyalar que E. coli era l'aïllat predominant, però aquesta observació contradiu la nostra
descobriments, on informem de P. aeruginosa com el bacteri predominant ([46] Klebsiella spp.
(19,4%), [47] S. aureus i [48] Escherichia coli). En general, la taxa de P. aeruginosa és alta
infeccions de ferides, especialment als països en desenvolupament, a causa de la manca de solucions antisèptiques i
medicinals d'alta qualitat i la manca de bones condicions higièniques [36].
La resistència mitjana dels antibiòtics seleccionats va ser molt alta tant en gram-positius com
aïllats gramnegatius, fins a aproximadament el 91,1%. Curiosament, l'estudi realitzat per
Mulu [49] a Etiòpia va demostrar un percentatge relativament més alt de resistència a múltiples fàrmacs
comparació amb les nostres observacions (del 95,5 al 100%). Alta resistència a múltiples fàrmacs en els aïllats pot
Es deu a l'automedicació dels pacients, a la manca de serveis de laboratori de diagnòstic o a la manca de pautes
sobre la selecció de fàrmacs, la qual cosa condueix a l'ús inadequat de
antibiòtics. S. aureus era 100% resistent a la bencil penicil·lina, ampicil·lina i amoxicil·lina i
presentava resistències variables a altres fàrmacs provats, inclosa la kanamicina (13,6%), la vancomicina
(9%), cefotaxima (9%) i tobramicina (4,7%). La taxa de resistència als antibiòtics observada va ser
coherent amb un altre estudi de l'Índia [36]. A més, només el 9% de S. aureus eren resistents
vancomicina, com es va assenyalar en aquest estudi, que va ser molt inferior al 40% reportat a l'Iran per
Mirnejad [50]. Els aïllats MDR de les ferides sèptiques dels pacients eren extremadament sensibles
a gentamicina, ciprofloxacina, estreptomicina i tetraciclina.
En aquest estudi, P. aeruginosa va demostrar resistència a la benzil penicil·lina (92,3%), amoxicillina (88,4%),
ampicil·lina (80,7%), cefotaxima (38,5%), kanamicina, tetraciclina i vancomicina.
(11,3%). El patró de resistència als antibiòtics dels aïllats de P. aeruginosa va ser relativament més alt
que els trobats en informes anteriors [51]. El nostre estudi assenyala que K. pneumoniae va demostrar
resistència a benzil penicil·lina i amoxicil·lina (85% cadascun), ampicil·lina (75%), cefotaxima (20%),
kanamicina (10%) i vancomicina (5%), mentre que aquests aïllats eren molt sensibles a kanamicina cin, tobramicina,
estreptomicina, gentamicina, tetraciclina i ciprofloxacina. Els nostres resultats són
correlacionat positivament amb estudis anteriors realitzats a l'Índia per Goswami [36]. En el nostre estudi,
informem d'un patró resistent d'aïllats d'E. coli a benzil penicil·lina (89,4%), amoxicil·lina i ampicil·lina (84,2%) i
tetraciclina (57,8%); tanmateix, l'estreptomicina només va demostrar un 42,1%. El
els patrons de sensibilitat mostrats per E. coli eren relativament més baixos que els dels informes anteriors [48],

que va demostrar (ampicil·lina (96,6%), tetraciclina (79%) i gentamicina (51,7%) un percentatge relativament
més alt de resistència als medicaments que els nostres resultats en l'estudi actual.
Observem que els antibiòtics més efectius contra les ferides sèptiques causades per MDR-bac
Els aïllats terials són gentamicina i ciprofloxacina. Un altre grup de recerca de Nigèria va informar
que la gentamicina és un fàrmac eficaç per als bacteris MDR a les ferides sèptiques [6]. A causa del nivell
alarmant d'evolució dels bacteris MDR, es requereixen terapèutiques alternatives per als bacteris MDR que
causen sèpsia i per a altres malalties on els bacteris MDR són freqüents. El més important és que els
bacteriòfags es poden provar com a alternatives fiables als antibiòtics. En aquest estudi, hem estandarditzat
l'aïllament i l'activitat lítica in vitro dels bacteriòfags contra els bacteris MDR que infecten les ferides sèptiques.
Hem determinat l'especificitat de l'hoste dels bacteriòfags mitjançant el mètode d'agar suau, assaig puntual
Es van examinar els mètodes i l'eficàcia lítica in vitro dels bacteriòfags sobre bacteris MDR de ferides
sèptiques mitjançant un assaig de reducció bacteriana. Els nostres resultats coincideixen amb diversos altres
informes, que demostren de manera concloent que els bacteriòfags funcionen com a agents terapèutics
contra les infeccions bacterianes. Els bacteriòfags s'han utilitzat per curar malalties infeccioses causades tant
per bacteris grampositius com gramnegatius, com E. coli, P. aeruginosa, A. baumannii, K. pneumoniae, V.
vulnificus, Salmonella spp., S. pyogenes, E. faecium i S. aureus [29–31,49–51 ]. La literatura d'estudis
anteriors demostren que, en comparació amb la quimioteràpia, la teràpia amb fags demostra resultats positius
i sembla ser un agent fiable per substituir els antibiòtics en el futur [52,53].
Aquests fags aïllats i provats positivament (PA DP4, KP DP1, SA DP1 i EC DP3) es van tornar a examinar
per a l'activitat lítica en els bacteris MDR de les ferides sèptiques mitjançant un assaig de reducció bacteriana.
Els resultats in vitro demostren que els aïllats de bacteris MDR podrien tornar a créixer després de 14-16 h
de teràpia amb fags; això pot ser degut a l'aparició de soques resistents als fags, com també van informar els
grups de Vieira, Kumari i Andretti [54,55].
Actualment, els antibiòtics, com la ciprofloxacina i la gentamicina, són el règim més eficaç per tractar
els bacteris MDR, com ara P. aeruginosa, S. aureus, K. pneumoniae i E. coli, implicats en infeccions de
ferides sèptiques. A causa de l'evolució de la resistència a aquests fàrmacs d'ús habitual, ara hi ha una
necessitat d'agents alternatius per tractar els bacteris MDR. Els bacteriòfags poden lisar els aïllats de
bacteris MDR que causen ferides sèptiques. Els bacteriòfags tenen activitat bactericida contra els bacteris
patògens responsables de les malalties i poden reduir ràpidament la càrrega bacteriana. S'ha informat que
l'ús de bacteriòfags és un mètode atractiu per tractar les infeccions per E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae
i S. aureus [55] en diverses malalties. Les limitacions del present estudi són les següents:
1. S'espera que el sistema immunitari augmenti la resposta contra els fags i pot eliminar els fags
de la circulació produint anticossos i respostes mediades cel·lulars.
2. Les endotoxines de bacteris poden contaminar els preparats de fags donant lloc a no desitjats
respostes.
3. Es necessita un estudi extens per comprendre la ciència bàsica de les interaccions dels fags i humans en
l'ús a curt i llarg termini dels fags amb finalitats terapèutiques, ja sigui en preparacions individuals o com a
còctel de fags [56].
A partir dels nostres resultats, vam demostrar que tant els bacteris grampositius MDR (S. aureus) com
els bacteris gramnegatius (P. aeruginosa, E.coli i K. pneumoniae) obtinguts de ferides sèptiques eren
susceptibles a la lisi de bacteriòfags (PA DP4, SA DP1, KP DP1 i EC DP3), i aquests fags mereixen un estudi
addicional per optimitzar-los en condicions in vivo mitjançant el model de ratolí adequat.

Conclusió
Els bacteris més comuns aïllats de les infeccions de ferides sèptiques van ser P. aeruginosa, seguit de S. aureus,
K. pneumoniae i E. coli. Aquests aïllats tenien una alta freqüència de resistència a ampicil·lina, bencilpenicil·lina,
amoxicil·lina, vancomicina i tetraciclina. Els bacteriòfags aïllats de les aigües residuals van demostrar una eficàcia
lítica contra aïllats de bacteris MDR de ferides sèptiques en un assaig in vitro. Aquests fags, que van mostrar
activitat lítica i van reduir la càrrega bacteriana, es poden considerar com a agents alternatius als antibiòtics. En
el futur, la teràpia amb fags serà una manera fiable de tractar les infeccions bacterianes MDR, tot i que es
necessita molta feina per entendre tots els mecanismes implicats, inclòs l'ús de còctels de fags per a múltiples
infeccions bacterianes.
Informació de suport S1 Fig.
Creixement d'aïllats de bacteris MDR en medis nutritius i selectius. A. Creixement de Staphylococcus

aureus a placa d'agar nutrient, B. Creixement de Staphylococcus aureus a placa d'agar de manitol, C. Creixement
de Klebsiella pnemoniae a placa d'agar nutrient, D. Creixement de Klebsi ella pnemoniae a placa d'agar Mac
Conkey, E. Growth d'Escherichia coli a placa d'agar nutrient, F. Creixement d'Escherichia coli a placa d'agar Mac
Conkey, G. Creixement de Pseudomonas aeruginosa a placa d'agar nutrient, H. Creixement de Pseudomonas
aeruginosa a placa d'agar Cetrimide.
(TIF)
S2 Fig. Recollides de mostres de hisop de pus dels pacients amb ferides sèptiques ingressats a
l'hospital RIMS.
(DOCX)
Dades S1. Dades en brut de pacients amb ferides sèptiques, factors de sexe i edat. Dades en brut de
pacients ingressats a l'hospital RIMS, Kadapa, Índia del 2014 al 2015. En aquest estudi es van incloure mostres
positives bacterianes amb tipus de ferides, grups d'edat amb proporció de sexes. Hem carregat el total de 130
pacients amb sospita de ferida sèptica en aquest estudi.
(DOCX)
Taula S1. Estadístiques de la Taula 1, Taula 2 i Taula 3.

(DOCX)
Agraïments Els autors

agraeixen les instal·lacions de la Universitat Yogi Vemana. L'autor (RRP) agraeix a
UGC el suport financer en forma de JRF i SRF.
Aportacions de l'autor
Conceptualització: RRP VLD VRPD.
Curació de dades: RRP.
Anàlisi formal: RRP VLD VRPD.
Adquisició de finançament: RRP VLD DL MCR VRPD.
Investigació: RRP.
Metodologia: PRR.
Administració del projecte: RRP VLD VRPD.
Recursos: RRP VLD VRPD.

Supervisió: VRPD.
Validació: VLD RRP VRPD.
Visualització: RRP VLD DL MCR VRPD.
Redacció – esborrany original: RRP.
Redacció – revisió i edició: RRP VLD DL MCR VRPD.
Referències
1. Ndip RN, Takang A, Echakachi CM, Malongue A, Akoachere J (2007) Activitat antimicrobiana in vitro de mels
seleccionades sobre aïllats clínics d'Helicobacter pylori. Ciències de la salut africanes 7.
2. Dai T, Huang YY, K Sharma S, T Hashmi J, B Kurup D (2010) Antimicrobians tòpics per a infeccions de ferides per
cremades. Patents recents sobre el descobriment de fàrmacs antiinfecciosos 5: 124–151. PMID: 20429870 3.
Church D, Elsayed S, Reid O, Winston B, Lindsay R (2006) Infeccions per ferides de cremades. Revisions de microbiologia
clínica 19: 403–434. https://doi.org/10.1128/CMR.19.2.403-434.2006 PMID: 16614255
4. Bisno AL, Stevens DL (1996) Infeccions estreptocòciques de la pell i els teixits tous. New England Journal of Medicine
334: 240–246. https://doi.org/10.1056/NEJM199601253340407 PMID: 8532002 5. Janda J, Abbott S, Brenden R
(1997) Visió general de l'etiologia de les infeccions de ferides amb particular
èmfasi en les malalties adquirides a la comunitat. Revista europea de microbiologia clínica i malalties infeccioses 16:
189–201.
6. Anguzu J, Olila D (2007) Patrons de sensibilitat als fàrmacs dels aïllats bacterians del postoperatori sèptic
ferides en un hospital de referència regional d'Uganda. Ciències de la salut africanes 7.
7. Mehta M, Dutta P, Gupta V (2007) Aïllats bacterians de les infeccions de ferides per cremades i els seus antibiogrames:
Un estudi de vuit anys. Indian Journal of Plastic Surgery 40: 25.
8. Kotz P, Fisher J, McCluskey P, Hartwell SD, Dharma H (2009) Use of a new silver barrier dressing,
ALLEVYN? Ag en ferides cròniques exsudants. Revista internacional de ferides 6: 186–194. https://doi.org/10. 1111/
j.1742-481X.2009.00608.x PMID: 19538192
9. Amoran O, Sogebi A, Fatugase O (2013) Taxes i factors de risc associats a la infecció del lloc quirúrgic
en un centre d'atenció terciària al sud-oest de Nigèria.
10. Sheridan RL (2005) Sèpsia en pacients amb cremades pediàtriques. Medicina crítica pediàtrica 6: S112–S119. https://
doi.org/10.1097/01.PCC.0000161577.27849.BE PMID: 15857543 11. Hart C, Kariuki S (1998) Resistència als
antimicrobians als països en desenvolupament. Revista mèdica britànica 317: 647. PMID: 9727995
12. Esebelahie N, Newton-Esebelahie F, Omoregie R (2013) Aïllats de bacteris aeròbics de ferides infectades. Revista
Africana de Microbiologia Clínica i Experimental 14: 155–159.
13. Shittu A, Kolawole D, Oyedepo E (2002) Un estudi de les infeccions de ferides en dues institucions sanitàries a Ile-Ife,
Nigèria. Revista africana d'investigació biomèdica 5.
14. Shahi SK, Kumar A (2015) Aïllament i anàlisi genètica de bacteris resistents a múltiples fàrmacs de les úlceres del peu
diabètic. Fronteres en microbiologia 6.
15. Buteera A, Byimana J (2009) Principis de gestió de fractures obertes.
16. Nkang O, Okonko I, Mejeha O, Adewale O, Udeze A (2009) Avaluació dels fitxers de susceptibilitat als antibiòtics d'alguns
aïllats clínics seleccionats de laboratoris de Nigèria. Revista de microbiologia i antimicrobials 1: 019–026.
17. Kutateladze M, Adamia R (2010) Els bacteriòfags com a noves terapèutiques potencials per substituir o complementar
els antibiòtics. Tendències en biotecnologia 28: 591–595. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2010.08.001 PMID:
20810181
18. Organització WH (2014) Informe mundial sobre la vigilància de la resistència als antimicrobians: resum de 2014.
19. Golkar Z, Bagasra O, Jamil N (2013) Teràpia experimental de fags sobre infecció per Pseudomo nas aeruginosa resistent
a múltiples fàrmacs en ratolins. Revista d'antivirals i antiretrovirals 2013.
20. Hall AR, De Vos D, Friman VP, Pirnay JP, Buckling A (2012) Efectes de les aplicacions seqüencials i simultànies de
bacteriòfags en poblacions de Pseudomonas aeruginosa in vitro i en vas de l'arna de cera. Microbiologia aplicada i
ambiental 78: 5646–5652. https://doi.org/10.1128/AEM.00757-12 PMID: 22660719
21. Chan BK, Abedon ST, Loc-Carrillo C (2013) Còctels fagics i el futur de la teràpia amb fags. Microbiologia futura 8: 769–
783. https://doi.org/10.2217/fmb.13.47 PMID: 23701332

22. Haq IU, Chaudhry WN, Akhtar MN, Andleeb S, Qadri I (2012) Bacteriophages and their implications on
Biotecnologia del futur: una revisió. Revista de virologia 9: 1.
23. Wang Z, Zheng P, Ji W, Fu Q, Wang H (2016) SLPW: un bacteriòfag virulent dirigit a la meticil·lina
Staphylococcus aureus resistent in vitro i in vivo. Frontières en microbiologia 7: 934. https://doi.org/
10.3389/fmicb.2016.00934 PMID: 27379064
24. Hudzicki J (2009) Protocol de prova de susceptibilitat a la difusió del disc Kirby-Bauer. Societat Americana de Microbiol.
25. Hsueh PR, Ko WC, Wu JJ, Lu JJ, Wang FD (2010). als laboratoris de microbiologia clínica de Taiwan.
Revista de Microbiologia, Immunologia i Infecció 43: 452–455.

26. Smith HW, Huggins MB, Shaw KM (1987) The control of experimental Escherichia coli diarrhea in
vedells mitjançant bacteriòfags. Microbiologia 133: 1111–1126.
27. Cerveny KE, DePaola A, Duckworth DH, Gulig PA (2002) Fagoteràpia de la malaltia local i sistèmica
causada per Vibrio vulnificus en ratolins tractats amb ferro dextrano. Infecció i immunitat 70: 6251–6262. https://
doi.org/10.1128/IAI.70.11.6251-6262.2002 PMID: 12379704
28. Bourdin G, Schmitt B, Guy LM, Germond JE, Zuber S (2014) Amplification and purification of T4-like
Fags d'Escherichia coli per a la teràpia de fags: de laboratori a escala pilot. Aplicat i ambiental
microbiologia 80: 1469–1476. https://doi.org/10.1128/AEM.03357-13 PMID: 24362424
29. Ceyssens P-J, Lavigne R, Mattheus W, Chibeu A, Hertveldt K (2006) Anàlisi genòmica dels fages Pseudomo nas
aeruginosa LKD16 i LKA1: Establiment del subgrup ÿKMV dins del supergrup T7. Revista de bacteriologia 188: 6924–
6931. https://doi.org/10.1128/JB.00831-06 PMID: 16980495
30. Santos SB, Carvalho CM, Sillankorva S, Nicolau A, Ferreira EC (2009) The use of antibiotics to improve
detecció i enumeració de fags mitjançant la tècnica d'agar de doble capa. Microbiologia BMC 9: 1.
31. Armon R, Kott Y (1993) Una prova de detecció de presència/absència senzilla, ràpida i sensible per al bacteriòfag a
l'aigua potable. Revista de bacteriologia aplicada 74: 490–496. PMID: 8486556
32. Sambrook J, Russell DW (2001) Molecular cloning: a laboratory manual 3a edició. Coldspring-Harbour Laboratory Press,
Regne Unit.
33. Edwards-Jones V, Greenwood JE, Grup MBR (2003) Què hi ha de nou en microbiologia de cremades?: James Laing
assaig del premi commemoratiu 2000. Burns 29: 15–24. PMID: 12543040
34. Wilson A, Gibbons C, Reeves B, Hodgson B, Liu M (2004) Infecció de la ferida quirúrgica com a actuació
Indicador: acord de definicions comunes d'infecció de ferides en 4773 pacients. Bmj 329: 720. https://
doi.org/10.1136/bmj.38232.646227.DE PMID: 15367425
35. Tayfour MA, Al-Ghamdi SM, Al-Ghamdi AS (2005) Infeccions de ferides quirúrgiques a l'Hospital King Fahad de
Al-Baha. Revista mèdica saudita 26: 1305–1306. PMID: 16127538
36. Goswami NN, Trivedi HR, Goswami APP, Patel TK, Tripathi C (2011) Perfil de sensibilitat antibiòtica dels patògens
bacterians en infeccions de ferides postoperatòries en un hospital d'atenció terciària de Gujarat, Índia. Diari de
Farmacologia i farmacoterapèutica 2: 158. https://doi.org/10.4103/0976-500X.83279 PMID:
21897707
37. Ohalete C, Obi R, EmeaKoroha M (2012) Bacteriologia de diferents infeccions de ferides i els seus patrons de
susceptibilitat antimicrobiana a l'estat d'Imo a Nigèria. World J Pharm Pharm Sci 1: 1155–1172.
38. Azene MK, Beyene BA (2011) Bacteriologia i antibiograma de patògens de les infeccions de ferides a
Laboratori Dessie, al nord-est d'Etiòpia. Revista de Recerca en Salut de Tanzània 13.
39. Kaftandzieva A, Cekovska Z, Kaftandziev I, Petrovska M, Panovski N (2012) Bacteriology of Wound
Utilitat clínica de la microscòpia de tinció de Gram i la correlació amb el cultiu. Revista Macedònia de Ciències
Mèdiques 5: 72–77.
40. Iregbu K, Uwaezuoke N, Nwajiobi-Princewill I, Eze S, Medugu N, et al. Un perfil de les infeccions de ferides a
Hospital Nacional d'Abuja. Revista Africana de Microbiologia Clínica i Experimental 14: 160–163.
41. Mehta PA, Cunningham CK, Colella CB, Alferis G, Weiner LB (2000) Risk factors for sternal wound and
altres infeccions en pacients amb cirurgia cardíaca pediàtrica. The Pediatric infectious disease journal 19: 1000–
1004. PMID: 11055604
42. Hout B, Oum C, Men P, Vanny V, Supaprom C (2015) Drug resistance in bacteris isolated from patients
presentant ferides en un centre quirúrgic sense ànim de lucre a Phnom Penh, Cambodja del 2011 al 2013.
Malalties tropicals, medicina de viatges i vacunes 1: 1.
43. Perim MC, Borges JdC, Celeste SRC, Orsolin EdF, Mendes RR (2015) Aerobic bacterial profile and
resistència als antibiòtics en pacients amb infeccions del peu diabètic. Revista da Sociedade Brasileira de Medi cina
Tropical 48: 546–554. https://doi.org/10.1590/0037-8682-0146-2015 PMID: 26516963
44. Sikka R, Mann J, Deep VM, Chaudhary U, Deep A (2012) Patró de prevalença i sensibilitat als antibiòtics
de bacteris aïllats d'infeccions nosocomials en una sala quirúrgica. Indian J Clin Pract 22: 519–525.

45. Thanni LO, Osinupebi OA, Deji-Agboola M (2003) Prevalència de patògens bacterians en infectats
ferides en un hospital terciari, 1995–2001: algun canvi de tendència? Journal of the National Medical Association
95: 1189. PMID: 14717475
46. Sankaran SV, Rajagopal GK, Achamkulangara S (2016) Efectes de la profilaxi antibiòtica en cirurgia
ferides: un estudi en un centre d'atenció terciària del centre de Kerala. Revista de l'Acadèmia de microbiòlegs
clínics 18: 12.
47. Ayub M, Rizwan H, Siddique S, Maryam U (2015) Aïllament de patògens que causen sèpsia, pus i ferides
infectades de la unitat de cures crítiques: un estudi retrospectiu. Anals d'Investigació Clínica i de Laboratori.
48. Mama M, Abdissa A, Sewunet T (2014) Patró de susceptibilitat antimicrobiana dels aïllats bacterians de
infecció de ferides i la seva sensibilitat a agents tòpics alternatius a l'Hospital Especialitzat de la Universitat de
Jimma, al sud-oest d'Etiòpia. Anals de microbiologia clínica i antimicrobians 13: 1.
[PubMed] 49. Mulu W, Kibru G, Beyene G, Damtie M (2012) Infeccions nosocomials postoperatòries i patró de
resistència antimicrobiana d'aïllats bacterians entre pacients ingressats a l'Hospital de referència Felege
Hiwot, Bahirdar, Etiòpia. Ethiopian Journal of Health Sciences 22: 7–18.
50. Mirnejad R, Fallahi S, Kiani J, Jeddi F, Khoobdel M (2008) Avaluació epidèmica d'agents bacterians en osteomielitis
i la seva determinació del patró de resistència als antibiòtics. Revista de Ciències Biològiques 8: 478–481.
51. Upadhyay A, Maharjan R, Shakya B (2012) Bacteris de resistència a múltiples fàrmacs en diferents mostres
clíniques al National Medical College and Teaching Hospital Birgunj, Nepal. Res J Pharm, BiolChemSci
(RJPBCS) 3: 797–707.
52. Mathur M, Vidhani S, Mehndiratta P, Bhalla P, Reddy B (2003) Teràpia de bacteriòfags: una alternativa als antibiòtics
convencionals. JOURNAL-ASSOCIATION OF PHYSICIANS OF INDIA 51: 593–596.
53. Nouraldin AAM, Baddour MM, Harfoush RAH, Essa SAM (2016) Sinèrgia bacteriòfag-antibiòtica per controlar aïllats
clínics de Pseudomonas aeruginosa que produeixen planctònics i biofilms. Alexandria Journal of Medicine 52:
99–105.
54. Kumari S, Harjai K, Chhibber S (2010) Evidència per donar suport al potencial terapèutic del bacteriòfag Kpn5 en
la infecció de ferides per cremades causada per Klebsiella pneumoniae en ratolins BALB/c. J Microbiol
Biotechnol 20: 935–941. PMID: 20519918
55. Vieira A, Silva Y, Cunha A, Gomes N, Ackermann H-W (2012) Fagtherapy to control multidrug-resis tant
Pseudomonas aeruginosa skin infections: in vitro and ex vivo experiments. Revista europea de microbiologia
clínica i malalties infeccioses 31: 3241–3249.
56. Sulakvelidze A, Alavidze Z, Morris JG (2001) Teràpia de bacteriòfags. Agents antimicrobians i quimioteràpia 45:
649–659. https://doi.org/10.1128/AAC.45.3.649-659.2001 PMID: 11181338
Veure les estadístiques de publicació

Journal - Pone.0179245 (1) Aïllament de Bacteriòfags

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Journal - Pone.0179245 (1) Aïllament de Bacteriòfags

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Machine Translated by Google

Aïllament i avaluació in vitro de bacteriòfags contra aïllats de bacteris

5 autors, entre ells:

Pallavali Roja Rani Dakshayani Lomada

Universitat Nacional de Transport de Corea Universitat Yogi Vemana

20 PUBLICACIONS 170 CITACIONS 45 PUBLICACIONS 416 CITACIONS

VEURE PERFIL VEURE PERFIL

Universitat Yogi Vemana

55 PUBLICACIONS 1.755 CITACIONS

Projecte d'aplicació de còctels de fags contra biofilms de doble espècie

L'usuari ha sol·licitat la millora del fitxer descarregat.

Aïllament i avaluació in vitro de

Durbaka VRP (2017) Aïllament i avaluació in vitro de

Copyright: © 2017 Pallavali et al. Aquest és un article

l'estudi, la recollida i l'anàlisi de dades, la decisió de publicar

Interessos en competència: els autors han declarat que

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 1/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 2/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 3/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

Prova de susceptibilitat als antibiòtics (AST)

Aïllament dels bacteriòfags Per aïllar

Mètode d'agar de doble capa Es van

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 4/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

Teràpia de fags in vitro

Perfil bacterià Entre

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 5/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

Fig 1. Aïllats bacterians predominants de pacients amb ferides sèptiques.

Streptococcus pyogenes en 9 (7,8%), Staphylococcus spp. coagulasa negatiu. 8 (6,9%), Enterococcus

Patró de susceptibilitat als antibiòtics dels aïllats bacterians

El valor P es va calcular mitjançant el programari Graph Pad Prism.

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 6/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

El valor P es va calcular mitjançant el programari Graph Pad Prism.

que es van utilitzar per a la prova de susceptibilitat als antibiòtics.

Aïllament de bacteriòfags i eficàcia lítica en condicions in vitro

Taula 3. Tipus de ferida amb tipus bacterià significatiu.

Ferides postoperatòries N = 69 29 43,9% 37 56% 66 57,3%

El valor P es va calcular mitjançant el programari Graph Pad Prism.

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 7/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

Aïllats bacterians Patró R/S Antibiòtics

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 8/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 9/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

notar una reducció de la densitat de població bacteriana a partir de les 4 h,

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 10/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 11/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

PLOS ONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0179245 18 de juliol de 2017 12/16

Aïllament i avaluació de fags contra bacteris MDR de ferides sèptiques

Informació de suport S1 Fig.

Creixement d'aïllats de bacteris MDR en medis nutritius i selectius. A. Creixement de Staphylococcus

Taula S1. Estadístiques de la Taula 1, Taula 2 i Taula 3.

Agraïments Els autors

Conceptualització: RRP VLD VRPD.

Curació de dades: RRP.