MAKALE ADI Development and validation of an RP-HPLC DAD method fo

ETKEN MADDE α-laktalbümin-serum albümin-laktoferrin-laktoperoksidaz-

MATERYAL Organik Numune
KULLANILAN YÖNTEM RP-HPLC/DAD
KULLANILAN KILAVUZ ICH guidelines (Q2/R1 2005)
VALİDASYON PARAMETRELERİ
LINEAR WORKING RAGE /DOĞRUSAL ÇALIŞMA ARALIĞI Doğrusallık, numunedeki bir analitin konsantrasyonu ile sin
benzerdir. Geniş çalışma aralıklarında doğrusallığı sağlamak
standardı test edildi. Rutin analiz ve metot doğrulama dene

Her kalibrasyon, en az altı eşit dağıtılmış standarda dayanıy

ile değerlendirildi.
LOD ve LOQ Tespit sınırı (LOD), güvenilir bir şekilde tespit edilebilen bir a
limiti (LOQ), bir numunedeki analitin uygun kesinlik ve doğr
konsantrasyonunu ifade eder.
ICH yönergelerine uygun olarak, LOD ve LOQ, m eğiminden
standart sapmasından türetilmiştir. Her eğri, 0,01 ila 0,06 g/
dağıtılmış altı kalibrasyon standardından oluşuyordu.

PRECISION / KESİNLİK Kesinlik, birden çok özdeş numuneden elde edilen bir dizi ö
ve testler arası kesinlik olarak ayırt edilebilir. Test içi (altern
bir süre boyunca kesinliği ifade eder. Tersine, testler arası k
ekipman içindeki varyasyonları dikkate alır.

Test içi kesinlik, kalibrasyon standartları ve peynir altı suyu

standartlarının yardımıyla, LOD'de ve kalibrasyon aralığında
Her proteinin kesinliği, üç konsantrasyon seviyesinde altı se
α-laktalbümin β-laktoglobulin
0.02 g/L 0.02 g/L
2.5 g/L 2.5 g/L
1.4 g/L 4 g/L

Aynı asit ve tatlı peynir altı suyu numuneleri, tahlil içi kesinl
alikotlanmış bir asit peynir altı suyu numunesi ile altı farklı g
varyasyon katsayısına dayanıyordu.
ACCURACY / DOĞRULUK

RECOVERY / GERİ KAZANIM Geri kazanım, numune hazırlama ve ölçüm sırasında matris
numunelerine protein standartları eklenmiştir. Ek protein C
yöneliktir.Orijinal konsantrasyon + %20 oranında artırılarak

SONUÇLAR

DOĞRUSAL ÇALIŞMA ARALIĞI

Genişletilmiş çalışma aralıkları (24 kalibrasyon standardı ile
doğrusallığında proteine ​bağlı farklılıkları ortaya çıkardı.α-la
serum albümini (R^2> 0.97), laktoferrin (R^2> 0.96) ve β-lak
ilişkiliydi.Spesifik aralıkları içindeki tüm proteinler için lineer
olmaksızın 20 µL peynir altı suyunun doğrudan enjeksiyonu

LOD ve LOQ Belirlenen limitler tüm proteinler için eşit boyutlardaydı. La

(LOD = 8 mg/L; LOQ = 24 mg/L), α-laktalbümin ise en düşük
limitler, LOQ'daki doğruluk ve kesinlik ölçümleriyle doğrulan
peynir altı suyu proteinleri laktoferrin ve laktoperoksidazın

KESİNLİK Karşılık gelen çalışma aralıkları içinde tekrarlanabilirlik, tüm

Protein standartları ve gerçek peynir altı suyu numuneleri a
değişkenlik göz önüne alındığında, α-laktalbümin (%89) ve s
Toksikolojik ve adli kimya derneğinin yönergelerine göre (G
>%85 olmalıdır, oysa LOQ değerleri >%80 tolere edilebilir.
 Karşılık gelen çalışma aralıkları içinde tekrarlanabilirlik, tüm
Protein standartları ve gerçek peynir altı suyu numuneleri a
değişkenlik göz önüne alındığında, α-laktalbümin (%89) ve s
Toksikolojik ve adli kimya derneğinin yönergelerine göre (G
>%85 olmalıdır, oysa LOQ değerleri >%80 tolere edilebilir.

DOĞRULUK Kalibrasyon aralığında belirlenen doğruluk, tüm proteinler i

değerden sapması <%5 idi, bu da doğru ve kesin ölçümlere
%83 - %102'den genişletilir ve bu da a-laktalbümin ve lakto
< %100 değerler, ölçülen konsantrasyonun beklenen refera
üzerindeki bir doğruluk, ölçülen konsantrasyonun beklenen

GERİ KAZANIM Tatlı ve asitli peynir altı suyunda ölçülen peynir altı suyu pro
standartları eklenmiştir. Doğruluğa benzer şekilde, < %100
daha düşük olduğunu gösterir.Doğruluk ölçümünün aksine,
protein kayıplarını dikkate almak için gerçek tatlı ve asitli pe
%102 arasındaydı. Tespit edilen geri kazanımlar, yöntemin d
çarpık matris etkileri veya kayıpları hariç tutulabilir.
 tion of an RP-HPLC DAD method for the simultaneous quantification of minor and major whey proteins
bümin-laktoferrin-laktoperoksidaz-β-laktoglobulin

i bir analitin konsantrasyonu ile sinyal yoğunluğu arasındaki doğrudan orantılılığı tanımlar, burada tepe alanı ile
aralıklarında doğrusallığı sağlamak için her protein için 0,01 ve 5 g/L konsantrasyon arasında 24 kalibrasyon
tin analiz ve metot doğrulama deneyleri için kalibrasyon standartları sütte beklenen değerlere yöneliktir.

tı eşit dağıtılmış standarda dayanıyordu ve kalibrasyonun iyiliği, R2 belirleme katsayısı

nilir bir şekilde tespit edilebilen bir analitin en düşük konsantrasyonunu tanımlar. Kantitasyon
deki analitin uygun kesinlik ve doğrulukla kantitatif olarak belirlenebilen en düşük
eder.
n olarak, LOD ve LOQ, m eğiminden ve üç kalibrasyon eğrisinden elde edilen yanıt artık
üretilmiştir. Her eğri, 0,01 ila 0,06 g/L arasında daha düşük konsantrasyon aralığında eşit olarak
n standardından oluşuyordu.

eş numuneden elde edilen bir dizi ölçüm arasındaki uyuşmanın yakınlığının bir ölçüsüdür. Test içi
larak ayırt edilebilir. Test içi (alternatif olarak tekrarlanabilirlik olarak anılır), aynı çalışma koşulları altında kısa
ği ifade eder. Tersine, testler arası kesinlik (ara kesinlik olarak da adlandırılır) farklı günler, analistler veya
yonları dikkate alır.

yon standartları ve peynir altı suyu numuneleri temelinde değerlendirildi. Kalibrasyon

a, LOD'de ve kalibrasyon aralığında test içi kesinliği belirlemek mümkün olmuştur.
ç konsantrasyon seviyesinde altı seri belirlemede ölçülmüştür.
serum albümin laktoferrin laktoperoksidaz
0.02 g/L 0.02 g/L 0.03 g/L
0.05 g/L 0.05 g/L 0.05 g/L
0.25 g/L 0.1 g/L 0.1 g/L

ltı suyu numuneleri, tahlil içi kesinlik için bir gün içinde altı kat belirlemede ölçülmüştür. Testler arası kesinlik,
nir altı suyu numunesi ile altı farklı günde değerlendirildi. Kesinlik hesaplaması, aşağıdaki denkleme göre CV
ayanıyordu.
 azırlama ve ölçüm sırasında matris etkilerini ve analit kaybını dikkate alır. Tatlı ve asitli peynir altı suyu
andartları eklenmiştir. Ek protein Cmeasured miktarı, karşılık gelen proteinlerin doğal konsantrasyonuna
ntrasyon + %20 oranında artırılarak ilave konsantrasyon elde edildi.

alıkları (24 kalibrasyon standardı ile 0,01 – 5,0 g/L) üzerindeki deneyler, dedektör yanıtının
​bağlı farklılıkları ortaya çıkardı.α-laktalbümin tüm aralıkta iyi doğrusallık (R^2> 0.99) gösterirken,
97), laktoferrin (R^2> 0.96) ve β-laktoglobulinin (R^2> 0.90) dedektör tepkileri konsantrasyonla
rı içindeki tüm proteinler için lineer kalibrasyon eğrileri (R2 ≥ 0.99) elde edildi ve numune seyreltmesi
altı suyunun doğrudan enjeksiyonuna izin verildi.

roteinler için eşit boyutlardaydı. Laktoperoksidaz en yüksek limitlere sahipken

4 mg/L), α-laktalbümin ise en düşük limitleri sergilemiştir (LOD = 3 mg/L; LOQ = 9 mg/L).Elde edilen
uk ve kesinlik ölçümleriyle doğrulandı. Sonuç olarak, peynir altı suyu numunelerinde minör
eri laktoferrin ve laktoperoksidazın geçerli bir tespiti ve miktarının belirlenmesi mümkündür.

alıkları içinde tekrarlanabilirlik, tüm proteinler için &gt; %96 gün içi kesinlik değerleri ile sağlanır.
gerçek peynir altı suyu numuneleri arasında kayda değer farklılıklar gözlenmedi.Günden güne
ındığında, α-laktalbümin (%89) ve sığır serum albümini (%91) için günler arası kesinlik azalır.
a derneğinin yönergelerine göre (GTFCH, 2009), çalışma aralığında kabul edilebilir kesinlik değerleri
Q değerleri >%80 tolere edilebilir.
alıkları içinde tekrarlanabilirlik, tüm proteinler için &gt; %96 gün içi kesinlik değerleri ile sağlanır.
gerçek peynir altı suyu numuneleri arasında kayda değer farklılıklar gözlenmedi.Günden güne
ındığında, α-laktalbümin (%89) ve sığır serum albümini (%91) için günler arası kesinlik azalır.
a derneğinin yönergelerine göre (GTFCH, 2009), çalışma aralığında kabul edilebilir kesinlik değerleri
Q değerleri >%80 tolere edilebilir.

elirlenen doğruluk, tüm proteinler için %95-%103 arasındaydı. Sonuç olarak, ölçülen değerin gerçek
di, bu da doğru ve kesin ölçümlere izin veriyordu.LOQ'ya yakın konsantrasyonlarda, doğruluk aralığı
tilir ve bu da a-laktalbümin ve laktoferrin içeriğinin hafif bir şekilde eksik tahmin edilmesine yol açar.
n konsantrasyonun beklenen referans değerinden daha düşük olduğunu gösterirken, %100'ün
ölçülen konsantrasyonun beklenen referans değerinden daha yüksek olduğu anlamına gelir.

uyunda ölçülen peynir altı suyu proteini konsantrasyonlarına dayalı olarak, numunelere ek protein
Doğruluğa benzer şekilde, < %100 değerler, ölçülen değerin sıçramadan sonra beklenen değerden
sterir.Doğruluk ölçümünün aksine, numune hazırlama sırasında engelleyici matris etkilerini veya
te almak için gerçek tatlı ve asitli peynir altı suyu matrisleri kullanıldı. Tüm geri kazanımlar %96 -
t edilen geri kazanımlar, yöntemin doğruluğu aralığında olduğundan, numune hazırlama sırasındaki
a kayıpları hariç tutulabilir.
MAKALE ADI Method Validation for Simultaneous Determination of Cholesterol an
MATERYAL Organik Numune Kolesterol-7-ketokolesterol-25-hidroksikole
KULLANILAN YÖNTEM RP-HPLC
KULLANILAN KILAVUZ IUPAC / ANVISA RE
VALİDASYON PARAMETRELERİ
SELECTIVITY/ SEÇİCİLİK Ürünlerin ve standartların kromatpgramlarındaki tepe noktalarının ka
çözünürlüğünün ayrılmasının doğrulanması yoluyla fotodiyot dizi dede
tarafından sağlanan spektrumlar kullanılarak 3 kopya halinde değerlen

RECOVERY / GERİ KAZANIM Ürünlerin kromatogramları ve her bir pikin saflık spektrumu elde edild
çözeltilerden toplanan verilerle karşılaştırıldı.Geri kazanımlar, aşağıda
için analitlerin süt numunesi alikotlarına standart çözeltileri eklenerek

Kolesterol için : 75 ppm 150 ppm

Kolesterol oksitler için : 50 ppm 75 ppm
Kontrol numunelerinin enjeksiyonu, standart güçlendirilmeden gerçek
numunelerde ve kontrolde analitlerin miktar tayininden sonra aşağıda
yüzdesi hesaplanmıştır.

Ek parametreler, analitik eğriler için elde edilen veriler kullanılarak de

fazda
çözünmüş standart kolesterol ve kolesterol oksit çözeltilerinin aşağıda
edilmesiyle gerçekleştirildi.
Kolesterol için Kolesterol türevleri için
1 ppm 0.1 ppm
10 ppm 1 ppm
20 ppm 10 ppm
100 ppm 100 ppm
200 ppm 500 ppm
1000 ppm
2000 ppm
LINEARITY / DOĞRUSALLIK Doğrusal regresyon için Pearson (R^2) korelasyon katsayısına göre de
eğrinin
kalitesinin tahmin edilmesini sağlar ve deneysel noktaların daha küçü
reg-
RANGE of APPLICATION / UYGULAMA ARALIĞI Analitik eğrinin uygulama aralığı, bağıl yanıt yöntemiyle elde edildi.Bu
eksenin-
deki bağıl tepkiler ve apsis ekseninde logaritmik bir ölçekte karşılık ge
oluşturulur.Uygulama aralığı, doğrusal aralığın %95 ve %105'inde göre
larının çizgilerini kestiği noktalar arasındaki aralık olarak tanımlanır.
PRECISION / KESİNLİK Ortalamaların ve varyasyon katsayılarının tahmini kullanılarak, tekrarl
kesinlik ( günler arası ) için noktadan noktaya değerlendirildi.

LOD / LOQ Her bir limit için kabul edilen sinyal-gürültü oranı ve analitik eğri için t
dikkate alınarak tespit ve miktar tayini limitleri hesaplanmıştır.

SONUÇLAR
SEÇİCİLİK
DOĞRUSALLIK ve UYGULAMA ARALIĞI
TEKRARLANABİLİRLİK ve ARA KESİNLİK
Kromatografik koşulların süt numunelerinde kolesterol ve kolesterol o
olduğu kanıtlanmıştır.Yöntemin seçiciliği piklerin iyi çözünürlüğünü ve
ayrılmasını gösteren LC Solution yazılımı kullanılarak doğrulandı. Koles
sürelerinde gıda matrisinde başka bileşiklerin birlikte elüsyonu olmad
Doğrusallıkla ilgili veriler, kolesterol konsantrasyonları ile oksitler aras
ilgili alanlar arasında güçlü bir korelasyon olduğunu göstermektedir. T
0,999'dan daha üstün belirleme katsayıları, yöntemin, belirli bir aralık
konsantrasyonları ile orantılı sonuçlar ürettiğini, alanları ve analit kons
ilişkilendirmenin mümkün olduğunu teyit eder.
Ayrıca, bu sonuçlar sırasıyla 0.99'a eşit bir korelasyon katsayısı veya 0
öneren ANVISA ve INMETRO gereklilikleriyle uyumludur.Elde edilen a
aralıklarının değerlendirilmesi için, standartların konsantrasyonunun l
ilgili nispi tepkisi (pik alan bölü analitin ilgili konsantrasyonu) ile ilgili g
Enjeksiyonların ortalama değerleri arasında %5'in altında ve %5'in üze
aralıkları kabul edilebilir uygulama aralığı olarak kabul edilmiştir.Göre
ilgili olarak, uygulama aralığı, kesinliğin garanti edildiği konsantrasyon
ekstraksiyon için önerilen yöntemin uygulama aralığı olarak kabul edi
elde edilebilir.
 Tekrarlanabilirlik ve ara kesinlik çalışmasında elde edilen varyasyon ka
katsayısı için kabul kriterini takiben en düşük kolesterol konsantrasyo
ketokolesterol ve 25-hidroksikolesterol konsantrasyonları için yeterliy
için maksimum %5'lik bir değişiklik önermekle birlikte, %15'e kadar CV
olarak değerlendirmektedir. Kolesterol oksitler gibi mikro bileşenler iç
olarak %20'ye kadar CV değerleri kabul eder. Analitler için analitik yön
değerler Tablo 1 ve 2'de bulunur.

LOD ve LOQ Analitik eğrilerle elde edilen saptama (LOD) ve kantifikasyon (LOQ) lim
33.65 ppm idi; sırasıyla 7-ketokolesterol için 1,35 ve 4,10 ppm ve 25-h
7,10 ppm

GERİ KAZANIM
 Determination of Cholesterol and Cholesterol Oxides in Milk by RP-HPLC-DAD
l-7-ketokolesterol-25-hidroksikolesterol

ramlarındaki tepe noktalarının karşılaştırılması, saf bileşiklerin

anması yoluyla fotodiyot dizi dedektörlü spektrofotometre
anılarak 3 kopya halinde değerlendirildi.

r pikin saflık spektrumu elde edildikten sonra, bu veriler standart

laştırıldı.Geri kazanımlar, aşağıdaki konsantrasyonlara ulaşmak
rına standart çözeltileri eklenerek 3 kopya halinde değerlendirildi.

300 ppm
100 ppm
standart güçlendirilmeden gerçekleştirilmiştir. Güçlendirilmiş
n miktar tayininden sonra aşağıdaki denkleme göre geri kazanım

elde edilen veriler kullanılarak değerlendirildi. Yapıları, mobil

esterol oksit çözeltilerinin aşağıdaki konsantrasyonlarda enjekte

l türevleri için

2) korelasyon katsayısına göre değerlendirildi.Bu parametre

e deneysel noktaların daha küçük dağılımını ve tahmin edilen

ıl yanıt yöntemiyle elde edildi.Bu yöntemde, koordinatlar

e logaritmik bir ölçekte karşılık gelen konsantrasyonlarla bir grafik

al aralığın %95 ve %105'inde göreceli yanıtın güvenilirlik aralık-
ındaki aralık olarak tanımlanır.
rının tahmini kullanılarak, tekrarlanabilirlik ( gün içi ) ve ara
noktaya değerlendirildi.

ürültü oranı ve analitik eğri için tahmin edilen parametreler

ni limitleri hesaplanmıştır.
elerinde kolesterol ve kolesterol oksitlerin ayrılması için yeterli
ciliği piklerin iyi çözünürlüğünü ve saf bileşiklerin
ımı kullanılarak doğrulandı. Kolesterol ve oksitlerinin alıkonma
eşiklerin birlikte elüsyonu olmadığını doğrular.

konsantrasyonları ile oksitler arasında incelenen aralık ve

syon olduğunu göstermektedir. Tüm eğriler için bulunan
ayıları, yöntemin, belirli bir aralık içinde analitlerin
r ürettiğini, alanları ve analit konsantrasyonlarını
teyit eder.

şit bir korelasyon katsayısı veya 0.90'ın üzerinde bir değer

ikleriyle uyumludur.Elde edilen analitik eğrilerin uygulama
andartların konsantrasyonunun logaritması ile ekipmanın
tin ilgili konsantrasyonu) ile ilgili grafikler çizildi.

asında %5'in altında ve %5'in üzerinde olan güvenilirlik

alığı olarak kabul edilmiştir.Göreceli yanıt yöntemiyle
in garanti edildiği konsantrasyon aralığının, analitlerin
uygulama aralığı olarak kabul edildiği kesinlik verileriyle
masında elde edilen varyasyon katsayıları, Brezilya varyasyon
n düşük kolesterol konsantrasyonu hariç, tüm kolesterol, 7-
rol konsantrasyonları için yeterliydi.Mevzuat, mikro bileşenler
nermekle birlikte, %15'e kadar CV değerlerini kabul edilebilir
ol oksitler gibi mikro bileşenler için matrisin karmaşıklığına bağlı
bul eder. Analitler için analitik yöntemin kesinliği için elde edilen

a (LOD) ve kantifikasyon (LOQ) limitleri kolesterol için 11.10 ve

erol için 1,35 ve 4,10 ppm ve 25-hidroksikolesterol için 2,35 ve

Süt numuneleri için geri kazanım testinin sonuçları Tablo 3'te gösterilmektedir. Elde edilen
sonuçlar, kolesterol tayini için önerilen yöntemin ve oksitler, 7-ketokolesterol ve
25-hidroksikolesterolün etkinliğini kanıtlamaktadır. %100'e yakın analit geri kazanımları
idealdir, ancak kesinlik iyiyse16 daha küçük değerler kabul edilir ve bu durumda %5'e
kadar bir CV / %'si kabul edilebilir.
MAKALE ADI HPLC–UV method validation for the identification and quantification of bioactive amines
MATERYAL Biyolojik Numune Feniletilamin-Putreskin-Kadaverin-Histamin-Tiramin-Spe
KULLANILAN YÖNTEM HPLC-UV
KULLANILAN KILAVUZ ICH
VALİDASYON PARAMETRELERİ
SELECTIVITY / SEÇİCİLİK Çözücüye (su) eklenen amin standartlarının alıkonma süreleri ve matrislerin (albümen ve
varlığında karşılaştırılarak değerlendirildi.
LINEARITY / DOĞRUSALLIK Doğrusallığı değerlendirmek için matrisler 7 seri halinde aşağıda verilen konsantrasyonlar
standart
çözeltisi ile kuvvetlendirildi.Analizlerden sonra pik alanını konsantrasyonla ilişkilendiren b
oluşturulmuş
Konsantrasyonlar
0.7 mg/kg
1.4 mg/kg
2.8 mg/kg
5.6 mg/kg
11.2 mg/kg
22.4 mg/kg
PRECISION / KESİNLİK Analizlerin kesinliği, aynı numunenin kısa zaman aralıklarında ve aynı koşullar altında gerç
analizlerinden elde edilen sonuçlar kullanılarak, tekrarlanabilirlik koşulları altında bağıl sta
(RSD)
belirlenerek değerlendirilmiştir. Matrisler, yöntemin lineer aralığı dikkate alınarak her biri
(1.4 mg/kg), ortalama (5.6 mg/kg) ve yüksek (22.4 mg/kg) olmak üzere üç konsantrasyon
standart
çözelti ile güçlendirildi.
Doğruluk, geri kazanım testleri yapılarak değerlendirildi.Düşük (1.4 mg/kg), ortalama (5.6
ACCURACY / DOĞRULUK
(22.4 mg/kg) konsantrasyonlarda yöntemin lineer aralığı dikkate alınarak analizler üç seri
yapılmıştır.
Her konsantrasyonda elde edilen geri kazanım, kuvvetlendirilmiş numunedeki (C1) analit
takviye edilmemiş numunedeki analit konsantrasyonunu (C2) ve güçlendirilmiş numuneye
konsantrasyonunu (C3) dikkate alan R= ((C1-C2)/C3) x 100 denklemi kullanılarak hesaplan

LOD ve LOQ Yanıtın standart sapması ve analitik eğrinin eğimi kullanılarak aşağıdaki denkleme göre he

RUGGEDNESS /SAĞLAMLIK Yöntemin sağlamlığı,yumurta sarısı matrisi ve albümen matrisi numunelerinin analizi sıras
(analist ve analiz günü) değiştirilerek değerlendirildi.

SONUÇLAR Önerilen yöntemin performans parametreleri, hem yumurta akında hem de yumurta sarı
biyoaktif aminlerin tespiti ve miktarının belirlenmesi için yeterliydi.

DOĞRUSALLIK
 Ak ve yumurta sarısına eklenen aminlerin analizleri için 0,7 ila 22,4 mg /kg aralığında doğr
lendirmesinde elde edilen regresyon denklemleri ve belirleme katsayısı (R^2) Tablo 1'de g
tedir.Analitik eğrilerin belirleme katsayısının (R2) 0.99'dan büyük olduğu göz önüne alındı
değerler modelin yeterli olduğunu gösterir; bu, verilerin regresyon çizgisine uygunluğunu
Avrupa ve Brezilya mevzuatlarının kriterlerine göre doğrusallık testleri için 0,99'dan yükse
Bu parametre, değeri 1.0'a ne kadar yakınsa, deneysel noktaların dağılımı o kadar düşük v
regresyon katsayılarının belirsizliği o kadar küçük olduğundan, elde edilen eğri için kalite t
verir.

SEÇİCİLİK

LOD ve LOQ
DOĞRULUK ve GERİ KAZANIM

KESİNLİK HPLC-UV'nin kesinliği, kullanılan matristen bağımsız olarak 1.4 ila 22.4 mg/kg
aralığında yedi amin için tatmin edici sonuçlar sergiledi. Geri kazanım testlerinde elde
edilen sonuçların varyasyon katsayıları, yumurta sarısı matrisi için %1.7 ila %9.9 ve
albümen matrisi için %2.2 ila %10.0 arasında değişmiştir.

Bu değerler, 1 mg/kg'dan yüksek analit konsantrasyonları için %10'luk bir

maksimum RSD'yi gösteren Avrupa Topluluğu ve Codex Alimentarius tarafından
belirlenen aralık içindedir.

SAĞLAMLIK
USP'ye göre sağlamlık değerlendirmesinin sonuçları Tablo 4 ve 5'te açıklanmıştır.
Analistlerdeki ve analiz günlerindeki değişiklikler, sarısı ve akı içindeki biyoaktif amin
seviyelerinin belirlenmesini engellememiştir. Aynı analist tarafından farklı günlerde
değerlendirilen numuneler için bulunan standart sapmalar ve RSD değerleri düşüktü.
Benzer şekilde, iki analist arasındaki farklılıklar da küçüktü, bu da prosedürün bu iki
faktörden zayıf bir şekilde etkilendiğini gösteriyor.
tion of bioactive amines in commercial egg
rin-Histamin-Tiramin-Spermidin-Spermin

matrislerin (albümen ve yumurta sarısı)

verilen konsantrasyonlarda 7 aminin

trasyonla ilişkilendiren bir grafik

aynı koşullar altında gerçekleştirilen ardışık

koşulları altında bağıl standart sapma

ı dikkate alınarak her biri üç tekrar ile düşük

üzere üç konsantrasyon seviyesinde

.4 mg/kg), ortalama (5.6 mg/kg) ve yüksek

alınarak analizler üç seri halinde

numunedeki (C1) analit konsantrasyonunu,

güçlendirilmiş numuneye eklenen analit
emi kullanılarak hesaplanmıştır.

ğıdaki denkleme göre hesaplanmıştır.

umunelerinin analizi sırasında iki faktör

nda hem de yumurta sarısında

di.
 ,4 mg /kg aralığında doğrusallık değer-
tsayısı (R^2) Tablo 1'de gösterilmek-
olduğu göz önüne alındığında,
on çizgisine uygunluğunun kanıtıdır.
stleri için 0,99'dan yüksek değerler önerilir.
dağılımı o kadar düşük ve tahmin edilen
de edilen eğri için kalite tahminine izin

Seçicilik, suya eklenen yedi aminin 22.4 mg/kg standart çözeltisinin

analizinde(A), standart çözelti ile takviye edilmiş yumurta sarısı ve ak
numunelerinin analizlerinde (B ve C) ve standart amin çözeltisi
eklenmeden yumurta sarısı ve akı numunelerinin aanalizlerinde (D ve E)
elde edilen kromatogramların görselleştirilmesiyle değerlendirildi.
Ortalama tutma süreleri, feniletilamin için 20.9770± 01 dakika idi; putresin
için 21.6670± 04 dk; Tiramin için 32.6570± 08 dk; spermidin için 34.1870±
06 dk; ve spermin için 38.7570± 08 dk

LoD, yumurta sarısı matrisi için 0,2 ila 0,3 mg/kg ve albümen
matrisi için 0,2 ila 0,4 mg/kg arasında değişirken, LoQ, yumurta
sarısı için 0,7 ila 1,0 mg/kg ve albümin için 0,7 ila 1,1
mg/kgarasında değişmektedir.
 Tablo 3, doğruluğu değerlendirmek için kullanılan ortalama geri kazanım
yüzdelerinin yanı sıra kesinliği değerlendirmek için kullanılan RSD'yi sağlar.
Doğrulanmış yöntemin doğruluğu, 1 mg/kg'dan yüksek analit
konsantrasyonları için sırasıyla %70'ten %110'a ve %80'den %110'a bir geri
kazanımı gösteren Avrupa Topluluğu ve Codex Alimentarius tarafından
belirlenen aralık içindedir.Bununla birlikte, yumurta sarısı matrisinde, 1.4
mg/kg konsantrasyonunda feniletilamin ve histamin geri kazanımı sırasıyla
%118.7 ve %65.8 olmuştur, bu da belirlenen limitleri karşılamamaktadır.
Bu nedenle, 1.4 ila 22.4 mg/kg aralığında değerlendirilen yöntem, putresin,
kadaverin, tiramin, spermidin ve spermin için tatmin edici doğruluk
sergiledi.Albümen matrisinde, feniletilamin ve spermin, Avrupa Topluluğu
ve Codex Alimentarius tarafından 1,4 mg/kg konsantrasyon için belirlenen
değerleri karşılamayan geri kazanım sonuçları sergiledi. Bu nedenle,
yalnızca putresin, kadaverin, histamin, tiramin ve spermidin, albümen
matrisi için tatmin edici doğruluk sergiledi.

22.4 mg/kg
anım testlerinde elde
n %1.7 ila %9.9 ve

0'luk bir
rius tarafından
 te açıklanmıştır.
ndeki biyoaktif amin
dan farklı günlerde
D değerleri düşüktü.
a prosedürün bu iki