KLIGLER'S IRON AGAR

Kligler's iron agar (KIA) can be used to determine whether a gram-negative rod is a glucose or
lactose fermenter or both. The medium also tests for gas production during carbohy- drate
fermentation and hydrogen sulfide production, both of which are useful in the differentiation of
gram-negative rods belonging to the family Enterobacteriaceae.

KIA contains glucose and lactose (fermentable carbohy- drates), where lactose is present at 10
times the glucose con- centration; phenol red (pH indicator); peptone (carbon/ nitrogen source);
and sodium thiosulfate plus ferric ammo- nium sulfate (sulfur source and hydrogen sulfide
indicator, respectively). KIA resembles triple sugar iron agar (TSI) except it lacks sucrose. When
reading the reactions, by con- vention the following shorthand is used: the reaction of the slant is
put over the reaction in the butt; “K” is used for alkaline and “A” for acid. The following three
carbohydrate fermentation patterns are possible:

1. Alkaline (red) slant and acid (yellow) butt (K/A) indicate the organism ferments glucose but not
lactose. This organ- ism ferments glucose by the Embden-Meyerhof-Parnas (EMP) pathway to
produce organic acids, changing the pH indicator from red to yellow. Once the glucose has been
consumed, the organism then breaks down peptones, pro- ducing ammonia. The breakdown of
peptones happens only aerobically and results in an increase in pH, and thus the slant reverts to
red.

2. Acid (yellow) slant and acid (yellow) butt (A/A) indicate that the organism ferments both glucose
and lactose. The organism ferments glucose, producing acid products. Once the glucose is
consumed, it ferments lactose, breaking it down into glucose and galactose, causing the pH in the
slant portion to remain acidic.

3. Alkaline (red) slant and alkaline (red) butt (K/K) indicate that the organism cannot ferment
glucose or lactose and therefore produces no acidic products. The slant may become redder owing
to peptone catabolism. Often, with the lack of glucose fermentation, the butt is the same color as
the butt of an uninoculated tube. Therefore some sources prefer the designation “no change” (NC)
as opposed to alkaline.

If there are gas bubbles in the butt. splitting of the medium, or displacement of the medium from
the bottom of the tube, the organism is aerogenic; that is, it is able to produce carbon dioxide and
hydrogen gases during fermentation. This desig- nation is noted in the shorthand designation as
“g” (e.g., A/ Ag). Any blackening in the butt indicates that the organism produces hydrogen sulfide
gas from thiosulfate. The hydrogen sulfide combines with iron salt to produce ferrous sulfide, a
black precipitate. H>S is added after the slant/butt shorthand 984 APPENDIX A Selected
Bacteriologic Culture Media to signify that the organism produces HS (e.g.. K/A HS). With an
inoculating needle that has a sample of a pure culture of the isolate, inoculate the medium by
stabbing the butt and streaking the slant. The cap should be slightly loose. If the cap is screwed on
too tightly, there will not be sufficient air for peptone catabolism and, as a result, gram-negative
rods able to ferment only glucose may appear as lactose fermen- ters. Reactions should be
interpreted at 18 to 24 hours. If the medium is read earlier, organisms able to ferment only
glucose may appear to be lactose fermenters. If the medium is read later, lactose fermenters may
consume the lactose and begin to catabolize peptones, with the slant reverting to red. A yellow
slant and red butt may indicate failure to stab the butt or inoculation of the medium with gram-
positive organisms. Examination of the medium for stab line or performance of Gram stain should
clarify this situation. The hydrogen sulfide indicator system in KIA is not as sensitive as the lead
acetate method or as sensitive as that found in other media, such as sulfide indole motility agar. A
black butt should be read as acid even though yellow color may be obscured. If hydrogen sulfide is
reduced, this indicates that an acid condition does exist and can be assumed. Critical to
understanding how this medium works is the fact that glucose is present in one tenth the amount
of lactose, Organisms use the simplest carbohy- drate, glucose, first; once this is consumed, the
organisms attack the more complex carbohydrate, lactose. If the organ- isms lack the appropriate
enzymes, they move on to protein catabolism. There is sufficient lactose in the medium to prevent
breakdown of peptone, provided it is read at the appropriate time.

AGAR HIERRO DE KLIGLER

El agar de hierro de Kligler (KIA) se puede utilizar para determinar si un bastoncillo gramnegativo
es un fermentador de glucosa o lactosa o ambos. El medio también prueba la producción de gas
durante la fermentación de carbohidratos y la producción de sulfuro de hidrógeno, los cuales son
útiles en la diferenciación de bacilos gramnegativos que pertenecen a la familia
Enterobacteriaceae.

KIA contiene glucosa y lactosa (carbohidratos fermentables), donde la lactosa está presente en 10
veces la concentración de glucosa; rojo fenol (indicador de pH); peptona (fuente de
carbono/nitrógeno); y tiosulfato de sodio más sulfato de amonio férrico (fuente de azufre e
indicador de sulfuro de hidrógeno, respectivamente). KIA se parece al agar de hierro con triple
azúcar (TSI), excepto que carece de sacarosa. Cuando se leen las reacciones, por convención se
usa la siguiente forma abreviada: la reacción del sesgo se antepone a la reacción del tope; "K" se
usa para alcalino y "A" para ácido. Los siguientes tres patrones de fermentación de carbohidratos
son posibles:

1. El sesgo alcalino (rojo) y el extremo ácido (amarillo) (K/A) indican que el organismo fermenta la
glucosa pero no la lactosa. Este organismo fermenta la glucosa por la vía de Embden-Meyerhof-
Parnas (EMP) para producir ácidos orgánicos, cambiando el indicador de pH de rojo a amarillo.
Una vez que se ha consumido la glucosa, el organismo descompone las peptonas, produciendo
amoníaco. La descomposición de las peptonas ocurre solo aeróbicamente y da como resultado un
aumento en el pH y, por lo tanto, la inclinación vuelve a ser roja.

2. La inclinación ácida (amarilla) y el extremo ácido (amarillo) (A/A) indican que el organismo
fermenta tanto la glucosa como la lactosa. El organismo fermenta la glucosa, produciendo
productos ácidos. Una vez que se consume la glucosa, fermenta la lactosa, descomponiéndola en
glucosa y galactosa, lo que hace que el pH en la porción inclinada permanezca ácido.

3. La inclinación alcalina (roja) y el extremo alcalino (rojo) (K/K) indican que el organismo no puede
fermentar la glucosa o la lactosa y, por lo tanto, no produce productos ácidos. La inclinación puede
volverse más roja debido al catabolismo de la peptona. A menudo, debido a la falta de
fermentación de glucosa, el extremo es del mismo color que el extremo de un tubo sin inocular.
Por lo tanto, algunas fuentes prefieren la designación "sin cambio" (NC) en lugar de alcalino.

Si hay burbujas de gas en la culata. división del medio, o desplazamiento del medio desde el fondo
del tubo, el organismo es aerogénico; es decir, es capaz de producir gases de dióxido de carbono e
hidrógeno durante la fermentación. Esta designación se anota en la designación abreviada como
“g” (p. ej., A/ Ag). Cualquier ennegrecimiento en el extremo indica que el organismo produce gas
de sulfuro de hidrógeno a partir del tiosulfato. El sulfuro de hidrógeno se combina con la sal de
hierro para producir sulfuro ferroso, un precipitado negro. H>S se agrega después de la
abreviatura slant/butt 984 APÉNDICE A Medios de cultivo bacteriológicos seleccionados para
indicar que el organismo produce HS (p. ej., K/A HS). Con una aguja de inoculación que tenga una
muestra de un cultivo puro del aislado, inocule el medio pinchando el extremo y rayando la
inclinación. La tapa debe estar ligeramente suelta. Si la tapa se enrosca demasiado, no habrá
suficiente aire para el catabolismo de la peptona y, como resultado, los bacilos gramnegativos
capaces de fermentar solo glucosa pueden aparecer como fermentadores de lactosa. Las
reacciones deben interpretarse a las 18 a 24 horas. Si el medio se lee antes, los organismos
capaces de fermentar solo glucosa pueden parecer fermentadores de lactosa. Si el medio se lee
más tarde, los fermentadores de lactosa pueden consumir la lactosa y comenzar a catabolizar
peptonas, con la inclinación volviendo a rojo. Un sesgo amarillo y un extremo rojo pueden indicar
que no se punzó el extremo o que se inoculó el medio con organismos grampositivos. El examen
del medio para la línea punzante o el rendimiento de la tinción de Gram debería aclarar esta
situación. El sistema indicador de sulfuro de hidrógeno en KIA no es tan sensible como el método
de acetato de plomo o tan sensible como el que se encuentra en otros medios, como el agar de
motilidad de sulfuro de indol. Una colilla negra debe leerse como ácido, aunque el color amarillo
puede estar oscurecido. Si se reduce el sulfuro de hidrógeno, esto indica que existe una condición
ácida y se puede suponer. Para comprender cómo funciona este medio es fundamental el hecho
de que la glucosa está presente en una décima parte de la cantidad de lactosa. Los organismos
usan primero el carbohidrato más simple, la glucosa; una vez consumido, los organismos atacan al
carbohidrato más complejo, la lactosa. Si los organismos carecen de las enzimas apropiadas, pasan
al catabolismo de proteínas. Hay suficiente lactosa en el medio para evitar la descomposición de la
peptona, siempre que se lea en el momento adecuado.