Machine Translated by Google

Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522

www.elsevier.com/locate/procbio

Ảnh hưởng của pH, thời gian và nhiệt độ ngâm vôi đến quá trình giải độc dịch
thủy phân bằng axit loãng cho quá trình lên men của nấm men Saccharomyces cerevisiae

Ria Millati *, Claes Niklasson, Mohammad J. Taherzadeh

Khoa Kỹ thuật Phản ứng Hóa học, Đại học Công nghệ Chalmers, S-41296 Goteborg, Thụy Điển

Nhận ngày 4 tháng 2 năm 2002; chấp nhận ngày 12 tháng 5 năm 2002

trừu tượng

Tác động của các yếu tố khác nhau trong quá trình khử độc của dịch thủy phân axit loãng bị ức chế nghiêm trọng bằng cách trộn quá vôi đã được nghiên cứu.

Quá trình định mức được thực hiện bằng cách tăng độ pH lên 10, 11 hoặc 12 ở hai nhiệt độ khác nhau, 25 và 60 8C, giữ độ pH và nhiệt độ ở các giá trị không đổi

trong các khoảng thời gian khác nhau, 0, 1, 20 và 170 h, sau đó điều chỉnh pH đến 5,5. Tất cả các sản phẩm thủy phân sau đó được lên men trong quá trình nuôi cấy

hàng loạt bởi Saccharomyces cerevisiae trong các bình lắc, sau đó một chất được chọn để nuôi cấy liên tục trong lò phản ứng sinh học. Tác động đáng kể nhất của quá

trình khử trùng là làm giảm mạnh nồng độ của furfural và hydroxymethylfurfural, trong khi nồng độ của axit axetic không thay đổi và tổng hợp chất phenolic giảm

dưới 30%. Quá trình giải độc ở pH 12 trong hơn 1 giờ có hiệu quả, trong khi không có tác dụng nào ở pH 10 và các chất thủy phân phải duy trì ở pH 11 trong hơn 20

giờ để có thể lên men. Mặt khác, việc giảm nồng độ đường trong quá trình cô đặc là một vấn đề nghiêm trọng ở pH 12, đặc biệt là ở nhiệt độ cao hơn, nơi có tới

70% đường bị phân hủy. Khả năng lên men của dịch thủy phân đã khử độc cũng đã được thử nghiệm trong quá trình canh tác liên tục bằng S. cerevisiae cố định trong

Ca-alginate. Dịch thủy phân có thể lên men hoàn toàn ở các tỷ lệ pha loãng khác nhau giữa 0,2 và 1,0 h1 # 2002 Elsevier Science Ltd. Bảo lưu mọi quyền.

Từ khóa: Cai nghiện; Saccharomyces cerevisiae ; thủy phân; Vượt trội; lên men; cố định

1. Giới thiệu (HMF), axit cacboxylic, ví dụ như axit axetic, axit formic và axit

levulinic, và các hợp chất phenolic [1].

Ethanol từ các nguồn tài nguyên tái tạo đã được quan tâm Việc nuôi cấy các sản phẩm thủy phân có thể được thực hiện ở các

trong những thập kỷ gần đây như một nhiên liệu thay thế hoặc phụ phương thức hoạt động khác nhau bao gồm lên men theo mẻ, cho ăn

gia oxy hóa cho nhiên liệu hóa thạch hiện tại. Vật liệu lignocellulose theo mẻ và lên men liên tục. Quá trình lên men của các sản phẩm thủy

là nguồn tài nguyên tái tạo rẻ, có sẵn với số lượng lớn. Trong quy phân theo truyền thống đã được nghiên cứu trong các quy trình hàng

trình này, trước tiên, quá trình thủy phân nên được thực hiện để loạt. Mặc dù đơn giản, nhưng có một nhược điểm lớn của quá trình

mở cấu trúc tinh thể của lignocellulose và phân hủy các polyme lên men theo mẻ, đó là nồng độ ban đầu cao của các chất ức chế trong

cellulose và hemi cellulose thành đường monome của chúng. Đường sau môi trường. Nó dẫn đến giai đoạn trễ dài hoặc đôi khi thậm chí thất

đó được lên men thành ethanol bằng men Baker chẳng hạn. Một số sản bại hoàn toàn của quá trình lên men [2,3]. Nuôi cấy theo đợt được

phẩm phụ không mong muốn được hình thành trong quá trình thủy phân, quan tâm để khắc phục một số vấn đề này [4,5]. Điều này là do khả

gây ức chế quá trình lên men. năng của nấm men trong việc giải độc tại chỗ các chất thủy phân và

chuyển đổi các chất ức chế như furfural và HMF thành một số hợp chất

Các sản phẩm phụ quan trọng nhất xét về nồng độ trong quá trình ít độc hơn [6/8].

thủy phân bằng axit loãng được xác định là các dẫn xuất của furan,

ví dụ như furfural và 5-hydroxymethylfurfural

Khả năng giải độc tại chỗ của các tế bào làm cho việc nuôi cấy
liên tục trở thành một phương pháp hấp dẫn để lên men các chất thủy

* phân axit loãng. Tuy nhiên, tốc độ pha loãng trong quá trình canh
Đồng tác giả. ĐT: /46-31-7723094; fax: 7723035 Địa chỉ /46-31-
email: rimi@cre.chalmers.se (R. Millati).
tác liên tục sẽ là một hàm của nồng độ chất ức chế, nghĩa là nồng

độ thấp hơn

0032-9592/02/$ - xem vấn đề phía trước # 2002 Elsevier Science Ltd. Bảo lưu mọi quyền.
PII: S 0 0 3 2 - 9 5 9 2 ( 0 2 ) 0 0 1 7 6 - 0
Machine Translated by Google

516 R. Millati và cộng sự. / Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522

tỷ lệ pha loãng nên được áp dụng cho thức ăn có nồng độ chất ức chế Độ pH của dịch thủy phân nhỏ hơn 2. Để dịch thủy phân ở nhiệt độ

cao hơn [9]. Hơn nữa, nếu tỷ lệ pha loãng rất thấp được áp dụng để phòng trong một tuần dẫn đến nồng độ đường giảm trung bình 10%.

lên men các chất thủy phân ức chế nghiêm trọng, tỷ lệ chuyển đổi của

các chất ức chế sẽ giảm cùng với sự tăng trưởng giảm của sinh khối

[7,8]. Điều này dẫn đến việc rửa sạch các tế bào khỏi lò phản ứng
2.2. điều trị thừa
sinh học, ngay cả ở tỷ lệ pha loãng rất thấp. Có thể tránh được

hiện tượng rửa trôi nếu sinh khối được giữ lại bằng cách lọc, tuần
Quá trình khử độc bằng quy trình overliming liên quan đến việc
hoàn hoặc cố định sinh khối. Trong một nghiên cứu trước đây [10],
tăng độ pH của dịch thủy phân lên 10,0, 11,0 hoặc 12,0 bằng cách bổ
việc nuôi cấy liên tục bằng Saccharomyces cerevisiae cố định đã được
sung Ca(OH)2. Độ pH được giữ ở mức tăng trong các khoảng thời gian
chứng minh là có thể lên men các sản phẩm thủy phân axit loãng với
khác nhau 0, 1, 20 và 170 h, ở hai nhiệt độ khác nhau, 25 và 60 8C.
tỷ lệ sản xuất ethanol cao. Tuy nhiên, khi các tế bào đối mặt với

quá trình thủy phân bị ức chế nghiêm trọng, hoạt động trao đổi chất
Độ pH của dịch thủy phân đã giải độc sau đó được điều chỉnh theo độ
và năng suất ethanol giảm xuống bằng 0, mặc dù có sự hiện diện của
pH canh tác, tiếp theo là khử trùng bằng nồi hấp và môi trường được
nồng độ khối lượng tế bào cao trong các hạt.
cấy ngay lập tức.

2.3. Chủng nấm men và môi trường

Khử độc trước khi lên men có lẽ là cần thiết để giữ lại sinh khối

'hoạt động' về mặt trao đổi chất, khi chất thủy phân độc hại được
Nấm men S. cerevisiae CBS 8066, thu được từ Văn phòng trung tâm
sử dụng làm thức ăn. Có một số phương pháp giải độc bao gồm phương
nuôi cấy Schimmel (Delft, Hà Lan) đã được sử dụng trong tất cả các
pháp xử lý sinh học, ví dụ như laccase và Trichoderma reesei,
thí nghiệm. Chủng này được duy trì trên các đĩa thạch làm từ dịch
phương pháp xử lý vật lý, ví dụ như chiết xuất và phương pháp xử
chiết nấm men 10 g/l, peptone đậu nành 20 g/l và thạch 20 g/l với D-
lý hóa học, ví dụ như trao đổi ion, bay hơi, xử lý bằng lớp phủ và
glucose 20 g/l làm nguồn carbon bổ sung. Dịch cấy được nuôi cấy
sulphite [11/18] . Do chi phí thấp và hiệu quả cao trong số các
trong bình nón nút bông 300 ml trên máy lắc ở 30 8C trong 24 giờ.
phương pháp giải độc, overliming đã được công nhận là phương pháp
Thể tích chất lỏng là 100 ml.
điều trị phổ biến nhất, mặc dù nó có nhược điểm về lượng đường

thất thoát [15].

Môi trường tăng sinh là môi trường tổng hợp xác định bao gồm 50 g/l

glucose như đã báo cáo trước đây [19].

Quá trình truyền thống được thực hiện bằng cách thêm kiềm (Ca(OH)2

hoặc NaOH) để tăng độ pH lên đến 10, sau đó là điều chỉnh độ pH canh
2.4. thủ tục cố định
tác [11,18].

Mục đích của công việc hiện tại là điều tra khả năng overliming
Trộn 100 ml dịch cấy với 400 ml natri alginate đã khử trùng để
trong giải độc và tăng khả năng lên men của các chất thủy phân axit
tạo ra nồng độ cuối cùng của dung dịch alginate là 3% (w/v). Các hạt
loãng trong các chế độ vận hành liên tục và hàng loạt. Ảnh hưởng
được hình thành bằng cách nhỏ từ từ dung dịch alginate vào 1 l dung
của ba yếu tố trong quá trình khử độc đã được kiểm tra: pH, thời
dịch canxi clorua khuấy nhẹ (30 g/l). Đường kính hạt hình thành
gian và nhiệt độ giải độc. Khả năng lên men của các chất thủy phân
thông qua một ống mở nhỏ là từ 3 đến 4 mm [10]. Quá trình làm cứng
đã khử độc được kiểm tra bằng cách nuôi cấy hàng loạt trong các bình
hoàn toàn các hạt đạt được chỉ sau một đêm.
lắc, và một chất thủy phân được chọn đã được thử nghiệm thêm bằng

cách nuôi cấy liên tục S. cerevisiae cố định trong lò phản ứng sinh

học.

2.5. Nuôi cấy trong bình lắc

2. Vật liệu và phương pháp Việc nuôi cấy trong bình lắc được thực hiện để kiểm tra khả năng

lên men của các sản phẩm thủy phân đã khử độc bằng cách bón vôi quá

2.1. Thủy phân axit loãng mức ở các điều kiện khác nhau. Dịch thủy phân đã khử độc được điều

chỉnh pH thành 5,5 và sau đó được bổ sung vào môi trường nuôi cấy,

Chất thủy phân được sử dụng trong các thí nghiệm được sản xuất là môi trường tổng hợp xác định không có nguồn carbon tương tự như

từ tàn dư rừng có nguồn gốc chủ yếu từ cây vân sam [10]. Các chip chất cấy. Việc nuôi cấy được thực hiện trong các bình Erlenmeyer có

này được thủy phân bằng H2SO4 0,5% ở 12/21 bar trong lò phản ứng lô nút bông 300 ml được đặt trong bể lắc ở nhiệt độ 30 8C trong 48 giờ

súng masonite được xây dựng lại 350-l trong hai giai đoạn. Điều này mà không cần kiểm soát pH. Tổng thể tích chất lỏng là 155 ml bao gồm

đã được mô tả trước đây [10]. Các sản phẩm thủy phân của hai giai 135 ml zate thủy phân, 5 ml chất cấy và 15 ml dung dịch chứa các

đoạn sau đó được trộn lẫn và bảo quản ở 4 8C trước khi sử dụng. khoáng chất và vitamin khác. Các mẫu chất lỏng được rút ra ở 0, 2,

Dịch thủy phân chứa 20,0 g/l glucose, 18,1 g/l mannose, 4,2 g/l 5, 8, 24 và 48 giờ, được phân tích bằng HPLC. Các thí nghiệm tương

galactose, 7,8 g/l xyloza, 1,95 g/l HMF, 0,8 g/l furfural, 3,0 g/l tự cũng được

axit axetic và 2,4 g/ l tổng hợp chất phenolic.

Machine Translated by Google
R. Millati và cộng sự. / Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522
được thực hiện với các sản phẩm thủy phân không khử độc tố. Tất
cả các thí nghiệm đã được nhân đôi.
2.6. Nuôi cấy liên tục với tế bào cố định
Nuôi cấy liên tục được thực hiện trong lò phản ứng sinh
học Biostat A (B. Braun Biotech International, Ger many) ở
nhiệt độ 30 8C và tốc độ khuấy 500 vòng/phút với thể tích làm
việc là 1,0 l. Dịch thủy phân đã khử độc được đưa vào lò
phản ứng sinh học bằng bơm nhu động (Watson-Marlow Alitea AB,
Thụy Điển) mà không cần điều chỉnh lại pH. Giá trị pH trong
môi trường được kiểm soát ở mức 5,0 (9/0,07) bằng cách thêm
HCl 3M.
Các điều kiện yếm khí được duy trì bằng cách phun nitơ liên
tục với tốc độ dòng chảy 0,8 l/phút được điều khiển bởi bộ
điều khiển lưu lượng khối lượng Hi-Tech (Ruurlo, The Nether
Lands). Quá trình nuôi cấy được bắt đầu ở chế độ hàng loạt
trong môi trường xác định đầy đủ [19] với nồng độ glucose là
50 g/l để chuẩn bị nồng độ tế bào cao bên trong hạt. Các chất
thủy phân và toàn bộ khoáng chất và vitamin sau đó được đưa
riêng vào lò phản ứng sinh học ở các tỷ lệ pha loãng nhất định.
2.7. Phương pháp phân tích
Hàm lượng carbon dioxide và oxy trong khí đầu ra của lò
phản ứng sinh học được đo liên tục bằng máy theo dõi khí âm
thanh (model 1311, Innova, Den mark). Mẫu để phân tích HPLC
được lấy ra khỏi bình lắc hoặc bình phản ứng sinh học, ly tâm
và bảo quản ở /20 8C trước khi phân tích. Glucose, xylose,
galactose và mannose được phân tích trên cột Aminex HPX-87P
(Bio-Rad, USA) ở 85 8C. Nước siêu tinh khiết được sử dụng
làm chất rửa giải với tốc độ dòng chảy 0,6 ml/phút.
Nồng độ etanol, axit axetic, axit lactic, glycerol, furfural
và HMF được xác định bằng cột Aminex HPX-87H (Bio-Rad) ở 60
8C với dung dịch rửa giải 0,6 ml/phút là H2SO4 5 mM . Máy dò
chỉ số khúc xạ (RI) (Waters 410, Millipore, Milford, USA) và
máy dò hấp thụ tia cực tím (Waters 486) được sử dụng nối tiếp.
Nồng độ của tất cả các chất chuyển hóa đã đề cập được xác
định từ sắc ký đồ RI, ngoại trừ axit lactic, furfural và HMF,
được xác định từ sắc ký đồ UV ở bước sóng 210 nm. Độ lệch
chuẩn của các phân tích bằng HPLC là 3%. Tổng nồng độ phenol
được phân tích bằng phương pháp đo quang phổ với thuốc thử
Folin & Ciocalteaus ở độ hấp thụ 725 nm [20].
3. Kết quả
3.1. giải độc
Ảnh hưởng của ba thông số khác nhau trong quá trình khử
độc bằng cách thêm Ca(OH)2 đã được nghiên cứu:
517
pH giải độc (pHd), thời gian giải độc (td) và nhiệt độ (Td).
Quá trình giải độc được thực hiện bằng cách điều chỉnh nhiệt
độ (Td), tăng pH từ pH ban đầu (tức là nhỏ hơn 2) bằng canxi
hydroxit đến pHd, giữ pHd và Td không thay đổi trong một
khoảng thời gian (td) và sau đó giảm nồng độ pH đến pH canh
tác. Ba biến này được đưa ra dưới dạng các giá trị sau:
pHdf10; 11; 12g tdf0; 1; 20; 170g (giờ)
Tdf25; 60g (C)
Hồ sơ nồng độ của các loại đường bao gồm glucose, mannose,
galactose và xyloza cũng như furan (furfural và HMF), tổng
hợp chất phenolic và axit axetic ở các pHd , td và Td khác
nhau được tóm tắt trong Bảng 1 và Bảng 2. Nồng độ của furan
bị ảnh hưởng nhiều bởi cả pHd và td, trong khi không có sự
khác biệt rõ ràng giữa các cấu hình của furan thu được ở hai
Td khác nhau. Nồng độ của cả furfural và HMF tiến gần đến 0,
trong khi pHd tăng lên 12 ở khoảng thời gian td cao hơn 20
giờ.
Tuy nhiên, nồng độ của axit axetic nói chung không bị ảnh
hưởng bởi sự thay đổi trong bất kỳ biến số pHd, td hoặc Td
nào. Nồng độ của tổng hợp chất phenolic giảm dưới 30% ở các
pHd và td khác nhau ở Td/25 8C (Bảng 1). Tuy nhiên, sự gia
tăng các hợp chất phenolic được quan sát thấy ở nhiệt độ và
pHd cao hơn (Bảng 2).
Kết quả cho thấy xu hướng chung là giảm nồng độ đường,
trong khi pHd hoặc td tăng lên. Mức giảm tối đa của nồng độ
glucose là hơn 60%, khi dịch thủy phân được xử lý ở pHd 12
trong td 170 giờ ở 25 8C (Bảng 1). Có một xu hướng tương tự
đối với các loại đường khác, trong đó nồng độ của tổng lượng
đường giảm 68% ở các điều kiện xử lý này. Các loại đường bị
thiếu thường được tìm thấy ở dạng axit lactic (Hình 1).
3.2. Nuôi cấy hàng loạt các chất thủy phân đã khử độc
Việc nuôi cấy hàng loạt các chất thủy phân đã khử độc được
thực hiện trong các bình lắc, để kiểm tra hiệu suất của quy
trình khử độc. Một phần 135 ml dịch thủy phân được thêm vào
tổng thể tích 155 ml môi trường tổng hợp hoàn toàn chứa 0,025
g tế bào nấm men có trọng lượng khô và nuôi cấy trong 48 giờ.
Một bản tóm tắt các kết quả quan trọng nhất được trình bày
trong Hình 2 và Hình 3.
Không có chất thủy phân giải độc nào ở pHd 10 có thể được
lên men, bất kể thời gian xử lý (td) và nhiệt độ (Td). Ngoài
ra, không quan sát thấy sự tiêu thụ glucose và sự hình thành
ethanol trong quá trình nuôi cấy các chất thủy phân đã khử độc
ở td /0.
Tuy nhiên, tăng một trong hai biến này, tức là
Machine Translated by Google

Bảng 1

Thành phần dịch thủy phân sau khi xử lý overliming ở 25 8C khác nhau

Thời gian điều trị td (h)

0
Điều trị pH (pHd)

10

11

12
Glucose (g/l) Manose (g/l)

20,1

20,1

18,6
18,4

20,1

16,6
4,4

3,5

3,6
7,8

7,7

7
2,03

0,78

1,51
518
Galactose (g/l) Xylose (g/l) HMF (g/l) Furfural (g/l) Acetic (g/l) Tổng phenol (g/l)

0,40

0,82

0,28
2,8

2,4
3,0
2,5

2,4

2,4

10 19,8 17,9 4,1 7,5 1,91 0,37 2,8 2,4

1 1 11 19,4 18,1 2,8 7,3 1,32 0,64 2,8 2,4

1 12 17,4 15,8 3 6,4 0,49 0,06 2,5 2,2

(2002
Millat
trình
522/
sinh
515
cộng
Hóa
Quá
sự.
38
và
R. 20

20

20

170

170

170

ban 2
10

11

12

10

11

12
20.6

19.6

13,5

18,5

18,9

10.6
19.7

20

12.7

16,5

18.7

9,5
3.7

3.3

0,6

3.1

3.4

1.3
7.3

6.6

7,5

7.2

1.8
1,43

0,56

0,02

1.19

0,35

0,04
0,27

0,06

0,00

0,29

0,06

0,00
2.7

2.7

2.7

2,5

2.9

2,5
2.3

2.2

2.1

2.4

1.8

2.7

Thành phần của dịch thủy phân sau khi xử lý overliming ở 60 8C khác nhau

Thời gian điều trị td (h) Điều trị pH (pHd) Glucose (g/l) Manose (g/l) Galactose (g/l) Xylose (g/l) HMF (g/l) Furfural (g/l) Acetic (g/l) Tổng phenol (g/l)

0 10 19,5 17,6 3,9 7,6 1,96 0,38 2,7 2,3

0 11 19,4 18,4 3,2 7,3 1,89 0,89 3,1 1,7

0 12 19,8 19,8 3,4 7,3 1,59 0,74 3,1 2,3

1 10 19.1 17.3 3,8 7,5 1,57 0,28 2.3 2.4

1 11 20,0 20.1 3,5 7.4 1,39 0,63 3.0 1.8

1 12 18.4 19.8 2.4 6.1 0,35 0,17 3.1 6,0

20 10 20.4 20.4 3.6 7.3 1,55 0,28 2,8 2.3

20 11 16.1 16,9 2.9 5.4 0,08 0,02 2,8 3.0

20 12 5,8 5,7 1.2 0,9 0,02 0,00 2.9 4,5

170 10 18.7 17.1 3.1 7.3 1,35 0,35 2,8 2.1

170 15,5 14,2 2,7 5,7 0,27 0,05 2,7 2,6

170 11 12 7,1 6,6 1,3 1,0 0,04 0,00 2,9 3,6

Machine Translated by Google
R. Millati và cộng sự. / Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522
Hình 1. Sơ đồ nồng độ của các loại đường có thể lên men ở các pHd giải
độc khác nhau là 10 (j), 11 (k) và 12 (') và tạo ra axit lactic ở pHd
là 10 (I), 11 (m) và 12 (^ ) với các thời gian xử lý khác nhau (td) ở
hai Td khác nhau là (a) 25 8C và (b) 60 8C.
pHd và td, sẽ làm tăng khả năng lên men. Trong số các sản
phẩm thủy phân đã khử độc trong 1 giờ, những chất duy nhất
có pHd 12 có thể lên men được, nhưng có giai đoạn trễ dài
(Hình 2 và 3). Pha trễ của dịch thủy phân được xử lý ở 25 8C
Hình 2. Hồ sơ sản xuất ethanol, tiêu thụ glucose và tổng số furan đối với các dịch thủy phân đã khử độc ở pHd là 10 (j), 11 (k) và 12 (') và các td
khác nhau là 0, 1, 20 và 170 h ở 25 8C .
519
hơi ngắn hơn, vì 1,5 g/l ethanol đã được sản xuất sau 24
giờ canh tác.
Khả năng lên men của các sản phẩm thủy phân được xử lý
ở pHd 11 phụ thuộc vào thời gian xử lý và tăng lên bằng
cách tăng 'td'. Mặc dù các chất thủy phân được xử lý ở pHd
này trong 0 và 1 giờ đều không thể lên men ở cả Td, nhưng
thời gian xử lý 20 giờ ở 25 8C làm cho nó có thể lên men
được nhưng với giai đoạn trễ dài (Hình 2). Tăng td lên
170 h sẽ làm giảm pha trễ. Việc xử lý ở nhiệt độ cao hơn
(Td /60 8C) dẫn đến khả năng lên men kém hơn: ở pHd 11 và
td trong 20 giờ, các chất thủy phân không thể lên men được
và đến td trong 170 giờ, chúng có thể lên men nhưng với
giai đoạn trễ dài.
Khả năng lên men tốt nhất thu được ở pHd 12, mặc dù td
đóng một vai trò quan trọng trong kết quả.
Các chất thủy phân được xử lý nhanh ở pHd 12, dẫn đến
không lên men trong vòng 48 giờ. Tuy nhiên, khi td tăng lên
1 giờ ở nhiệt độ 25 hoặc 60 8C, các sản phẩm thủy phân đã
khử độc có thể lên men được nhưng với giai đoạn trễ dài
(Hình 2 và 3). Tăng thêm td lên 20 hoặc 170 giờ dẫn đến các
chất thủy phân có thể lên men hoàn toàn.
Mặt khác, td tăng dẫn đến giảm nồng độ đường và hình thành
axit lactic (Hình 1).
Machine Translated by Google
520 R. Millati và cộng sự. / Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522
Hình 3. Hồ sơ sản xuất ethanol, tiêu thụ glucose và tổng số furan đối với các dịch thủy phân đã khử độc ở pHd là 10 (j), 11 (k) và 12 (') và các td khác nhau
là 0, 1, 20 và 170 h ở 60 8C .
3.3. Nuôi cấy liên tục các chất thủy phân khử độc
Hiệu suất giải độc đã được nghiên cứu trong quá trình
canh tác kỵ khí liên tục bằng các tế bào cố định của S
cerevisiae. Môi trường cấy (100 ml) chứa 0,5 g tế bào khô
được cố định trong tổng thể tích 500 ml hạt có đường kính
3/4 mm. Quá trình lên men được bắt đầu với một đợt canh
tác ở pH 5 trong môi trường tổng hợp hoàn toàn và 50 g/l
glucose làm nguồn carbon và năng lượng. Các tế bào được
lớn lên trong các hạt để đạt được nồng độ khoảng 5 g/l.
Để kiểm tra khả năng lên men của các sản phẩm thủy phân
chưa khử độc tố trong canh tác liên tục, nó được đưa vào
Hình 4. Tốc độ phát triển carbon dioxide trong quá trình nuôi cấy liên tục
dịch thủy phân đã khử độc bằng S. cerevisiae cố định ở hai tỷ lệ pha loãng
khác nhau. Các đường đứt nét hiển thị các điểm mà nguồn cấp dữ liệu đã
được thay đổi.
phản ứng sinh học với tốc độ pha loãng (D) là 0,1 và 0,2
h1 trong các thí nghiệm khác nhau. Việc cho ăn tiếp tục
trong 40 giờ, nhưng các tế bào không thể tồn tại trong cả
hai trường hợp, tốc độ tiến hóa carbon dioxide (CER) giảm
xuống 0 và lượng glucose còn lại được tăng lên đến mức
glucose có trong thức ăn.
Việc nuôi cấy liên tục zate thủy phân đã khử độc được
thực hiện tương tự như zate chưa khử độc bằng cách bổ
sung dịch thủy phân ở các tỷ lệ pha loãng 0,2, 0,4, 0,6,
0,8 và 1,0 h1 . Dịch
mức ởthủy
pHd phân được
12, td chọn
là 20 giờđãvàđược
ở Tdkhử quá
là 25
8C. Phương pháp xử lý ở những điều kiện này đã được chọn
do khả năng lên men thích hợp của nó dẫn đến việc canh tác
hàng loạt. Việc canh tác đã được thực hiện và CER đã được
ổn định trong tất cả các giai đoạn. Việc canh tác tiếp tục
ở mỗi giai đoạn trong 5 thời gian cư trú để đảm bảo đạt
được các điều kiện ở trạng thái ổn định. Quá trình cấp
liệu dừng lại giữa hai giai đoạn cho đến khi CER giảm
xuống dưới 2% CER ở điều kiện trạng thái ổn định (ví dụ:
xem Hình 4). Một bản tóm tắt các kết quả ở mỗi tỷ lệ pha
loãng được trình bày trong Bảng 3. Quá trình khử độc của
dịch thủy phân đã chọn đã hoàn toàn thành công, vì hơn
80% glucose và 70% mannose đã được tiêu thụ ngay cả ở tỷ
lệ pha loãng cao. Lượng glucose còn lại bằng 0 ở tốc độ
pha loãng thấp nhất và tăng lên 2,1 g/l ở D cao nhất, tức
là 1,0 h1 được phát hiện dưới 0,03 g/l trong các lò phản
ứng sinh học ở . Furfural và HMF còn lại
Machine Translated by Google
R. Millati và cộng sự. / Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522
Bảng 3
Lượng đường, furan và axit axetic còn lại trong môi trường trong quá trình nuôi cấy liên tục dịch thủy phân đã khử độc ở pHd 12, td 20 h và Td
25 8C bởi S. cerevisiae cố định ở các tỷ lệ pha loãng khác nhau
Nồng độ (g/l) D0.2 h1 D0.4 h1
glucose dư thừa 0,28
mannob còn lại 0 1,49
furfural dư 0,93 0,025
HMF dư 0,002 0,013
A-xít a-xê-tíc 0,008 1,40 2,31
Nồng độ glucose trong thức ăn12,1 g/l.
Một
b
Nồng độ Mannose trong thức ăn11,4 g/l.
tất cả các thí nghiệm. Nồng độ axit axetic trong lò phản ứng
sinh học thấp hơn nồng độ tương ứng trong thức ăn (Bảng 3),
có nghĩa là một phần axit đã được men tiêu thụ.
4. Thảo luận
Giải độc bằng cách khử vôi là một phương pháp đầy hứa hẹn
để tăng khả năng lên men của dịch thủy phân axit loãng. Quá
trình truyền thống thông thường thường được thực hiện bằng
cách thêm một bazơ, ví dụ như Ca(OH)2 lên đến pH 10 hoặc 11
ở 25 hoặc 60 8C, chờ 30/60 phút và sau đó giảm độ pH xuống
mức phù hợp cho quá trình lên men [11 Ø15,16,18]. Kết quả của
công việc hiện tại cho thấy tầm quan trọng của việc lựa chọn
pH giải độc phù hợp (pHd), thời gian (td) và nhiệt độ (Td).
Những biến số này có thể ảnh hưởng nghiêm trọng đến kết quả
của quá trình giải độc và lượng đường trong dịch thủy phân.
Nói chung, ảnh hưởng của ba yếu tố này đối với quá trình cai
nghiện có thể được tóm tắt như sau:
1) Bất kỳ sự gia tăng pHd nào cũng sẽ tăng cường giải độc
và tăng khả năng lên men của các chất thủy phân, nhưng
cũng gây ra sự suy giảm nồng độ đường.
2) Quá trình giải độc không phải là một quá trình nhanh chóng.
Thời gian xử lý (td) đóng một vai trò quan trọng trong
đó, và thời gian dài hơn làm tăng khả năng lên men của
các chất thủy phân.
3) Ảnh hưởng của nhiệt độ Td không mạnh bằng ảnh hưởng của
pHd và td. Việc xử lý ở nhiệt độ thấp hơn thường dẫn
đến khả năng lên men tốt hơn.
Hiệu quả của việc thêm vôi là rõ ràng trong việc giảm nồng
độ furan (Bảng 1 và 2), trong khi nồng độ axit axetic không
thay đổi và tổng hợp chất phenolic chỉ giảm vài phần trăm.
Trong số các hợp chất phenolic, các hợp chất phenol ít bị
thay thế hơn có lẽ là nguyên liệu gây ức chế nhất trong các
chất thủy phân [21]. Phenol và vanillin là những hợp chất
phenolic mạnh nhất, nhưng chúng có tác dụng ức chế biên ở
nồng độ 1 g/l [22]. Mặc dù furan không được coi là chất ức
chế mạnh trong
521
D0.6 h1 D0.8 h1 D1.0 h1
1,61 1,69 2,10
3,33 2,51 2,19
0,025 0,015 0,012
0,011 0,016 0,016
2,28 1,77 1,52
nồng độ thấp như đã xuất hiện trong các chất thủy phân
[7/9 ], nhưng có vẻ như việc loại bỏ một phần furfural và
HMF là đủ để làm cho chất thủy phân có thể lên men được.
Axit axetic đôi khi được coi là chất ức chế và đôi khi là
chất tăng cường cho quá trình lên men [19,23].
Axit axetic sẽ ức chế quá trình lên men, nếu nồng độ axit
axetic không phân ly tăng cao hơn 5 g/l. Nó khác xa với điều
kiện hiện tại trong công việc hiện tại. Kết quả của công việc
hiện tại phù hợp với các báo cáo trước đây về tác động của
việc ghi đè [11,16]. Tuy nhiên, cần lưu ý rằng phép ngoại
suy định lượng của các giá trị được trình bày trong công
trình hiện tại hoặc công trình trước đó cho bất kỳ chất thủy
phân nào khác phải được thực hiện rất cẩn thận, vì quá trình
thủy phân thường không thể lặp lại tốt.
Đạt được khả năng lên men tốt hơn của các chất thủy phân
độc hại bằng cách trộn quá nhiều phải trả giá bằng việc giảm
nồng độ đường. Sự phân hủy đường không nghiêm trọng đến mức
pHd 11 trong một thời gian ngắn, trong khi một phần lớn đường
có thể bị phân hủy ở độ pH cao hơn trong một thời gian dài
hơn. Sự xuống cấp của đường đi kèm với sự xuất hiện của axit
lactic (Hình 3), là sản phẩm được biết đến của quá trình phân
hủy đường trong dung dịch kiềm [24,25]. Các hexose được cho
là phân hủy đầu tiên thành 3-desoxy-hexosone, sau đó thành
glyceraldehyd và metyl glyoxal hoặc axit metasaccharic, sau
đó thành axit lactic và aldehyde glyceric [24].
Có thể kết luận rằng ghi đè không phải là một quá trình
đơn giản với các biến được xác định. Tất cả các biến được
nghiên cứu bao gồm độ pH, thời gian và nhiệt độ giải độc, và
một số biến khác như loại bazơ được sử dụng, có thể ảnh
hưởng đến mức độ giải độc. Vì pHd hoặc td cao hơn giúp giải
độc tốt hơn nhưng phải trả giá bằng sự cạn kiệt đường, có
lẽ cần phải tối ưu hóa cho từng mẻ thủy phân để tìm ra các
điều kiện khử tốt nhất.
Người giới thiệu
[1] Sjo¨stro¨m E. Hóa học gỗ: nguyên tắc cơ bản và ứng dụng.
Nhà xuất bản Học thuật, 1993.
Machine Translated by Google

522 R. Millati và cộng sự. / Quá trình Hóa sinh 38 (2002) 515/522

[2] Taherzadeh MJ, Eklund R, Gustafsson L, Niklasson C, Lide´n G. [14] Rivard CJ, Engel RE, Hayward TK, Nagle NJ, Hatzis C, Philippidis GP. Đo khả

Đặc tính và quá trình lên men của các chất thủy phân axit loãng từ gỗ. Ind năng ức chế và giải độc của dịch thủy phân tiền xử lý sinh khối để sản xuất

Eng Chem Res 1997;36:4659/65. ethanol. Appl Biochem Biotechnol 1996;57/58:183/91 (Hội nghị chuyên đề lần

[3] Larsson S, Quintana-Sainz A, Reimann A, Nilvebrant NO, Jonsson LJ. Ảnh thứ 10 về Công nghệ sinh học cho nhiên liệu và hóa chất, 1995).

hưởng của các hợp chất thơm có nguồn gốc từ lignocellulose đối với sự tăng

trưởng và quá trình lên men etanol trong môi trường hạn chế oxy của

Saccharomyces cerevisiae. Appl Biochem Biotechnol 2000;84/ 86:617/32. [15] Martinez A, Rodriguez ME, York SW, Preston JF, Ingram LO.

Ảnh hưởng của phương pháp xử lý Ca(OH)2 ('overliming') đối với thành phần

[4] Taherzadeh MJ, Niklasson C, Lide´n G. Chuyển đổi các chất thủy phân axit và độc tính của sản phẩm thủy phân hemiaellulose bã mía. Công nghệ sinh học

loãng của cây vân sam và bạch dương thành ethanol bằng cách lên men theo Bioeng 2000;69:526/36.
mẻ. Bioresour Technol 1999;69:59 /66. [16] Martinez A, Rodriguez ME, Wells ML, York SW, Preston JF, Ingram LO. Giải

[5] Nilsson A, Taherzadeh MJ, Lide´n G. Sử dụng phản ứng bước động để kiểm soát độc dung dịch axit loãng thủy phân ligno cellulose bằng vôi. Chương trình

quá trình chuyển đổi theo mẻ của các sản phẩm thủy phân lignocellulose thành Công nghệ sinh học 2001;17:287/93.

ethanol. Công nghệ sinh học J 2001;89:41/53. [17] Ranatunga T, Jervis J, Helm R, McMillan J, Wooley R. Ảnh hưởng của việc

[6] Taherzadeh MJ, Gustafsson L, Niklasson C, Lide´n G. Chuyển đổi furfural vượt quá giới hạn đối với độc tính của lignocellulose tiền xử lý bằng axit
trong quá trình lên men glucose hiếu khí và kỵ khí theo mẻ của Saccharomyces loãng: vai trò của chất vô cơ, axit uronic và chất hữu cơ hòa tan trong

cerevisiae . J Biosci Bioeng 1999;87:169/74. ether. Enzyme Microb Technol 2000;27:240/7.

[18] Leonard R, Hajny G. Lên men đường gỗ thành rượu etylic. Ind Eng Chem

[7] Taherzadeh MJ, Gustafsson L, Niklasson C, Lide´n G. Physiolo gical effects 1945;37:390/5.

of 5-hydroxymethylfurfural on Saccharomyces cer evisiae . Công nghệ sinh [19] Taherzadeh MJ, Lide´n G, Gustafsson L, Niklasson C. Ảnh hưởng của việc
học Appl Microbiol 2000;53:701/8. thiếu hụt pantothenate và bổ sung axetat đối với quá trình lên men glucose

[8] Taherzadeh MJ, Gustafsson L, Niklasson C, Lide´n G. Tác dụng ức chế của kỵ khí theo mẻ của Saccharomyces cerevisiae . Công nghệ sinh học Appl

furfural đối với quá trình nuôi cấy hàng loạt hiếu khí của Saccharomyces Microbiol 1996;46:176/82.

cerevisiae phát triển trên ethanol và/hoặc axit axetic. J Biosci Bioeng [20] Nilvebrant KHÔNG, Reimann A, Larsson S, Jonsson LJ. Giải độc các chất thủy
2000;90:374/80. phân lignocellulose bằng nhựa trao đổi ion. Công nghệ sinh học Appl Biochem

[9] Horva´th IS, Taherzadeh MJ, Niklasson C, Lide´n G. Ảnh hưởng của furfural 2001;91/93:35/49.

đối với quá trình nuôi cấy liên tục kỵ khí của Saccharomyces [21] Clark T, Mackie K. Chất ức chế lên men trong chất thủy phân gỗ có nguồn gốc
cerevisiae . Công nghệ sinh học Bioeng 2001;75:540/9. từ gỗ mềm Pinus radiata. Công nghệ sinh học J Chem Tech 1984;34B:101/10.

[10] Taherzadeh MJ, Millati R, Niklasson C. Nuôi cấy liên tục các chất thủy phân

axit loãng thành etanol bằng Sacchar cố định . Công nghệ sinh học Appl [22] Pfeifer PA, Bonn G, Bobleter O. Ảnh hưởng của các sản phẩm phân hủy sinh

Biochem
S, Reimann A, Nilvebrant NO, 2001;95:45/57.
Jonsson LJ. So omyces cerevisiae
sánh các [11] khác
phương pháp Larsson
nhau khối đối với quá trình lên men glucose thành ethanol bởi Sacchar omyces

để giải độc các chất thủy phân lignocellulose của cây vân sam. Công nghệ sinh học carlsbergensis W 34. Biotechnol Lett 1984;6:541/6.

Appl Biochem 1999;77/ 79:91/103. [23] Taherzadeh MJ, Niklasson C, Lide´n G. Axit axetic*/bạn hay thù trong quá

trình chuyển đổi kỵ khí hàng loạt glucose thành etanol bởi Saccharomyces

cerevisiae ? Chem Eng Sci 1997;52:2653/9.

[12] Jonsson LJ, Palmqvist E, Nilvebrant NO, Hahn-Hagerdal B. [24] Telegdy-Kovats L, Orsi F, Rasky K. Động học của quá trình sản xuất axit

Giải độc chất thủy phân gỗ bằng laccase và peroxidase từ nấm thối trắng lactic trong quá trình phân hủy glucose và fructose trong môi trường kiềm.

Trametes versicolor. Công nghệ sinh học Appl Microbiol 1998;49:691/7. Nahrung 1970;14:9/12.

[25] Ohashi K, Takahashi T. Sử dụng tinh bột. II. Phân hủy glucozơ trong dung

[13] Nigam JN. Sản xuất etanol từ thủy phân hemicellulose rơm lúa mì bằng Pichia dịch kiềm. Res Bull Gifu Coll Agr (Nhật Bản) 1950;68:74 /9.

stipitis. Công nghệ sinh học J 2001;87:17/27.