第 51 卷第 3 期 辽 宁 化 工 Vol.51，No.

3
2022 年 3 月 Liaoning Chemical Industry March，2022

GC 法测定潜在基因毒性杂质
1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯
闵婕，王恩，林萍，兰公剑*
（南京正大天晴制药有限公司，江苏 南京 210046）

摘 要：建立了潜在基因毒性杂质 1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯的 GC-FID 检测方法。采用 DB-624

（30 m×0.32 mm，1.8 µm）毛细管色谱柱，柱温为程序升温，载气流速为 2.0 mL·min-1，进样口温度为
280 ℃，检测器温度为 280 ℃，进样量为 1.0 μL，分流比为 10∶1。结果表明：1-(1-氯乙基)-2,3-二甲
基苯在 0.92～13.82 μg·mL-1 范围内线性关系良好（r=0.999 8），检测限为 0.46 μg·mL-1 ，定量限为
0.92 μg·mL-1，加标回收率平均值为 115.7%（RSD=1.5%，n=9）。该方法灵敏度高，准确简便，适用于
潜在基因毒性杂质 1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯的测定。
关 键 词： 1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯；潜在基因毒性杂质；气相色谱法
中图分类号：O657.7 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2022）03-0442-03

基因毒性杂质或者潜在基因毒性杂质存在于药 XSE205DU 型电子天平，美国梅特勒-托利多公司。

物生产的各个阶段，起始物料、中间体、副产物、 1.2 试药
催化剂、残留溶剂、原料药储存不当等均可能引入 中间体 4-[1-(2,3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑，
或产生基因毒性杂质[1-2]。目前对磺酸酯类[3]、亚硝 99%，批号 01、02、03，南京正大天晴制药有限公
胺类[4]、卤代烷烃[5-7]等基因毒性杂质的研究在不断 司；杂质 A 对照品，91%，济南诚汇双达化工有限
深入，可采用多种方法进行评估和分析，并量化控 公司；杂质 B，99%，上海升华医药科技有限公司；
制基因毒性杂质，以保障用药安全。 乙腈，色谱纯，天地试剂。
1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯（杂质 A）是医药化
工产品 4-[1-(2,3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑的合成 2 方法与结果
起始物料，其结构中含卤代烷烃的基因毒性杂质警
2.1 溶液配制
示结构，为潜在基因毒性杂质，目前尚未有文献报
溶剂：乙腈。
导杂质 A 的检测方法。杂质 A 在水相体系中不稳定，
对照品贮备液：取杂质 A 和杂质 B 对照品各约
易水解生成 1-(2,3-二甲基苯基)乙醇（杂质 B），反
15 mg，精密称定，置 200 mL 量瓶中，加溶剂溶解
应过程见图 1。因此，本文开发了气相色谱分析方
并稀释定容，制成每 1 mL 中约含 75 μg 的溶液。
法，可良好分离杂质 A 和杂质 B，该方法灵敏度
对照品溶液：精密量取杂质 A 对照品贮备液
高[11]，适用于潜在基因毒性杂质 A 的检测。
2 mL，置 20 mL 量瓶中，用溶剂稀释定容，制成每
1 mL 中约含 7.5 μg 的溶液。
供试品溶液：取样品约 0.2 g，精密称定，置
20 mL 量瓶中，加溶剂超声溶解，并稀释定容，制
成每 1mL 中约含 10 mg 的溶液。
图 1 杂质 A 的水解反应路线图 系统适用性溶液：取样品约 0.2 g，精密称定，
置 20 mL 量瓶中，加入杂质 A、杂质 B 对照品贮备
1 仪器与试药 液各 2 mL，加溶剂超声溶解并稀释定容，制成每
1.1 仪器 1 mL 中约含样品 10 mg、杂质 A 和杂质 B 各 7.5 μg
7697A-7890B 气相色谱仪，美国 Agilent 公司； 的溶液。
收稿日期： 2021-08-20
作者简介： 闵婕（1990-），女，江苏省南京市人，工程师，硕士， 2015 毕业于沈阳化工大学化学工程与技术专业，研究方向：药物分析。
通信作者： 兰公剑（1981-），男，高级工程师，研究方向：药物分析、药品质量研究与管理。
第 51 卷第 3 期 闵婕，等：GC 法测定潜在基因毒性杂质 1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯
2.2 色谱参数
色谱柱：DB-624（30m×0.32mm，1.8 µm）；柱
-1
温：起始温度 60 ℃，维持 2 min，以 20 ℃·min
-1
的速率升温至 160 ℃，维持 10 min，再以 20 ℃·min
的速率升温至 240 ℃，维持 15 min；进样口温度为
280 ℃；检测器（FID）温度为 280 ℃；载气为氮
-1
气，流速为 2.0 mL·min ；进样量为 1.0 μL，分流比
为 10∶1。
2.3 专属性
精密量取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液、
系统适用性溶液各 1.0 μL，注入气相色谱仪，记录
色谱图，如图 2 所示。由图 2 可知，空白溶剂对杂
质 A 出峰无干扰，系统适用性溶液中杂质 A 与杂质
B 之间的分离度为 2.0，供试品溶液中无其他杂质峰
干扰杂质 A，结果表明，该方法专属性良好。
a—空白溶剂；b—对照品溶液；c—供试品溶液；d—系统适用性溶液
图 2 各溶液色谱图
2.4 线性与范围
分别精密量取杂质 A 对照品贮备液 0.2、0.4、
1.0、1.6、2.0、3.0 mL，置 20 mL 量瓶中，加溶剂稀
释定容，作为 10%、20%、50%、80%、100%和 150%
系列的线性溶液。取上述系列线性溶液 1.0 μL，注
入气相色谱仪，记录色谱图。以进样质量浓度
-1
（μg·mL ）为横坐标（x）与相应的峰面积为纵坐
标 （ y）， 进 行 线 性 回 归 分 析 ， 计 算 回 归 方 程 ：
y=1.232 6x+0.122 0。结果表明，杂质 A 在质量浓度
-1
0.92～13.82 μg·mL 范围内线性关系良好，相关系
数 r 为 0.999 8，响应因子 RSD 为 7.8%。
2.5 定量限、检测限
取杂质 A 对照品溶液，逐级稀释，按信噪比
≥10∶1 配制成定量限溶液；按信噪比约为≥3∶1
配制成检测限溶液。精密量取各溶液 1.0 μL，注入
气相色谱仪，记录色谱图。定量限结果为
-1
0.92 μg·mL ，平行配制 6 份，峰面积 RSD 为 3.6%；
443
-1
检测限结果为 0.46 μg·mL 。
2.6 准确度
回收率溶液：取样品约 0.2 g，精密称定，置
20 mL 量瓶中，精密加入杂质 A 对照品贮备液 1.0、
2.0、3.0 mL，加溶剂超声溶解并稀释定容，作为
50%、100%、150%回收率溶液，精密量取各溶液
1.0 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图。杂质 A 的
平均回收率为 115.7%，RSD 为 1.5%（n=9），方法
准确度良好。
2.7 精密度
2.7.1 进样精密度
取“2.1”项下对照品溶液 1.0 μL，注入气相色
谱仪，连续进样 6 针，考察仪器的进样精密度。连
续进样 6 次，杂质 A 保留时间 RSD 为 0.1%，峰面
积 RSD 为 2.2%，进样精密度良好。
2.7.2 重复性
照“2.6”项下 100%回收率溶液，平行配制
6 份，取“2.1”项下对照品溶液、重复性溶液
1.0 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图。6 份重复性
溶液中杂质 A 的检出量平均值为 0.11%，RSD 为
1.4%（n=6），方法的重复性良好。
2.7.3 中间精密度
为考察随机变动因素对精密度的影响，由另一
名分析员独立建立系统，重新配制 6 份重复性溶液，
在不同的日期采用不同仪器进行检测。12 份溶液中
杂质 A 的检出量平均值为 0.10%，RSD 为 3.8%
（n=12），方法的中间精密度良好。
2.8 耐用性
2.8.1 溶液稳定性
取“2.1”项下对照品溶液和供试品溶液，室温
条件下，分别在 0、5、12、24、42 h 测定。结果表
明，不同时间点对照品溶液中杂质 A 峰面积与 0 h
峰面积的比值在 88.3%~101.4%之间，对照品溶液在
室温条件下 42 h 内稳定；供试品溶液在室温放置
42 h 内，不同时间点均未检出杂质 A，供试品溶液
在室温条件下 42 h 内稳定。
2.8.2 耐用性
-1
调整色谱条件参数（流速 2.0±0.2 mL·min 、
柱初温 60±5 ℃、进样口温度 280±5 ℃），取“2.1”
项下系统适用性溶液 1.0 μL，注入气相色谱仪，记
录色谱图。不同色谱条件下杂质 A 的理论板数均大
于 20 000，拖尾因子均为 1.0，与杂质 B 的分离度
均大于 2.0，检出量的极差为 0.01%，方法的耐用性
良好。
444
2.9 样品测定
照气相色谱法（中国药典 2020 年版四部通则
0521）试验，取 3 批中间体，按“2.2”项下方法测
定杂质 A 的质量浓度。结果表明，3 批中间体中杂
质 A 均未检出。
3 结果与讨论
3.1 杂质 A 限度计算
按治疗时长超过 10 年，根据 TTC 法[9]（毒理学
关注阈值）， 长期用药品种的基因毒杂质每日允许最
大摄入量为 1.5 μg[10]。原料药每日最大剂量为 2 mg，
则规定中间体 4-[1-(2,3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑
-1
中杂质 A 的控制限度为 0.075% （1.5 μg·d /2 mg·d ）。
3.2 色谱柱的选择
根据杂质 A 和杂质 B 的极性，选择中等极性色
谱柱 DB-624（30m×0.32mm，1.8 µm）
，采用程序升
温，分离杂质 A 和杂质 B。结果显示，该色谱柱的
色谱峰峰型良好。
3.3 升温程序的选择
为使杂质 A 和杂质 B 能够完全分离，且不受其
他物质的干扰，对升温程序进行考察，结果发现，
升温至 160 ℃，维持 10 min，杂质 A 可与杂质 B
完全分离，空白溶剂无干扰。
辽 宁 化 工 2022 年 3 月
3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑。本文为潜在基因毒性
杂质 1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯的测定提供了新的
分析方法。
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本文建立气相色谱法测定潜在基因毒性杂质
403-409.
1-(1-氯乙基)-2,3-二甲基苯，该方法专属性强、灵敏
度高、准确方便，适用于检测医药化工产品 4-[1-(2,

Determination of Potential Genotoxic Impurity

1- (1-Chloroethyl)-2,3-Dimethylbenzene by GC
MIN Jie, WANG En, LIN Ping, LAN Gong-jian
（Nanjing Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co., Ltd., Nanjing Jiangsu 210046, China）

Abstract: A method for the determination of the potentially genotoxic impurity 1 - (1-chloroethyl) - 2,3-dimethylbenzene by GC-FID
was established. A DB-624 was used as capillary column (30 m×0.32 mm, 1.8 μm) (temperature programming), carrier gas flow rate
was 2.0 mL·min-1, injection temperature and FID temperature both were 280 ℃. Injection volume was 1.0 μL and the split ratio was
10 ∶ 1. The calibration curve was well linear for 1-(1-chloroethyl)-2,3-dimethylbenzene in the range of 0.92~13.82 μg·mL-1
(r = 0.999 8). The LOD and LOQ were 0.46 μg·mL-1 and 0.92 μg·mL-1, respectively．The average recovery was 115.7%, with RSD of
1.5% (n=9). The method is sensitive, accurate and convenient. It is suitable for the determination of the potential genotoxic impurity
1- (1-chloroethyl)-2,3-dimethylbenzene.
Key words: 1-(1-Chloroethyl)-2,3-dimethylbenzene; Potentially genotoxic impurity; GC