Đại học Huddersfield Kho lưu trữ: Alyassin, Mohamad

Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.
com
Đại học Huddersfield Kho lưu trữ
Alyassin, Mohamad
ARABINOXYLAN PREBIOTICS HỢP TÁC SẢN XUẤT TRONG CÁC NHÀ MÁY SINH
HỌC TÍCH HỢP
Trích dẫn gốc
Alyassin, Mohammad (2019) ARABINOXYLAN HỢP TÁC SẢN XUẤT TRONG CÁC NHÀ
MÁY SINH HỌC TÍCH HỢP. Luận án Tiến sĩ, Đại học Huddersfield.
Phiên bản này có tại http://eprints.hud.ac.uk/id/eprint/34941/
Kho lưu trữ Đại học là một bộ sưu tập kỹ thuật số về đầu ra nghiên cứu của Đại học, sẵn có trên
Truy cập Mở. Bản quyền và Quyền nhân thân đối với các mục trên trang web này được giữ bởi cá
nhân tác giả và/hoặc chủ sở hữu bản quyền khác. Người dùng có thể truy cập các mục đầy đủ
miễn phí; các bản sao của các mục toàn văn nói chung có thể được sao chép, hiển thị hoặc thực
hiện và cung cấp cho bên thứ ba ở bất kỳ định dạng hoặc phương tiện nào cho mục đích nghiên
cứu hoặc học tập cá nhân, giáo dục hoặc phi lợi nhuận mà không cần sự cho phép hoặc tính phí
trước, với điều kiện:
• Các tác giả, tiêu đề và chi tiết thư mục đầy đủ được ghi có trong bất kỳ bản sao nào;
• Một siêu liên kết và/hoặc URL được bao gồm cho trang siêu dữ liệu gốc; Và
• Nội dung không bị thay đổi dưới bất kỳ hình thức nào.
Để biết thêm thông tin, bao gồm chính sách và thủ tục đệ trình của chúng tôi, vui lòng
liên hệ với Nhóm Kho lưu trữ tại: E.mailbox@hud.ac.uk.
http://eprints.hud.ac.uk/
HỢP TÁC SẢN XUẤT ARABINOXYLAN PREBIOTICS
TRONG CÁC NHÀ MÁY SINH HỌC TÍCH HỢP
MOHAMMAD ALYASSIN
Một luận án nộp cho Đại học Huddersfield để hoàn thành một phần của
các yêu cầu đối với bằng tiến sĩ triết học
Đại học Huddersfield
tháng 1 năm 2019

tuyên bố bản quyền
I. Tác giả của luận văn này (bao gồm cả các phụ lục và/hoặc phụ lục của luận văn này
luận án) sở hữu bất kỳ bản quyền nào trong đó ("Bản quyền") và ông đã trao cho Trường Đại học
của Huddersfield quyền sử dụng bản quyền đó cho bất kỳ hành chính,
mục đích quảng bá, giáo dục và/hoặc giảng dạy.
II. Các bản sao của luận án này, toàn bộ hoặc trích đoạn, chỉ có thể được thực hiện theo
với các quy định của Thư viện trường đại học. Chi tiết các quy định này có thể
lấy từ Thủ thư. Trang này phải là một phần của bất kỳ bản sao nào như vậy
làm ra.
III. Quyền sở hữu của bất kỳ bằng sáng chế, thiết kế, thương hiệu và bất kỳ và tất cả các
quyền sở hữu trí tuệ ngoại trừ Quyền tác giả (“Sở hữu trí tuệ
Quyền”) và bất kỳ bản sao nào của các tác phẩm có bản quyền, ví dụ như biểu đồ và
bảng (“Bản sao”), có thể được mô tả trong luận án này, có thể không
thuộc sở hữu của tác giả và có thể thuộc sở hữu của bên thứ ba. trí tuệ như vậy
Quyền sở hữu và Bản sao không thể và không được cung cấp cho
sử dụng mà không có sự cho phép trước bằng văn bản của (những) chủ sở hữu có liên quan
Quyền sở hữu trí tuệ và/hoặc sao chép.

trừu tượng
Hợp tác sản xuất prebiotic Arabinoxylan trong các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp
trừu tượng
Trong các nhà máy tinh chế sinh học dựa trên ngũ cốc, các loại hạt khô có chất hòa tan trong máy chưng cất (DDGS) là nguyên liệu chính
sản phẩm phụ, được sử dụng trong các công thức thức ăn chăn nuôi có giá trị tương đối thấp. một chuyên ngành
thành phần của DDGS là arabinoxylan (AX), là một thành phần thực phẩm tiềm năng và
nguồn prebiotic mới. Việc sản xuất AX sử dụng một lượng lớn ethanol,
đưa ra phạm vi tích hợp khả thi của quá trình chiết xuất AX trong nhà máy tinh chế sinh học. Trong khi đó,
sản xuất enzyme của prebiotic arabinoxylan oligosacarit (AXOS) và xylo-

oligosacarit (XOS) được các nhà công thức thức ăn chăn nuôi quan tâm, vì những prebiotic này
tăng cường chuyển đổi thức ăn đáng kể.
Kịch bản tích hợp sẽ được triển khai trên các luồng đang xử lý, Distillers
Hạt ướt (DWG) và Chất hòa tan trước khi chúng được kết hợp. Tuy nhiên, đây không phải là
sẵn sàng để nghiên cứu, vì các nhà máy lọc sinh học là các quy trình khép kín không cho phép
quá trình lấy mẫu của các dòng này. Do đó, dự án này đã sử dụng GUNT CE-640
đơn vị cồn sinh học để sản xuất phụ phẩm ướt đại diện cho DWG thương mại.
Lên men mười mẻ 6 kg lúa mì thu được trung bình 1275 g (db) DWG
với hàm lượng 16% AX và 800 g Chất khô có hàm lượng 11,4% AX.
Xử lý DWG bằng enzyme với endoxylanase thương mại mang lại ít hơn
3% w/w của oligosacarit prebiotic. AX polysacarit được chiết xuất bằng kiềm
oxy hóa, có và không có tinh chế thêm bằng enzym, để thu được hàm lượng AX là 44%
và 19% tương ứng. Xử lý bằng enzym chỉ chuyển đổi 6% AX thành

AXOS/XOS, với việc sản xuất đáng kể các monosacarit không mong muốn.
Những hạn chế trong các phương pháp phân tích được sử dụng đã thúc đẩy sự phát triển của HPAEC-
Phương pháp PAD để đo đồng thời mono- và oligosacarit và

axit uronic. Phương pháp mới đã được sử dụng để định lượng cấu hình của XOS trong thương mại
vật liệu và sau quá trình xử lý enzyme của vật liệu sinh khối và oligosacarit
tiêu chuẩn lên đến DP6, cái sau tiết lộ phương thức hoạt động của xylanase. Thương mại
xylanase được điều tra cho thấy ưa thích các phân tử XOS lớn hơn và không có khả năng
tác động lên các phân tử phân nhánh (AXOS).

trừu tượng
Hai loại AX với các kiểu phân nhánh khác nhau đã được sản xuất; AX phân nhánh cao
đã được chiết xuất hóa học từ DWG với quá trình tinh chế tiếp theo để tạo ra độ tinh khiết 51% w/w,
và AX ít phân nhánh hơn được tạo ra từ phần Chất hòa tan bằng siêu lọc để tạo ra
độ tinh khiết 74%. Xử lý bằng enzyme đã chuyển đổi 46% Chất hòa tan AX thành oligosacarit,
cho thấy đây là một nguyên liệu đầy hứa hẹn để sản xuất XOS.
Mohamad Alyassin Luận án tiến sĩ, tháng 1 năm 2019

Mục lục
Mục lục
1 Arabinoxylan, một đồng sản phẩm tiềm năng của các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp ..................... 15
1.1 Các nhà máy lọc dầu sinh học ở Vương quốc Anh gần đây và bối cảnh toàn cầu ............................................ ...... 15
1.2 Arabinoxylan là đồng sản phẩm của quá trình sản xuất cồn sinh học ..................................... 21
1.3 Phạm vi của luận án ............................................... ................................................... 24
2 Cấu trúc và tính chất hóa lý của Arabinoxylan .................................. 26

2.1 Giới thiệu ............................................................ .................................................... ..... 26
2.2 Sơ lược về arabinoxylan ......................................................... ................................ 26
2.3 Cấu trúc của Arabinoxylan ................................................ .................................... 28
2.4 Phân loại arabinoxylan ................................................ ............................. 31
2.5 Sự xuất hiện của arabinoxylan ................................................ ................................ 31
2.6 Tính chất hóa lý của Arabinoxylan ................................................. ........31
Độ hòa tan trong nước .............................................................. .................................................... ............... 32
Độ nhớt .................................................... .................................................... .................... 32
Sức chứa nước............................................... .................................................... .... 33
Khả năng tạo gel oxy hóa và tạo gel ............................................ ....................... 33
Ổn định bọt ............................................................................ .................................................... ............... 34
2.7 Mục tiêu nghiên cứu .............................................................. .............................................. 34
2.8 Tóm tắt ............................................................ .................................................... ..........35
3 Sản xuất quy mô thí điểm các sản phẩm phụ của nhà máy lọc sinh học .................................. ....36
3.1 Giới thiệu ............................................................ .................................................... ..... 36
3.2 Nhà máy tinh chế cồn sinh học – quá khứ, hiện tại và tương lai............................................. ... 36
Xay ướt ................................................................. .................................................... ......................37
Xay khô ............................................................................. .................................................... ....................... 38
3.3 Chưng cất ngũ cốc khô với chất hòa tan .................................................... ......................... 39
DDGS và DWG ............................................................ .................................................... ................42
3.4 Vật liệu và thiết bị được sử dụng để sản xuất cồn sinh học và DWG quy mô thí điểm . 43
Hóa chất và enzyme ................................................................ .................................................... ... 43
Nhà máy sản xuất cồn sinh học CE-640 ............................................ .................................................... 44
3.5 Các phương pháp được sử dụng để sản xuất cồn sinh học và DWG ............................................. .46
Phương pháp lên men .................................................................. .................................................... ..... 46
3.6 Đặc tính của các sản phẩm phụ .................................................. ......................... 49
Độ tinh khiết của etanol ................................................................ .................................................... .................. 49
Phân tích đường cấu thành .............................................................. ................................................... 49
Phân tích hàm lượng đạm ............................................................ .................................................... ... 50
Xác định hàm lượng tro .............................................................. ................................................... 51
3.7 Kết quả ................................................... .................................................... ............. 52
Độ tinh khiết của etanol ................................................................ .................................................... .................. 52
Kết quả phân tích đường cấu thành .............................................. .................................... 53
Kết quả hàm lượng đạm và tro .................................................. ................................................. 53
3.8 Thảo luận ............................................................ .................................................... ........ 54
3.9 Tóm tắt ............................................................ .................................................... ..........56
4 Sản xuất arabinoxylan oligosacarit ............................................................ ....... 58

4.1 Giới thiệu ............................................................ .................................................... ..... 58
4.2 Khái niệm về thực phẩm chức năng.................................................... ............................... 58
4.3 Các đặc tính tiền sinh học của AXOS và XOS ............................................ ........................ 60
4.4 Xylanase và AXOS trong thức ăn chăn nuôi ............................................. ......................... 63
Mục lục
4.5 Vật liệu và phương pháp xử lý DWG-xylanase ............................................. 65

Enzyme và hóa chất ............................................................................ .................................................... ....65
Xử lý bằng enzim ............................................................................ .................................................... ............. 66
Tiền xử lý protease .............................................................. .................................................... ....66
Phương pháp phân tích ................................................ .................................................... ......... 67
4.6 Kết quả xử lý bằng enzym ................................................ .................................... 68
Kết quả phân tích monosacarit ................................................ .................................... 69
Kết quả phân tích hồ sơ oligosacarit .............................................. .............................. 72
Kết quả xử lý bằng protease .................................................. ................................................... 75
4.7 Tóm tắt ............................................................ .................................................... ..........76
5 Chiết xuất hóa học AX từ DWG ................................................ .................. 77

5.1 Giới thiệu ............................................................ .................................................... ..... 77
5.2 Các phương pháp chiết xuất Arabinoxylans .................................................... ....................... 77
Thủy phân và hòa tan AX ............................................................ .................................... 78
Khai thác có sự hỗ trợ của cơ học .................................................. .................................... 81
Tinh chế AX ............................................................ .................................................... .............. 83
5.3 Khai thác AX ở quy mô thí điểm.................................................. .................................... 86
5.4 Vật liệu và phương pháp .............................................................. ........................................ 88
Hóa chất và enzyme ................................................................ .................................................... ... 88
Thiết bị ................................................. .................................................... ...................... 88
Phương pháp chiết xuất arabinoxylan .................................................. .................................... 91
Đặc tính của dịch chiết .................................................................. ................................................ 94
Xử lý bằng enzim ............................................................................ .................................................... ............. 95
5.5 Kết quả và thảo luận .................................................. ................................................ 96
Đặc tính chiết xuất ................................................................ .................................................... .96
Kết quả xử lý bằng enzym ................................................. ............................................. 100
5.6 Tóm tắt ............................................................ .................................................... .........103
6 Phát triển phương pháp phân tích oligosacarit ............................................ 104
6.1 Giới thiệu ............................................................ .................................................... ....104
6.2 Phương pháp phân tích oligosacarit ......................................................... ......................104
6.3 Vật liệu và phương pháp .............................................................. ................................................114
Nguyên vật liệu ................................................. .................................................... ......................114
6.4 Điều kiện sắc ký .................................................... ...................................114
Chuẩn bị các dung dịch chuẩn .............................................................. ..................................... 115
Chuẩn bị mẫu................................................ .................................................... .......116
6.5 Kết quả và thảo luận .................................................. ...................................................117
Sắc ký và độ đặc hiệu .............................................................. .................................... 117
Độ tuyến tính ............................................................. .................................................... ........................ 119
Giới hạn phát hiện (LOD) và định lượng (LOQ) .................................... ................... 120
Độ chính xác và độ chụm ............................................................ .................................................... ... 120
Kiểm tra tính phù hợp của hệ thống .................................................. .................................................... ... 122
Kết quả phân tích mẫu ............................................................ .................................................... ... 122
6.6 Tóm tắt ............................................................ .................................................... .........128
7 Sự phân hủy của endoxylanase theo tiêu chuẩn XOS ............................................ ..130
7.1 Giới thiệu ................................................................ .................................................... ....130
7.2 Xylanase – đánh giá các tính năng và ứng dụng của chúng.............................................131
7.3 Phân loại xylanase ................................................. ...................................132
7.4 Ứng dụng của Xylanase trong công nghiệp ................................................ .....................134
7.5 Vật liệu và phương pháp .............................................................. ...................................................138
7.7 Tóm tắt ............................................................ .................................................... .........148
Mục lục
số 8 Chiết xuất arabinoxylan chiết xuất được bằng nước và không thể chiết xuất được bằng nước trong
nhà máy lọc sinh học.................................................................. .................................................... ....... 150
8.1 Giới thiệu ............................................................ .................................................... ....150
8.2 Hiện trạng các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp ................................................ .........................150
8.3 Vật liệu và phương pháp .............................................................. ...................................................154
Phương pháp ............................................................. .................................................... ....................... 156
Đặc tính của dịch chiết .................................................................. .................................... 158
Xử lý bằng enzym WEAX và WUAX .............................................. ................................ 158
8.5 Tóm tắt ............................................................ .................................................... .........165
9 Kết luận và kiến nghị ................................................. ................168

9.1 Tiến độ đạt được trong công việc hiện tại............................................... ...................168
9.2 Các khuyến nghị cho công việc trong tương lai và sự tiếp thu của ngành công nghiệp....................170
10Người giới thiệu................................................. .................................................... ..172
11Ruột thừa ................................................. .................................................... ....205

11.1 Lô sản xuất DWG: .............................................................. ...................................205
11.2 Lô sản xuất Arabinoxylan: .............................................. .....................205
12Hội nghị:.................................................................. .................................................... 206

12.1 Thuyết trình................................................ ...................................................206
12.2 Trình bày áp phích ................................................................ ................................................206
Danh sách các số liệu
danh sách các hình
Hình 1-1. Tốc độ tăng trưởng bình quân hàng năm về công suất năng lượng tái tạo và nhiên liệu sinh học
sản xuất, Cuối năm 2010 đến Cuối năm 2015 (Anon, 2016 a)................................... .................... 17
Hình 1-2. Thực tế sản xuất cồn sinh học ở Anh. .................................................... ....... 18
Hình 1-3. Đầu tư mới trên toàn cầu vào năng lượng sạch theo ngành (Louw, 2018)................... 19
Hình 1-4. Đầu tư mới vào năng lượng sạch tại Vương quốc Anh, theo lĩnh vực ............. 19
Hình 2-1. Số ấn phẩm về arabinoxylan. ............................................. 27

Hình 2-2. Cấu trúc của AX, thể hiện các đơn vị xyloza được thay thế đơn và di và một
liên kết axit ferulic (Mendiset al.,2016). .................................................... ......................... 29
Hình 2-3. Khử nước este (dime axit ferulic) ................................................. .30
Hình 2-4. Liên kết oxy hóa của axit ferulic (Döringet al., 2015). .............................. 33
Hình 3-1. Quy trình xay xát ướt hạt ngô. .................................................... ................38
Hình 3-2. Quy trình xay xát khô để sản xuất cồn sinh học.............................................39
Hình 3-3. Quy trình sản xuất etanol nghiền khô và các sản phẩm phụ .............. 41
Hình 3-4. Nhà máy Ethanol sinh học GUNT CE-640, tổng quan. ................................................. 45
Hình 3-5. Sơ đồ quy trình của nhà máy Ethanol sinh học GUNT CE-640. ..................................... 46
Hình 3-6. Quy trình sản xuất DWG bằng nhà máy sản xuất cồn sinh học GUNT CE-640. .... 48
Hình 3-7. khí CO2giải phóng khỏi nước bịt kín trong quá trình lên men. .............................. 49
Hình 3-8. Độ tinh khiết của ethanol được sản xuất trong nhà máy ethanol sinh học GUNT CE-640. ..... 52
Hình 3-9. Cân bằng khối lượng protein, AX và hàm lượng tro trước và sau
quá trình lên men. .................................................... .................................................... 55
Hình 4-1. Sắc ký tách tiêu chuẩn Arabinose, xyloza và glucose. ....... 69
Hình 4-2. Tổng số monosacarit được giải phóng từ DWG sau khi xử lý xylanase
(được đo bằng HPAEC-PAD sau khi thủy phân). .................................................... ............... 70
Hình 4-3. Lượng AXOS được giải phóng từ 2 g DWG bởi các enzyme ở các thời điểm khác nhau
liều lượng và độ pH. .................................................... .................................................... ........71
Hình 4-4. Tiêu chuẩn XOS tách biệt bởi IPOS. .................................................... ..........72
Hình 4-5. Oligosacarit trong các mẫu (%w/w của DWG) bởi các enzyme ở các mức khác nhau
liều lượng và độ pH. .................................................... .................................................... ........73
Hình 4-6. Tác dụng xử lý protease trên AXOS được phát hành. ..................................... 75
Hình 5-1. Máy ly tâm Beckman GS-6S. .................................................... ...................... 88

Hình 5-2. Hệ thống siêu lọc: A Vivaflow, B LabStak. .......................................... 90

Hình 5-3. Thiết kế hệ thống siêu lọc hybrid. ............................................... 91
Hình 5-4. Lắp ráp hệ thống siêu lọc. .................................................... ............ 91
Hình 5-5. Quy trình tách chiết AXa. .................................................... ............................ 93
Hình 5-6. Phương pháp tinh sạch dịch chiết AXb. .................................................... ............. 94
Hình 5-7. Chiết xuất AXa sau khi xay xát. .................................................... ................................ 96
Hình 5-8. Khối lượng mol tích lũy của AXb trước và sau khi xử lý Econase. .....102
Hình 6-1. Tách Xyololigosacarit bằng HPLC-RI (Voragenet al., 1986)... 107
Hình 6-2. Sắc ký đồ của các tiêu chuẩn XOS DP 2-4 (1000 ppm) được phân tích bởi RP-HPLC
(Morganet al.,2017).................................................. .................................................... .108
Hình 6-3. Phân tích XOS bằng HPAEC-PAD (Falcket al., 2014). .............................. 110
Hình 6-4. Ảnh hưởng của cường độ pha động, nhiệt độ cột và tốc độ dòng trên
tách XOS (Cürtenet al., 2018)................................................. ......................... 111
Hình 6-5. Phân tích XOS trong mẫu thức ăn chăn nuôi (Công trình chưa công bố, phòng thí nghiệm AB Enzymes).
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
Hình 6-6. Tách 1. arabinose; 2. galactôzơ; 3. glucôzơ; 4. xyloza; 5. xylon

axit; 6. axit gluconic; 7. axit galacturonic; 8. axit glucuronic với gradient bước
phương pháp (Vươnget al.,2012). .................................................... ..................................... 113
Hình 6-7. Phát triển điều kiện phương pháp HPAEC-PAD cho phương pháp mới .............. 115
Hình 6-8. Sắc ký đồ của hỗn hợp mono và oligosacarit sử dụng CarboPac
PA200. .................................................... .................................................... ..................... 118
Hình 6-9. Sắc ký đồ của hỗn hợp mono và oligosacarit sử dụng CarboPac
PA20. .................................................... .................................................... ....................... 118
Hình 6-10. Máy sắc ký của Đại học Aberystwyth đã sử dụng các mẫu hạt. ........123
Hình 6-11. Sắc ký đồ mẫu AB Vista (108-656 XOS syrup). ................................ 124
Hình 6-12. Các mẫu xử lý enzyme xi-rô XOS .............................................. ...... 125
Hình 6-13. Mono- và oligosacarit được giải phóng từ cám lúa mì bởi xylanase
sự đối đãi. .................................................... .................................................... ............... 126
Hình 6-14. Sự phát triển của XOS từ cám lúa mì theo thời gian sau xylanase
sự đối đãi. .................................................... .................................................... ............... 127
Hình 7-1. Vị trí tấn công của enzyme thủy phân AX (Dornezet al., 2009)...................134
Hình 7-2. Sự phân hủy xylohexaose khi xử lý bằng Econase. ............................. 140
Hình 7-3. Sự phân hủy xylopentaose khi xử lý bằng Econase. ................................ 141
Hình 7-4. Econase phân hủy hỗn hợp xylohexaose và xylopentaose. ....142
Hình 7-5. Sự phân hủy xylotetraose khi xử lý bằng Econase ............................... 143
Hình 7-6. Sự phân hủy xylotriose khi xử lý bằng Econase. .................................... 144
Hình 7-7. Sự phân hủy xylobiose khi xử lý Econase...................................144

Hình 7-8. Sự cố của xylobiose khi điều trị Econase nghiêm trọng. ...................... 145
Hình 7-9. Sự xuống cấp của XOS (DP6-DP2) khi xử lý Econase. ....................... 146
Hình 7-10. Cấu trúc của 33-α-L-arabinofuranosyl-xylotetraose và 23-α-L-
arabinofuranosyl-xylotetraose. .................................................... .................................... 147
Hình 7-11. Cấu trúc của 23-α-L-Arabinofuranosyl-xylotriose. .................................... 147
Hình 7-12. Điều trị 33-α-L-arabinofuranosyl-xylotetraose và 23-α-L-

arabinofuranosyl-xylotetraose với Econase. .................................................... ........... 147
Hình 8-1. Tổng quan về quy trình chuyển hóa sinh khối và các sản phẩm tiềm năng...... 152
Hình 8-2. Máy ép lọc Carlson ............................................................ ..................................... 154
Hình 8-3. Vỏ và màng siêu lọc xoắn ốc AMI®..................................155

Hình 8-4. Sơ đồ hệ thống UF. .................................................... ................................... 155
Hình 8-5. Lắp ráp bộ siêu lọc quy mô lớn .................................................. ....... 155
Hình 8-6. Quy trình sản xuất WEAX và WUAX .............................................. 156
Hình 8-7. Sản xuất XOS từ WEAX và WUAX thông qua xử lý Econase trong 1 giờ
và 2 giờ.................................................. .................................................... ................. 162
Hình 8-8. Xử lý WEAX bằng Econase ở 500×, 50×, 5× và 0,5× thương mại
liều lượng. .................................................... .................................................... ........................ 163
Hình 8-9. Hiệu ứng Econase trước và sau khi xử lý nhiệt ở 70°C trong 30 phút.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 164
0
Danh sách các bảng
Danh sách các bảng
Bảng 2-1 Công dụng tiềm năng của AX. .................................................... .................................... 28
Bảng 3-1. Thành phần của DDGS từ các loại thực vật và nguồn khác nhau (được biểu thị bằng %,
chất khô) (Jarret và cộng sự, 2011; Pedersen và cộng sự, 2014; Spiehs và cộng sự, 2002). ........ 42
Bảng 3-2. Phân tích đường cấu thành của lúa mì ban đầu và kết quả là DWG và
Các chất hòa tan sau quá trình sản xuất ethanol (các phân tích được thực hiện bởi Englyst Carbohydrate
TNHH). .................................................... .................................................... ................................ 53
Bảng 3-3. Phân tích protein và tro của lúa mì ban đầu và kết quả là DWG và
Các chất hòa tan sau quá trình sản xuất ethanol (db). .................................................... ............... 54
Bảng 4-1. Liều lượng và pH của phép thử ủ enzyme .................................................. ..66
Bảng 4-2. Xử lý protease trước Econase. .................................................... ....... 67

Bảng 4-3. Tổng số monosacarit được giải phóng từ DWG sau khi xử lý xylanase
(Được đo bằng HPAEC-PAD sau khi thủy phân) ........................................ .................... 70
Bảng 4-4. Lượng AXOS được giải phóng từ 2 g DWG bởi các enzyme ở các liều lượng khác nhau
và độ pH. .................................................... .................................................... ......................71
Bảng 4-5. Oligosacarit trong các mẫu (%w/w của DWG) được giải phóng bởi các enzym ở
liều lượng và pH khác nhau. .................................................... ................................................. 73
Bảng 4-6. Kết quả xử lý Protease %w/w. .................................................... ........... 75

Bảng 5-1. Thu hồi AX sau quá trình thủy phân (IPOS). .................................................... ... 99
Bảng 5-2. XOS được phát hành từ AXb sau khi xử lý Econase (IPOS). ......................... 100
Bảng 5-3. XOS từ AXb sau khi điều trị bằng arabinofuranosidase và Econase. ..........101
Bảng 5-4. Trọng lượng phân tử và chỉ số polydispersity của AXb trước và sau Econase
sự đối đãi. .................................................... .................................................... ............... 101
Bảng 6-1. Các phương pháp phân tích để tách oligosacarit.............................105

Bảng 6-2. Độ tuyến tính của phương pháp, LOD và LOQ cho từng chất phân tích........................................... 119
Bảng 6-3. Độ chính xác của phương pháp (được báo cáo là phần trăm thu hồi) và độ chụm ........ 121
Bảng 6-4. Độ phân giải của phương pháp, hệ số bất đối xứng, hệ số công suất và số lượng
đĩa lý thuyết. .................................................... .................................................... ... 122
Bảng 6-5. Nồng độ của XOS trong các mẫu hạt của Đại học Aberystwyth. ....124
Bảng 7-1. Các phương pháp được báo cáo để sản xuất XOS .................................................. ......... 137
Bảng 8-1. Thành phần hóa học của WEAX và WUAX ............................................ ..160
1
Sự nhìn nhận
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo
Giáo sư Grant Campbell vì sự hướng dẫn quý báu, sự hiện diện bền bỉ, liên tục
hỗ trợ, sự kiên nhẫn, thời gian và nỗ lực của mình. Rất vui được làm việc dưới sự chỉ đạo trực tiếp của anh ấy
sự giám sát, động lực và sự hỗ trợ của anh ấy đã cải thiện đáng kể kiến thức của tôi. TÔI
không thể tưởng tượng được có một cố vấn và người cố vấn tốt hơn cho nghiên cứu tiến sĩ của tôi.
Tôi cũng xin cảm ơn người đồng giám sát của tôi, Tiến sĩ Vasileios Kontogiorgos vì đã thường xuyên
hỗ trợ và góp ý mang tính xây dựng.
Công việc này sẽ không thể thực hiện được nếu không có sự đóng góp của AB Agri và AB
Vista; vật liệu, enzyme và hỗ trợ tài chính của họ là động lực chính của điều này
nghiên cứu, và tôi muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến Tiến sĩ Mike Bedford và Tiến sĩ Helen
(Nell) Masey O'Neill vì sự hướng dẫn và hỗ trợ của họ trong suốt dự án này.
Tôi biết ơn tất cả những người mà tôi đã có hân hạnh được làm việc cùng trong thời gian này
dự án, đặc biệt là Tiến sĩ Nick Powles của IPOS, người đã làm phong phú dự án này bằng
kinh nghiệm và kiến thức và những phân tích của họ đã giúp dự án tiến lên với tốc độ
thời điểm quan trọng, cùng với thời điểm quan trọng của Englyst Carbohydrate. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến
cộng tác viên học thuật tại Đại học Nottingham Trent, đặc biệt là Tiến sĩ Emily Burton và
Tiến sĩ Dawn Scholey và Judit Zdiarstek từ AB Enzymes để được trợ giúp và tư vấn.
Xin gửi lời cảm ơn nồng nhiệt đến tất cả các kỹ thuật viên tại Đại học Huddersfield vì
hỗ trợ. Tôi đặc biệt đánh giá cao sự hỗ trợ của Tiến sĩ Richard Hughes và Hayley
Markham, bao gồm đào tạo sử dụng thiết bị chuyên dụng.
Và tôi biết ơn các nghiên cứu sinh và nghiên cứu sinh đồng nghiệp của tôi tại Trường Ứng dụng
Khoa học cho những cuộc đấu tranh và chiến thắng chung. Chúng ta đã học được rất nhiều điều cùng nhau, và tôi ước
tất cả các bạn tốt trong học tập và sự nghiệp của riêng bạn.
2
Danh sách viết tắt
AAFCO Hiệp hội các quan chức kiểm soát thức ăn chăn nuôi Hoa Kỳ
CÂY RÌU Tỷ lệ arabinose so với xyloza
A2A3XXX 23,33-di-α-L-arabinofuranosyl-xylotriose 23-

A2XXX α-L-arabinofuranosyl-xylotriose Hiệp hội Hóa
AACC học lâm sàng Hoa Kỳ liên kết với Thực phẩm
ABF Anh
tân tinh phân tích phương sai
AOAC Hiệp hội các nhà hóa học phân tích chính thức
Ara Arabinose
BẰNG bất đối xứng
CÂY RÌU arabinoxylan
AXa Đợt chiết xuất AX đầu tiên
axb Đợt chiết xuất AX thứ hai
AXOS Arabinoxylan Oligosacarit
CAZy EnZYmes hoạt tính
sơ yếu lý lịch carbohydrat Hệ số biến thiên
Đà dalton
db đế khô
DDGS Chưng cất Ngũ cốc khô với các chất
ĐP hòa tan Mức độ polyme hóa
ĐS chưng cất hòa tan
DWG Máy chưng cất hạt ướt
EU liên minh châu âu
FAO Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp Trung
FFC tâm thực phẩm chức năng

phúc hắc fucose
FuFoSE Hành động phối hợp của Ủy ban châu Âu về khoa học thực phẩm chức
năng ở châu Âu
cô gái Galactose
cô dâu Axit Galactorunic
GC sắc ký khí
keo đường
GluA Axit Glucorunic
HPAEC Sắc ký trao đổi anion hiệu năng cao Sắc ký lỏng
HPLC hiệu năng cao
HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao Giải pháp
IPO vật lý hữu cơ sáng tạo Hồng ngoại
hồng ngoại
IUBMB Liên minh Hóa sinh và Sinh học Phân tử Quốc tế Hệ

k' số năng lực
LOD Giới hạn phát hiện
3
LOQ Giới hạn định lượng
Mann Mannose
bệnh đa xơ cứng quang phổ khối
mw trọng lượng phân tử
mw trọng lượng phân tử
NSP Polysacarit không tinh bột
NSPase Enzym thủy phân polysaccharid không tinh bột
TẬP GIẤY Máy dò ampe kế dạng xung
PV quang điện mặt trời
REN21 Mạng Chính sách Năng lượng Tái tạo cho Hiệp hội
RFA Nhiên liệu Tái tạo Thế kỷ 21
Rha rhamnose
RI Chỉ số khúc xạ
Rs yếu tố độ phân giải
RTFO Nghĩa vụ nhiên liệu vận chuyển tái tạo
RTFO Nghĩa vụ nhiên liệu vận chuyển tái tạo
S/N Tín hiệu nhiễu
SCF Axit béo chuỗi ngắn
SCFA Axit béo chuỗi ngắn
GIÂY- Sắc ký loại trừ kích thước với tán xạ ánh sáng laser đa góc
trung tâm thương mại
TLC Sắc ký lớp mỏng Quang phổ tử ngoại

tia cực tím khả kiến arabinoxylan chiết được
WEAX trong nước arabinoxylan không chiết
WUAX được trong nước Xylose
X1
X2 Xylobiose
X3 Xylotriose
X4 Xylotetraose
X5 Xylopentaose
X6 Xylohexaose
XA2XXX 23-α-L-arabinofuranosyl-xylotetraose
XA3XXX 33-α-L-arabinofuranosyl-xylotetraose
XOS Xylooligosaccharid
Xyl Xylose
4
Arabinoxylan, một đồng sản phẩm tiềm năng của các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp
1 Arabinoxylan, một đồng sản phẩm tiềm năng của các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp
1.1 Các nhà máy lọc dầu sinh học ở Vương quốc Anh gần đây và bối cảnh toàn cầu
Thế giới đang đối mặt với những thách thức chưa từng có trong việc cung cấp đủ lương thực và nhiên liệu cho
đáp ứng nhu cầu ngày càng tăng của dân số ngày càng tăng, dự kiến sẽ tăng
lên 9,8 tỷ vào năm 2050 (UN DESA, 2017). Sản xuất và tiêu thụ năng lượng ngày nay
các mô hình chỉ ra rằng các nguồn tài nguyên than, dầu và khí đốt hữu hạn có thể phục vụ nhân loại
chỉ cần vài thập kỷ nữa (Agarwalet al.,2017). Khoảng 80% năng lượng
và 90% hóa chất trên thế giới được sản xuất từ nguồn hóa thạch (Maity, 2015). Như là
sự phụ thuộc vào các nguồn tài nguyên hữu hạn là một chỉ báo đáng báo động về những hậu quả thảm khốc.
Tiêu thụ năng lượng leo thang cũng đi kèm với lượng khí thải nhà kính lớn hơn
khí chủ yếu là CO2, được thải vào tầng khí quyển thấp hơn và làm thay đổi khí hậu
với tốc độ nhanh chóng (Von Blottnitz và Curran, 2007; Hamit-Haggar, 2012; Sainiet al.,2018).
Hai vấn đề song hành là cạn kiệt nhiên liệu hóa thạch và biến đổi khí hậu, trước một
dân số toàn cầu ngày càng tăng và ngày càng đòi hỏi nhiều tài nguyên, là những yếu tố quyết định
đặc điểm của đầu 21stthế kỷ và sử dụng các nguồn lực và quyết tâm của các nhà khoa học,
kỹ sư, doanh nghiệp, chính trị gia và xã hội trên toàn cầu.
Trong bối cảnh cấp bách ngày càng tăng đối với việc chuyển đổi sang các nguồn năng lượng bền vững với
lượng khí thải carbon thấp hơn và những con đường mới giúp giảm tình trạng nô lệ xuống mức hạn chế
nhiên liệu hóa thạch, các nguồn năng lượng tái tạo liên tục được xem xét, bao gồm cả gió,
sóng thủy triều, năng lượng mặt trời và nhiên liệu sinh học (IRENA, 2017). Trong số này, nhiên liệu sinh học là nhiên liệu duy nhất
nhà cung cấp năng lượng ở dạng nhiên liệu vận chuyển lỏng, trái ngược với năng lượng tái tạo khác
nguồn năng lượng (Bomet al., 2007; Huberet al., 2006; Nigam và Singh, 2011).
Hơn nữa, không giống như năng lượng gió, sóng và mặt trời, nhiên liệu sinh học không liên tục và
không yêu cầu hệ thống lưu trữ năng lượng hoặc sử dụng công nghệ nhiên liệu khác như
một bản sao lưu (Grahnet al.,2009).
Được thúc đẩy bởi nhận thức này, Ủy ban Châu Âu đã ban hành Nhiên liệu sinh học EU đầu tiên
chỉ thị năm 2003 nhắm mục tiêu tăng tỷ lệ pha trộn nhiên liệu sinh học trong dầu diesel và xăng
5
(Berti và Levidow, 2014). Năm 2005, chính phủ Vương quốc Anh công bố Năng lượng tái tạo
Nghĩa vụ nhiên liệu vận tải (RTFO) đã khuyến khích sản xuất nhiên liệu sinh học từ năm 2008
trở đi. RTFO đã thúc đẩy ngành công nghiệp nhiên liệu sinh học phát triển ở Anh. Ví dụ,
Vivergo Fuels ở Kingston Upon Hull, East Yorkshire, nhà sản xuất nhiên liệu lớn nhất của Vương quốc Anh
bioethanol, được bắt đầu vào năm 2007 với tư cách là một liên doanh giữa AB Sugar, BP và Du Pont để
tạo ra một nhà máy tinh chế sinh học cho tương lai. Năm 2011, việc sản xuất ethanol sinh học bắt đầu,
và đến năm 2014, nhà máy đã đạt được công suất sản xuất tối đa. Tuy nhiên, trong một thất bại
cho ngành công nghiệp tinh chế sinh học mới nổi ở Anh, vào tháng 9 năm 2018, Vivergo đã ngừng hoạt động
điều hành, với lý do “Chính phủ thiếu tốc độ trong thập kỷ qua để giới thiệu E10
[xăng pha với 10% cồn sinh học].” (https://vivergofuels.com/news/vivergo-fuels-
cồn sinh học-nhà máy-đề xuất-ngừng-sản xuất/ ). Kết luận đáng tiếc này đối với
Sáng kiến Vivergo minh họa cho sự mong manh về kinh tế của quá trình tinh chế sinh học khi đối mặt với
bối cảnh chính sách và thị trường không hỗ trợ, và khó khăn trong việc thực hiện
đóng góp tiềm năng cho các vấn đề an ninh năng lượng và biến đổi khí hậu.
Trước sự phát triển mới nhất này, vào năm 2016, Mạng Chính sách Năng lượng Tái tạo cho
Thế kỷ 21 (REN21) đã công bố báo cáo Hiện trạng năng lượng tái tạo toàn cầu (Anon, 2016 a),
báo cáo rằng trong năm đó, sản xuất năng lượng tái tạo của thế giới chưa bao giờ
cao hơn, cho thấy những nỗ lực hướng tới quá trình chuyển đổi sang năng lượng thân thiện với môi trường hơn
kịch bản đã diễn ra. Tuy nhiên, Tạp chí Thống kê Dầu mỏ Anh, cũng
phát hành vào năm 2016, báo cáo rằng mức tiêu thụ nhiên liệu hóa thạch của thế giới cũng chưa bao giờ
lớn hơn (BPstats, 2016). Báo cáo tình trạng năng lượng tái tạo toàn cầu cho thấy năng lượng tái tạo
sản xuất năng lượng đạt mức kỷ lục trong năm 2015, đặc biệt là từ năng lượng mặt trời
quang điện (PV), có mức tăng đáng kể nhất trong lĩnh vực năng lượng tái tạo,
chỉ với tốc độ tăng trưởng nhỏ là 3,9% trong sản xuất cồn sinh học (Hình 1-1).
6
Hình 1-1. Tốc độ tăng trưởng bình quân hàng năm về công suất năng lượng tái tạo và nhiên liệu sinh học
sản xuất, Cuối năm 2010 đến Cuối năm 2015 (Anon, 2016 a).
Sự gia tăng năng lượng tái tạo mà không làm giảm tiêu thụ nhiên liệu hóa thạch một phần
phản ánh không có khả năng thay thế trực tiếp nhiên liệu hóa thạch. Mặc dù thực tế là điện,
được cung cấp bởi năng lượng mặt trời và gió, có thể là nhiên liệu hấp dẫn cho một số ít phương tiện,
thật không may, nó không phải là trường hợp cho nhiệm vụ nặng nề và vận chuyển thông thường
các ứng dụng đòi hỏi một loại nhiên liệu lỏng mà nhiên liệu sinh học, mặt khác, có thể
giao hàng.
Henry Ford, ngay từ năm 1925, đã tiên đoán tầm quan trọng của nhiên liệu sinh học (Agarwalet al.,2017):
“Nhiên liệu của tương lai sẽ đến từ trái cây như cây thù du bên đường, hoặc
từ táo, cỏ dại, mùn cưa—hầu hết mọi thứ. Có nhiên liệu trong mỗi bit của rau
chất có thể lên men được.”
Vương quốc Anh có tổng công suất sản xuất nhiên liệu sinh học, ethanol sinh học và dầu diesel sinh học,
hơn 1.500 triệu lít mỗi năm (Alberici và Toop, 2013). Hình 1-2 cho thấy
tăng năng lực sản xuất tích lũy của các nhà máy sản xuất cồn sinh học quy mô thương mại ở
Vương quốc Anh (đang hoạt động và theo kế hoạch), từ đó có thể thấy rằng việc sản xuất cồn sinh học
công suất tăng gần gấp đôi trong năm 2013 sau đó giảm nhẹ trong năm tiếp theo
năm.
7
1000
800
600
Triệu lít
400
200
0
2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016
Sản xuất thực tế Khả năng sản xuất
Hình 1-2. Thực tế sản xuất cồn sinh học ở Anh. Chuyển thể từ (Alberici và Toop, 2013;
Phillips, 2017).
Bất chấp sự tăng trưởng về năng lực sản xuất, bản thân sản lượng ethanol sinh học của Vương quốc Anh vẫn
dưới công suất đáng kể kể từ năm 2010, đặc biệt là vào năm 2011 khi hiệu suất sử dụng chỉ
17% và tỷ lệ phần trăm sử dụng tối đa đạt được trong khoảng thời gian này chỉ là
65% (Alberici và Toop, 2013). Tuy nhiên, sản lượng rõ ràng đã tăng trong năm 2016
chỉ cho phép pha trộn tối đa ethanol sinh học trong nhiên liệu vận tải là 3,3%, đáng kể
dưới mục tiêu 10% cho năm 2020 (Phillips, 2017).
Hơn nữa, Hình 1-2 cho thấy năng lực sản xuất đạt mức tối đa vào năm 2013 tại
900 triệu lít, sau đó không đổi ở mức 850 triệu lít trong những năm sau đó.
Tỷ lệ năng lực sản xuất không thay đổi cho thấy những thách thức phải đối mặt với việc mở rộng
của ngành công nghiệp cồn sinh học. Hình 1-3 trình bày các khoản đầu tư vào năng lượng sạch trên toàn cầu.
Rõ ràng, đầu tư vào năng lượng mặt trời và gió đã chiếm ưu thế trong những năm gần đây, trong khi
đầu tư vào nhiên liệu sinh học chưa bao giờ thấp hơn, chỉ đạt 7 tỷ đô la trong năm 2017 so với
đến 268 tỷ đô la đầu tư vào năng lượng gió và mặt trời.
số 8
Hình 1-3. Đầu tư mới toàn cầu vào năng lượng sạch theo ngành (Louw, 2018).($ tỷ/năm)
Tại Vương quốc Anh, bối cảnh đầu tư liên quan đến các nguồn năng lượng sạch không khác biệt.
Hình 1-4 cho thấy xu hướng toàn cầu tương tự đang xảy ra ở Vương quốc Anh liên quan đến tăng trưởng
đầu tư vào năng lượng điện từ gió và quang điện mặt trời, với sự quan tâm ít hơn nhiều
nhiên liệu sinh học.
Hình 1-4. Đầu tư mới vào năng lượng sạch ở Vương quốc Anh, theo ngành (Louw, 2018).
($ tỷ/năm)
Việc giảm đầu tư vào ngành nhiên liệu sinh học là kết quả của sự thay đổi bản chất
những vấn đề và trở ngại cản trở sự phát triển của ngành công nghiệp này. Trong nhiều thập kỷ, các
kinh doanh nhiên liệu sinh học đã bị hạn chế bởi nhiều trình điều khiển, chẳng hạn như sự biến động và tăng
trong giá cả hàng hóa thực phẩm từ đó “Lương thựcso vớiTình trạng tiến thoái lưỡng nan về nhiên liệu” xảy ra sau đó (Alberici và
9
Tốp, 2013). Liên quan đến nhu cầu, cũng có một số rào cản về chính sách
và thị trường; quan trọng nhất là thiếu chính sách rõ ràng, ổn định, lâu dài và có lợi
khuôn khổ cản trở mạnh mẽ sự phát triển của ngành công nghiệp nhiên liệu sinh học
(Non, 2017). Ngoài ra, việc giá dầu tiếp tục giảm kể từ năm 2014 đã
nâng cao đáng kể tiêu chuẩn sản xuất nhiên liệu sinh học và dẫn đến việc từ bỏ hoặc
gián đoạn một số dự án nhiên liệu sinh học (Berti và Levidow, 2014); trọng tâm đã thay đổi
hướng tới phát triển các ứng dụng có giá trị cao hơn là nhiên liệu sinh học, vì nó chưa được
có thể cạnh tranh với nhiên liệu hóa thạch về mặt kinh tế. Nhiên liệu sinh học không thể đứng vững
thị trường như một doanh nghiệp khả thi về tài chính khi đối mặt với sự cạnh tranh từ nhiên liệu hóa thạch
và những khó khăn trong việc khắc phục các trở ngại chính sách là yếu tố chính cản trở
sự phát triển của ngành công nghiệp nhiên liệu sinh học, như minh họa bằng việc đóng cửa Vivergo.
Nhìn vào một nhà máy lọc dầu thô, rõ ràng là số lượng hàng hóa được sản xuất
trong các nhà máy lọc dầu như vậy góp phần vào hiệu quả kinh tế của họ (Asche, Gjølberg, và
Volker, 2003). Tương tự như vậy trong một nhà máy lọc sinh học, một loạt các sản phẩm có thể bán được nên được
được sản xuất, cùng với nhiên liệu sinh học, để tạo điều kiện cho một doanh nghiệp có hiệu quả kinh tế có thể
cạnh tranh với các nhà máy lọc dầu. Ngoài ra, các nhà máy lọc dầu được hưởng lợi từ các công nghệ tiên tiến và
các công nghệ tích hợp quy trình phức tạp giúp tăng cường đáng kể tổng thể
hiệu quả và tính kinh tế của các doanh nghiệp lọc dầu (Lyndet al.,2005; Lyndet al.,2009;
Martinez-Hernandezet al.,2018). Sản xuất một danh mục các sản phẩm, sao cho “không
một giọt dầu là lãng phí”, không chỉ mang lại càng nhiều giá trị gia tăng càng tốt cho toàn bộ
nguyên liệu, mà còn tạo ra phạm vi tích hợp cao do đó hiệu quả và kinh tế
quy trình.
Mặc dù danh mục các sản phẩm đồng sản xuất là rất quan trọng đối với khả năng cạnh tranh của nhà máy lọc sinh học,
để tạo ra một loạt các luồng doanh thu và để cung cấp các cơ hội tích hợp
như được khai thác trong các nhà máy lọc dầu. Không phải tất cả mọi người làm việc trong các nhà máy lọc sinh học đều cảnh giác với
khía cạnh tích hợp giống như khía cạnh của dòng doanh thu (Campbellet al.,2018). Như vậy,
ví dụ, định nghĩa được phát triển bởi Cơ quan Năng lượng Quốc tế Năng lượng sinh học
Nhiệm vụ 42 Biorefinery (Anon, 2009) đọc:
0
“Nhà máy tinh chế sinh học là quá trình xử lý bền vững sinh khối thành một dải các sản phẩm có thể bán được trên thị trường.
sản phẩm (thực phẩm, thức ăn chăn nuôi, vật liệu, hóa chất) và năng lượng (nhiên liệu, điện, nhiệt).”
Định nghĩa này nhấn mạnh “phạm vi của các sản phẩm có thể bán được trên thị trường” nhưng không
tham chiếu đến các quy trình tích hợp cho phép hợp tác kinh tế sản xuất các sản phẩm này.
Về mặt này, một định nghĩa tốt hơn được đưa ra bởi Cơ quan Năng lượng Tái tạo Quốc gia Hoa Kỳ
Phòng thí nghiệm (NREL):
“Nhà máy tinh chế sinh học là cơ sở tích hợp các quy trình và thiết bị chuyển đổi sinh khối
để sản xuất nhiên liệu, năng lượng và hóa chất từ sinh khối. Khái niệm nhà máy lọc sinh học là
tương tự như các nhà máy lọc dầu ngày nay, nơi sản xuất nhiều loại nhiên liệu và sản phẩm
từ dầu mỏ.”
Như Campbellet al.(2018) lưu ý,
“Nếu một cơ sở xử lý sinh học sản xuất nhiều sản phẩm, điều này hàm ý sự phức tạp
hoạt động mang lại phạm vi và cơ hội để tích hợp hiệu quả - nhưng nó không
ngụ ý rằng sự tích hợp như vậy được thực hiện tự động và nhất thiết. trừ khi điều này
cơ sở phức hợp - với nhiều sản phẩm của nó - được tích hợp có chủ ý, nó vẫn chỉ là
một cơ sở xử lý sinh học. Nó không phải là một nhà máy lọc sinh học.”
Định nghĩa NREL là hiện thân của mô hình khái niệm cho việc sản xuất nhiên liệu sinh học trong tương lai
nơi hàng hóa có giá trị cao được sản xuất, một trong số đó là nhiên liệu sinh học. Đây có thể là
hoàn thành thông qua chuyển đổi và phân đoạn sinh khối; Tích hợp sản xuất sinh học
dựa trên hóa chất, nhiệt, năng lượng và thực phẩm trong một nhà máy lọc sinh học sẽ mang lại hiệu quả tối ưu
lựa chọn kinh tế.
1.2 Arabinoxylan là đồng sản phẩm của quá trình sản xuất cồn sinh học
Trong các nhà máy tinh chế sinh học từ ngũ cốc ngày nay, đồng sản phẩm chính của quá trình sản xuất cồn sinh học là
Máy chưng cất Ngũ cốc khô có chất hòa tan (DDGS), một sản phẩm có giá trị tương đối thấp được chuyển đến
thức ăn gia súc. DDGS đến từ phần không phải tinh bột của ngũ cốc mà chủ yếu là
cám cùng với protein còn sót lại và sinh khối nấm men (Chatzifragkouet al.,2015). Ngũ cốc
1
cám là phần ngũ cốc có vấn đề đối với các nhà máy tinh chế sinh học, vì nó bao gồm một lượng lớn
một phần nguyên liệu thô và chưa được khai thác hết về mặt kinh tế. Như vậy, chiết xuất
các thành phần có giá trị cao hơn của cám đã là một trọng tâm của sự chú ý hướng tới sản xuất
sản phẩm giá trị gia tăng.
Gần đây, các nghiên cứu đã tập trung vào việc sản xuất arabinoxylan (AX), một thành phần của
sinh khối lignocellulose, và một đồng sản phẩm tiềm năng của các nhà máy lọc dầu sinh học có thể cung cấp
một lớp mới của các thành phần thực phẩm và các sản phẩm phi thực phẩm. Thành phần DDGS làm cho nó
một nguồn tiềm năng để chiết xuất AX và arabinoxylan oligosacarit (AXOS). Cũng,
một quy trình sản xuất arabinoxylan bao gồm kết tủa bằng etanol, tạo ra
cơ hội tích hợp với sản xuất ethanol sinh học trong các nhà máy lọc dầu sinh học (Duet al.,
2009; Hollmann và Lindhauer, 2005; Misailidiset al., 2009). Như vậy AX dường như là một
đồng sản phẩm đặc biệt hứa hẹn để tích hợp vào nhà máy lọc sinh học để cung cấp cả hai
các nguồn doanh thu có giá trị cao bổ sung cũng như phạm vi tích hợp và
tiết kiệm kinh tế liên quan xác định một nhà máy lọc sinh học thực sự.
Công việc trước đây đã xác định rằng việc đồng sản xuất AX được tích hợp với ethanol sinh học
có thể khả thi về mặt kinh tế (Misailidiset al., 2009) và đã thành lập khai thác
quy trình sản xuất AX từ ngô, lúa mì và bã mía (Bell 2015;
Campbellet al.,2019; bànhet al.,2010; Hoa hồnget al.,2010). Công việc tiếp theo đã giới thiệu
phân tích nhúm ethanol sinh học như một công cụ tích hợp quy trình chính thức để giảm thiểu việc sử dụng
cồn sinh học trong quá trình chiết xuất AX và do đó để giảm chi phí (Martinez-
Hernandezet al.,2013; 2018). Tuy nhiên, tính chất của dịch chiết làm thực phẩm chức năng
thành phần, do bị ảnh hưởng bởi nguồn và điều kiện khai thác, đã không được sử dụng rộng rãi
đã học. Cần hiểu rõ hơn về các đặc tính chức năng của arabinoxylan, vì
các tính chất này thay đổi tùy theo nguyên liệu và điều kiện khai thác. Nghiên cứu ban đầu
trên chiết xuất arabinoxylan đôi khi cho kết quả mâu thuẫn do sự khác biệt trong
thành phần và độ tinh khiết của dịch chiết (Biliaderiset al.,1995; Courtin và Delcour, 2002).
Với mục đích thực hiện các cuộc điều tra tài sản chức năng rộng rãi trong thực phẩm
hệ thống, chiết xuất AX cần phải có sẵn với số lượng lớn (kg). hiện tại không có
nguồn thương mại của AX ở quy mô này. Vì vậy, để phát triển hướng nghiên cứu này, cần có
cần thiết lập các cơ sở để sản xuất thường quy AX nguyên chất với số lượng kg.
2
Ngoài ra, arabinoxylan oligosacarit (AXOS) và xylo-oligosacarit (XOS),

các sản phẩm thoái hóa nhỏ của các phân tử AX lớn hơn, đã trở thành tâm điểm tiếp theo của
quan tâm, vì chúng có đặc tính tiền sinh học có thể mang lại lợi ích cho cả người và động vật
sức khỏe. Việc sản xuất một loạt các sản phẩm AX và AXOS/XOS, bắt đầu bằng cách sử dụng
ethanol ở các nồng độ khác nhau, cũng làm tăng phạm vi tích hợp ethanol sinh học
để giảm chi phí (Martinez-Hernandezet al.,2018). Vì vậy, một kịch bản được dự kiến trong
mà một loạt các sản phẩm AX và AXOS/XOS được sản xuất, mỗi sản phẩm đều tăng thêm doanh thu
để nâng cao tính kinh tế của nhà máy lọc sinh học, đồng thời giảm chi phí xử lý
thông qua hiệu quả của hợp tác sản xuất tích hợp.
Một trở ngại lớn đối với nghiên cứu về DDGS là không có khả năng tìm nguồn trong quá trình
nguyên liệu mà cuối cùng trở thành sản phẩm thức ăn chăn nuôi khô, DDGS. Học nhiều lần
đã xem xét DDGS như một nguyên liệu để xử lý thêm (Chatzifragkouet al., 2015;
Kosiket al., 2017). Tuy nhiên, đây không phải là vật liệu thực sự sẽ được sử dụng trong
một quy trình thương mại; vật liệu để khai thác sẽ được truy cập sớm hơn trong quá trình,
trước khi sấy khô. Sấy khô có thể làm thay đổi tính chất của vật liệu ướt, những vật liệu này
được gọi là Hạt ướt chưng cất (DWG) và các chất hòa tan. Tuy nhiên, hiện có
nhà máy sản xuất cồn sinh học là những hệ thống khép kín không cho phép nguyên liệu trong quá trình
lấy mẫu; đây là lý do tại sao các nghiên cứu cho đến nay đã sử dụng DDGS sẵn có hơn.
Một trở ngại nữa là khó định lượng các oligosacarit nhỏ,
do thiếu tiêu chuẩn và những thách thức cố hữu trong việc phân tách và phát hiện
đường.
Do đó, công việc hiện tại đã tiến hành một cuộc điều tra trên phạm vi rộng về quy mô thí điểm
sản xuất vật liệu AX và nghiên cứu enzym về sản xuất AXOS và XOS từ
Những vật liệu này. Công việc yêu cầu phát triển một phương pháp mới để tách và
định lượng hỗn hợp mono- và oligo-sacarit, và áp dụng phương pháp này để
điều tra động học của quá trình sản xuất enzyme của XOS bằng cách sử dụng xylanase. Công việc vì thế
giải quyết các vấn đề thực tế về sản xuất AX và AXOS/XOS cũng như các vấn đề khoa học về
đặc tính của các vật liệu được sản xuất và hiểu biết về động học của xylanase.
3
1.3 Phạm vi của luận án
Trong các nhà máy tinh chế sinh học dựa trên ngũ cốc thông thường, sản phẩm phụ chính, DDGS, là một chất có giá trị thấp
đồng sản phẩm dùng làm thức ăn chăn nuôi. Việc sản xuất một danh mục sản phẩm đồng hành là
quan trọng đối với khả năng cạnh tranh kinh tế của các nhà máy lọc dầu sinh học. Các nghiên cứu gần đây đã tập trung vào
tiềm năng sản xuất arabinoxylan (AX), arabinoxylan oligosacarit (AXOS)

và xylo-oligosacarit (XOS) trong các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp. Công việc hiện tại
giải quyết các vấn đề sản xuất các vật liệu này ở quy mô kg và đặc trưng cho
các sản phẩm và các quá trình phân hủy enzyme mà chúng được tạo ra.
Arabinoxylan là phần hemicellulose chính của cám ngũ cốc và là thành phần chính
của DDGS. Một trong những quy trình sản xuất arabinoxylan sử dụng etanol để
sự kết tủa; do đó, việc đồng sản xuất AX với sản xuất etanol sinh học tạo cơ hội cho
xử lý tích hợp và sản xuất kinh tế của danh mục AX và AXOS/XOS

các sản phẩm.
Câu chuyện về arabinoxylan đang phát triển trong bối cảnh các nhà máy tinh chế sinh học ngũ cốc ở Anh được trình bày trong
Chương 2 cùng với việc mô tả cấu trúc, phân loại arabinoxylan,

tính chất hóa lý và mối quan hệ của các tính chất này với cấu trúc của
polysacarit.
Chương 3 mô tả quy trình sản xuất cồn sinh học công nghiệp và minh họa
đặc điểm của các sản phẩm phụ trung gian của quá trình lên men và ảnh hưởng của
việc sấy khô các sản phẩm trung gian này để tạo ra DDGS cuối cùng. trong nhà
quy trình sản xuất cồn sinh học được sử dụng trong dự án này cũng được mô tả, cùng với
phân tích và mô tả đặc tính của sản phẩm.
Chương 4 giới thiệu khái niệm về thành phần thực phẩm chức năng và thành phần sinh học
tầm quan trọng của prebiotic arabinoxylan đối với dinh dưỡng của con người và động vật. Nó cũng mô tả
vai trò của các enzyme thủy phân xylan trong quá trình sản xuất XOS tại chỗ trong thức ăn chăn nuôi,
và trình bày các thử nghiệm được thực hiện trong dự án này để sản xuất các sản phẩm XOS từ
sản phẩm phụ của cồn sinh học.
4
Chương 5 trình bày chi tiết các phương pháp được sử dụng để chiết xuất AX từ sinh khối ngũ cốc ở quy mô nhỏ và
quy mô lớn và báo cáo quá trình chiết xuất quy mô lớn các chất xơ hòa tan AX từ ethanol sinh học
sản phẩm phụ.
Đã chỉ ra rằng đặc tính của sản phẩm là một thách thức và hạn chế đối với
nghiên cứu trong lĩnh vực này, Chương 6 xem xét các phương pháp phân tích được sử dụng để xác định
và định lượng arabinoxylan oligosacarit, sau đó trình bày chi tiết về sự phát triển và
xác nhận một phương pháp phân tích mới mạnh mẽ để mô tả đặc tính đồng thời
của mono- và oligosacarit và axit uronic.
Chương 7 mô tả các enzyme thủy phân arabinoxylan (xylanase), phân loại của chúng,
ứng dụng công nghiệp và vai trò tiềm năng trong việc sản xuất prebiotic AX. kinh tế là
một endoxylanase thương mại được sử dụng rộng rãi trong các công thức thức ăn chăn nuôi, được cho là
để phát huy một số lợi ích của nó thông qua việc sản xuất oligosacarit tiền sinh học và cho
cần phải hiểu động học của quá trình sản xuất oligosacarit. Các
chương trình bày thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng của xylanase này đến quá trình tạo XOS
và suy thoái.
Chương 8 thảo luận về tầm quan trọng của việc tích hợp sản xuất AX trong
nhà máy tinh chế sinh học và báo cáo việc tích hợp được thực hiện trong dự án này để sản xuất hai loại
của các chất xơ hòa tan AX và khả năng chuyển đổi AX thành XOS bằng cách sử dụng xylanase.
Chương 9 kết thúc luận án bằng cách tóm tắt những phát hiện chính từ công việc hiện tại
và trình bày các khuyến nghị để tiến hành nghiên cứu trong lĩnh vực này, nhằm dẫn dắt
đến một cơ sở tri thức đầy đủ để cho phép sản xuất thương mại và khai thác
Các sản phẩm dựa trên AX trong các nhà máy tinh chế sinh học tích hợp.
5
Cấu trúc và tính chất hóa lý của Arabinoxylan
2 Cấu trúc và tính chất hóa lý của Arabinoxylan
2.1 Giới thiệu
Hemicellulose là polysaccharid phổ biến thứ hai trong tự nhiên sau cellulose và,
cùng với cellulose và lignin, tạo thành thành phần cấu trúc của thành tế bào thực vật
(Bắc Kinhet al.,1988; Izydorczyk và Biliaderis, 1995). Hemicellulose là polysaccharid
chủ yếu là đường 5 carbon, thành phần của nó thay đổi tùy theo loại cây
giống loài. Trong ngũ cốc, arabinoxylans (AX) là hemicelluloses chính, bao gồm, cho
ví dụ, 20-25% cám lúa mì (Bacic và Stone, 1981). Phân tử AX gồm

một chuỗi xylose tuyến tính với chuỗi bên arabinose và một số axit phenolic gắn vào
nhánh arabinose. AX là các polyme mới có chức năng độc đáo

các đặc tính có thể hữu ích như một thành phần thực phẩm hoặc cho mục đích sử dụng phi thực phẩm, cung cấp
khả năng sản xuất một danh mục các đồng sản phẩm dựa trên AX trong các nhà máy tinh chế sinh học ngũ cốc.
Chương này ôn lại cấu trúc, phân loại và tính chất lý hóa của AX, trong
để cung cấp bối cảnh cho các mục tiêu của công việc hiện tại.
2.2 Sơ lược về arabinoxylan
Vào đầu thế kỷ XX, Hoffmann và Gortner (1927) báo cáo

một polysacarit không tinh bột dẻo từ bột mì bao gồm chủ yếu là
xyloza và arabinose, đều là đường 5 carbon; do đó kẹo cao su mới được đặt tên là 'pentosan'.
Sau đó, kẹo cao su pentosan mới được mô tả là bao gồm một loại phân tử đơn giản
được tạo ra từ sự liên kết của arabinose và xylose trong ngũ cốc (Preece và Hobkirk, 1953).
Nghiên cứu sau đó đã báo cáo sự hiện diện của AX trong các lớp bên ngoài của hạt ngũ cốc
chẳng hạn như lúa mì, ngô, gạo, lúa mạch, yến mạch, lúa mạch đen và lúa miến (Vinkx và Delcour, 1996). CÂY RÌU
đã nhận được sự quan tâm ngày càng tăng trong lĩnh vực khoa học ngũ cốc và vật liệu sinh học trong
vài thập kỷ qua. Một tìm kiếm thư mục của ScienceDirect được thực hiện vào tháng 8 năm 2018 cho
“Arabinoxylan” trong tiêu đề, tóm tắt hoặc từ khóa cho thấy các ấn phẩm về chủ đề này
đã tăng gần 10 lần trong 20 năm qua (Hình 2-1).
6
450
400
350
300
250
Số ấn bản 200
150
100
50
0
1996 1998 2000 2002 2004 2006 2008 2010 2012 2014 2016 2018
Hình 2-1. Số ấn phẩm về arabinoxylan. Nguồn: ScienceDirect (Tháng 8 năm 2018).
Các tài liệu hiện có mô tả hầu hết các thuộc tính đặc trưng của AX,
khả năng trích xuất trên quy mô băng ghế dự bị và các ứng dụng tiềm năng. Chỉ có một số lượng hạn chế
báo cáo khai thác quy mô lớn hơn, như khai thác ở quy mô thương mại, hoặc thậm chí thí điểm
quy mô, bị cản trở bởi hai yếu tố: (i) quá trình chiết xuất đòi hỏi một lượng lớn ethanol,
đó là tốn kém và có ý nghĩa xử lý liên quan đến an toàn và an ninh. (ii) Các
không có thị trường rõ ràng để thương mại hóa các sản phẩm dựa trên AX. Những sự thật này đã được
lý do để AX chỉ còn là một tài liệu lý thuyết có thể có triển vọng

tương lai. Vì vậy, ví dụ, Courtin và Delcour (2002) đã quan sát thấy:
“Bất chấp những báo cáo ban đầu về tác động có lợi của chúng trong sản xuất bánh mì, AX vẫn
chỉ là một ứng cử viên lý thuyết để bổ sung vào công thức bánh mì. Điều này có liên quan đến thực tế
rằng các nghiên cứu về chức năng của chúng đôi khi mang lại kết quả trái ngược nhau và
không có sẵn của họ trên quy mô thương mại.
Để kích thích thị trường cho AX, một số lượng đáng kể các nghiên cứu đã tập trung vào
lợi ích của AX trong các lĩnh vực sức khỏe con người và các đặc tính tiền sinh học, sản xuất bánh mì
và ngành thực phẩm, tá dược trong ngành dược phẩm và bao bì thực phẩm.
Bảng 2-1 tóm tắt các thí nghiệm quy mô nhỏ về khả năng sử dụng arabinoxylan.
Tuy nhiên, việc thiếu sản xuất AX quy mô thương mại là trở ngại chính, vì
không có đủ số lượng để chứng minh việc sử dụng công nghệ của AX và
thúc đẩy sự hấp thụ của họ trong ngành công nghiệp.
7
Bảng 2-1 Công dụng tiềm năng của AX.
Chuyên ngành Ảnh hưởng của AX Thẩm quyền giải quyết
Làm bánh mì - Tăng thể tích ổ bánh (Biliaderiset al.,1995; Lýet

- Độ ẩm cao hơn al.,2013)
Sức khỏe - Cải thiện trao đổi chất trong bệnh tiểu (Akpinaret al.,2010; García
đường et al.,2007; Geraylouet al.,
- Phản ứng sau bữa ăn thấp hơn trong glucose 2013; Hughes vàtất cả.,
huyết thanh, insulin và chất béo trung tính 2007; Lópezet al.,1999; Lữet
- Hạ nồng độ cholesterol trong máu al., 2004; Stanevaet al.,
- Chống béo phì 2014; tônget al.,2014; Van
- Tiền sinh học Craeyveldet al., 2008;
D.Trươnget al.,2015)
Bao bì thực phẩm - Rào cản dầu mỡ (Mikkonenet al.,2009;
Stepan et al.,2014;
Stevanicet al., 2011)
dược phẩm - Nhũ tương ổn định (Bashiret al.,2014; Erumet
- Bọt ổn định al.,2015; iqbalet al.,2011;
- Ma trận phát hành bền vững Izydorczyket al.,1991; Raja
- Hệ thống treo ổn định et al.,2014; Yadavet al.,
- Chất phân hủy 2007)
2.3 Cấu trúc của arabinoxylan
Arabinoxylan là polysacarit hemicellulose chính trong ngũ cốc; nó tồn tại chủ yếu ở
lớp ngoài và thành tế bào nội nhũ và được liên kết với cellulose và lignin
(Izydorczyk và Biliaderis, 1995). AX bao gồm một xương sống tuyến tính của β-D-xylopyranosyl
được liên kết thông qua (1-4) liên kết glycosid. Izydorczyk (2008) đã báo cáo rằng các monome củaα-L-
arabinofuranoside được liên kết với một số chuỗi xylopyranosyl tại O-2, O-3 và/hoặc cả hai
O-2, 3 vị trí. Theo cấu tạo này, bốn đơn vị cấu trúc chính của AX có thể là
được quan sát như minh họa trong Hình 2-2: xylopyranosyl được thế đơn ở O-2 hoặc O-3,
xylopyranosyl di-thế ở cả O-2,3 và xylopyranosyl không thế (Izydorczyk

và Dexter, 2008; mendiset al.,2016).
số 8
Hình 2-2. Cấu trúc của AX, hiển thị các đơn vị xyloza được thay thế đơn và di và axit ferulic
liên kết (Mendis và cộng sự, 2016).
Trình tự và sự phân bố của bốn đơn vị cấu trúc hình dạng này phụ thuộc vào
nguồn arabinoxylan (Gruppenet al., 1993). Izydorczyk (1995) báo cáo rằng
phần lớn các chuỗi bên arabinose bao gồm một chất thay thế đơn phân và chỉ một phần nhỏ
tỷ lệ có thể chứa hai hoặc nhiều đơn vị arabinose được liên kết thông qua các liên kết 1-2, 1-3 hoặc 1-5
(Izydorczyk và Biliaderis, 1995). Lượng arabinose trong AX cho biết

"sự phân nhánh" của các chuỗi và thường được ước tính bằng Arabinose/Xylose (A/X)
tỷ lệ, thay đổi giữa các loại cây khác nhau và giữa các bộ phận khác nhau của
một cái cây.
Các thuật ngữ "phân nhánh" và "phân nhánh" được sử dụng rộng rãi trong tài liệu AX để
tham khảo các chất thay thế arabinose (ví dụ(Hoffmannet al.,1992; song mâyet al.,1994;
Cyran và Saulnier, 2012; coelhoet al.,2016)). Đây không thực sự là các chi nhánh,
đề xuất một chuỗi bên – cụm từ “chuỗi bên arabinose” cũng được sử dụng, không chính xác
gợi ý một chuỗi các đơn vị arabinose, vì vậy những thuật ngữ này có lẽ không hữu ích nhất
những từ chính xác, nhưng để phù hợp với các tài liệu khác, những thuật ngữ này được sử dụng trong tài liệu này
luận án.
Ví dụ, tỷ lệ A/X của nội nhũ lúa mì AX được báo cáo vào khoảng 0,7 (Mây
et al., 1994), trong khi tỷ lệ này lớn hơn ở cám lúa mì và đạt giá trị 1,07
(Shiiba và Nagao, 1993), và tỷ lệ 0,21 trong rơm lúa mì (Xuet al.,2006). AX là
được báo cáo là có tỷ lệ A/X là 2,6-4,1 trong hạt lúa mạch đen (Hansenet al.,2003) và tỷ lệ 1,7
trong cám lúa mạch đen (Figueroa-Espinozaet al.,2004).
9
Axit phenolic như hydroxycinnamic, ferulic vàP-axit coumaric có thể xuất hiện
este hóa thành O-5 của các đơn vị arabinofuranoside trong AX (Smith và Hartley, 1983). Ferulic
axit, axit phenolic dồi dào nhất trong ngũ cốc, có thể tạo thành các dime của quá trình khử nước
este, như trong Hình 2-3, tạo thành liên kết cộng hóa trị giữa chuỗi AX và
giữa AX và các thành phần khác của thành tế bào (lignin, protein, v.v.) (Santiagoet al.,2006;
Santiago và Malvar, 2010).
Hình 2-3. Dehydrodiferulate este (Ferulic acid dimer) (Santiago và Malvar, 2010).
Do các liên kết hydro giữa các đơn vị xyloza liền kề trong xylan không được thay thế
polyme, một cấu trúc của một chuỗi xoắn ba lần và thuận tay trái được quan sát thấy ở đâu
mỗi nhóm gồm ba loại đường xyloza tạo thành một lượt trong chuỗi xoắn và cấu tạo cuối cùng
có thể trông giống như một dải ruy băng xoắn mở rộng (Courtin và Delcour, 2002; Fincher và
Đá, 1986; Izydorczyk và Biliaderis, 1995). Sự thay thế Arabinose có thể làm sai lệch điều này
hình dạng, vì các đơn vị bên có thể cản trở sự hình thành này và bán linh hoạt
cấu trúc cuộn dây ngẫu nhiên được đề xuất (Courtin và Delcour, 2002; Dervilly-Pinelet al.,
2001). Hơn nữa, hàm lượng axit ferulic trong chuỗi AX có thể hình thành cầu nối
giữa các chuỗi AX liền kề, dẫn đến các phân tử có trọng lượng phân tử cao hơn và có thể
thay đổi hình dạng và do đó các thuộc tính.
0
2.4 Phân loại arabinoxylan
Các biến thể trong cấu hình cấu trúc của AX là động lực chính để phân chia
polysacarit thành hai loại chính: arabinoxylan chiết xuất được trong nước (WEAX)
và arabinoxylan không chiết xuất được bằng nước (WUAX) (Vinkx và Delcour, 1996). WEAX là
gắn lỏng lẻo vào thành tế bào và có thể dễ dàng di chuyển vào dung dịch nước; họ đang
các chuỗi ngắn hơn với ít liên kết chéo hơn và ít liên kết hơn với thành tế bào khác
thành phần (Izydorczyk và Biliaderis, 1995). WUAX khó trích xuất AX hơn, chúng
có trọng lượng phân tử lớn hơn nhiều và phân nhánh lớn hơn (I Ethay thế arabinose),
và được gắn mạnh hơn vào ma trận thành tế bào bằng cộng hóa trị (I Eeste và ete
liên kết, cầu axit diferulic) và không cộng hóa trị (I Eliên kết hydro) liên kết với
AX liền kề và các thành phần vách tế bào khác (Fengler và Marquardt, 1988; Izydorczyk
và Biliaderis, 1995).
2.5 Sự xuất hiện của arabinoxylan
AX là một trong những hemiaellulose chính trong vương quốc thực vật, xuất hiện trong nhiều loại
của thực vật. Họ đóng một vai trò thiết yếu trong việc củng cố hệ thống hỗ trợ cấu trúc bằng cách
liên kết chéo các vi sợi cellulose và do đó điều chỉnh sự mở rộng của tế bào và
củng cố bức tường (Gibeautet al.,1991; Scheller và Ulvskov, 2010). Hemicellulose
được tổng hợp trong bộ máy Golgi (Carpita và Gibeaut, 1993). Một cách ngắn gọn, các
quá trình tổng hợp AX trải qua bốn bước chính: bắt đầu chuỗi xylan, chuỗi xylan
kéo dài, bổ sung chuỗi bên arabinose và lắng đọng ngoại bào (Junget al.,
1993). Glycosyltransferase là các enzyme chịu trách nhiệm sinh tổng hợp các dị
polysacarit như AX; β-1,4-xylosyltransferase được phát hiện là enzyme

xúc tác sinh tổng hợp xương sống xylan trong khi AX-arabinosyltransferase
thêm chuỗi bên arabinose (Gibeaut và Carpita, 1991; Porchiaet al.,2002).
2.6 Tính chất hóa lý của Arabinoxylans
Các thuộc tính hóa lý được báo cáo của AX chủ yếu là do cấu trúc của nó
đặc trưng,I E,chiều dài của xương sống xylan, mức độ phân nhánh (A/X
1
tỷ lệ) và liên kết ngang oxy hóa bởi axit ferulic (Courtin và Delcour, 2002;
Izydorczyk và Biliaderis, 1995). Các tính chất hóa lý chính được quan tâm là
độ hòa tan trong nước, độ nhớt, khả năng giữ nước và gel oxy hóa.
độ hòa tan trong nước
Nói chung, độ tan của AX trong nước phụ thuộc vào cấu tạo của phân tử,I E
chiều dài chuỗi, mức độ thay thế (DS, tương đương với tỷ lệ A/X) và
mô hình thay thế (Courtin và Delcour, 2002; Saulnieret al., 2007). Mức độ
sự thay thế dường như là yếu tố chính ảnh hưởng đến độ hòa tan của AX; DS cao hơn cho lớn hơn
khả năng hòa tan trong nước, dưới dạng "chuỗi bên" arabinose (chính xác hơn là sự thay thế arabinose)
ngăn chặn sự tổng hợp liên phân tử của các chuỗi xyloza không được thay thế, đồng thời loại bỏ
các chuỗi bên về mặt enzyme thường dẫn đến độ hòa tan thấp hơn (Andrewarthaet al.,
1979; Courtin và Delcour, 2002). Trọng lượng phân tử (Mw) cũng đóng một vai trò thiết yếu
về độ hòa tan, với Mw AX thấp hơn thể hiện độ hòa tan cao hơn (Mares và Stone, 1973;
Courtin và Delcour, 2002; Saulnieret al.,2007). Biệnet al. (2010) áp dụng dần dần
kết tủa trên dịch chiết AX sử dụng dải nồng độ etanol 10, 20, 30, 45,
60 và 80%. Mw AX cao với ít nhánh hơn kết tủa trước, trong khi thấp hơn
Mw với nhiều nhánh cần nồng độ ethanol cao hơn để kết tủa.
độ nhớt
Dung dịch AX nhớt và có xu hướng biểu hiện hành vi giả dẻo do

trọng lượng phân tử tương đối cao và cấu trúc cuộn ngẫu nhiên bán linh hoạt cứng.
Một số yếu tố ảnh hưởng đến độ nhớt của dung dịch AX bao gồm Mw, tỷ lệ A/X, pH, AX
nồng độ và hàm lượng axit ferulic (Girhammar và Nair, 1992; Courtin và Delcour,
2002). Girhammar và Nair (1992) báo cáo rằng Mw AX cao hơn cho độ nhớt cao hơn
các dung dịch và các dung dịch nhớt hơn thu được ở pH trung tính; họ lưu ý rằng đó là
có thể các giá trị pH axit và kiềm phá vỡ các liên kết chéo este hoặc thậm chí
thủy phân các chuỗi polysaccharid trong điều kiện pH khắc nghiệt. hàm lượng axit ferulic
ảnh hưởng đáng kể đến độ nhớt của dung dịch vì nó có thể tạo ra các liên kết chéo giữa các chuỗi AX,
2
hình thành các phân tử Mw cao hơn (Courtin và Delcour, 2002; Dervilly-Pinelet al., 2001;
Saulnieret al., 2007).
Sức chứa nước
Khả năng giữ nước là một trong những thuộc tính hấp dẫn nhất của AX, đặc biệt đối với
thợ làm bánh chẳng hạn. Courtin và Delcour (1998) đã thêm chiết xuất AX vào bột nhào bánh mì và
định lượng hành vi của bột bằng farinograph; họ kết luận rằng WUAX có khả năng
giữ 7-10 lần trọng lượng của chúng trong nước, trong khi WEAX thể hiện lượng nước thấp hơn-
khả năng liên kết ở mức 4-6 lần trọng lượng của chúng.
Khả năng tạo gel và tạo gel oxy hóa
Izydorczyket al. (1990) đã chứng minh rằng các tác nhân oxy hóa (ví dụhydro peroxide hoặc
peroxidase) có thể tạo ra sự gel hóa oxy hóa trong dung dịch AX, bằng cách xúc tác sự hình thành
của các liên kết ngang cộng hóa trị giữa các phân tử AX bằng phản ứng dime hóa axit ferulic
dư lượng. Hình 2-4 mô tả sự liên kết oxy hóa của axit ferulic.
Hình 2-4. Sự liên kết oxy hóa của axit ferulic (Döring et al., 2015).
Những liên kết chéo này làm tăng độ nhớt và cuối cùng dẫn đến sự hình thành gel
(Dervilly-Pinelet al., 2001a; vinkxet al., 1991). Mw cao, axit ferulic cao và
chuỗi xylan ít thay thế hơn (A/X thấp) là tiền chất chính của phản ứng chéo đáng kể
liên kết (Izydorczyk và Biliaderis, 1995). Tuy nhiên, độ cứng của gel tùy thuộc vào
độ nhớt nội tại của AX, chứ không phải hàm lượng dư lượng axit ferulic (Dervilly-Pinel
3
et al., 2001a). Các liên kết không cộng hóa trị khác, chẳng hạn như liên kết hydro và liên kết van der
Waals, cũng góp phần vào độ bền của gel (Saulnieret al., 2007).
ổn định bọt
Arabinoxylans có đặc tính nhũ hóa và khả năng ổn định màng protein
chống lại sự gián đoạn nhiệt khi chúng làm tăng độ nhớt của chất lỏng giữa các lớp, thay đổi
đặc tính thoát nước của màng bọt và làm trung gian tương tác giữa các protein trong
lớp hấp thụ (Izydorczyket al.,1991; Sarkeret al.,1998; Xiang và Runge, 2016).
2.7 Mục tiêu nghiên cứu
Trong bối cảnh khám phá các chiến lược để nâng cao thu nhập kinh tế từ
nhà máy lọc dầu sinh học, cách tiếp cận tích hợp nhà máy lọc dầu sinh học là cơ sở hiệu quả để khai thác
các cơ hội tương tác phát sinh từ việc đồng sản xuất một số sản phẩm.
Các nhà máy tinh chế sinh học hiện nay chủ yếu bắt nguồn từ sản xuất etanol, và etanol có thể
đóng vai trò là tác nhân kết tủa cho arabinoxylan, làm cho arabinoxylan trở thành đồng hợp tự nhiên
sản phẩm cồn sinh học mang đến cơ hội mang đến một loại thực phẩm chức năng mới
nguyên liệu ra thị trường.
Động lực chính của công việc hiện tại đã được xác định trước đó là quy mô thí điểm
sản xuất arabinoxylan và arabinoxylan oligosacarit trong tích hợp

nhà máy lọc dầu sinh học. Để điều tra cơ hội, một số mục tiêu đã được xác định
(một số trong số này trở nên nổi bật khi dự án tiến triển):
(i) thực hiện quy trình lên men cồn sinh học ở quy mô thí điểm để sản xuất và
đặc trưng cho các sản phẩm phụ trung gian ướt,I EDWG và các chất hòa tan.
(ii) để điều tra việc sản xuất enzyme trực tiếp của prebiotic AX từ nguyên liệu ướt
sản phẩm,DWG.
(iii) chiết xuất AX về mặt hóa học bằng phương pháp oxy hóa kiềm ở quy mô thí điểm
từ DWG và để mô tả các phần chiết xuất.

4
(iv) phát triển một phương pháp phân tích hiệu quả để xác định đồng thời
monosacarit, xylo-oligosacarit, arabinoxylan oligosacarit và uronic
axit.
(v) để nghiên cứu quá trình sản xuất enzyme và phân hủy đồng thời XOS.
(vi) để sản xuất và mô tả đặc điểm của AX có thể chiết xuất được bằng nước và không thể chiết xuất được bằng nước trong
nhà máy tinh chế sinh học và để đánh giá tiềm năng sản xuất XOS từ các chất chiết xuất này.
2.8 Tóm tắt
Phân loại Arabinoxylan và tính chất chức năng được xác định bởi giá trị trung bình
tính chất phân tử như trọng lượng phân tử, mức độ thay thế và
Liên kết chéo. Các phân tử AX nhỏ hơn dễ hòa tan hơn trong nước và chứa ít ferulic hơn
liên kết chéo axit và thường được phân loại là AX có thể chiết xuất trong nước, trong khi
các phân tử lớn hơn với sự phân nhánh cao và nhiều liên kết ngang ít hòa tan trong nước
và thường được gọi là AX không thể chiết xuất bằng nước. Nói rộng ra, cao
WUAX được thay thế cho thấy khả năng giữ nước lớn hơn và có khả năng hình thành
dung dịch có độ nhớt cao hơn. Giảm sự thay thế arabinose làm giảm cả hai
độ tan và độ nhớt của dung dịch.
Như đã lưu ý ở trên, mặc dù hiểu biết khoa học về AX rất sâu rộng và chi tiết, nhưng
sự hiểu biết về công nghệ đã bị cản trở do thiếu sự sẵn có của lớn hơn
số lượng quy mô băng ghế dự bị. Vì vậy, một trong những mục tiêu của công việc hiện tại là sản xuất
lượng đáng kể AX bằng cách sử dụng cồn sinh học quy mô thử nghiệm của Trường Khoa học Ứng dụng
thực vật. Việc sản xuất tương đương với quy mô công nghiệp Distillers Wet Grains (DWG)
và Distillers Solubles (DS), từ đó chiết xuất AX, được mô tả trong chương tiếp theo.
5
Sản xuất quy mô thí điểm các sản phẩm phụ của nhà máy lọc sinh học
3 Sản xuất quy mô thí điểm các sản phẩm phụ của nhà máy lọc dầu sinh học
3.1 Giới thiệu
Ethanol sinh học trong những thập kỷ gần đây đã trở thành nhiên liệu sinh học quan trọng nhất cho giao thông vận tải
và là cơ sở cho sự xuất hiện của các nhà máy lọc dầu sinh học. Như đã lưu ý trong Chương 1, các
đặc điểm của các nhà máy lọc sinh học bao gồm danh mục sản phẩm đồng hành và triển khai
tích hợp quy trình để đạt được hiệu quả sẽ giúp các nhà máy lọc dầu sinh học trở thành
cạnh tranh với các nhà máy lọc dầu. AX là một ứng cử viên đặc biệt hứa hẹn với tư cách là đồng sản phẩm
với etanol sinh học, vì etanol được sử dụng để kết tủa AX, tạo cơ hội tích hợp
và làm cho việc sản xuất AX trở nên khả thi về mặt kinh tế. Sự gia tăng của các nhà máy lọc dầu sinh học, mang lại
cơ hội tạo nguồn thương mại cho các sản phẩm dựa trên AX, cũng đòi hỏi sự hợp tác
tạo ra thị trường cho các sản phẩm này trong thực phẩm, dược phẩm và dược phẩm
thị trường.
Để tích hợp thành công quá trình sản xuất AX trong các nhà máy lọc sinh học,
các dòng của quy trình cồn sinh học, Hạt ướt chưng cất (DWG) và Hòa tan trong chưng cất
(DS), cần được đặc trưng cho nội dung và thuộc tính AX của chúng và để dễ dàng
khôi phục AX từ các luồng này. Tuy nhiên, thiết kế của các nhà máy sản xuất cồn sinh học hiện nay ở
Vương quốc Anh không cho phép truy cập sẵn sàng vào các luồng đang xử lý này để lấy mẫu.
Vì vậy, phần này của dự án nhằm vận hành nhà máy sản xuất cồn sinh học GUNT CE-640
để sản xuất vật liệu tương tự như dòng DWG và Solubles trong các nhà máy công nghiệp. Cái này
chương xem xét sản xuất ethanol sinh học công nghiệp và mô tả hoạt động của
Quy trình quy mô thí điểm GUNT để sản xuất và mô tả DWG và DS để tiếp tục
các cuộc điều tra.
3.2 Nhà máy tinh chế cồn sinh học – quá khứ, hiện tại và tương lai
Lên men rượu là một trong những quá trình sinh học đầu tiên mà loài người sơ khai khai thác.
Các nhà khảo cổ báo cáo rằng đồ uống lên men tồn tại trong thời kỳ đồ đá mới (7000
6
BC) ở Trung Quốc, Lưỡng Hà và Ai Cập cổ đại (McGovernet al.,1996; Samuel, 1996;
Steinkraus, 1997), với quá trình lên men bắt đầu bởi các loại men tự nhiên (Sicard và
Legras, 2011). Ở Trung Quốc, đồ uống chủ yếu được làm từ gạo, trong khi
Mesopotamia và Ai Cập lên men trái cây, mật ong và mạch nha, trong khi việc sử dụng
nho đã được báo cáo ở Mesopotamia khoảng 5400 TCN (McGovernet al.,1996). Không phải vậy
được ghi lại chính xác khi nào và ở đâu thực phẩm lên men được bắt đầu, nhưng rõ ràng là
rằng quá trình lên men đã mang lại cho loài người những món ăn, thức uống có mùi vị dễ chịu
và kết cấu và, trong trường hợp đồ uống, có đặc tính gây say.
Ngày nay, quá trình lên men vẫn tiếp tục cung cấp cho loài người không chỉ thực phẩm và đồ uống
nhưng với nhiên liệu là tốt. Quy trình sản xuất cồn sinh học không khác nhiều so với
quy trình sản xuất đồ uống lên men, ngoại trừ ở quy mô lớn hơn và không có
ví dụ như mối quan tâm về mùi thơm và hương vị của bia và rượu vang.
Năm 2017, sản lượng ethanol sinh học toàn cầu đạt khoảng 100 tỷ lít, một nửa trong số đó là
tại Hoa Kỳ (Chatzifragkouet al.,2015). Khoảng 95% ethanol sinh học trên thế giới
sản xuất ở Mỹ, Trung Quốc và Châu Âu, sử dụng tinh bột làm nguyên liệu ban đầu
(OECD/FAO, 2015). Sản xuất chủ yếu từ ngô và đậu tương ở Mỹ, mía
ở Brazil, ngô ở Trung Quốc và củ cải đường, lúa mì và lúa mạch ở châu Âu (Stein, 2007), với
quá trình sản xuất khác nhau tùy thuộc vào nguyên liệu thức ăn chăn nuôi. Đối với cồn sinh học
ngũ cốc, có hai quy trình chính: quy trình xay xát ướt và
quá trình xay khô.
xay xát ướt
Hình 3-1 minh họa quy trình xay ướt ngô. Trong quá trình này, ngô được
được phân đoạn thành các thành phần tương đối tinh khiết (tinh bột, gluten, dầu) và bột mầm và
các phần cám dùng làm thức ăn chăn nuôi, trước khi tinh bột được thủy phân thành glucose
và lên men thành etanol. Tóm lại, sàng lọc đầu tiên được áp dụng để loại bỏ ngoại lai
vật liệu (phụ phẩm cây trồng, hạt vỡ, v.v.), sau đó hạt được ngâm trong
bể ngâm với dung dịch sulfur dioxide pha loãng trong 48 giờ. mầm bệnh là
được tách ra khỏi nhân đã ngâm và chuyển sang sản xuất dầu, phần còn lại được sử dụng
7
làm thức ăn và được gọi là bột mầm ngô. Cám được tách ra bằng cách đi qua bùn
qua rây, để lại tinh bột và gluten trong dung dịch. Gluten được tách ra
và sấy khô để tạo thành bột ngô (Blanchard, 1992; Elmekawyet al.,2013; Cổ phần,
Lewis, Klopfenstein và Milton, 2000). Quá trình này tạo ra một loạt các tương đối tinh khiết
và các sản phẩm có giá trị cao; tuy nhiên, điều này đòi hỏi nguyên liệu chất lượng tốt (thứ nhất hoặc thứ hai
loại ngô) và một quy trình phức tạp và tốn kém đòi hỏi vốn đầu tư cao
(Bê-ly-aet al.,2010).
Hình 3-1. Quy trình xay xát ướt hạt ngô.
xay xát khô
Trong quy trình này, hạt hoặc hỗn hợp ngũ cốc được xay mà không sử dụng bất kỳ
phân đoạn trước khi lên men; toàn bộ ngũ cốc sau đó trải qua quá trình
quá trình lên men, và phần tinh bột được chuyển thành ethanol và CO2, Nhân vật
3-2 cho thấy một quá trình đơn giản hóa. Hỗn hợp lên men trải qua quá trình phân tách khác nhau
số 8
quy trình tách etanol ra khỏi phần lớn môi trường lên men; không phải
dư lượng lên men được sấy khô để tạo ra sản phẩm phụ chính, Hạt khô chưng cất với
Chất hòa tan (DDGS), được đưa vào thức ăn chăn nuôi và đóng góp một tỷ lệ đáng kể vào
doanh thu của nhà máy tinh chế sinh học. Trong một số quá trình CO2có thể bị bắt và bán dưới dạng
một nguồn doanh thu bổ sung.
Hình 3-2. Quy trình nghiền khô để sản xuất cồn sinh học.
Ưu điểm chính của quy trình này, so với quy trình xay xát ướt, là khả năng
để chế biến các loại ngũ cốc khác nhau với giới hạn hạn chế về chất lượng của hạt
(Cổ phầnet al.,1999). Khoảng 82% sản lượng cồn sinh học trên toàn thế giới sử dụng phương pháp nghiền khô
phương pháp (Gỗet al.,2012). Sự phổ biến của quá trình này dẫn đến sự gia tăng
lượng DDGS xâm nhập vào thị trường thức ăn chăn nuôi, điều này gây ra các vấn đề về
giá trị dinh dưỡng và hiệu quả của DDGS đối với các loại vật nuôi khác nhau (bò, lợn,
gia cầm và cá).
3.3 Chưng cất ngũ cốc khô với chất hòa tan
DDGS trong lịch sử là sản phẩm phụ của ngành công nghiệp đồ uống có cồn và là
nguồn năng lượng, đạm, khoáng và vitamin cho thức ăn chăn nuôi (Cromwellet al.,1993;
Klopfensteinet al.,2008). Gần đây, sự gia tăng đột biến trong sản xuất cồn sinh học nghiền khô cho
nhiên liệu đã dẫn đến một lượng lớn hơn nhiều sản phẩm phụ này đi vào thức ăn chăn nuôi
9
chợ. Tính khả dụng của DDGS dự kiến sẽ còn tăng hơn nữa trong tương lai.
Khai thác DDGS trên thị trường thức ăn chăn nuôi đóng góp đáng kể vào lợi nhuận
của nhà máy lọc sinh học (Klopfensteinet al.,2008). Tuy nhiên, DDGS vẫn còn tương đối thấp.
giá trị sản phẩm, và khai thác kinh tế tốt hơn của vật liệu này sẽ đáng kể
hỗ trợ phát triển ngành công nghiệp cồn sinh học.
Khai thác AX cung cấp một sản phẩm có giá trị cao hơn, nhưng cũng mang lại lợi ích hơn nữa; CÂY RÌU
là chất xơ ăn kiêng, gây bất lợi cho việc chuyển đổi thức ăn chăn nuôi thành chất tăng trọng
(con người nên ăn nhiều chất xơ hơn vì nói chung, chúng ta cần tránh tăng cân, nhưng động vật
dinh dưỡng thì ngược lại, nơi người chăn nuôi mong muốn tăng trọng nhanh).
Do đó, việc giảm hàm lượng chất xơ của DDGS bằng cách chiết xuất AX sẽ tăng cường
giá trị của DDGS chất xơ khử còn lại. Gia súc có thể đối phó với lượng chất xơ cao trong chế độ ăn uống của chúng,
nhưng lợn và gia cầm cần ít chất xơ hơn trong khẩu phần – loại bỏ AX khỏi DDGS sẽ
có khả năng cho phép sử dụng nhiều hơn DDGS trong các công thức thức ăn chăn nuôi cho lợn và gia cầm.
DDGS được xác định bởi Hiệp hội các quan chức kiểm soát thức ăn chăn nuôi Hoa Kỳ (Świa̧tkiewicz và
Koreleski, 2008) như sau:
“Distillers Dry Grains with Solubles là sản phẩm thu được sau khi loại bỏ etyl
rượu bằng cách chưng cất từ quá trình lên men men của ngũ cốc hoặc hỗn hợp ngũ cốc bằng cách
cô đặc và làm khô ít nhất ¾ chất rắn của toàn bộ phần còn lại thu được bằng cách
các phương pháp được sử dụng trong ngành chưng cất ngũ cốc.”
Định nghĩa phản ánh quy trình sản xuất DDGS, được minh họa trong Hình
3-3. Tóm lại, quá trình xay xát, hóa lỏng và đường hóa toàn bộ hạt là
đạt được bằng cách thủy phân nhiệt và enzyme để tạo điều kiện thuận lợi cho sự phân hủy tinh bột thành
glucose lên men được. Sau đó, nấm men lên men các loại đường có sẵn thành ethanol và
khí cacbonic. Sau quá trình lên men, ethanol được tách ra bằng cách chưng cất và
khử nước bằng sàng phân tử. Các thành phần không thể lên men và không bay hơi
được tách ra khỏi bùn bằng cách lọc và ly tâm để tạo ra phần chất lỏng
được gọi là ảnh tĩnh mỏng (với phần chất rắn khoảng 5%) và phần chất rắn được gọi là
Chưng cất ngũ cốc ướt (DWG). Phần tĩnh mỏng được bốc hơi thành Distillers Solubles
0
(thường có hàm lượng chất rắn khoảng 12% (Moreyet al.,2009)), được thêm vào
DWG và sấy khô ở nhiệt độ cao để tạo ra DDGS cuối cùng (Jensenet al.,2012;
vua chúaet al., 2010).
Hình 3-3. Sản xuất ethanol nghiền khôquy trình và sản phẩm phụ
(đơn giản hóa, phỏng theo Kingsly et al., 2010).
Thành phần hóa học của DDGS tương tự như hạt không tinh bột ban đầu
các thành phần (nó cũng chứa nguyên liệu men từ quá trình lên men). Các biến thể trong
nguyên liệu thô đưa ra các biến thể về thành phần của DDGS cuối cùng và các biến thể là
được báo cáo giữa các nhà máy sản xuất cồn sinh học và giữa các lô khác nhau từ cùng một
nhà máy sản xuất (Liu, 2011). Ảnh hưởng của sự thay đổi trong nguyên liệu thô (lúa mì,
lúa mạch, ngô hoặc hỗn hợp) có tác động rõ ràng nhất, nhưng sự khác biệt trong quá trình trồng ngũ cốc,
thu hoạch và xử lý cũng có những tác động đáng chú ý (Cromwellet al.,1993; Kimet al.,
2007; Lưu, 2008). Các điều kiện chế biến như phương pháp sấy khô và nhiệt độ
cũng ảnh hưởng đến DDGS cuối cùng (Chatzifragkouet al.,2015). Bảng 3-1 cho thấy sự khác biệt
thành phần hóa học của DDGS lúa mì (Jarretet al.,2011), ngô DDGS (Spiehset al.,
2002) và hỗn hợp lúa mì, triticale, lúa mạch và lúa mạch đen DDGS (Pedersenet al.,2014).
Rõ ràng, sự khác biệt về thành phần dinh dưỡng của hạt bố mẹ thể hiện ở
DDGS; dầu trong DDGS ngô lớn hơn trong DDGS lúa mì, trong khi loại sau chứa
lượng protein thô lớn hơn một chút.
1
Bảng 3-1. Thành phần của DDGS từ các loại thực vật và nguồn khác nhau (được biểu thị bằng %, khô
cơ sở vật chất)(Jarretet al.,2011; người đi bộet al.,2014; Spiehset al.,2002).
ngô DDGS lúa mì DDGS pha trộn DDGS

Vật chất khô 87.2–90.2 89,3–94,4 90,5–92,7
Dầu 10.2–11.4 3.6–5.6 8.1–12.8
Chất đạm 28.7–31.6 32,6–38,9 23.4–27.9
Sợi thô 8.3–9.7 6.2–10.9 9,6–10,6
Tro 5.2–6.7 4.3–6.7 3.4–7.3
Nói chung, sau khi loại bỏ tinh bột bằng quá trình lên men, các thành phần còn lại
của hạt được cô đặc theo hệ số khoảng ba (Rascoet al., 1987). Người giàu
hàm lượng protein và chất xơ trong DDGS mở ra một số khả năng khai thác khác ngoài
thức ăn chăn nuôi, bao gồm cả sự xuống cấp của polysacarit để có thêm ethanol
sản xuất, sản xuất các sản phẩm giá trị gia tăng, nguồn nguyên liệu thực phẩm hoặc sử dụng trong
vật liệu tổng hợp sinh học (Thacker và Widyaratne, 2007). Tuy nhiên, sự hội nhập thành công
bất kỳ quy trình bình ổn hóa DDGS nào trong các nhà máy lọc dầu sinh học sẽ cần phải được thực hiện
trên vật liệu ướt thực tế,I EDWG và hoặc DS, vì vật liệu khô cuối cùng không thể chấp nhận được
để xử lý tiếp (không phân tán lại trong nước) và sấy khô có thể thay đổi
đặc tính của vật liệu. DDGS khô rất dễ kiếm, và một số nghiên cứu
đã nghiên cứu khai thác từ DDGS (Chatzifragkouet al.,2015; Kosiket al., 2017),
nhưng các nghiên cứu về DWG ướt sẽ thực tế hơn cả về đặc điểm
của vật liệu và tính thực tiễn của việc trích xuất từ nó trong bối cảnh công nghiệp.
DDGS và DWG
Trong lịch sử, có hai sản phẩm phụ của quá trình sản xuất ethanol sinh học,
Hạt khô chưng cất (DDG) và Chất hòa tan trong chưng cất (DS) (Thacker và Widyaratne,
2007). Các nhà máy sản xuất cồn sinh học hiện nay có xu hướng trộn ngũ cốc đã qua sử dụng và các chất hòa tan trong quá trình sấy khô
để tạo ra sản phẩm kết hợp, DDGS. Trong một số trường hợp, nhà sản xuất có sự sắp xếp
với các doanh nghiệp chăn nuôi địa phương cho phép sản xuất một sản phẩm ẩm, vì nó là
vận chuyển và tiêu thụ bởi động vật trước khi nó có thể hư hỏng, nhưng nói chung khô
sản phẩm là cần thiết để cung cấp cho sự ổn định lâu hơn.
2
Hình 3-3 cho thấy quy trình sản xuất ethanol trong lúa mì xay khô
nhà máy tinh chế sinh học, nơi hỗn hợp nghiền được tách ra sau khi chưng cất thành DWG (~60-70%
độ ẩm) và phần cất loãng (~95% độ ẩm) chứa tất cả các chất hòa tan (Morey
et al., 2009). DWG và ảnh tĩnh mỏng trải qua quá trình xử lý nhiệt khắc nghiệt trong quá trình
quá trình sấy khô, làm thay đổi các thành phần của DDGS. Như đã lưu ý trong phần 3.3,
khai thác từ DDGS, cũng như không phù hợp trong bối cảnh công nghiệp, sẽ
mang lại các sản phẩm có chức năng khác (và có thể kém hơn) so với
trích xuất từ DWG. Xử lý nhiệt khắc nghiệt có ảnh hưởng lớn đến
giá trị dinh dưỡng của protein DDGS (De Vrieset al., 2013). Schroeder (2012) báo cáo
rằng tỷ lệ protein không thể phân hủy tăng từ 47% trong DWG lên 54% trong
DDG. Hiệu quả của xử lý nhiệt có khả năng ảnh hưởng đến các thành phần khác như
như polysaccharid của vách tế bào. Chẳng hạn, AX trong DDGS được báo cáo là có
tỷ lệ A/X thấp hơn đáng kể so với AX hạt ban đầu cũng như cao hơn
tỷ lệ AX có thể chiết xuất bằng nước (Pedersenet al.,2014). Những thay đổi cấu trúc này
và những thay đổi về độ hòa tan của AX có thể là kết quả của sự thay đổi cấu trúc phân tử
và/hoặc liên kết ngang phân tử với các thành phần khác trong thành tế bào (Kosiket al.,
2017).
Do đó, mặc dù một số nghiên cứu trong lĩnh vực này đã điều tra DDGS như một nguồn cao hơn
vật liệu giá trị, công việc hiện tại bắt đầu bằng cách sản xuất tương đương quy mô thí điểm của DWG,
để cung cấp một vật liệu tiêu biểu hơn cho các nghiên cứu tiếp theo về tách chiết AX và
xử lý enzym.
3.4 Vật liệu và thiết bị được sử dụng để sản xuất cồn sinh học và DWG quy mô thí điểm
Ethanol sinh học và DWG được sản xuất từ lúa mì xay bằng GUNT CE-640
nhà máy cồn sinh học.
Hóa chất và enzyme
Lúa mì được lấy từ Target Feeds Ltd (Shropshire, Vương quốc Anh), người cung cấp lúa mì
xay đôi qua lưới 2 mm. Các enzym dùng để thủy phân tinh bột,α-
3
amylase (SCHLIESSMANN-VF-) và gluco-amylase (SCHLIESSMANN-VZ-), chất chống
chất tạo bọt (SCHLIESSMANN-EX-PROTIN) và men làm bánh khô từ chủng

Saccharomyces cerevisiae(KORNBRAND PREMIUM), được mua từ ReKru
GmbH, Đức. Viên natri hydroxit và axit sunfuric (>95%) phòng thí nghiệm
loại thuốc thử được lấy từ Fisher Science Ltd.
Nhà máy sản xuất cồn sinh học CE-640
Thiết bị CE-640 do GUNT Technology Ltd. (Hamburg, Đức) cung cấp được thiết kế để
bắt chước các quy trình sản xuất ethanol công nghiệp và tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình sản xuất
lấy mẫu vật liệu đã xử lý qua tất cả các giai đoạn của quy trình.
(https://www.gunt.de/en/products/process-engineering/biological- process-
kỹ thuật/quy trình kỵ khí/sản xuất-công nghệ sinh học

etanol/083.64000/ce640/glct-1:pa-148:ca-251:pr-69 ). Nó bao gồm ba đơn vị chính:
bể nghiền, bể lên men và thiết bị chưng cất. Hình 3-4 cho thấy một
cái nhìn tổng thể của các thành phần đơn vị. Nhà máy được điều khiển và giám sát thông qua
bộ điều khiển logic khả trình tích hợp hiển thị bên phải Hình 3-4. Cây cối
giao cho Đại học Huddersfield có một số sửa đổi từ
đơn vị tiêu chuẩn do GUNT cung cấp, để làm cho nó đặc biệt phù hợp với công việc khai thác AX:
máy bơm có khả năng xử lý chất rắn dạng hạt lớn hơn, kiểm soát pH và nhiệt độ đầy đủ để
cả bể nghiền và bể lên men, và phần mềm điều khiển tương ứng

sửa đổi.
Bể nghiền được sử dụng để hóa lỏng và đường hóa các nguyên liệu ban đầu,
với dung tích 40 lít. Nó là một tàu thép không gỉ hai lớp được trang bị
máy khuấy điều chỉnh tốc độ bao gồm một động cơ giảm tốc và một lưỡi cắt nghiêng trên trục.
Vật liệu trong bể nghiền được làm nóng bằng cách phun hơi nước trực tiếp qua vòi phun hoặc qua
hệ thống sưởi hai lớp. Độ pH được theo dõi bằng đầu dò pH tích hợp và
được kiểm soát bằng nguồn cung cấp axit/bazơ với bơm định lượng màng.
4
Hình 3-4. Nhà máy Ethanol sinh học GUNT CE-640, tổng quan.
Bộ phận lên men có dung tích 60 lít, với tất cả các thông số kỹ thuật kiểm soát của
bể nghiền. Ngoài ra, bể được niêm phong kín và trục khuấy chạy vào
thùng chứa thông qua khóa lên men, sử dụng nước làm chất lỏng bịt kín. Các
sinh ra CO2trong quá trình lên men ngọc trai lên như bong bóng khí thông qua niêm phong
chất lỏng của khóa lên men.
Thiết bị chưng cất là một bộ gia nhiệt nồi hơi đã được sửa đổi với bể nước. Nó chứa một bong bóng
cột khay nắp, máy khử đờm (một thiết bị để làm ngưng tụ một phần dịch
dòng hơi đa thành phần) và bình ngưng.
Sơ đồ quy trình, Hình 3-5, trình bày tất cả các thành phần và phép đo trên
thiết bị, cũng như các kết nối đường ống, đường cung cấp và các van vận hành thủ công.
5
Hình 3-5. Sơ đồ quy trình của nhà máy Ethanol sinh học GUNT CE-640.
3.5 Phương pháp sản xuất cồn sinh học và DWG
Sản xuất sản phẩm DWG yêu cầu quy trình lên men bắt chước quy trình có liên quan
điều kiện công nghiệp. Quy trình được sử dụng để sản xuất ethanol và DWG trong
Nhà máy GUNT được mô tả dưới đây. Quá trình lên men được theo sau bởi đặc tính
của nguyên liệu đầu và cuối; các phương pháp phân tích được sử dụng cũng được mô tả.
phương pháp lên men
Để tạo ra sản phẩm phụ lên men tươi, DWG, đại diện cho
sản phẩm phụ công nghiệp, điều kiện sản xuất công nghiệp nên được tuân theo. Tuy nhiên, nó
rất khó để xác định chính xác các điều kiện lên men công nghiệp vì thông tin này là
nhạy cảm về mặt thương mại và cũng khác nhau giữa các nhà máy sản xuất. Vì vậy, nhằm
để tạo ra một DWG đại diện có các đặc tính của vật liệu được tạo ra
trong các nhà máy lọc sinh học quy mô lớn, các điều kiện sản xuất được thiết lập theo
khuyến nghị của nhà cung cấp đơn vị lên men quy mô thí điểm, đó là
tương tự như các điều kiện được báo cáo trong tài liệu.
6
Hình 3-6 trình bày chi tiết quy trình sản xuất DWG được thực hiện trong dự án này.
Lúa mì được xay đôi bằng mắt lưới 2 mm của Target Feeds Ltd.; tuy nhiên, điều này để lại
một tỷ lệ đáng kể các hạt lớn và hạt nguyên vẹn mà lẽ ra đã được

lên men không hoàn toàn. Do đó, lúa mì đã xay được sàng trên lưới 1,4 mm,
và vật liệu lớn được xay bằng máy nghiền Retsch ZM1000 (Retsch GmbH, Đức)
không có màn hình, được sàng lại (một lần nữa trên lưới 1,4 mm) và vật liệu đi qua
sau đó phối lại kỹ lưỡng với chất liệu ban đầu nhỏ hơn, trong khi chất liệu quá khổ
được xay lại.
Một lô 6 kg lúa mì đã xay được phân phối vào thùng nghiền với 15 L nước; trực tiếp
phun hơi nước làm nóng hỗn hợp nghiền đến 85 ° C. Tổng lượng nước bổ sung là 25 L,
tương ứng với tỷ lệ rắn:lỏng là 1:4. Quá trình thủy phân tinh bột được bắt đầu bằng cách thêm 1,2
mL α-amylase (20 mL trên 100 kg) đồng thời khuấy mạnh ở tốc độ 200 vòng/phút trong một giờ. Các
nhiệt độ của quá trình nghiền được giảm xuống 55°C và độ pH được điều chỉnh thành 4,5-5 bằng axit sunfuric.
axit. Quá trình thủy phân tiếp theo được thực hiện bằng cách thêm 3,6 mL gluco-amylaza (60 mL
trên 100 kg) với khuấy liên tục trong 2 giờ. Nhiệt độ của hỗn hợp là
giảm xuống 28°C, và hỗn hợp nghiền được bơm vào bình lên men. Men (6 g,
tương đương với 100 g trên 100 kg) đã được thêm vào hỗn hợp nghiền để bắt đầu quá trình lên men, cùng với
với 0,9 mL chất chống tạo bọt (15 mL trên 100 kg). Hỗn hợp được lên men trên 72
giờ với sự kiểm soát nhiệt độ liên tục trong khoảng 25-28°C. Kết thúc của
quá trình lên men được công nhận bởi sự ngừng của CO2giải phóng khỏi con dấu nước, như
minh họa trong Hình 3-7.
Sau 72 giờ, hỗn hợp được bơm lên cột chưng cất và chưng cất trong thời gian
4 giờ để tách etanol, sau đó để nguội đến nhiệt độ phòng qua đêm.
Bùn còn lại được lọc qua vải để thu được DWG và dịch lọc —
các chất hòa tan - được sấy khô trong lò để thu hồi các chất hòa tan khô. Cả DWG và chất hòa tan
được bảo quản trong tủ đông cho các thí nghiệm tiếp theo.
7
Hình 3-6. Quy trình sản xuất DWG bằng nhà máy sản xuất cồn sinh học GUNT CE-640.
số 8
Hình 3-7. khí CO2giải phóng khỏi nước bịt kín trong quá trình lên men.
3.6 Đặc tính của các sản phẩm phụ
Một loạt các thử nghiệm và phân tích đã được thực hiện để định lượng sản lượng và đặc trưng
các nguyên liệu được sản xuất và những thay đổi trong việc phân phối đường sau khi lên men.
độ tinh khiết của etanol
Vì etanol được sản xuất không phải là mối quan tâm chính của nghiên cứu này nên các thử nghiệm đã tiến hành
ra trên etanol được giới hạn trong việc ước tính số lượng và nồng độ
bằng tỷ trọng kế cồn. Trường Khoa học Ứng dụng đã được yêu cầu để có được
giấy phép nhà máy chưng cất cho nhà máy cồn sinh học GUNT từ Cơ quan Thuế và Hải quan; TRONG
theo các điều khoản của giấy phép, tất cả ethanol được sản xuất đã được ghi lại và lưu trữ
trong “nhà kho” của chúng tôi (một cái tủ có khóa).
Phân tích đường cấu thành
Các mẫu nguyên liệu thô (lúa mì) và nguyên liệu được sản xuất (DWG và Chất hòa tan)
đông khô và gửi đến Englyst Carbohydrate Ltd. (Southampton, UK) để

phân tích thành phần đường, từ đó có thể tính toán hàm lượng arabinoxylan.
(Sau này chúng tôi đã có thể tự mình thực hiện những phân tích này, nhưng trong giai đoạn đầu của dự án
chúng tôi không có quyền truy cập vào các cơ sở cần thiết, vì vậy đã sử dụng phòng thí nghiệm bên ngoài này.)
9
Phép đo polysacarit phi tinh bột (NSP) được thực hiện sau khi xử lý bằng enzym
loại bỏ tinh bột và thủy phân axit của NSP thành các loại đường cấu thành của chúng. Vì
thủy phân, các mẫu được xử lý bằng axit sunfuric 12M trong 30 phút ở
35˚C sau đó xử lý bằng axit sunfuric 2M trong 1 giờ ở 100 C̊. Sau đó, đường
được phân tách và đo bằng sắc ký trao đổi anion hiệu năng cao
(HPAEC) kết hợp với cột Dionex® CarboPac® PA-100 (250 x 4 mm) với
phát hiện ampe kế xung (PAD) (Englystet al., 1994).
Phân tích hàm lượng protein
Phân tích Kjeldahl được sử dụng để xác định hàm lượng protein tổng số trong
lúa mì, chất hòa tan và DWG. Axit sunfuric, axit clohydric, metyl đỏ (chỉ thị pH),
thu được các viên natri hydroxit, axit boric và Kjeltabs® (chất xúc tác tiêu hóa)
từ Công ty TNHH Khoa học Fisher, Vương quốc Anh. Hệ thống tiêu hóa nhanh Turbotherm, Gerhardt® (Model
TT125) được sử dụng để phá mẫu, Gerhardt Kjeldahl VAPODEST®, (Vapodest-10)
đã được sử dụng để chưng cất hơi nước khí amoniac được giải phóng và Schott Titronic® cơ bản
Buret chuẩn độ (máy chuẩn độ tự động) được sử dụng để chuẩn độ muối amoni.
Phương pháp xác định nitơ tổng số Kjeldahl bao gồm ba giai đoạn: phá mẫu,
chưng cất và chuẩn độ. Trong giai đoạn phân hủy, 0,50 g vật liệu thử nghiệm được
đặt vào ống tiêu hóa cùng với 2 viên Kjeltab® (natri sunfat khan
và chất xúc tác), 20 mL axit sunfuric đậm đặc và một ít chất chống va đập (đối với
ngăn ngừa sủi bọt). Quá trình phân hủy chuyển đổi nitơ thành muối amoniac
((NH4)2VÌ THẾ4) và các chất hữu cơ khác thành CO2và H2Ô.
Một mẫu kiểm soát cũng đã được chuẩn bị và tiêu hóa cho phù hợp. Các mẫu được tiêu hóa
trong 1 giờ 20 phút. Vào cuối giai đoạn phân hủy, màu xanh lục là
phát triển, cho thấy sự hoàn thành của quá trình tiêu hóa (tăng tiêu hóa
thời gian cần thiết để có được màu xanh lá cây). Sau khi quá trình tiêu hóa đã
hoàn thành, các ống phân hủy được để cân bằng với nhiệt độ phòng.
0
Thiết bị chưng cất Gerhardt Kjeldahl Vapodest® được sử dụng để chuyển đổi amoni
sunfat thành khí amoniac bằng cách thêm natri hydroxit. Amoniac được hình thành
được chưng cất vào bình nhận chứa 25 mL axit boric 3% và hai giọt
metyl đỏ (chỉ thị pH). Axit boric được sử dụng để chuyển đổi khí amoniac thành
muối amoni borat.
Xác định hàm lượng nitơ đã đạt được thông qua chuẩn độ của hình thành
amoni borat với axit clohydric 0,1 M; thể tích chuẩn độ trung bình từ
thu được ba lần lặp lại và giá trị hiệu giá trắng được sử dụng để tính toán
tỷ lệ phần trăm nitơ có trong các mẫu:
[%&'()* ,-,.&,-/0 1/)2'* ('4) − 7)&08 ,-,.&,-/0 1/)2'*('4)] ×;/)&.-,</= >?) × 14 × 100
%" =
C*-Dℎ, /= F&'()* ('D)
Sau khi xác định hàm lượng nitơ tổng số, nitơ thu được là
được chuyển đổi thành bối cảnh tỷ lệ phần trăm protein bằng hệ số chuyển đổi protein
phép nhân (F = 5,7) đối với các sản phẩm liên quan đến lúa mì (AOAC, 979,09).
xác định hàm lượng tro
Thuật ngữ “tro” dùng để chỉ chất vô cơ trong vật liệu được nghiên cứu. nguồn gốc của
hàm lượng tro có thể từ chính thực vật, chẳng hạn như muối được hấp thụ từ đất trong quá trình
tăng trưởng, hoặc từ chuỗi cung ứng, ví dụ, các hạt đất mang trên cây, hoặc từ
xử lý vật liệu,ví dụbổ sung axit và bazơ có thể làm tăng tro
nội dung. Hàm lượng tro thường được xác định bằng cách đốt cháy đối tượng nghiên cứu trong
một lò phòng thí nghiệm trong điều kiện kiểm soát.
Trong công trình này, hàm lượng tro được xác định theo tiêu chuẩn sinh khối
phương pháp phân tích được xuất bản bởi Phòng thí nghiệm năng lượng tái tạo quốc gia (NREL),
trong đó đề xuất biểu thức của tro dưới dạng phần trăm dư lượng còn lại
sau quá trình oxy hóa khô ở 550° đến 600°C (Sluiteret al., 2008).
1
Các mẫu lúa mì, chất hòa tan và DWG được cho vào chén sứ và đặt
trong lò nung có kiểm soát nhiệt độ ở 575°C ± 25°C trong bốn giờ. nồi nấu kim loại là
được lấy ra khỏi lò trực tiếp vào bình hút ẩm và để nguội trong phòng
nhiệt độ và cân. Chén nung lại được đưa vào lò và nung nóng trong một
giờ, chuyển vào bình hút ẩm và cân lại. Điều này đã được lặp đi lặp lại cho đến khi một
trọng lượng không đổi đã được ghi lại.
3.7 Kết quả
Khoảng 60 kg lúa mì (10 lô, chi tiết được liệt kê trong phụ lục 1) đã được xử lý
theo quy trình chi tiết ở trên. Trung bình mỗi mẻ đạt 6 kg
khoảng 2,2 L etanol, 1,275 kg trên cơ sở khô (db) hoặc 5,100 kg độ ẩm 75%
DWG và 0,800 kg (db) Chất hòa tan. Như vậy tổng sản lượng DDG cộng với S là khoảng 2 kg
hoặc một phần ba lượng lúa mì ban đầu, phù hợp với sản lượng công nghiệp.
độ tinh khiết của etanol
Nồng độ của etanol chưng cất được đo bằng tỷ trọng kế cồn.

Hình 3-8 cho thấy nồng độ thu được, thường là khoảng 89% v/v.
Hình 3-8. Độ tinh khiết của ethanol được sản xuất trong nhà máy ethanol sinh học GUNT CE-640.
2
Kết quả phân tích đường cấu thành
Bảng 3-2 trình bày kết quả từ Englyst về sự phân bố các loại đường cấu thành
và hàm lượng tinh bột trong lúa mì, chất hòa tan và DWG. Lượng AX trong lúa mì
là khoảng 5,3%, sẽ trở nên cô đặc sau khi chế biến thành khoảng 16,7% trong
DWG và 11,4% trong Chất hòa tan. Tổng AX được tính là [0,88 × (ara + xyl)]. (Các
hệ số 0,88 chiếm thêm một phân tử nước (khối lượng phân tử 18)
trong quá trình thủy phân mỗi monome có khối lượng phân tử 150: (150–18)/150 = 0,88.)
Hàm lượng tinh bột trong nguyên liệu thô khoảng 68% (4,08 kg tinh bột trong 6 kg lúa mì),
tinh bột chưa lên men vào cuối quá trình là khoảng 7% DWG (khoảng 89 g
tinh bột trong 1,275 kg DWG). Do đó, khoảng 98,5% tổng số tinh bột đã được xử lý thành công.
lên men và chuyển thành ethanol và carbon dioxide, trong khi vật liệu còn lại
đã được tập trung bởi một hệ số khoảng ba.
Bảng 3-2. Phân tích đường cấu thành của lúa mì ban đầu và kết quả là DWG và
Các chất hòa tan sau quá trình sản xuất ethanol (các phân tích được thực hiện bởi Englyst Carbohydrate Ltd.).
Đường cấu thành (g/100 g) Tổng NSP Tinh bột

Vật mẫu
rha phúc hắc ara xyl người đàn ông cô gái keo gal-A g/100g gam/100 gam
Lúa mì 0,0 0,0 2.1 3.9 0,1 0,3 2.4 0,1 8,9±0,0 68,4±0,7
DWG 0,1 0,0 5.4 11.3 1.2 0,9 10.2 0,4 29,6±0,8 7,0±0,3
chất hòa tan 0,1 0,0 3,5 7,9 1.0 1.1 1.4 0,1 15,0±0,4 0,0
Kết quả hàm lượng đạm và tro
Bảng 3-3 trình bày các hiệu giá thu được cho mỗi mẫu, hiệu giá trung bình được tính toán,
% nitơ tổng số, và tỷ lệ phần trăm hàm lượng protein tương ứng. chất đạm
hàm lượng của hai sản phẩm cuối cùng giống nhau khoảng 37-39%, tương tự như tài liệu
giá trị (Jarretet al.,2011; Liu, 2011), và cả hai đều lớn hơn khoảng ba lần so với 12,77%
hàm lượng protein ban đầu của lúa mì. Bảng 3-3 cũng báo cáo hàm lượng tro của
lúa mì, DWG và các chất hòa tan. Đáng chú ý là hàm lượng tro của các chất hòa tan là nhiều
cao hơn so với DWG. Với tỷ lệ tương đối của chúng (dWG nhiều hơn khoảng 50% so với
Các chất hòa tan được sản xuất, trên cơ sở khô), hàm lượng tro tổng thể nếu cả hai
kết hợp sẽ vào khoảng 4,72%, gần gấp ba lần hàm lượng tro ban đầu của
3
cây lúa mì. Hàm lượng tro của DWG và Chất hòa tan thấp hơn so với báo cáo trong
văn học (Jarretet al.,2011; Liu, 2011), có thể là do độ tinh khiết của hóa chất
đã sử dụng.
Bảng 3-3. Phân tích protein và tro của lúa mì ban đầu và kết quả là DWG và các chất hòa tan
sau quá trình sản xuất ethanol (db).
Trung bình Trung bình

Vật mẫu tiêu đề 1 tiêu đề 2 tiêu đề 3 N% Chất đạm % Tro %
tiêu đề Trống
Lúa mì 9.4 9,5 9,5 9.50 1,5 2,24 12,77±0,09 1,8 ± 0,08
DWG 25.9 26.1 26.1 26.05 1,5 6,87 39.18±0,18 2,2 ± 0,00
chất hòa tan 25,0 25,0 24,9 24,95 1,5 6,57 37,42±0,09 8,5 ± 0,40
3.8 Thảo luận
Mười lô, mỗi lô 6 kg lúa mì, đã được hóa lỏng, đường hóa và
quá trình lên men trong nhà máy sản xuất cồn sinh học GUNT CE-640, mỗi nhà máy sản xuất khoảng 2,2 L etanol
ở độ tinh khiết 89% v/v. Phần hỗn hợp còn lại được đưa qua quá trình tách rắn/lỏng
quy trình, dẫn đến hai sản phẩm cuối cùng, Chất hòa tan (800 g db) và DWG
(1275 g db), tương ứng với hiệu suất kết hợp khoảng 33%, phù hợp với tiêu chuẩn
sản lượng DDGS sau khi sản xuất ethanol từ lúa mì (Jensen và Björnsson, 2012).
Hình 3-9 cho thấy sự cân bằng khối lượng của protein, AX và tro trong lúa mì ban đầu và
hai sản phẩm cuối cùng. Trong 6000 g lúa mì có 12,77% prôtêin ban đầu có 766 g
chất đạm. DWG và Soluble thu được có khối lượng giữa chúng là 798 g, chênh lệch 4%
phản ánh các lỗi tích lũy trong các phân tích. Protein được cô đặc bởi một
hệ số ba trong suốt quá trình, phù hợp với tài liệu và công nghiệp
hiệu suất.
4
Hình 3-9. Cân bằng khối lượng protein, AX và hàm lượng tro trước và sau khi lên men
quá trình.
Theo cách tương tự, 108 g tro ban đầu tăng lên 124 g tro ở hai sản phẩm cuối cùng,
tăng 15% do dung dịch enzyme và hóa chất (axit và bazơ)

được thêm vào trong quá trình để điều chỉnh độ pH. Đáng chú ý là mức tăng 15% ít hơn
hơn mức tăng điển hình được báo cáo trong tài liệu (20-30%) (Jarretet al.,2011). Cái này
sự khác biệt có lẽ là do chất lượng của các hóa chất và enzyme được sử dụng trong quá trình
quá trình, quan trọng nhất là hàm lượng khoáng chất của nước. Các chất hòa tan có
hàm lượng tro lớn hơn nhiều so với lúa mì hoặc DWG, cho thấy rằng việc bổ sung
vật liệu khoáng được thêm vào trong quá trình hầu hết kết thúc ở phần Hòa tan, như
mong đợi nếu nó chủ yếu đến từ nước và dung dịch nước.
Arabinoxylan lúa mì ban đầu (356 g) được phân chia giữa DWG và
Chất hòa tan; phần lớn đã kết thúc trong DWG, nhưng tổng cộng khoảng 12% của AX ban đầu
dường như bị mất trong quá trình này. Sự mất mát này có thể là do sự xuống cấp
trong quá trình thủy phân tinh bột hoặc trong quá trình chưng cất. Nồng độ của AX trong
nguyên liệu tăng theo hệ số khoảng 2,5, từ ~6% đối với lúa mì lên ~15% đối với DWG
và Hòa tan, tương ứng với các mô tả tài liệu về DDGS thương mại (Kosikvân vân
al.,2017).
Xem xét tỷ lệ arabinose trên xyloza (A/X), đây là một trong những tỷ lệ quan trọng nhất
đặc điểm của AX bên cạnh khối lượng phân tử, phân tích các loại đường cấu thành
tiết lộ tỷ lệ A/X là 0,54 trong lúa mì ban đầu, trong khi tỷ lệ này thấp hơn trong DWG
5
(0,48) và Chất hòa tan (0,44). giảm tương tự được báo cáo trong tài liệu, những
sự khác biệt có thể liên quan đến sự khác biệt trong cấu trúc phân tử của họ và trong chéo của họ
liên kết với các thành phần khác trong vách tế bào (Kosiket al.,2017).
Có thể kết luận rằng DWG thu được từ quy trình lên men theo sau trong
công việc hiện tại có thành phần tương tự như sản phẩm phụ trung gian được tạo ra
trong các nhà máy công nghiệp. Do đó, nó là vật liệu thích hợp cho các nghiên cứu tiếp theo về enzym
điều trị, chiết xuất AX và AXOS và hiệu suất trong các thử nghiệm cho ăn động vật.
3.9 Tóm tắt
Chưng cất ngũ cốc khô với chất hòa tan là sản phẩm quan trọng thứ hai từ ngũ cốc
nhà máy lọc dầu sinh học, sau ethanol. DDGS được bán trên thị trường để sử dụng trong các công thức thức ăn chăn nuôi. Các
thành phần protein của DDGS có giá trị làm thức ăn chăn nuôi, nhưng thành phần chất xơ,
bị chi phối bởi arabinoxylans, có hại trong thức ăn chăn nuôi và sẽ tốt hơn
được khai thác cho các mục đích sử dụng cuối cùng khác, bao gồm cả việc tăng tiêu thụ chất xơ trong con người
chuỗi thức ăn, đồng thời khai thác các đặc tính chức năng khác của AX. Trong khi đó,
hiểu hiệu quả của xylanase trong công thức thức ăn chăn nuôi, về mặt
sản xuất arabinoxylan oligosacarit có lợi tiền sinh học, là một bước tiếp theo
lĩnh vực điều tra quan trọng.
Việc sản xuất thương mại các sản phẩm dựa trên AX trong một nhà máy tinh chế sinh học tích hợp sẽ
truy cập vào các vật liệu ướt sau quá trình lên men trước khi nó được sấy khô, được gọi là hiện tại
công việc Chưng cất ngũ cốc ướt (DWG). Truy cập DWG từ các cơ sở thương mại theo thứ tự
để thực hiện chiết xuất AX và các nghiên cứu khác là một vấn đề, vì cồn sinh học thương mại
các nhà máy là những hệ thống khép kín trong đó nguyên liệu trong quá trình này không thể tiếp cận được. Vì thế
công việc hiện tại nhằm mục đích sử dụng một cơ sở sản xuất ethanol sinh học quy mô thí điểm để sản xuất
vật liệu DWG tương đương và đại diện cho các nghiên cứu tiếp theo.
Nhà máy sản xuất cồn sinh học GUNT CE-640 được sử dụng để xử lý các lô lúa mì 10 × 6 kg,
sản lượng trung bình 2,2 L ethanol ở 89% v/v, Chất hòa tan (0,8 kg db) và DWG (1,275 kg
đb). DWG được tạo ra trong tác phẩm này dường như có sản lượng và thành phần tương tự
6
đến vật liệu được sản xuất trong các nhà máy tinh chế sinh học quy mô lớn. Do đó vật liệu này đã được sử dụng
cho các nghiên cứu tiếp theo về chiết xuất AX và sản xuất arabinoxylan
oligosacarit, như được mô tả trong các chương sau.
7
Sản xuất arabinoxylan oligosacarit
4 Sản xuất arabinoxylan oligosacarit
4.1 Giới thiệu
Việc xác định prebiotic, kích thích sự phát triển của vi khuẩn lành mạnh trong
hệ thống tiêu hóa của con người và động vật, là một trong những phát triển thú vị nhất trong
lĩnh vực nguyên liệu thực phẩm và sự quan tâm ngày càng tăng trong lĩnh vực thức ăn chăn nuôi.
Arabino- và xylo-oligosacarit thể hiện hoạt động prebiotic đầy hứa hẹn thúc đẩy
việc sử dụng chúng bằng cách bổ sung trực tiếp hoặc thông quatại chỗsản xuất bởi xylanase. Cái này
chương xem xét tầm quan trọng của prebiotic XOS và trình bày công việc thử nghiệm để
nghiên cứu khả năng của xylanase để tạo ra XOS từ DWG mới được sản xuất, sử dụng
các enzyme và tiền xử lý khác nhau.
4.2 Khái niệm về thực phẩm chức năng
Vào những năm 1980, thị trường thực phẩm Nhật Bản chứng kiến lần đầu tiên sử dụng thuật ngữ “chức năng
thực phẩm” để mô tả các mặt hàng thực phẩm có chứa các thành phần tăng cường đặc biệt
mang lại lợi ích sinh lý lành mạnh cho người tiêu dùng (Aachary và Prapulla, 2011).
Thực phẩm chức năng là một loại thực phẩm hợp pháp được gọi là “FOFHU” và được yêu cầu
đáp ứng ba tiêu chuẩn dinh dưỡng: 1) cho thấy kết quả hiệu quả trong các thử nghiệm lâm sàng; 2) đến
an toàn trong khám lâm sàng và phi lâm sàng; 3) để có hoạt động định lượng
thành phần (Martirosyan và Singh, 2015). Ở châu Âu, khái niệm thực phẩm chức năng đã
được xác định bởi Hành động Phối hợp của Ủy ban Châu Âu về Khoa học Thực phẩm Chức năng trong
Châu Âu (FuFoSE) như (Diplock và Fern, 1999):
“Một sản phẩm thực phẩm chỉ có thể được coi là chức năng nếu cùng với thành phần dinh dưỡng cơ bản
tác động nó có tác dụng có lợi trên một hoặc nhiều chức năng của cơ thể con người do đó
hoặc cải thiện các điều kiện chung và thể chất hoặc/và giảm rủi ro của
diễn biến của bệnh tật. Lượng ăn vào và hình thức của thực phẩm chức năng nên được
vì nó thường được mong đợi cho các mục đích ăn kiêng. Vì vậy, nó không thể ở dạng
thuốc viên hoặc viên nang giống như dạng thức ăn thông thường.”
số 8
Tuy nhiên, pháp luật Châu Âu coi thực phẩm chức năng là một khái niệm chứ không phải là một loại thực phẩm
thể loại (Stantonet al.,2005). Hiện tại, các loại thực phẩm châu Âu là:
thực phẩm thông thường, thực phẩm biến đổi, thực phẩm dùng cho chế độ ăn kiêng đặc biệt và thực phẩm y tế
(Martirosyan và Singh, 2015). Nhưng các nhà phát triển thực phẩm được phép đưa ra hai tuyên bố:
tuyên bố về dinh dưỡng và tuyên bố về sức khỏe. Công bố dinh dưỡng chỉ ra giá trị dinh dưỡng cơ bản
và năng lượng được cung cấp, trong khi các tuyên bố về sức khỏe trích dẫn khả năng ngăn ngừa,
quản lý hoặc chữa lành bệnh tật.
Trung Tâm Thực Phẩm Chức Năng (http://functionfoodscenter.net/ ) ở Mỹ

định nghĩa thực phẩm chức năng là:
“Thực phẩm tự nhiên hoặc chế biến có chứa hoạt tính sinh học đã biết hoặc chưa biết
các hợp chất, với số lượng xác định cung cấp chứng minh lâm sàng và được ghi nhận
lợi ích sức khỏe để phòng ngừa, quản lý hoặc điều trị bệnh mãn tính.”
Định nghĩa nhấn mạnh sự cần thiết của "hợp chất hoạt tính sinh học" cụ thể trong chức năng
thực phẩm có tác dụng đối với sức khỏe, chẳng hạn như men vi sinh và prebiotic.
Từ “probiotic” hoàn toàn trái ngược với từ “kháng sinh” trong tiếng Hy Lạp, và nó
có nghĩa là "cho cuộc sống". Thuật ngữ probiotic lần đầu tiên được sử dụng để mô tả các chất được sản xuất bởi
một vi sinh vật kích thích sự phát triển của một vi sinh vật khác (Lilly và Stillwell, 1965).
Parker (1974) đã định nghĩa lợi khuẩn là:
“Các sinh vật và các chất góp phần cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột.”
Định nghĩa này kết nối men vi sinh với sức khỏe đường ruột, tuy nhiên, nó không làm rõ
bản chất của men vi sinh vì nó bao gồm cả “sinh vật và chất”. Đầy đủ hơn (1989)
tinh chỉnh định nghĩa để chỉ vi sinh vật:
“Một chất bổ sung thức ăn có vi sinh vật sống ảnh hưởng có lợi đến vật chủ bằng cách
cải thiện sự cân bằng vi khuẩn đường ruột của nó.”
9
Định nghĩa gần đây tuyên bố bản chất của chế phẩm sinh học là các sinh vật sống khả thi. Lactic
vi khuẩn axit và bifidobacteria, là thành phần tự nhiên của hệ vi sinh vật đường ruột, là
chế phẩm sinh học được nghiên cứu và sử dụng nhiều nhất trong các sản phẩm từ sữa (Siróet al.,2008).
Ngược lại, prebiotic là chất dinh dưỡng có khả năng thay đổi đường ruột
Hệ vi sinh vật. Các báo cáo ban đầu đã mô tả cái gọi là “yếu tố Bifidus” như một thành phần của
sữa mẹ có lợi cho vi khuẩn bifidobacteria ở trẻ sơ sinh (Hutkinset al.,2016).

Sau đó, yếu tố Bifidus được tìm thấy là một phức hợp của oligosacarit và
glycans. Thuật ngữ và định nghĩa về prebiotic lần đầu tiên được giới thiệu bởi Gibson và
Roberfroid (1995) như một thành phần thực phẩm chức năng:
“Một thành phần thực phẩm không tiêu hóa có ảnh hưởng có lợi đến vật chủ bằng cách chọn lọc
kích thích sự phát triển và/hoặc hoạt động của một hoặc một số lượng hạn chế vi khuẩn trong
ruột kết, và do đó cải thiện sức khỏe của vật chủ.”
Từ định nghĩa rộng sau này, người ta kết luận rằng prebiotic bao gồm oligo- và
polysacarit chống lại quá trình thủy phân axit và enzyme trong đường ruột của con người,
có thể được lên men bởi hệ vi sinh vật và kích thích sự phát triển của vi khuẩn đường ruột. nhiều nhất
prebiotic được đề xuất và có sẵn trên thị trường là các oligosacarit như lactulose,
fructo-oligosacarit, galacto-oligosacarit, oligosacarit đậu nành, lacto-

sucrose, isomalto-oligosacarit, gluco-oligosacarit, xylan oligosacarit
(XOS) hoặc palatinose (Macfarlaneet al.,2006; Manning và Gibson, 2004; Okazakiet al.,
1990).
4.3 Thuộc tính tiền sinh học AXOS và XOS
Tiền tố “oligo-” xuất phát từ tiếng Hy Lạpὀλίγοιcó nghĩa là “một vài hoặc có chứa
một số lượng nhỏ các đơn vị” (Từ điển Oxford). Oligosacarit là những chuỗi nhỏ của
một số lượng hạn chế các loại đường được kết nối để tạo thành một phân tử; IUB-IUPAC
danh pháp định nghĩa oligosacarit là sacarit chứa từ ba đến mười

monome (Voragen, 1998), trong khi một số cơ quan chức năng khác xem xét sacarit
chứa từ ba đến mười chín đơn vị là oligosacarit. Tuy nhiên, từ
0
một quan điểm dinh dưỡng, hầu hết các disacarit có đặc tính tương tự như tri- và
tetrasacarit và cũng được coi là oligosacarit (Crittenden và Playne,

1996).
Xylan oligosacarit là một loại prebiotic mới xuất hiện tự nhiên trong nhiều loại
trái cây, rau tre, mật ong và sữa (Poesenet al.,2016; Rastall và Gibson, 2015;
Singhet al.,2015) và có thể được sản xuất từ sinh khối lignocellulose. Các
cấu trúc của XOS tương tự như AX gốc: một β-(1-4)-D-xylopyranose tuyến tính có hoặc
không thay thế arabinose, dẫn xuất axit uronic, axit ferulic và coumaric
và các axit phenolic khác (Gullónet al.,2014). Sự thay đổi trong cấu trúc XOS
phụ thuộc chủ yếu vào loại cây bố mẹ, bộ phận của cây và phương pháp
sản xuất (Suzukiet al.,2000).
Nói chung, hiệu quả tiền sinh học của oligosacarit phụ thuộc vào
khả năng lên men của vi khuẩn đường ruột, có liên quan đến cấu trúc và mức độ của chúng
polyme hóa (DP). Van Craeyveldet al.(2008) báo cáo rằng AX oligosacarit với
DP trung bình là 3 (và tối đa không lớn hơn DP5) cho thấy khả năng nâng cao hơn
nồng độ của bifidobacteria khi so sánh với DP lớn hơn. Hơn nữa,
DP2 và DP3 XOS thể hiện động học sử dụng nhanh hơn so với DP4 và DP5 XOS (Gullón et
al., 2008a). Người ta tin rằng các polysacarit xylan không nhạy cảm với đường ruột
vi khuẩn và không có đặc tính tiền sinh học nào cả (Falcket al.,2013; Neyrincket al.,
2012). Chủ yếu, XOS ở mức độ trùng hợp của DP2-DP4 được mong muốn cho
ứng dụng thực phẩm (Vázquezet al.,2000). Ảnh hưởng của sự thay thế XOS đối với
động học lên men cho thấy rằng cả XOS tuyến tính và AXOS phân nhánh đều tốt hơn
nhạy cảm với hệ vi sinh vật đường ruột hơn XOS phức tạp hơn có chứa
axit glucuronic, trong khi quá trình lên men GlamA-XOS mang lại nồng độ ngắn cao hơn
chuỗi axit béo (Kabelet al.,2002). Tương tự, XOS chiết xuất từ cám lúa mì cho thấy
hoạt động prebiotic tốt hơn so với XOS được chiết xuất từ trấu Bengal Gram; đây có thể là
được cho là do sự thay thế arabinose cao hơn trong cám lúa mì (A)XOS (Madhukumar
và Muralikrishna, 2012). Do đó, có thể kết luận rằng hoạt tính prebiotic của
XOS và AXOS tùy thuộc vào mức độ polyme hóa, loại nhóm thế và
tỷ lệ arabinose-to-xylose (mức độ thay thế).
1
Arabinoxylan oligosacarit là một loại bột màu trắng, pH ổn định trong khoảng 2,5 – 8,0
và ổn định nhiệt lên đến 100°C (Courtinet al.,2009). Vươnget al.(2009) báo cáo rằng
XOS có thể chịu được quá trình thanh trùng và khử trùng ở nhiệt độ cao trong điều kiện pH thấp
môi trường. Độ pH và độ ổn định nhiệt có lợi cho XOS hơn inulin đối với nhiều loại thực phẩm
các ứng dụng, chẳng hạn như trong nước trái cây, vì inulin dễ bị phân hủy hơn ở độ pH thấp
và nhiệt độ cao (Courtinet al.,2009).
Là prebiotic, XOS đặc biệt tiếp thêm sinh lực cho sự phát triển hoặc hoạt động của một nhóm vi khuẩn
(Đắm chìmet al.,2014; Mendis và Simsek, 2014) và nhờ đó cải thiện sức khỏe, giảm
nhiễm trùng đường ruột và ức chế ung thư ruột kết (Macfarlaneet al.,2006). họ đang
ưu tiên sử dụng bởiBifidobacteriumspp (Okazakiet al.,1990) và được sử dụng như một loại carbon
nguồn bởiWeissellachủng (Patelet al.,2013) vàBifidobacteriumspp (Fujikawaet al.,
1991). Trong ống nghiệmcác thử nghiệm cho thấy XOS là chất nền ưa thích cho
Bifidobacteriumspp trên các oligo-sacarit không tiêu hóa khác của hexose; của họ
hoạt tính tương đương với raffinose oligosacarit và cao hơn fructo-
oligosacarit (Jaskariet al.,1998; Vázquezet al.,2000). XOS dường như cải thiện
sức khỏe đường ruột tổng thể và điều hòa nhu động ruột trong trường hợp táo bón nặng
(Chunget al.,2007; Tateyama et al., 2005) mà không có báo cáo về bất kỳ tác dụng phụ nào như
tăng đầy hơi, chướng bụng hoặc kích ứng đường ruột, đã được
báo cáo đi kèm với việc tiêu thụ fructo-oligosacarit (Bruggencateet al.,
2006).
Prebiotics có thể làm trung gian cho phản ứng miễn dịch bảo vệ trong đường ruột, gây ra
bởi các kháng nguyên lạ từ thực phẩm hoặc vi khuẩn, và giúp tránh phản ứng quá mẫn
chống lại các kháng nguyên (Schley và Field, 2002). Hòa giải chủ yếu là kết quả của
sản xuất axit béo chuỗi ngắn (SCFA) (acetate, propionate, butyrate và lactate).
XOS đã chứng minh khả năng chống viêm, điều hòa miễn dịch và gốc tự do
hoạt động nhặt rác (Chenet al.,2012; Hromádkováet al.,2013). Ngoài ra, XOS
sản phẩm lên men, SCFA, có vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh độ pH trong ruột
để ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn gây bệnh không mong muốn (Hugheset al.,2007; Knudsen
và Lærke, 2010; Vươnget al.,2010; quả bônget al.,2015; Rumpagapornet al., 2015).
2
XOS đã được báo cáo mang lại một số lợi ích liên quan đến sức khỏe, chẳng hạn như cải thiện
các điều kiện lâm sàng liên quan đến bệnh tiểu đường và giảm tỷ lệ tử vong ở loài gặm nhấm
(Gobinathet al.,2010). Ngoài ra, XOS đã thể hiện một vai trò hiệu quả trong việc điều chỉnh
béo phì và rối loạn chuyển hóa liên quan ở chuột (Neyrinck et al., 2012). XOS là
báo cáo hiệu quả chống lại stress oxy hóa gây ra liên quan đến chế độ ăn nhiều chất béo trong
chuột cống (Vươnget al.,2011); tương tự, chúng đóng một vai trò bảo vệ chống lại protein cao
nhiễm độc gen do chế độ ăn kiêng (tổn thương DNA ruột kết). Tuy nhiên, kết quả như vậy không
thu được cho inulin (Christophersenet al.,2013). Hoạt động bảo vệ này được gán
đến việc sản xuất SCFA vì chúng dường như kích hoạt các gen chịu trách nhiệm về tế bào
chuyển hóa năng lượng và phản ứng chống viêm (Fukudaet al.,2011). Hơn thế nữa,
XOS mang lại hiệu quả thuận lợi trong việc điều chỉnh hồ sơ glucose và lipid và do đó trên
trao đổi chất năng lượng của con người (Stanevaet al.,2014).
Song song, những nỗ lực đáng kể đã được thực hiện để tăng lượng AXOS trong động vật
cho ăn. Một số nghiên cứu cho thấy rằng AXOS ảnh hưởng đến hiệu suất tăng trưởng,
tỷ lệ tử vong và sức khỏe đường ruột nói chung của gà thịt (Austinet al.,1999; tòa ánet al.,
2008; Lôiet al., 2016). Việc sản xuất AXOS trong thức ăn chăn nuôi đạt được nhờ
bổ sung xylanase vào thức ăn (Leiet al.,2016).
4.4 Xylanase và AXOS trong thức ăn chăn nuôi
Xylanase là các enzyme tự nhiên xúc tác sinh học cho quá trình phân hủy xylan
chuỗi (Bonner, 2007). Chúng đã được khai thác trong nhiều ứng dụng công nghiệp
bao gồm tẩy trắng trong ngành công nghiệp giấy, làm bánh mì, nước ép trái cây và làm trong bia,
và thức ăn chăn nuôi (Sharma, 2013), với thị phần toàn cầu hàng năm là 1 tỷ USD với
xấp xỉ 40% giá trị dành cho các enzyme thủy phân polysacarit phi tinh bột
(NSPases) vào năm 2018 (https://www.marketsandmarkets.com/Market-Reports/feed-
enzyme-market-1157.html ).
Xylanase là một trong những enzyme được tiêu thụ nhiều nhất trong thức ăn chăn nuôi lợn và gia cầm
công nghiệp xây dựng công thức, được sử dụng theo truyền thống bởi các nhà sản xuất thức ăn chăn nuôi để đạt được hiệu suất
nhất quán (Bedford và Morgan, 1996; Paloheimoet al.,2010; Sitanakaet al.,2018).
3
Mặc dù xylanase được sử dụng rộng rãi trong thức ăn chăn nuôi nhưng chức năng của các enzym này không
hoàn toàn hiểu. Người ta xác định rằng AX hoạt động như một chất kháng dinh dưỡng trong cơ thể của chim
nguồn cấp dữ liệu, được giải thích bởi hai cơ chế. Cơ chế đầu tiên gợi ý rằng AX
có khả năng chống lại sự phân hủy enzym trong ruột non và do đó cản trở
enzym nội sinh (ví dụprotease và amylase) tiếp cận với nguyên vẹn
tế bào nội nhũ do thiếu bộ enzyme NSPase chức năng trong động vật
(Bedford và Morgan, 1996; Pettersson và Åman, 1989). bánet al.(2009) báo cáo
việc sử dụng xylanase trong công thức thức ăn đã cải thiện tổng lượng thức ăn ăn vào và
khả năng tiêu hóa và do đó hiệu suất tăng trưởng.
Cơ chế thứ hai dựa trên khả năng tăng độ nhớt của AXE đối với đường ruột.
chất lỏng, được biết là làm giảm tốc độ khuếch tán của chất dinh dưỡng, giảm lượng thức ăn đi qua
tỷ lệ và tăng dân số của hệ thực vật đường ruột (Feighner và Dashkevicz, 1988; Fengler
và Marquardt, 1988; Salihet al., 1991). Bổ sung đáng kể xylanase vào thức ăn
giảm độ nhớt trong ruột và cải thiện tăng trọng (Wuet al.,2004;
Zyłeet al.,1999). Hai cơ chế được kết nối và chỉ ra tầm quan trọng của
phân hủy các phân tử lớn của AX trong thức ăn chăn nuôi để đạt được mức sử dụng thức ăn tối ưu.
Gần đây, sự chú ý đã chuyển sang vai trò có lợi của (A)XOS được sản xuất bởi
xylanase (Broekaertet al.,2011; Craeyveldet al.,2008). Vai trò này đã được liên kết với
lên men AXOS trong hệ thống tiêu hóa của động vật và sản xuất SCFA
(Chích chọtet al.,1999). Người ta thấy rằng SCFA thúc đẩy giải phóng neuropeptide
peptide YY (PYY) giúp tăng hiệu quả tiêu hóa và hấp thu dinh dưỡng
sau bữa ăn bằng cách trì hoãn việc làm rỗng dạ dày (le Roux và Bloom, 2005; Mayet al.,2015).
Alijosiuset al.(2018) đã báo cáo rằng các xylanase ảnh hưởng đến độ mềm và màu sắc của
thịt ức gà. Hiệu ứng này có thể là do prebiotic XOS được sản xuất hoặc
hợp chất phenolic trong thức ăn, mặc dù cần nhiều nghiên cứu hơn để tiết lộ
tác động của XOS và các prebiotic khác đối với thức ăn chăn nuôi. Những nghiên cứu này nhấn mạnh lại
sự cần thiết phải hiểu tính nhạy cảm của chất nền thức ăn để giải phóng XOS khi
xử lý bằng enzym. Ngoài ra, nó nhấn mạnh tầm quan trọng của việc sản xuất đáng kể
lượng XOS và AXOS được kết hợp trong các thử nghiệm thức ăn chăn nuôi để đạt được
kiến thức lớn hơn về tác động của việc bao gồm các prebiotic này trong công thức thức ăn chăn nuôi.
4
DDGS như một sản phẩm phụ của cồn sinh học được bán trên thị trường như một thành phần dinh dưỡng cho thức ăn chăn nuôi.
Rõ ràng là các điều kiện sấy khắc nghiệt làm giảm giá trị dinh dưỡng của DDGS đối với
thức ăn chăn nuôi và thay đổi đặc tính của AX trong quá trình (De Vrieset al., 2013;
Kosiket al.,2017; người đi bộet al.,2014; Schroeder, 2012). Vì vậy, có một điều tuyệt vời
cơ hội để tăng giá trị của DDGS thông qua xử lý xylanase trước khi sấy khô. Các
DWG ướt được sản xuất như mô tả trong chương trước cung cấp chất nền phù hợp để
kiểm tra quá trình sản xuất enzyme của (A)XOS hoặc (A)XOS vật liệu giàu trong
nhà máy lọc dầu sinh học.
Chương này trình bày các thí nghiệm được thực hiện để nghiên cứu khả năng của xylanase đối với
sản xuất (A)XOS từ DWG mới sản xuất, sử dụng các enzyme khác nhau và
phương pháp tiền xử lý, để đánh giá khả năng bình ổn hóa nhà máy lọc sinh học này
sản phẩm phụ bằng cách tăng giá trị dinh dưỡng của DDGS.
4.5 Vật liệu và phương pháp xử lý DWG-xylanase
Nhằm mục đích tạo ra các mức oligosacarit có ý nghĩa từ sản phẩm mới được sản xuất
DWG cho thức ăn chăn nuôi, ba loại enzyme đã được thử nghiệm ở hai liều lượng dưới hai pH
điều kiện. Tiền xử lý với enzyme protease cũng đã được nghiên cứu.
Enzyme và hóa chất
Xylanase: Econase XT 25L,Xylanase 1 EL-2016/002288 và Xylanase 2 EL-2016/002287
được cung cấp bởi AB Agri Ltd. Loại đầu tiên trong số này là endoxylanase thương mại
tiếp thị cho ngành thức ăn chăn nuôi; hai loại còn lại là các enzym phát triển. Các
liều lượng Econase khi bổ sung vào thức ăn chăn nuôi thường là 100 mL/tấn, sơ bộ
kết quả không cho thấy bất kỳ sản xuất XOS nào ở mức liều lượng này, do đó liều lượng cao hơn gấp 500 lần
50 mL mỗi kg đã được sử dụng trong suốt dự án này. Axit citric monohydrat, Natri
dihydrogen phosphate dodecahydrate, natri hydroxit và axit trifluoroacetic là

lấy từ Fisher Scientific Ltd, Vương quốc Anh. Các mẫu được xử lý bằng enzym trong
bể cách thủy lắc Thermo-Haake®, model (SWB20), và ly tâm bằng cách sử dụng
Máy ly tâm Eppendrof®, model 5702.
5
xử lý enzym
Một mẫu 2 g (db) DWG được chuyển vào cốc 200 mL, citrate-phosphate
bộ đệm được thêm vào để tạo ra tỷ lệ chất rắn trên chất lỏng khoảng 1:10 và các cốc được chuyển vào một
bể nước lắc 42°C. Hai dung dịch đệm được chuẩn bị ở pH 5,5 (enzim
phạm vi pH tối ưu) và pH thấp hơn 2,5 để nghiên cứu các enzym'
hiệu suất trong điều kiện axit trong quá trình tiêu hóa trong hệ thống dạ dày của động vật. Các
enzyme nghiên cứu đã được thêm vào theo liều lượng được liệt kê trong Bảng 4-1. các enzym
được thêm vào với liều 50 mL mỗi kg và gấp 10 lần liều đó; hai mẫu trắng cũng
chuẩn bị, để quan sát hiệu ứng pH. Các mẫu được ủ trong 1 giờ, sau đó
chúng được lấy ra khỏi bể nước và để nguội đến nhiệt độ phòng. Các
pH được điều chỉnh thành 7 ± 0,1 bằng natri hydroxit 1M. Bùn thu được là
ly tâm 4000 vòng/phút trong 15 phút. Dịch nổi được thu lại, lọc qua
một bộ lọc ống tiêm (lỗ 0,45 µm) và đông khô ở0,04 mbar và –55°C trong 72 giờ.
Bảng 4-1. Liều lượng và pH của phép thử ủ men.

ID mẫu enzym Liều lượng enzym pH
mẫu 1 Kinh tế ×1- 2,5 Econase XT 25L 0,1mL 2,5
mẫu 2 Kinh tế ×1- 5,5 Econase XT 25L 0,1mL 5,5
mẫu 3 Tiết kiệm ×10- 2,5 Econase XT 25L 1mL 2,5
mẫu 4 Kinh tế ×10- 5,5 Econase XT 25L 1mL 5,5
mẫu 5 XYL1 ×1- 2,5 Xylanase 1 EL-2016/002288 0,1mL 2,5
mẫu 7 XYL1 ×10- 2,5 Xylanase 1 EL-2016/002288 1mL 2,5
mẫu 8 XYL1 ×10- 5,5 Xylanase 1 EL-2016/002288 1mL 5,5
mẫu 9 XYL2 ×1- 2,5 Xylanase 2 EL-2016/002287 0,03mL* 2,5
mẫu 13 Bộ đệm 2.5 - x0 2,5
mẫu 14 Bộ đệm 5,5 - x0 5,5
* mL dung dịch 1 mg/mL
tiền xử lý protease
Người ta đưa ra giả thuyết rằng sự biến tính protein lúa mì trong quá trình lên men và
quá trình chưng cất có thể tạo ra một ma trận protein bảo vệ, ngăn chặn các xylanase
6
truy cập vào cấu trúc của các hạt cám và do đó làm giảm hoạt động của
enzyme và giảm sản xuất AXOS. Do đó, DWG đã được xử lý bằng
protease để phân hủy protein, sau đó tiếp theo là xử lý Econase như được mô tả trong
Bảng 4-2. Dịch nổi được thu thập, đông khô và gửi đi phân tích tại phòng thí nghiệm IPOS
để phân tích đường (xem bên dưới).
Bảng 4-2. Xử lý protease trước Econase.

ID mẫu 1 (DWG + Kinh tế) 2 (DWG + Protease + Econase)
DWG (g) db 2 2
Dung dịch đệm (pH = 8) (mL) 20 20
Protease (mL) - 0,1
Ủ trong 1 giờ ở 50°C
Đun sôi hỗn hợp trong 10 phút để vô hiệu hóa protease
Điều chỉnh pH đến 2,5 bằng axit xitric
Kinh tế (mL) 0,1 0,1
Ủ trong 1 giờ ở 42°C
Để nguội, trung hòa bằng NaOH 1M và ly tâm
Phương pháp phân tích
Các phương pháp phân tích áp dụng cho các mẫu khô chủ yếu là phân tích
thành phần đường sau khi thủy phân và sàng lọc hồ sơ của oligosacarit.
4.5.4.1 Phân tích đường cấu thành
Hàm lượng AX của vật liệu được giải phóng được thu thập trong phần nổi phía trên được định lượng bằng
thủy phân vật liệu thành arabinose và xyloza cấu thành của nó, sau đó được
được đo bằng sắc ký trao đổi anion hiệu năng cao với xung
máy dò ampe kế (HPAEC-PAD). Công cụ HPAEC được sử dụng là Dionex ICS–
Hệ thống sắc ký ion 3000 (Dionex Corporation, CA, USA), bao gồm một
Dionex Auto Sampler, Dionex ICS 3000 Eluent Organiser, Dionex ICS 3000 Detector
Sắc ký, Hệ thống bơm kép Dionex ICS 3000 và Dionex ICS 3000 Eluent
Sắc ký ion không thuốc thử máy phát điện. Cột được sử dụng là CarboPac® PA20
cột phân tích, kích thước hạt 3×150 mm 6,0 μm. Pha động được chọn là 10mM
7
NaOH với tốc độ dòng thích ứng là 0,3 mL tối thiểu–1và thể tích tiêm 20 μL.
Phần mềm Chromeleon® Xpress đã được sử dụng để xử lý dữ liệu (Englystet al.,1994).
Một bước thủy phân đã được thực hiện để tạo ra sự phân cắt liên kết hóa học trong nước
bổ sung, tạo điều kiện thuận lợi cho việc chuyển đổi AX và AXOS thành các phân tử đường của chúng.
các thành phần. 4,0 mg chất nổi khô phía trên được chuyển cẩn thận vào áp suất
ống, 2 mL axit trifluoroacetic 2M đã được thêm vào, các ống được đậy nắp và đun nóng ở
120°C trong 2 giờ, sau đó để cân bằng với nhiệt độ phòng xung quanh. Một hằng số
dòng khí nitơ ở 60°C được duy trì để làm bay hơi trifluoroacetic
axit. Sau đó, cặn khô được hòa tan trong 4 mL nước siêu tinh khiết
để phân tích HPAEC-PAD.
4.5.4.2 Phân tích hồ sơ oligosacarit
Phân tích monosacarit của các mẫu thủy phân tương đối đơn giản và dễ dàng
HPAEC đạt được. Ngược lại, phân tích oligosacarit khó khăn hơn. Tại đây
giai đoạn của dự án, chúng tôi đã không phát triển phương pháp mới được mô tả sau trong
Chương 6. Do đó, chúng tôi đã hợp tác với Innovative Physical Organic Solutions (IPOS),
Huddersfield, người đang phát triển một phương pháp sàng lọc oligosacarit
phân phối sử dụng phương pháp sắc ký loại trừ kích thước mới được phát triển (Powles,
N., tác phẩm chưa xuất bản). Các mẫu đã được gửi đến IPOS và phân tích được thực hiện bằng cách sử dụng một
HPLC kết hợp với máy dò chỉ số khúc xạ (RID). Các công cụ đã được điều hành một cách đẳng cấp
sử dụng nước siêu tinh khiết, với tốc độ dòng chảy 0,2 mL tối thiểu–1.
4.6 Kết quả xử lý bằng enzym
Các phân tích monosacarit và oligosacarit được thực hiện song song trên
các mẫu được xử lý, nhằm mục đích xây dựng một bức tranh định tính và định lượng đầy đủ về
phân phối thủy phân và do đó phát triển sự hiểu biết chi tiết về các xylanase'
hoạt tính ở các giá trị pH và liều lượng khác nhau.
số 8

Đại học Huddersfield Kho lưu trữ: Alyassin, Mohamad

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Đại học Huddersfield Kho lưu trữ: Alyassin, Mohamad

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

Đại học Huddersfield Kho lưu trữ

Trích dẫn gốc

Phiên bản này có tại http://eprints.hud.ac.uk/id/eprint/34941/

Đại học Huddersfield

tháng 1 năm 2019

Quyền sở hữu trí tuệ và/hoặc sao chép.

sản xuất enzyme của prebiotic arabinoxylan oligosacarit (AXOS) và xylo-

tăng cường chuyển đổi thức ăn đáng kể.

và 19% tương ứng. Xử lý bằng enzym chỉ chuyển đổi 6% AX thành

Phương pháp PAD để đo đồng thời mono- và oligosacarit và

tác động lên các phân tử phân nhánh (AXOS).

Mohamad Alyassin Luận án tiến sĩ, tháng 1 năm 2019

2 Cấu trúc và tính chất hóa lý của Arabinoxylan .................................. 26

4 Sản xuất arabinoxylan oligosacarit ............................................................ ....... 58

4.5 Vật liệu và phương pháp xử lý DWG-xylanase ............................................. 65

5 Chiết xuất hóa học AX từ DWG ................................................ .................. 77

9 Kết luận và kiến nghị ................................................. ................168

10Người giới thiệu................................................. .................................................... ..172

11Ruột thừa ................................................. .................................................... ....205

12Hội nghị:.................................................................. .................................................... 206

danh sách các hình

Hình 2-1. Số ấn phẩm về arabinoxylan. ............................................. 27

liên kết axit ferulic (Mendiset al.,2016). .................................................... ......................... 29

quá trình lên men. .................................................... .................................................... 55

(được đo bằng HPAEC-PAD sau khi thủy phân). .................................................... ............... 70

liều lượng và độ pH. .................................................... .................................................... ........71

liều lượng và độ pH. .................................................... .................................................... ........73

Hình 5-1. Máy ly tâm Beckman GS-6S. .................................................... ...................... 88

Hình 5-2. Hệ thống siêu lọc: A Vivaflow, B LabStak. .......................................... 90

(Morganet al.,2017).................................................. .................................................... .108

Hình 6-6. Tách 1. arabinose; 2. galactôzơ; 3. glucôzơ; 4. xyloza; 5. xylon

phương pháp (Vươnget al.,2012). .................................................... ..................................... 113

PA200. .................................................... .................................................... ..................... 118

PA20. .................................................... .................................................... ....................... 118

sự đối đãi. .................................................... .................................................... ............... 126

sự đối đãi. .................................................... .................................................... ............... 127

Hình 7-7. Sự phân hủy xylobiose khi xử lý Econase...................................144

Hình 7-10. Cấu trúc của 33-α-L-arabinofuranosyl-xylotetraose và 23-α-L-

arabinofuranosyl-xylotetraose. .................................................... .................................... 147

Hình 7-11. Cấu trúc của 23-α-L-Arabinofuranosyl-xylotriose. .................................... 147

Hình 7-12. Điều trị 33-α-L-arabinofuranosyl-xylotetraose và 23-α-L-

Hình 8-2. Máy ép lọc Carlson ............................................................ ..................................... 154

Hình 8-3. Vỏ và màng siêu lọc xoắn ốc AMI®..................................155

và 2 giờ.................................................. .................................................... ................. 162

Danh sách các bảng

TNHH). .................................................... .................................................... ................................ 53

Bảng 4-2. Xử lý protease trước Econase. .................................................... ....... 67

(Được đo bằng HPAEC-PAD sau khi thủy phân) ........................................ .................... 70

và độ pH. .................................................... .................................................... ......................71

liều lượng và pH khác nhau. .................................................... ................................................. 73

Bảng 4-6. Kết quả xử lý Protease %w/w. .................................................... ........... 75

sự đối đãi. .................................................... .................................................... ............... 101

Bảng 6-1. Các phương pháp phân tích để tách oligosacarit.............................105

đĩa lý thuyết. .................................................... .................................................... ... 122

hỗ trợ và góp ý mang tính xây dựng.

A2A3XXX 23,33-di-α-L-arabinofuranosyl-xylotriose 23-

FFC tâm thực phẩm chức năng

IUBMB Liên minh Hóa sinh và Sinh học Phân tử Quốc tế Hệ

TLC Sắc ký lớp mỏng Quang phổ tử ngoại

một bản sao lưu (Grahnet al.,2009).

[xăng pha với 10% cồn sinh học].” (https://vivergofuels.com/news/vivergo-fuels-

Sản xuất thực tế Khả năng sản xuất