Scribd Logo
Upload

Welcome to Scribd!

  • Capitulo 2 Brock Biología de Los Microrganismos

    Uploaded by

    danielsan1204
    86 views25 pages

    Original Title

    Capitulo 2 Brock Biología de los microrganismos

    Copyright

    © © All Rights Reserved

    Available Formats

    PDF or read online from Scribd

    Did you find this document useful?

    Is this content inappropriate?

    Report this Document

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Download as PDF or read online from Scribd
    Flag for inappropriate content
    Download as pdf
    86 views25 pages

    Capitulo 2 Brock Biología de Los Microrganismos

    Uploaded by

    danielsan1204

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Download as PDF or read online from Scribd
    Flag for inappropriate content
    Download as pdf
    of 25
    Capitulo 2. Un breve viaje por el mundo microbiano i) LA VISION DE LO MUY PEQUENO De. ci mato vita istic la elena de ta microbiologia florecié cuando fue posible ver a los microorganismos. En otras palabras, el desarrollo de la, microbiologia fue paralelo al de la microscopia. Esto es particularmente apropiado en lo que respecta al tema principal de este capitulo, la diversidad microbiana. El microscopio es el instrumento microbiolégico mas importante; el estudio de la microbiologia requiere algunos conocimientos sobre como funcionan los mi- croscopios y ciertas nociones de microscopfa. Comenza- remos nuestro breve viaje por el mundo microbiano considerando primero los dilerentes tipos de pios y la aplicacién de los principios de microscopfa que nos permiten observar los microorganismos, 2.1 | Fundamentos de microscopia ~~ éptica Los microorganismos se pueden visualizar utilizando un microscopio dptico o un microscopio eectrénico. neral, cl microscopio dptico se usa para observat células ‘microscopio electrénico se emplea para observar estruc- turas internas o detalles superficiales de las células a Todos los microscopios utlizan lentes para aumentar el tamano de tna célula, de modo que se puedan obser- var sus detalles estructurales. Sin embargo, tan impor: 2 tante como el aumento es la resoluetén, propiedad que permite observar dos puntos adyacentes como puntos, separados, Aunque el aumento se puede incrementar practicamente sin limite, no ocurze lo mismo con la re- solucidn, que esta determinada por las propiedades ff cas dela luz. Por tanto, la resolucién, y no el aumento, es, Jo que en tltimo término marca los limites de lo que se puede ver en tun microscopio, Tniciamos esta presentaci6n con el microscopio 6p- tico, cuyos limites de resoluci6n estan en aproximada- mente 0,2 um (un micrometro equivale a 10° m) y describiremos mas adelante el microscopio € que es capaz de aumentar aproximadiamente 1,000 veces el limite del poder de resolucin del microscopio optico, sctr6nik EI microscopio éptico compuesto El mieroscopio éptico usa la luz visible para sluminar las estructuras celulares. En microbiologia se utilizan varios tipos de microscopios de fases, campo oscuro y fluorescencia Con el microscopio de campo elaro las muestras se vi sualizan gracias alas diferencias de contraste entre ellas y el medio que las rodea, v estas diferencias se producen porque las células absorben o dispersan la huz en diferen- tes grados. EI microscopio de fondo claro es el que gene- ralmente se emplea en icrobiologia y se compone de dos series de lentes (lentes del objetivo y lentes del ocular) que funcionan conjunta- mente para producir la imagen. La fuente de luz se enfoca sobre la muestra por una tercera lente Hamada lente del condensador (Figura 2.1). Muchas células bacterianas son dificles de observar debido a su falta de contraste con el 6pticos: de capo claro, contraste rsos basicos de biologia y Aumento Recorrido de la luz 100%, 400%, Imagen 1.000% vsualzada oa Mucatra sobre portadbetos Se deo ate _/ Lente ocular imagen intermedia Arwertca respecte Objet Sila muestra) Petia CCondensador fo, 405.0 Lente objetivo 100: aceite) Dispositve de entoque ~suesra re 4g Negune <=> Lente condensadora i Fuente emisora do kiz { « o Figura 2.1. Microscopia. (2) Un microscopio dptico compuesto. (b) Trayectora dela hz a vavés del mieroscopio compuesto. Adams dol ocular de-10x,existen oculares que proporcionan sumentas de 15-30x 30 UNIDAD 1 & Principios de microbiologia entomo. Los microorganismos pigmentados son una ex- cepcién, pues su color afade contraste y mejora la visua. lizacién de las células (Figura 2.2). En el caso de células sin pigmentos hay varios modos de aumentarel contrast. Estudiaremos estos métodos en la siguiente seccidn. Aumento y resolucién El aumento total de un microscopio compuesto es el pro ducto del aumento debido a la lente del objetivo por el au mento de la lente del ocular (Figura 2.1). Aumentos de lunas 1.500 veces estan cercanos al limite superior y por eneima de este valor la resolucién no mejora, La resolu- cin depende de la longitud de onda de la luz nilizada y de una caracteristica propia de la lente del objetivo deno- minada aperttra numérica (una medida de la capacidad de captacién de la luz por la lente). Existe una correlacién entre la capacidad de aumento de una lente y su apertura numérica: las lentes de mayor aumento poseen general- ‘mente mayores aperturas numéricas (la apertura numé. rica de una lente se suele marcar en ella al lado de su aumento). El didmetro del objeto mas pequerio que se puede resolver es igual a 0,5 J/apertura numérica, donde A representa la longitud de onda de la luz empleada. Por esta razén, la resoluci6n aumenta cuando se usa hz azul para iluminar la muestra (la luz azul tiene una longitud dle onda mas pequefta que la luz blanea o roja) y cuando la lente objetivo tiene una apertura numérica muy alta. Muchos microscopios 6pticos disponen de un filtro azul sobre la lente del condensador para mejorar la resolucién, @ ie i ® Figura 2.2 Micrografias de micraorganismos pigmentados obtenides mediante mieroscopia de fondo claro. (a) Un alga "0je fotétrofa (procariota). El 1Smmyeldelas didmetro de os bacteriss de Como se ha indi aleanza ble en un microscopio éptico compuesto es de unos 0,2 um. Esto significa que dos objetos que estén mas pré- ximos que esa distancia no podran verse como entidades distintas y separadas. La mayoria de los microscopios utilizados en microbiologia poseen oculares que aumen. tan 10-15 veces y objetivos que aumentan 10-100 v. (Figura 2.15). Con aumentos de 1.000 veces, los objetos de 0,2 um de diametro pueden apreciarse con dificultad, Con lentes de objetivo de 100 aumentos, ¥ con otras de apertura numérica muy elevada, se emplea aceite de in- mersion para que no exista aire entre la preparacion y la lente objetivo. Estas lentes se denominan objetivos de tr mersion. El aceite de inmersién se utiliza porque aw menta a capacidad de captacién de la luz por la lente, permitiendo que los ravos que emergen de la muestra con gran dngulo (y que se perderfan de otro modo sin entrar en la lente objetivo) puedan ser captados y percibidos. kx sntckiclgiec El isebaps Go eampe aes mien ado, la maxima resoluei 1 Defina el término resolucién 4 {Cual es el limite superior de aumento de un ‘microscopio de fondo claro? {Cusl es la causa de esto? (2.2 } Mejora y ajuste del contraste ~~~ en microscopia éptica La mejora del contraste mejora la imagen final observada por microscopfa. La tincién es un método sencillo de au- mentar el contraste, pero existen también otros métodos, Tinciones: incremento del contraste para microscopia de campo claro Se pueden utilizar colorantes para tenir las células y faci- litar su observacién. Los colorantes son compuestos or xinicos y cada tipo de colorante tiene afinidad por determinados componentes celulares. Muchos coloranies utilzados con frecuencia en microbiologta estan cargados Positivamente (son basicas 0 eatiénicos) y se combinan fuertemente con constituyentes celulares cargados nega- tivamente, como los écidos nucleicos y los polisacdridos dcidos. Como ejemplo de colorantes bisicos se puede ci- tar el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina Como las superticies cclulares estin porlo general carga- das negativamente, estos colorantes se combinan con es- tructuras de la superficie de las células y; por tanto, son excelentes colorantes de aplicacién general _Las tinciones simples se realizan sobre preparaciones Previamente secadas (Figura 2.3). Sobre un portaobjetos con una suspensién de microorganismos previamente se- cada y fijada a la llama, se vierte una solucion diluida de Exiensén de una fina capa de ‘muestra sabre el portaobjetos |. Preparacion de un frotis Secer alae Fac por fameado cel portaobjetos I. Fijacién por calor y tincién ‘Adolén de obiorante: favar y eecar om Il, Microscopia CColocar una gota de aceite de inmorsin en ‘et poctaobjetos y examinar ‘con objetivo de 100s Figura 2.3 Tinclén de células para observacién microseépiea. Las tinciones mejoran el contraste entre las células yl medi. un colorante y se mantiene durante uno 6 dos minutos; a continuacién se lava varias veces con agua y se seca, De- bido a que las células son muy pequefias, este tipo de pre paracion suele observarse con aceite de inmersién en la lente objetivo. Tinciones diferenciales: la tincién de Gram Las tinciones que tiften de diferente color a células que son de diferentes tipos se llaman tinciones diferenciales, Una tinci6n diferencial muy importante y ampliamente usada en microbiologia es la denominada tincién de Gram (Figura 2.4a), Dependiendo del resultado de esta tincién las bacteria pueden dividirse en dos grandes gr pos: las grampositivas aparecen de color morado y las, gramnegativas de color rosa (Figura 2.46). Esta diferen- cia en la respuesta a la tincién de Gram se debe a dife reneias en la estructura de la pared celular de las eélulas, ampositivas y gramnegativas (véanse Secciones 4.6 y 4.7). Después de tenir con un colorante basico, que nor- malmente es el cristal violeta, se trata a las células con etanol porque este alcohol es capaz. de decolorar alas ¢é- hulas gramnegativas pero no a las grampositivas. A conti- nuacién se realiza una tincién de contraste con un, colorante distinto a fin de poder distinguir los dos tipos de células en el microscopio (Figura 2.4), Latincin de Gram es uno de los procedimientos mas Utiles en los laboratorios de bacteriologia. Para empezar er ere Paso 1 @ Tincién del frotis, See e cristal violeta durante este ae pee eccetii Paso2 ‘Adicién dela Rr vas sone nena fount "e re i soem Paso Q Decoiracisn Breve a wae “D (aed to 20 ae segundos} — £ ours) a reeves ceocates Pao4 ee Tincién de contraste reat ae cee Gp sect oats voce vee ogee E 2 a a Figwa 24. Lesa rea Penden sibs avis rani suyeutayeeaayoweaans Eeeicie ak omacherena Close Atiderome maphad gunned (uc oalacocs (grampssitiva, narnia tehidas por un método fluorescente de un solo paso, Este método permite la ciferenciacién de células grampositvas y grarmnegativas mediante una nica tincién la identificacién de una bacteria, se suele comenzar determinando si es grampositiva 0 gramnegativa, Si se dispone de un microscopio de fluos leristicas se presentan més adelante, la tincién de Gram, puede reducirse a un procedimiento de un solo paso que permite observar que las eélulas de uno u otro tipo pre- sentan fluorescencia con colores distintos (Figura 2.4¢). 32 UNIDAD 1 4 Principios de microbiologia Microsco} oscuro Aungue la tincién de eélulas es u de contraste de fases y de campo técnica muy utilizada en microscopia éptica, presenta el inconveniente de que mata a las células y puede alterar sus propiedades mor- folégicas. Existen dos tipos de microscopia éptica q permiten mejorar el contraste sin el empleo de colorat tes, la microscopfa de contraste de fases y la microscopia, de campo oscuro (Figura 2.5). El microscopio de con- taste de fases se usa habitualmente en investigacién po que permite la observacién de montajes en himedo donde las eélulas permanecen viables. EL microscopio de contraste de fases fue introducido cen 1936 por el médico y matemstico holandés Frits Zer- nike y se basa en el hecho de que las células poseen un indice de refraccidn (que es un factor que retrasa la luz cuando atraviesa la muestra) distinto al del medio. La lux que pasa a través de una célula esté, por tanto, en una fase distinta de la que atraviesa el medio, Este pequeiio efecto se amplifica mediante un dispositivo especial si- tuado en la lente objetivo del microscopio de contraste de fases que se denomina el anillo de jases, dando lugar ala formacién de una imagen oscura sobre un fondo bri- ante (Figura 2.5b). El anillo inchiye una placa de fases, que representa la aportacidn esencial de Zernike y que amplifica las pequefias variaciones de fase. El descubri- miento de Zernike, sobre las diferencias de contraste en- tre las células y el medio, sirvié de estimulo para el desarrollo de ottas innovaciones en microscopia, como la microscopia de fuorescencia y la confocal, que se ana- lizan mas adelante. Por la invencién del microscopio de contiaste de fases, Zernike recibié el premio Nobel de Fi- sica en 1953, EI microscopio de campo oscuro es un microscopio 6ptico en el que el sistema de iluminacién ineide sobre Ja muestra sélo lateralmente. La tinica luz. que es eapaz, de alcanzar el objetivo es la dispersada por la muestra y, consecuencia, los microorganismos se observan bri- antes sobre un fondo oscuro (Figura 2.5c). La resohi- cién que se logra en los microscopias de fondo oscuro es bastante alta y en ellos pueden abservarse objetos difi- cilmente pereibidos por microscopia de fondo claro 0 de contraste de fases. La microscopia de fondo oscuro es también un método excelente para observar la movili- dad en los microorganismos, va que esta técnica per- mite observar los penachos de flagelos (véase Figura 4.464), roscopia de fluorescencia EI microscopio de fluorescencia se utiliza para visualizar -muestras capaces de emitir fluorescencia, es decit; capa- ces de emitira una determinada longitud de onda cuando incide sobre ellas una luz de longitud de onda menor (Fi- gura 2.6). La fluorescencia puede deberse a que algunas células poseen sustancias fluorescentes naturales, como la clorofila u otros compuestos fluorescentes (autofluo- © Figura 2.5 Células de la levadura de panaderia Saccharomyces cerevisiae vistas en diferentes tipos de microscopia éptica. (2) (@ Campo oscuro, Las rape claro, (b) Contraste do fases. las presentan un diématra de 8-10 ym. rescencia) (véase Figura 2.64, b) oa que las células se ti- fen previamente con un colorante fluorescente (Figura 2.6c). Por ejemplo, puede emplearse el colorante DAPI (diamidino-2-fenilindol) para identificar células en me- dios complejos como suelo: limentos © mues. tuas clinicas. La microscopia de fluorescencia se usa habitualmente en los diagndsticos clinicos microbiol6- gicos asi como en ecologia microbiana para enumerar bacterias en medios naturales o en suspensiones celula- res (Figura 2.60), Figura 2.6 Microscopia de fluorescencia. (2, b) ancbacterias. (a) Las eélulas se observan por micro 30 caro, (b) Las mismas eéulas se v de fluorescencia tras ser expuestas 2 luz de 546 nm. El color rojo, s¢ debe ala autofliorescencia de la dlorofila ay a otros igmentos. (9 Céluas de Escher lorante fluorescente DAPL -opio de chia col tehidas con el Bemis Una limitacién intrinseca de la microscopia de campo claro es a fata de contraste entre las células y el mecio. Este problema puede evitarse mediante el uso de tinciones o de formas alternativas de microscopis éptica, como la de contraste de fases 0 la de campo oscuro 1 gDe qué color aparecers una bacteria gramnegativa después de una tincién de Gram por el método convencional? {.Cual es la principal ventaja de la microscopia de contraste de fasos respecto alas tinciones? {Como se pueden hacer fluorescentes las células? Capitulo 2 Un breve viaje por el mundo microbiano 33 (2.3) Imagen tridimensional ~~ de las células Hasta ahora hemos considerado tipos de microscopfa que proporcionan imagenes bidimensionales. Sin em. rgo, esta limitacién puede ser superada, En la siguiente mos que el microscopio electrénico de ba- rido ofrece una solucién a este problema, pero ahora consideraremos algunas formas de microscopia éptica que también pueden ha lo, Microscopia de contraste de interferencia diferencial La microscopia de contraste de interfereneia diferencial (DIC, de Differential Interference Contrast) es un tipo de microscopia éptica que emplea una fuente de luz pola zada. La luz polarizada pasa a wavés de un prisma que nnera dos haces diferentes de luz, los cuales atraviesan la muestra y entran en la lente objetivo. Aqui los dos ra yos de luz se combinan y, debido a pequefias diferencias en el indice de ref vesado cada rayo, los dos rayos combinados no estén en la misma fase, lo que crea como resultado un efecto de interferencia. Este efecto intensifica diferencias muy su. tiles de la estructura celular y, mediante este tipo de mi croscopia, adquieren una apariencia tridimensional objetos como el nticleo de las células eucaristicas (Fi gura 2.7a), y las endosporas, vacuolas y grinulos de las élulas procariéticas, La microscopia de contraste de in. terferencia diferencial es particularmente atl para la ob- servacién de células no tenidas por su capacidad para revelar estructuras celulares internas qi ‘on de las sustancias que ha atra- no son facil es (0 que resultan incluso invisibles) cuando se utiliza ‘ascopfa de fondo claro (compa- rese la Figura 2.3 ra 2.7a), mente apar con la Microscopia de fuerza atémica Otra forma de microscopia que resulta muy ditil para pro: ducir estructuras tridimensionales de muestras biol cas es la que utiliza el microscopio de fuerza (AFM, de Atomic Force Mic sscope). En la microscopia de fuerza atémica se sittia una fina aguja como sonda muy proxima a la muestra que se va a analizar, de modo que entre la sonda y la muestra se establecen futerzas atémi cas débiles de repulsién, Cuando la muestra se recorre tanto horizontal como verticalmente, la sonda reproduce Jos valles y las coli tantemente las inte flales se registran en una serie de detectores que g tal en una computadora, la cual repro- imagen (Figura 2.76). ‘Aunque las imagenes que se obtienen con un micros- copio de fuerza atémica son similares a las derivadas de tun microscopio electrénico de barrido (comparese la Fi- gura 2.7) con la Figura 2.10c), la microscopja de fuerza atomica tiene la gran ventaja de que la preparacion de la de la muestra, registrando cons- icciones con la superficie, Estas se- 34 UNIDAD 1 & Principios de microbiologia Figura 2.7 Imagen tridimensional de células. -opia de contraste de intelerencia diferencia. (6) Microscopia de fuerza 2 metro de unos ica, Las céluas en la miet um, Puede distingutse la Figura 25a). Las bacteria de la el nécleo [compérese c ‘mictogratia() tienen una longitud de 2.2 um y proceden de un biofilm natural que se desarrllé scbre un porta inmerso en ¢ ‘agua del comedoro de un perto durante 24 horas. El porta se seed antes de la observacién por un mi scopio de fuerza muestra no requiere ni fijacién ni inclusién, lo que per mite la observacion de muestras vivas que generalmente 1no es posible con los microscopios electrnicos. Microscopia confocal microscopio confocal de barrido con kiser (CSLM, de Confocal Scanning Laser Microscope) es un microscopio computerizado que acopla una fuente de luz laser aun microscopio éptico. Esta técnica permite producir imé: nes tridimensionales de microorganismos y de otras muestras biolégicas (Figura 2.8). El rayo laser se enfoca de manera precisa de modo que solo se hace visible un plano particular de la muestra y la luz. perdida en otros, planos focales se elimina tra relativamente grues De esta mat ‘omo por ejemplo en un biofilm 9 Microscopia confocal por laser. (3) Imager focal de una comunidad microbiana mixta en un bie ivado en el laboratoro, Las células baclaes ve Peeudemonas aeruginosa. Otras células de diferentes colores aparecen a diferentes profundidades dentro del biofilm (6) Mictografia confocal de una cianobacterisflamentoss fon un lago carbonatado. Las céulas tienen un cde Sim, didmetro de slrededo bacte las de la superficie del biofilm, como ocurriria en el ease de la microscopia éptica convencional, sino también las ccélulas de las diversas capas mediante el ajuste del plane de foco del rayo laser. Mediante la iluminacién de une muestra con un rayo laser de intensidad variable, se hs logrado mejorar la resolucién tipica del microscopio 6p. tico compuesto desde 0,2 jim hasta 0,1 jum, En la micrascopia confocal las preparaciones cells res se suelen tenir con colorantes fuorescentes para faci litar su visién (Figura 2.8). Por otra parte, también s¢ pueden crear falsos colores en muestras no teflidas ajus: tando el microscopio de tal modo que las diferentes capas presenten colores distintos. El microscopio confocal cor liser esta equipado con programas de computadora que reunen las imagenes digitales obtenidas y permiten st procesamiento posterior. Las imagenes obtenidas de las iano (Figura 2.80), no sélo se observarsin las eélu. diferentes capas se pueden almacenar y luego superpo. ner digitalmente para reconstruir la imagen tridimensio- nal de la muestra completa (Figura 2.84). La microsco \dido en ecologia microbiana, especialmente en la identifica- ion de las poblaciones celulares filogenstic: Lintas que estan presentes en un habitat determinado (Figura 1.5b) 0 para determinar los diferentes compo- nentes de un hébitat estructurado como un biofilm ( gura 2.80). Su utilidad se extiende a cualquier situacién, que requiera examinar en profundidad muestras de rela- tivo espesor en cuanto a su contenido microbiano. La microscopia de contraste diferencial de interferencia | y la microscopia confocal son formas de microscopia fa confocal tiene un Sptica que permiten generar imagenes tridimensionales mejor que otras formas de microscopia éptica, yla de ipo confocal hace posible el analisis através de rmuestras de relativo espesor. El microscopio de fuerza ‘atémica puede proporcionar imagenes tridimensionales de muesteas vivas, 1 2Qué estructura se ve con mas facilidad por microscopia de contraste de interferencia diferencial ‘que por microscopia de campo claro en una célula ‘eucaritica? (Pista: comparar las Figuras 2.5a y 2.72). 11 1Cémo es posible ver por microscopia confocal las diferentes capas de una preparacién gruesa? 2.4. ) Microscopia electronica La microscopia electrOnica utiliza fotones en lugar de electrones para producir imagenes de células o de es- tructuras En el microscopio electrénico de transmisién (TEM, de Transmission Electron Microscope) Jas lentes son electromagn: ciona allo vacfo (Figura 2.9). Los microscopios electr6- n equipados con cdmaras que permiten tomar Hlamadas miicrografias electrénicas croscopio electrénico de transmisién suele em- plearse para el examen de estructuras celulares a muchos aumentos ¥ elevada resoluci6n. El poder de resolucion de este microscopio es mucho mayor que el del microscopio ptico, lo que permite ver estructuras a nivel molecular, Esto se debe a que la longitud de onda de los electrones, ‘es mucho més corta que la de la luz visible y a que el va lor de la longitud de onda afecta a la resolucién (Seccién 2.2), Por ejemplo, mientras que el poder de resolucién de tun microscopio éptico de calidad es de unos 0, nretros, el de un microscopio electronico de transmisién es de unos 0,2 nandmetros (nm, 10°? m). Por tanto, con, este tipo de microscopfa se individuales como proteinas y dcidos nucleicos (Figura 2.10b y Figura 2.14), cas y todo el sistema fun- env incluso moléculas Capitulo 2 © Un breve viaje por el mundo microbiano 35, Figura 2.9 Microscopie electrénico. Este aparato realiza tanta microscapia de tranamisibn como de barrido. Sin embargo, a diferencia de la luz visible, los haces de electrones tienen escaso poder de penetracién e in- cluso una célula aislada es demasiado gruesa para que su contenido pueda visualizarse directamente. Por este mo- tivo, se emplean técnicas especiales para obtener cortes uultrafinos a fin de poder ver las muestras. Una célula bac teriana, por ejemplo, se corta con una cuchilla especial en varios cortes ultrafinos (de 20-60 nm de espesor) y se examinan éstos de modo individual electrénico (Figura 2.104). Para obtener suficiente con- traste, las preparaciones se tiilen antes con colorantes como acido ésmico, permanganato o sales de uranio, de Jantano o de plomo, que son sustancias que poseen ato- mos pesados capaces de desviar los electrones y aumen lar por tanto el contraste (Figura 2,105). Microscopia electrénica de barrido Cuando en una muestra sélo se pr tructuras externas de un orgat cortes ultrafines, pudiéndose realizar Ia observacién de las células intactas o de los componentes celulares de ‘modo directo por el microscopio electrénico de transmi sin tras una técnica denominada tincién negativa (Fi gura 2.10b). puede utilizar el microscopio eleetrénico de barrido (SEM, de Scanning Electron Microscope) (Figura 2.9), En el microscopio electronico de barrido, la muestra a estudiar se recnbre primero con una fina capa de un, metal pesado, como el oro. Fl haz de electrones de este tra y los elec: trones desviados por la capa de metal se recogen y pro- sobre una pantalla para producir una imagen (Figura 2.105). En este microscopio muestras de cierto tamafio y la profun sende estudiar las es- ismo no son necesarios los Por otra parte, se instrumento barre la superficie de la mui pueden observar jdlad de campo es 36 UNIDAD 1 I Principios de microbiologia DNA (eucteoids) } Pores ~ celular ® Membrane < ‘itoplésmica 3 i @ © Figura 2.10. Micrografias electrénica. (2) Micrografis de un corte ulvrafino dela bacteria crampesitiva Bacillus subtilis en fase de divieién, tomada Cade célua tiene un ciémetro aproximado de 0,8 um. (b} Imagen al microscopio electidnivo de trensmision de moléculas de hhemoglabina del gusano marino Nereis vrens con tinién negativa. Cada molécula de forma hexagonal tiene unos 25 nanémetros diémevoy nun mieroscopio elect nico de transmisién. La regién clara central corresponde al DNA que forma el nuclecide, sta de dos anillos ciculares en forma de donut. (¢) Células dela bacteria fotdtrofa Rhodovibrio sodomensis por nicroscopia electrénica de barrido. Cada célula tiene una anchura de unos 0,75 jm. excelente, Ademés, perm aumentos, desde 15 hasta 100.000 veces, pero sdlo s puede ver Ia superficie de los objetos. Las micrografias electrénicas tomadas por el micros- copio electronico de transmisién o por el de barrido pro- porcionan imagenes en blanco y negro. A estas imagenes _Los microscopios electrénicos tienen mucho mas poder seles puede atadir un falso color adicional manipulando de resolucién que los microscopios éptices, legando las micrografias en una computadora. Pero estos colores _ hasta limites de resolucién de 0,2 nm. Existen dos tipos ‘obtener un amplio rango de no mejoran la resolucién de la micrografia, que depende (os logrados en la micrografia original © de los aum principales de microscopia olactrénica la microscopia electrGnica de transmisién, empleada en la cbservacién de estructuras intracelulares hasta un nivel molecular, y la microscopia electrénica de barrido, que es itil para la ormacién de imagenes tricimensionales y el examen de superficies 1 Qué es una micrografia electrénica? ZEn qué se | diferencia una microgratia electrénica de una fotomicrografia en lo que respecta al modo de cobtencién de la imagen? {Por qué las microgratias | electrSnicas tienen mucha mejor resolucién que las rmicrografias Spticas? Qué tipo de microscopia electrénica emplearia para ‘observar un conjunto de células? zQué tipo usaria para observar el nucleoide bacteriano? Il ESTRUCTURA CELULAR E HISTORIA EVOLUTIVA La siguiente parte de este capitulo presenta conceptos so- bre la estructura y diversidad de la edlula mierobiana que sirven de base a temas que se desarrollan a lo largo dll bro. Estudiaremos primero la arquitectura interna di células microbianas y dilerenciaremos a las eélulas de los virus. A continuacién exploraremos el 4rbol evolutive de la vida para establecer el escenario que permite presentar los principales grupos dle microonganismos que influyen sobre nuestras vidas y sobre nuestro planeta, 2.5.) Elementos estructurales ~~ de las eélulas y de los virus ‘Todas las eélulas tienen mucho en comiin y compartén muchos componentes. Como vimos en el Capitulo 1, to- das ellas poseen una barrera de permeabilidad llamada la membrana citoplasmatica que separa el interior ce- lular o citoplasma del medio externo (Figura 2.11), Los principales componentes disueltos en el cito- plasma son macromoléculas, pequefias moléculas or ganicas (sobre todo precursoras de macromoléculas), diversos iones inorgénicos y ribosomas, que son las c tructuras de la célula donde se sintetizan las proteinas, Los ribosomas interaccionan con protefnas del cito- plasma y con los RNA mensajeros y de transferencia en el proceso esencial de la sintesis proteica (traduccién) (véase Figura 1.4). La pared celular proporciona rigidez estructural ala célula. Es relativamente permeable y esta situada por fuera de la membrana citoplasmica (Figura 2.1 la), cons tituyendo una capa mucho més fuerte que la membrana, Las células vegetales y las de la mayorfa de los microor- ganismos presentan paredes celulares, mientras que las células animale: ras excepciones presen- tan, En vez de pared celular, las eélulas animales se r Capitulo 2 | Un breve viaje por el mundo microbiano 37 Copies Fibosomas Plasmid 4 05am Pred caluar (@ Procariota Mombrana — ‘toplasmatica—— Reticuo —_ ‘endopiasmatiog Riposomas Nacleo —— Nucleolo —— Mambrana svclar Aparato. ~~ de Calg) Ccopiasma Itocncia CCloroplasto—~ (©) Eucariota Figura 2.11 Estructura interna de las eélulas microbianas, Se resaltan la difere las células procarioticas y e ncias de escala y de astructua interna entre fuerzan por medio de moléculas con funciones de so: porte 0 andamiaje, localizadas dentro del citoplasma, que forman el citoesqueleto. Células procaristicas y eucaristicas Un anilisis detallado de la estructura celular interna y de otras propiedades permite diferenciar dos tipos de célu las: Ja procariética y la eucariética (Figura 2.11 y Figura 2:12). Las eucarioticas tienen su DNA en un necleo ro: deado de membrana y son por lo general més grandes y de estructura mas compleja que las células procariéticas, En las cucariéticas los importantes procesos de trans- cripei6n y traduccién (véase Figura 1.4) estin divididos: la transcripeién ocurre en el nucleo y la citoplasma, Los microorganismos eucariéticos son las al- gas, los hongos y los protozoos. Todos los organismos pluricelulares de las plantas y los animales estan forma- dos por células eucarioticas. Las eélulas eucariéticas se tratardn con mas detalle en el Capitulo 18 Una caracteristica diferencial de las células eucarioti- cas es la presencia de estructuras Hamadas orgénulos ue estén limitadas por membranas. Los organulos com prenden el micleo, las mitocondrias y los cloroplastos (es- Ikimos presentes sélo en las eélulas fotosintéticas) raduccion en el tos 38 UNIDAD 1 4 Principios de microbiologia Procariotas | (e)Bacterto (o) Archaea Eucariotas ‘Mitoconctia (0) Eukarya Figura 2.12 Micrografias electrénicas de cortes ultrafinos de eélulas de cada uno de los tres dominios de organismos vives. (a) Helfobacterium medesticaldum la célula mide 1 x 3 um. (b) Methanopyrus kandleri la célula mide 05 x 4 um. Reinhard Rachel y Karl O. Setter, 1981. Archives of Microbiology 128:288.-293, © Springer-Verlag GmbH & Co, KG. (c) Saccharomyces cerevisiae; la lula mide & um de dismetzo (Figuras 2.20 y 2.12c). Con berga el genoma y es tamb transcripeién en las eélul drias y los cloroplastos contienen su propio genoma mas pequenio y desemperian funciones especific racién de energia, llevando a cabo la respiracién y la fo: tosintesis, respectivamente. A diferencia de las células eucariéticas, las eélulas procariticas tienen una estructura interna mais simple y carecen de orgdnulos rodeados por membrana (Figuras 21a y 2.12a, b). Ademas también difieren de las euca- ridticas en muchos otros aspectos. Por ejemplo, las eéhi- las procaridticas presentan directamente acopladas la transcripeién y la traduccién en el cltoplasma porque su. DNA no esta ence ticas (Seccién 2.6). Por otra part ceucariéticas, la mayoria de las eélul se ha dicho, el nticleo al- el lugar donde ocurre la s eucaridticas, Las mitocon- ado en el nticleo como en las eucaris- en contraste con las ss procatisticas usan su membrana citoplésmica para generar ene! tienen genomas pequefios y compactos que est luidos por DNA circular (Seccién 2.6) Pese a estas diferencias tan marcadas entre las e6lu- las procariticas y eucarioticas, es importante destacar que no se puede equiparar la organizacion celular con una relaci6n evolutiva. En la Seceién 2.7 considerare- mos que el mundo procaristico comprende dos amplios, grupos que son distintos desde el punto de vista evol- tivo. En los Capitulos 7 y 8 compararemos y contrasta- remos la biologia molecular de las células procariéticas, destacando sus similitudes y diferencias y relacionan- dolas con los procesos moleculares de las ridticas, consti Tamajio celular En general, las células microbianas son muy pequenas, particularmente las procariéticas. Un bacilo procariético pico mide de 1 a 5 um de largo por 1 um deancho, y por Io tanto resulta invisible a simple vista. Para compr esta magnitud hay que considerar que se podria poner en. fila 500 bacterias de 1 jim de largo sobre el punto final de esta frase, Por lo general, las células eucaridticas son mu; cho mayores que las procariéticas, pero el tamaio puede variar dentro de un amplio margen, Existen células eu cariéticas con diémetros tan pequenos como 0,8 um o tan, grandes como varios center ares de micrémetros. Trata na del remos de nuevo con més detalle el « lular en la Secci6n 4.2. amano ce- Virus Los virus representan una clase importante de microor- ganismos, pero no son células (Figura 2.13). Carecen de muchos atributos de las células (véase Figura 1.3) ¥ se di ferencian particularmente de éstas en que no son siste- mas dindmicos abiertos. Por el contrario, una particule virica es una estructura estitica, muy estable e incapaz de cambiar o sustituir sus constituyentes, Un virus slo adquiere el atributo clave de los sistemas vivos, es decir Ja reproduccién, cuando infecta a una célula. A diferen- cia de las células, los virus no tienen capacidad metabs- lica propia. Ademés, aunque contienen sus propios ‘genomas, los virus carecen de ribosomas, y por tanto de- penden por completo de I maquinaria biosintética de las células que infectan para sintetizar protefnas, Por otra parte, a diferencia de las eélulas, los virus contienen slo Capitulo 2. Un breve viaje por el mundo microbiano 39 Célula de levadura (Eukorya) 8 um de diamotro, Célula de Escherichia ‘call (actera) 1x3 um 1.000 ym) o @ Figura 2.13 Estucturaviriea y comparacién del tamafo de virus y eélulas (2) Particulas de thabclowins (virus que infectan plantas y animales). Cada particula individual mide corca de 65 am (0,045 ur). (6 El virus bacteriano lambda (bacteri6fago). La cat de cada paricula mide cerca de 65 nm de didmetio, (c) Tamaro de los virus mostrados en (@)y (b} comparados con una céula bacteriana y una eucariétca tun tipo de écido nucleico, DNA RNA; en consecuencia, algunos virus tienen el genoma formado por RNA. En los Capitulos 10 y 19 estudiaremos los virus con detalle, Los virus infectan todo tipo de células, incluso las lulas microbianas. Muchos virus causan enfermedades, en los organismos que infectan, pero la infeccién virica puede también tener otros profundos efectos muy distin tos a la enfermedad, como alteraciones genéticas que en realidad pueden mejorar las capacidades de la célula. Los, Virus son mucho mas pequefios que las células, mucho, menores todavia que las células procaridticas (Figura 2.13), El tamafio de los virus es muy variable y el ms pe. {quefio conocido tiene un didmetro de tan solo 10 nm. Todas las células microbianas poseen clertas estructuras, basicas comunes como membrana citoplasmatica y ribosomas; la mayoria poseen ademés pared celular Desde el punto de vista estructural se reconocen dos ceategarias celulares: la procariética y la euceristica. Los. virus no son células pero dependen de ellas para sus funciones replicativas 1 Observando al interior celular, cémo podria decir si una célula es procariétics 0 eucaristica? 1 {Cual es la importante funcién de los ribosomas en la ula? 2Por qué los virus no se consideran células? 1B aPor g ideran célul J 2.6 ) Organizacién del DNA ~—— en las células microbianas En todas las células los procesos vitales estén controla: dos por su conjunto de genes, es decir, por su genoma Un gen puede ser definido como un segmento de DNA que codifica una molécula de protefna o de RNA. En el Capitulo 13 analizaremos los rapidos avances exper ‘mentados en la secuenciacion y analisis de genomas de organismos, desde los virus y las bacterias hasta el hom: bre, que han permitido disponer de informaciones micas detalladas en centenares de organismos diferentes y hac posible su comparaci6n. Aqui sélo considerare. ‘mos cémo se organizan los genomas en las células pro, jcas y eucatidticas, y el ntimero de genes y de as presente en una célula bacteriana t Nicleo versus Nucleoide Los genomas presentan una organizacin diferente en cé- lulas procaristicas y en células eucariéticas. En las pro- cariéticas, el DNA se presenta como una larga molécula de dos eadenas llamada cromosoma que se condensa en una masa visible por microscopfa electronica llamada nucleoide (Figura 2.14), En el Capitulo 7 veremos que cen la mayorfa de los procariotas el nucleoide esta cova- lentemente cerrado y es circular Por lo general, las células procariéticas tienen tn cro- mosoma nico. Por esta raz6n, tipicamente contienen, ée of .* * < oe * ‘oe 2 s 9 * 7 @ 2 > a Figura 2.14 El nucleeide, (a) Microorafia de cslulas de Escherichia uns 3 ym. (6) Mi rafiatomada con microscopio tlectrSnico de transmisin de un nuclecide aslado iberedo de tune célula de E. coi La célula fue lisaca suaverente pars i altamen extremos de las cadenas del DNA ppetmitique el nucleoicle compactado saliera intacto, Las fechas indica lo tuna sola copia de ticamente haploides, Muchos procariotas contienen tam bién pequefias cantidades de DNA extracromosémico, dispuesto habitualmente de modo circular, que constit yen los plasmidos. Los plasmidos suelen contener genes {que confieren propiedades especiales a las células (como propiedades metabdlicas sin, llevan los genes esenciales que se requieven para la superviveneia y que se localizan en el cromosoma. En las célilas eucariéticas, el DNA se presenta dentro del nticleo en moléculas lineales empaquetadas en un es- tado muy organizado formando los eromosomas. El nti- mero de cromosomas es muy variable. Por ejemplo, la evadura de panaderfa Saccharomyces cerevisiae contiene 16 cromosomas dispuestos en 8 pares, mientras que las células humanas contienen 46 (23 pares), En las células eucariéticas los cromosomas contienen también protef- ‘nas que favorecen el pl ida gen y por consiguiente son gené- ulares). Por el contrario, no isicamente miento ¥ empaquetamiento del Figura 2.15 Mitosis en eélulas tefildas de rata canguro. L2 célule fue fotografiada en estado de motalase de la division mittica;sélo las e6lulas eucariéticas presentan mitosis Eller lide se debe ala tincién de una proteina llamada tubulina que fs importante para la saparacién de los cromosomas (véase én 18. DNA e indi: S El color azul se debe a unc orante que tie el DNA y otras que son necesarias para la expresién de los genes (véase Seccién 8.5). Una diferencia fundamental entre las células procariéticas y eucaristicas es que las til ante la divi- timas contienen por lo general dos copias de cada g son, por tanto, genéticamente diploides. Du sidn celular de las células eucarioticas el mticleo se divide (tras duplicarse el numero de crom soma proceso de mitosis (Figura 2.15), de modo que se origi nan dos células hijas idénticas v s) mediante el ida una de ellas reeibe tun conjunto completo de genes. La dotacién diploide del material genético de las eé- Julas eucarioticas se reduce a ceso de meiosis para formar n sexual, La fusion de dos formacién del zigoto restaura el estado diploide de la e& lula resultante. Estos procesos se presentan con mas de- talle en el Capitulo 8, mitad mediante el pro- gametos haploides en la reproducci metos durante la Genes, genomas y proteinas 2Cuntos genes y protefnas tit fia tipica como Escherichia coli contiene un tinico cro- ‘mosoma circular con DNA formado por 4,68 millones de pares de bases. Como el genoma de E. coli ha sido com pletamente secuenciado, sabemos que contiene cerca de 4.300 genes. Algunas bacterias tie nes tres veces supetior, pero otras no superan la octava parte de dicho ntimero (vase Tabla 13.1) Las células eu- cariéticas tienen muchos més tuna célula? Una bacte snes que las proc cas, Una célula humana, por ejemplo, contiene unas 1,000 veces mas DNA que E. coli y alrededor de 7 veces su nimero de genes. Una tinica célula de E, coli contiene aproxima mente 1.900 tipos de proteinas diferentes y cerca de 2,4 millones de proteinas en total (véase Tabla 3.2). Algunas muy abundantes, otras lo son menos y iti proteinas son otras estan presentes en una 0 en pocas copias. E. coli por tanto, mecanismos que controlan la expresiort 's genes (transcripeidn y traduccion, véase Figura 1.4) de modo que no todos son expresados con la misma frecuencia al mismo tiempo. La tet mecanismo muy importante en todo tipo de eélulas y se detalla en el Capitulo 9, Los genes dirigen las propiedades de las células y el conjunto de genes de una célula se denomina genoma EIDNA se dispone en las células formando cromosomas. La mayoria de las especies procariéticas tienen un cromosoma circular Unico, mientras que las eucariéticas alacién génica es un poseen varios cromosomas lineales, 1 Diferencie el nucleo del nucleoide. 1 gEn qué se dlferencian los plasmidos de los 1 {Por qué parece légico que una célula humana tenga més genes que una célula bacteriana? ) 2.7 ) El érbol evolutivo de la vida La evolueién es el proceso de cambio que ocurre en una linea de descendencia a lo largo del tiempo y que origina, 1a aparicion de nuevas variedades y especies de organis ‘mos. La evolucién tiene lugar en cualquier sistema at torreplicativo en que surjan variaciones a causa de mutaciones y el resultado sea una seleccién potencial derivada de la nueva eapacidad de adaptacién. Por tanto, con el tiempo, todas las células y los virus evolu- DNA Secvenciac ‘dol DNA Gon que codiica Catas SIRNA ribosomes oS w — ¢&€ — ntaent oR ‘se DNA @ » © Figura 2.16 Secuenciacin del gen del RNA ribosémico y filo codiice el RNA ribosémice y produccis cde RNA. Un programa informstico realiza comparaciones por pares 2eonel3y queelt Capitulo 2 # Un brave viaje por el mundo microbiano 41 Determinacién de relaciones evolutivas Las relaciones evolutivas entre los microorganismos son al objeto de estudio de la filogenia. Las relaciones filo genéticas entre las células se pueden deducir mediante la comparacién de nética que existe en sus 4cidos nucleicos o en sus proteinas (las secuencias de nu: stidos o de aminodcidos) (véase Capitulo 14). Las mo- Iéculas que forman el ribosoma, en particular las del RNA de los ribosomas (rRNA), resultan ser unos indicadores excelentes para det Como todas las célula #RNA, esta molécula puede empl Arbol filogenético de todas las células, incluyend microorganismos (véase Figura 2.17). También se hi tablecido las relaciones filogenéticas entre los virus, per como estos microorganismos carecen de ribosomas, s han utilizado otras moléculas para establecer sus rela clones evolutivas. Carl Woese, un microbislogo estadou: nidense, fue el primero en advertir Ia posibilidad de emplear rRNA como instrumento idéneo para estudiar la filogenia microbiana, y este concepto revohucioné nues- tros conocimientos acerca de la evoluicién celular Los pasos para obtener un Arbol filogenético basado en el RNA se indican en la Figura 2.16. En resumen, los, genes que codifican ¢l RNA en dos o mas organismos se sectiencian, es decir, se determina el orden e3 clestidos en la secuencia (Seceién 12.5) y esta secuencia se alinea y se examina base a base mediante una compu: tadora. Cuanto mayor sea la variacién en la secuencia de los genes para el RNA de dos organismos, mayor ser su divergencia evolutiva. Esta divergencia se puede repre- sentar después en un arbol filogenético (Figura 2.16) contienen ribosomas, y por tanto se para construir un io de nu- Los tres dominios de la vida A partir de la comparacién de secueneias de los FRNA se han identificado tres lineas celulares filogenéticas distin isa ‘Alineamiento de las secuencias del gen Se! RNA ribosomico 3 AgTescTag Hi ———> atrcceras 2| p> Cit nalisds) ACCOGTTAG 9 yGaneiacion ‘secvencias ‘ol tbo! flogenstico 2 @ @ genia. (a) Rotura de la células. (6) Alslamiento del gen que ‘continuacion de muchas copias por ls técrica de la reaccion en cadena de la polimerasa PCR, véase Seccién 128), (¢ d) Secuenciacin del gen (véese Seccién 125] y alineacién de la secuencia obtenida con otras 8 en la secuencia del 1 diferencias son las siguientes: entre el organismo 1 y el 2, tes sy genera un drbol (8) que reflea las ciferencia FRNA de los organismos analizados. En el ejemplo que se indica a dlferencias; entre el 1 el 3, dos diferencias; entre el 2y e 3, cuat que el2. ciferencias. Por tanta, los arganismos 1 y3 estan més relacionados — — UNIDAD 1 A Principios de microbiologie pROCARIOTAS Pale dl art Evoarotas ~superores» Figura 2.17 Arbol flogenétice de los seres vives deducido de Ia secuenciacién comparative del gen del RNA ribosémico £1 arbol esté formado por ites dominios de oxganismos: Bacteria y Archaes, que presentan células proc: ica, y Eukorye(eucariota). Solomente se incican elgunos grupos de organisms dentro de cada dominio. Los ipertarrsfilos son procariotas que crecen mejor 280°C o a tempersturas superiores. Los grupos sombreados en rojo son macroorganismos. El resto en el érbol de la vicla son Tricroorganismos. Se pueden ver drboles flogendticos més detallados da cada dominio en les Figuras 219, 2.28 y 2.32 tas. Estas lineas evolutivas, denominadas dominios, son, Bacteria y Avchaea (que estan constituidas por procario- tas) y Eikarya (que comprende los eucariotas) (Figura 2.17), Se supone que en los comienzos de la vida sobre la Tierra estos dominios surgieron por divergencia a partir de un organismo © comunidad ancestral comin. 1 4rbol filogenético de la vida revela dos hechos evo- utivos importantes: (I) como se ha comentado anterior- mente, no todos los procariotas estdn estrechamente relacionados desde el punto de vista filogenético, y (2) el dominio Archaea presenta una relacién mas préxima al dominio Eukarya que al dominio Bacteria (Figura 2.17), Por tanto, a partir del antecesor universal comtin a todas, las formas de vida, la diversificacisn evolutiva inicial twvo, lugar en dos direcciones: el dominio Bacteria y otra se- gunda linea evolutiva que eventualmente originé tanto el dominio Archaea, que retuvo Ia estructura celular proca- ‘comoel dominio Evkarya, que no la mantuvo. Alo largo de este libro, el término bacteria, escrito con «bo mi- niscula se refiere a algunas especies del dominio Bacteria. Eukarya Com todas las células de los animales y de las plantas son, eucaristicas, se deduce que los microorganismos eucari6- ticos fueron los antecesores de todos los organismos plu- ricelullares. El rbol de la vida refleja claramente este hecho, pues Jos eucariotas microbianos constituyen una fama temprana del érbol mientras que los animales y las plantas se localizan hacia el extremo terminal (Figura 2.17). Sin embargo, la secuenciacién molecular y otras evidencias han puesto de manifiesto que las eélulas cuca. Hétieas poseen genes de los dos dom*nios, Ademis d noma empaquetado en los cromosomas del nticleo, las mitocondrias y los cloroplastos de las células eucariticas ‘poseen sus propios genomas (DNA dispuesto en forma cir- cular, como en los procariotas) y sus propios ribosomas. Usando las técnicas de secuenciacién de rRNA, se ha de- mostrado que estos organulos derivan de antecesores es: pecificos pertenccientes al dominio Bacteria (Figura 2.17 y Seccién 2.9), Parece pues probable que las mitocondrias ¥ylos cloroplastos fueron en otro tiempo células que vivian, tenestado libre y que establecieron tna existencia intrace- lular dentro de eélulas de Evkarya en tiempos primize- nios. El proceso por el que ocurrid esta adaptacion estable se conoce como endosimbiosis, y se comenta en poste- riores capitulos (wartse Secciones 14.4 y 18.4). Contribuciones de la secuenciacién molecular ala microbiologi Los estudios filogenéticos realizados a nivel molecular con- firman las relaciones evolutivas existentes entre todas kas eé- lulas, La aplicacién de esta tecnologia ha creado un sistema de relaciones evolutivas entre los procariotas, lo que consti tuye un logro importaffie que la microbiologia no hab abordado desde sus principios. Ademas, la filogenia basada tenel RNA ribosémico ha dado lugar a nuevos instrumentos ‘con aplicaciones en otras ramas de la microbiologia, afec- tando en particular a la clasificacién microbiana, a la eco- logia microbiana y al diagnéstico clinico. En estas areas, la filogenia molecular ha facilitado el concepto de especie bac suministrado a los ecélogos microbianos y a los ‘microbidlogos clinicos la posibilidad de identificara los m- croorganismos incluso sin cultivarlos. Por otra parte, ha ampliado nuestro conocimiento de Ia diversidad micro. Diana y revelado la sorprendente conclusién de que la ma. yor parte de esta diversidad que existe en la Tierra atin no ha sido cultivada en el laboratorio, Le comparacién de secuencias del rRNA ha permitico efinir los tres dominios de la vida: Bacteria, Archaea y Eukarya. La secuonciacién molecular ha demostrado ‘tembién que los organulos presentes en las células de Eukerya tienen raices evolutivas en el dominio Bacteria y ha suministrado ademés nuevos instrumentos a la ecologia microbiana y a la microbiolagia clinica, 1 Cémo se pueden distinguir especies de Bacteria y de Archaea empleando la biolagia molecular? 1 Como benefica a las eélulas eucariéticas el proceso de endosimbiosis? DIVERSIDAD MICROBIANA de casi 4.000 millones de atios de cambios evolutivos ‘véase Figura 1.6). La diversidad microbiana se expresa de muchos modos, por ejemplo, como variaciones en el tamafio yen la forma celular (morfologia), en las estrate- gias metabélicas, en la movilidad, en los mecanismos de division celular, en la patogenicidad, en el desarrollo, en la adaplacién a condiciones ambientales extremas, en la filogenia yen muchos otros aspectos. En las siguientes secciones dibujaremos a grandes trazos el cuadro de la diversidad microbiana. Se volverd a tratar con mas deta- Ile el tema de esta diversidad en los Capitulos 14-19. Iniciaremos nuestra presentacion de la diversidad mi- crobiana considerando en primer lugar la diversidad nte- ‘tabdlica porque ambos conceptos estin relacionados. Los microorganismos han aprovechado cada modo de vida Posible que esté de actierdo con las leyes fisicas y quimi- cas. Esta enorme versatilidad ha determinado que ocu- pen todos los habitats posibles de nuestro planeta. La diversidad metabolica se trata con mis detalle en los Ca- pitulos 5, 6, 20 y 21 (2.8 ) Diversidad fisiolégica de los microorganismos Todas las células requieren energia y un método que per- a para otros usos. En la naturaleza la Capitulo 2 | Un breve viaje por el mundo microbiano 43 Compuestos quimicos Luz Quiniovotia Compuestos Compvestos ‘orginicos inergarscos (ucoss set, e) i H.S, NZ, te) Quimiorganstrofes _Quimiolitétrofos (Glucosa +O, C0;+H,0) (H+ p= H.0} wa) ate ATP. ATP. Figura 2.18 Opciones metabslicas para la obtencién de ‘energia. Los compuestes cxgénicos o inorganicas que se indican son sélo un ejemplo de los muchos usados por los diferentes organismos quimistrofos. Los organismos quimistrofos oxidan ompuestos orginicos 0 inergénicos pare producir ATP. Los crgenismos fotdtrofos convierten la energia solar en encrgia ‘quimica en forma de ATR puede obtenerse a partir de tres fuentes: com. Puestos orgdnicos, compuestos inorgénicos y la luz. Quimioorganétrofos Los organismos que obtienen Ia eneriia de compuestos quimicos se llaman guimidtrofos, y los que lo hacen a par- tir de compuestos organicos se denominan quimioorga- n6trofos (Figura 2.18). Muchos miles de sustancias organicas diferentes pueden usarse por un microorganis- mos 0 por otro para obtener energia, De hecho, todos los compuestos organicos naturales y gran parte de los sin- téticos pueden ser desdoblades por el metabolismo de luno 0 varios microorganismos. La energfa se obtiene por oxidacién del compuesto conereto y se conserva en la cé= hula como un compuesto de alta energia, el trifosfato de adenosina (ATP), Algunos microorganismos pueden obtener energfa de un compuesto orgénico solamente cuando el o esta presente; estos organismos se llaman aerobios. Otros solo lo hacen en ausencia de oxigeno (anaerobios) y otros en cambio pueden metabolizar compuestos or tanto en presencia como en auesencia de oxigeno. La ma- yor parte dé los microorganismos que se han logrado cul- tivar en el laboratorio son quimioorgandtrofos Quimiolitétrofos ‘Muchos microorganismos pueden aprovechar la energia ue esta disponible en los compuestos inorganicos. tipo de metabolismo se llama quimiolitowofia (des cubierto por Winogradsky, vase Seccién 1.9) y los microorganismos que la llevan acabo se llaman quimio- te 44 UNIDAD 1 & Principios de microbiologia lit6trofos (Figura 2.18). Esta forma de metabolismo cnergético se encuentra s6lo en microorganismos proca- rioticos y esta ampliamente distribuido entre especies de Bacteria y de Archaea. El rango de compuestos inorgani- cos diferentes que pueden usarse es amplio pero, por lo eneral, un grupo procariético determinado suele espe- cializarse en la utilizacion de uno o de un grupo de com- puestos inorganicos relacionados. Parece obvio que la capacidad de obtener energfa de Tos compuestos inorgdnicos presenta sus ventajas; no existe competencia con los quimioorganétrofes. Ademas, muchos de los compuestos inorginicos que son oxidados, 10 por ejemplo H, y H,S, son en realidad productos de desecho de los quit n6trofos. Por tanto, los qui- miolit6trofos han desarrollado estrategias para explotar recursos que los quimioorgandtrofos no pueden usar Fotétrofos Los microorganismos fot6trofos contienen pigmentos ‘que les permiten utilizar la luz como fuente de energéa, y Por tanto sus células suelen estar intensamente colorea- das (Figura 2.2), A diferencia de los organismos quimi tofos, los fotétrofos no usan compuestos quimicos como fuente de energfa y sintetizan ATP a expensas de la Juz solar. Esto supone una ventaja muy significativa, ya que no existen problemas de competencia para obtener energia con los quimidtrofos y Ia luz. esta disponible en una amplia variedad de habitats microbianos. Entre los procariotas existen dos formas principales de fototrofia. En una, que se denomina fotosintesis oxigé- nica, se produce oxigeno (0;). La fotosintesis oxigénica es caracteristica en grupos como las cianobacterias, las al- z2as y los organismos filogenéticamente relacionados con ellos, En la otra forma, Hamada fotosintesis antoxigénica, no se produce O; y es tipica de las bacterias rojas y las bac: terias verdes. Todos los fot6trofos usan la luz pa rar ATP y mas adelante consideraremos la gran similitud de ATP. La fo- tosintesis se estuclia con mas detalle en el Capitulo 20. que presentan sus mecanismos de sintesi Heterstrofos y autétrofos ‘Todas las células requieren carbono como un nutriente sential. Las células microbianas son heterétrofas si re- uieren uno 0 mas compuestos orginicos como fuente de carbono, o autétrofas sila fuente de carbono es el CO, Los microorganismos quimioorgan6trofos son también heterétrofos. Por el contrario, muchos quimiolitétrofos v practicamente todos los fotétrofos son autétrofos. Los autétrofos se denominan tambien produetores primavios porque sintetizan materia orgnica a partir de CO, tanto para su propio benelicio como pai sndtrofos. Estos tiltimos se alimentan directamente de los productores primarios o bien a expensas de los pro- ductos que exeretan. En tiltimo término, toda la materia orgainica de la Tierra ha sido sintetizada por los produc- tores primarios, en particular por los fot6trofos. 1 el de los quimioor- Habitats y condiciones ambientales extremas Los microorganismos estin presentes en toclos los luga- res de la Tierra que sean capaces de 1 er la vida. Es tos habitats incluyen lugares que nos son familiares, como el suelo, el agua, los animales 6 las plantas, asi como pricticamente cualquier estructura hecha por el hombre. La esterilidad (es decir, la ausencia de formas: Temperatura Eleveds —Hipetarmétlo Prolab umari®™ Archaea Carte, fuentes wc 16 THB hidroteale submarines Baie Pico Poloromonss = Bactria_‘Hielo marino oc 8 aC vecuolta ie. : Fuentestermales écdos = -008 eh ne Lagos arbonstadee as eset resin Montlayayaosi? Bacteria Sedimertosocsinicos——«SODatm —-700atm —~1000atn sme ae a aa 15K 25% 32K entaién Es Bs ots mobeaan aera = + Elorpunsm ctado on cada catgora st réord actual an cuanto a requetc une condi etrema parce pare cece Sea descito que Geogerma bares, ura nuova erpece de Archaea hipertermaia. ex capa de cece 121%. Sn barge, Pyrolbus pemanece emo l proces mejor cracaizade que cece or ancima de 110°, Pos tambien un terme, con erecimianto Spine a °C + N gregory es ambien un hall ema, con ercmiento pina en 20% de NaC * Mrtels yayanos es también un pcr, con crecnent Sptime aadedr de 4° ss) es muy poco comdn en una muestra natural de cual- auier tipo. Desde el punto de vista humano, algunos ambientes scupados por los microorganismos podrian considerarse como demasiado limitados para contener vida, Aunque algunos de estos ambientes pueden suponer también un jesafo para el desarrollo de los microorganismos, los, ambientes extremos estén a menudo colonizados por la ida microbiana, Los organismos que habitan ambientes xremos s¢ Haman extreméfilos v constituyen un nota: ‘upo de microorganismos que, en conjunto, definen os limites fisico-quimicos en los que la vida es posible. Los extremofilos abundan en ambientes tan radicales como las fuentes termales con agua en ebullicién, en el hielo que cubre los lagos, glaciares y mares polares, en tas de elevada salinidad y en suelos v aguas que tienen nn pH de 0 0 tan alto como 12, Estos procariotas no son simplementes solerantes a tales condiciones extremas, sino que realmente las reguieren para cre os (del sufijo philus, amante de). algunos de los «records» que pre: 1: Por esto se denominan extreméf La Tabla 2.1 resume sentan los procariotas extreméfilos ¢ indica el tipo de ha bitats que ocupan. Muchos de estos microorganismos serin considerados de nuevo en capftulos posteriores Capitulos 6 y 15-17). “Todas las células necesitan disponer de una fuente de cearbono y de una fuente de energia. Los términos quimicorganstrofo, quimiolitétrofe y fotétrofo definen Células que usan compuestos orgénicos, compuastos inorganicos o la luz como fuente de energia, respectivamente, Los microorganismos autotrofos usan (CO? como fuente de carbono y los heterétrofos usan ol carbone de compuestos orginicos. Los microorganismos extremafilos viven en ambientes que otros organismos son incapaces de resist. 11 Cémo podria distinguir por simple observacién microscépica un microorganismo fotétrofo de otro quimistrofo? 11 Qué son los microorganismos extreméfilos? 2.9 | Bacterias Como hemos indicado, los procariotas nios evolutivos, Arqueas y Bi (Figura 2.17). La ma. vor parte de los procariotas mejor conocidos pertenecen al dominio Bacterias; comenzaremos con ellos. forman dos domi te! Proteobacterias, bacterias grampositivas y cianobacterias, El dominio Bacterias contiene un procariotas. Todos los procariot enorme variedad de conocidos que 45 Capitulo 2 & Un breve viaje par el mundo microbiane Figura 2.19 Arbo! tamaios ealtivos de los de géneroe y erpecies que se concen actualmente en cada grupo. Las Proteobacterias son el gtupo mas amplio de Bacteria. Lei 13a en el érbol coma OP-2no representa lun mieroorganismes cultivado sino una secuencia de RNA ribosémico aislado de un erganismos en una muestra natural logenético del dominio Bacterias. Los fadros caloreades indican el ime En este caso, el més relacionado evolutivamente con OP-2 ‘Aquitfex. Aunque no se tepresentan en este dtbol, se co’ ‘muchos miles de otras secuencias detectacas en ol me ambiente y que se dstibuyen sobre todo el stbol. No se indicen en este drbol todos los grunes cana: se las bacteria enfermedades (patégenos) pertenecen a las bacterias, asf como miles de especies no patégen: te dominio se presenta una gran variedad de morfologias y fisiolo las. La division Proteobacterias constituye la division ds amplia dentro de las bacterias (Figura 2.19). Dentro de Proteobacterias se encuentran muchas bacterias qui: mioorganétrofas, como Escherichia col, el organismo modelo por excelencia en fisiologia, bioguimica v biolo- ssfa molecular microbiana, asi como varias especies de fo: {6trofos ¥ quimiolitétrofos (Figura 2.20), Muchos de estos itimos grupos usan sulfuro de hidrégeno (HS, que hnuele a huevos podridos) en su metabolismo, produ: ciendlo azufre elemental que se deposita dentro o fuera de Ja células (Figura 2.20). El azufre es un producto de la oxidacién del HS y puede ser exidado posteriormente a sulfato (S0,*>). El sulfuro y el azufre se oxidan para per- mitir funciones metabélicas tan importantes como la 6 jacién de CO; (autotrofia) o la generacién de energia (Figura 2.18). Otros procariotas frecuentes del suelo y del agua, y especies que viven en las plantas 0 en los animales, bien sea de modo casual u originando enfermedades, tam- bign son miembros de Proteobacterias. Tal es el caso de especies de Pseudomonas, muchas de las cuales pueden degradar computestos organicos complejos y algunas ve- ces téxicos, tanto naturales como sintéticos, y Azorobac- ter, una bacteria fijadora de nitrégeno en estado libre Muchos patégenos importantes estan también incluidos en la divisién Proteobacterias, como Salmonella, Ric- 46 UNIDAD 1 4 Principios de microbiologi Figura 2.20 Proteobacterias fototroficas ¥ quimiolitotrsficas. (a) La bacteria roja del azulre Chrematiam 28 fotétrofe (células bacilaes largas y rojzas en esta microgratia

    You might also like