Introducción a la

Biología
Molecular y
Celular (IBMC)
Año 2023
Dr. Luciano Melli
 Sumario
Replicación ADN: Experimentos

Temas para el parcial

Guía de Problemas
Replicación
ADN
Cap. 4 y 5 Alberts
Cap. 15, 16 Campbell
 Ácidos Nucleicos
Experimento de Griffith Living S Living R Heat-killed Mixture of heat-killed S
1928 (control) cells (control) cells (control) S cells cells and living R cells

• Griffith descubrió que cuando

mezclaba HK de la cepa
patógena con células vivas de
la cepa no patógena, algunas
de estas células vivas se
volvieron patógenas.

• A este fenómeno lo llamó

transformación definido como
un cambio en el genotipo y el
fenotipo debido a la Mouse dies Mouse healthy Mouse healthy Mouse dies
asimilación del ADN externo
por una célula.

Living S cells
are found in
blood sample.
 Ácidos Nucleicos
Hershey y Chase 1 Mixed radioactively 2 Agitated in a blender to 3 Centrifuged the mixture 4 Measured the

1952 labeled phages with

bacteria. The phages
separate phages outside
the bacteria from the
so that bacteria formed
a pellet at the bottom of
radioactivity in
the pellet and
infected the bacterial cells. bacterial cells. the test tube. the liquid

Radioactive Empty Radioactivity

El experimento demuestra que ADN Phage protein protein shell (phage protein)
del fago T2 es el material genético Bacterial cell
in liquid

DNA
Batch 1: Phages were Phage
grown with radioactive DNA
sulfur (35S), which was
Centrifuge
incorporated into phage
protein (pink). Radioactive
DNA Pellet (bacterial
cells and contents)

Batch 2: Phages were

grown with radioactive
phosphorus (32P), which
was incorporated into Centrifuge
Radioactivity
phage DNA (blue).
Pellet (phage DNA)
in pellet
Ácidos Nucleicos
Replicación

T
A T A T A A T A T A T
C G C G C G C G C G C G
T A T A T A T A T A T A
A T A T A T A T A T A T
G C G C G C C G C G C
G

(a) The parent molecule has
two complementary strands
of DNA. Each base is paired
by hydrogen bonding with
its specific partner, A with T
and G with C.
(b) The first step in (c) Each parental strand
replication is separation now serves as a template
of the two DNA strands. that determines the order
of nucleotides along a new,
complementary strand.
(d) The nucleotides are
connected to form the sugar-
phosphate backbones of the
new strands. Each
“daughter” DNA molecule
consists of one parental
strand and one new strand.
 Parent cell 1° 2°
Conservative
model. The two
parental strands

Ácidos Nucleicos reassociate

after acting as
templates for

Replicación
new strands, thus
restoring
the parental
double helix.

Semiconservative
DNA replication is semiconservative. model. The two
strands of the
Each of the two new daughter parental molecule
molecules will have one old strand, separate, and each
functions as a
derived from the parent molecule, template for
synthesis of a new,
and one newly made strand complementary
strand.

Dispersive model.
Each strand of
both daughter
molecules contains
a mixture of old
and newly
synthesized DNA.
Ácidos Nucleicos
Meselson and Stahl
EXPERIMENT Matthew Meselson and Franklin Stahl cultured E. coli bacteria for several generations on a
medium containing nucleotide precursors labeled with a heavy isotope of nitrogen, 15N. The bacteria
incorporated the heavy nitrogen into their DNA. The scientists then transferred the bacteria to a medium with
only 14N, the lighter, more common isotope of nitrogen. Any new DNA that the bacteria synthesized would be
lighter than the parental DNA made in the 15N medium. Meselson and Stahl could distinguish DNA of different
densities by centrifuging DNA extracted from the bacteria.
1 Bacteria 2 Bacteria
cultured in transferred to
medium medium
containing containing
15N 14N

RESULTS

Less
3 4 DNA sample dense
DNA sample
centrifuged centrifuged
after 20 min after 40 min
(after first (after second
More
replication) replication)
dense

The bands in these two centrifuge tubes represent the results of centrifuging two DNA samples from the flaskin
step 2, one sample taken after 20 minutes and one after 40 minutes.
 Ácidos Nucleicos
Meselson and Stahl
CONCLUSION Meselson and Stahl concluded that DNA replication follows the semiconservative model by comparing their
result to the results predicted by each of the three models in Figure 16.10. The first replication in the 14N medium produced a band
of hybrid (15N–14N) DNA. This result eliminated the conservative model. A second replication produced both light and hybrid DNA, a
result that eliminated the dispersive model and supported the semiconservative model.

First replication Second replication

Conservative
model

Semiconservative
model

Dispersive
model
PCR
Las bases de como replicar ADN in vitro
 PCR
Las bases de como replicar ADN in vitro

1) El ADN se puede desnaturalizar

aplicando calor
2) Y renaturalizar enfriando
PCR
Las bases de como replicar ADN in vitro

1987

3) Puede ser sintetizado in vitro con la enzima ADN pol I modificada y primers.
 PCR
Las bases de como replicar ADN in vitro

4) Y si lo hago con una

enzima termoestable puedo
realizar varios ciclos de
desnaturalización y
replicación!
PCR
Como funciona?
 PCR
Historia

Inicialmente se realizaba utilizando la enzima

polimerasa de E. coli para amplificar fragmentos
de DNA.

Desafíos:
- Había que agregar enzima nueva en cada ciclo.
- Los primers eran muy costosos de sintetizar

1 2 3
An early PCR machine with three water baths
 PCR
Historia

Inicialmente se realizaba utilizando la enzima

polimerasa de E. coli para amplificar fragmentos
de DNA.

Desafíos:
- Había que agregar enzima nueva en cada ciclo
- Los primers eran muy costosos de sintetizar

- Desarrollo de Termocicladores
- Polimerasa purificada de Thermus aquaticus

The TC1/DNA Thermal Cycler came to market in 1987.

Temas para el primer parcial
1. Organización de la materia ¿Qué es la vida?
Biodiversidad.
2. Primera y Segunda Ley de la Termodinámica. Concepto
de Energía y Sistemas.
3. Metabolismo (Glucolisis, Respiración celular y
Fermentación)
4. Hidratos de Carbono
5. Proteínas
6. Lípidos
7. Ácidos Nucleicos
8. Replicación del ADN
 Guía de
Problemas
y repaso de
conceptos…
 Problema 9
¿Qué es la vida?

 (1) Reproducción
 (2) Sistema abierto (intercambio de materia y energía)
 (3) Homeostasis (regulación)
 Problema 10-13
Osmosis y Difusión
 Una solución hipotónica es aquella que tiene menor
concentración de soluto en el medio externo en relación al
medio citoplasmático de la célula
 Una solución hipertónica es aquella que tiene mayor
concentración de soluto en el medio externo en relación al
medio citoplasmático de la célula

 La difusión es el flujo neto de moléculas desde una región de

alta concentración a una región de baja concentración. Esta
diferencia en la concentración de una sustancia en el espacio
se denomina gradiente de concentración. La difusión se debe
al movimiento aleatorio de las partículas y se llama
movimiento browniano. Todos los objetos en movimiento
tienen energía cinética o energía de movimiento. Las
partículas de materia se mueven en líneas rectas hasta que
colisionan con otras partículas.
 Ósmosis: el paso selectivo de moléculas del disolvente a
través de una membrana porosa (semipermeable) desde una
disolución diluida hacia una de mayor concentración.
Problema 10-13
Problema 10-13
 Problema 10-13
Presión Osmótica
 Ósmosis: el paso selectivo de moléculas del disolvente a través
de una membrana porosa desde una disolución diluida hacia una
de mayor concentración.
 La presión osmótica (π) de una disolución es la presión que se
requiere para detener la ósmosis.
 El fenómeno de la presión osmótica (π) implica la presencia de
una membrana semipermeable, que es una película con poros
suficientemente grandes para permitir el paso de moléculas
pequeñas de disolvente, pero suficientemente pequeños como
para impedir el paso de moléculas grandes de soluto de peso
molecular alto.

M es la molaridad de la disolución, R la constante de los gases (0.0821 L . atm/K . mol)

y T la temperatura absoluta
 Problema 10-13
Osmosis inversa
 La ósmosis inversa (OI) es un proceso en
el cual se reduce el caudal a través de una
membrana semipermeable y se ejerce una
fuerza de empuje superior a la presión
osmótica en dirección opuesta al proceso
de ósmosis.
 De esta forma se logra separar las
sustancias que se encuentran en el agua en
un lado de la membrana (concentrado) y
del otro lado se obtiene una solución
diluida baja en sólidos disueltos
(permeado).
 Podría decirse que es un filtro físico pero
por tratarse de una membrana que retiene
elementos solidos, pero ya no lo podemos
llamar filtración porque retiene moléculas
disueltas que no solo son retenidas por la
física, sino también por lo química.
 Problema 10-13
Osmosis inversa

 La desalinización es un proceso para quitar

las sales disueltas del agua de mar.
 La desalinización también se puede
realizar por ósmosis inversa, que usa alta
presión para forzar el agua de una
disolución más concentrada a una menos
concentrada.
 Problema 21
¿Qué pasa cuándo dos núcleos
atómicos se acercan?

“indiferencia” atracción repulsión

 Problema 25
Termodinámica

 La primera ley de la termodinámica establece que la

energía puede convertirse de una forma a otra, pero no
puede crearse ni destruirse.

 La segunda ley de la termodinámica establece que en

el curso de las conversiones energéticas, el potencial
termodinámico -o energía potencial termodinámica- de
un sistema en el estado final siempre será menor que el
potencial termodinámico del mismo sistema en el
estado inicial.

 La diferencia entre los potenciales termodinámicos de

los estados inicial y final se conoce como cambio en la
energía libre (o de Gibss) § del sistema y se simboliza
como ∆G.

∆G = ∆H - T∆S
 Problema 25
Termodinámica

Las reacciones exergónicas (que liberan energía) son espontaneas y tienen un ∆G

negativo.
Las reacciones endergónicas (que requieren de energía) no son espontaneas y
tienen un ∆G positivo.
 Problema 25

Como obtiene
Energía la célula?

 Las enzimas median las

reacciones químicas que ocurren
en la célula…

 Disminuyen la energía de
activación de las reacciones
químicas.
 En otras palabras aumentan la
probabilidad de que la reacción
ocurra.
Punto de fusión (Temp paso de solido a liquido):
Saturados > insaturados
Trans > cis
 Problema 33

Punto de fusión (Temp paso de

solido a liquido):
Saturados > insaturados
Trans > cis
 Problema 33

https://biomodel.uah.es/model2/lip/acgr-pto-fusion.htm