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GUIA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO
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FACULTAD PROGRAMA CICLO DE FORMACIÓN

Ciencias de la salud Microbiología

CURSO Microbiología de alimentos CODIGO MB226 SEMESTRE VII

4: Sistemas de conservación de los alimentos
UNIDAD
Determinación de coliformes totales y fecales mediante la técnica HORARIO
TEMA Lunes 9-
de filtración por membrana. 12 am

1. INTRODUCCIÓN
La filtración es el proceso que consiste en separar un sólido suspendido del líquido en el que está suspendido al
hacerlos pasar a través de un medio poroso por el cual el líquido puede penetrar fácilmente. El líquido a filtrar se
denomina suspensión, el líquido que se filtra, el filtrado, y el material sólido que se deposita en el filtro se conoce
como residuo. Esta técnica de filtración por membrana es eficaz para analizar la presencia de contaminación
microbiana o por partículas en las soluciones acuosas.

Tomado de: http://www.microbiologiadealimentos.com/

Los coliformes son los indicadores más reconocidos de contaminación debido a son indicadores útiles de procesos
de saneamientos inadecuados, su presencia en un numero alto en un alimento procesado indica que la probabilidad
de crecimiento de bacterias patógenas es alta, en el caso de los coliformes fecales indica una contaminación
probable de fuente fecal. (Da Silva, et al 2019)

En agua indican medición primaria de la calidad microbiológica de agua potable. Es decir funcionan como una
alerta de que ocurrió contaminación, sin identificar el origen, indican que hubo fallas en el tratamiento, en la
distribución o en las propias fuentes. Generalmente presente en agua contaminada con residuos humanos y
animales. Son indicadores de degradación de los cuerpos de agua.

2. OBJETIVOS

 Aislar coliformes totales y fecales mediante la técnica de filtración por membrana en agua de grifo
 Cuantificar el número de coliformes totales y fecales mediante la técnica de filtración por membrana en agua
de grifo.
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3. BIOSEGURIDAD

 Utilización de las medidas de bioseguridad o elementos de protección personal (ver materiales).

 Prohibido comer, fumar, beber y aplicar cosméticos durante las prácticas
 Manejo adecuado de Instrumentos y equipos; incluyendo la limpieza
 Evitar derrames e inhalaciones
 Limpieza y desinfección del mesón
 Lavado de manos según protocolo
 Usar bata blanca manga larga, guantes, gorro y cubre boca.
 Antes y después de cada sesión el estudiante deberá limpiar los mesones de trabajo con desinfectantes.
 Al concluir cada sesión el estudiante deberá asegurarse de que los materiales de desecho u objetos contaminados
sean colocados en recipientes específicos para ello (caneca roja y caneca verde).


4. MATERIALES Y EQUIPOS

 Pinzas estériles
 Beaker estéril
 Erlenmeyer estéril
 Agar EMB
 Cajas de Petri estériles
 Pipetas
 Equipo de filtración estéril
 Contador de colonias
 Incubadora a 35ºC +/- 2ºC.
 Estufa
 Membranas de nitrocelulosa estériles

5. FUNDAMENTO DE LAS PRUEBAS

El método consiste en hacer pasar la muestra a través de un filtro de membrana impermeable a los
microorganismos, después de la filtración quedas retenidas los microorganismos sobre la superficie de la
membrana, la cual posteriormente es colocada en un medio de cultivo específico en este caso EMB o VRBA. Por lo
general las membranas filtrantes están compuestas de ésteres de celulosa, típicamente con poros de 0,45 mm de
diámetro que retienen los coliformes totales y otras clases de bacterias presentes en la muestra. Esta técnica puede
aplicarse en el análisis de casi todos los tipos de agua, también se utiliza en el análisis de leche y otros alimentos
líquidos.

La determinación de coliformes en agua indica medición primaria de la calidad microbiológica de agua potable. Es
decir funcionan como una alerta de que ocurrió contaminación, sin identificar el origen, indican que hubo fallas en el
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tratamiento, en la distribución o en las propias fuentes. Generalmente presente en agua contaminada con residuos
humanos y animales. Son indicadores de degradación de los cuerpos de agua.

6. MONTAJE DEL PROCEDIMIENTO

TECNICA DE FILTRACIÓNPOR MEMBRANA

 Preparar, hacer el montaje correspondiente del equipo de filtración

 Verter 100 ml de la muestra en el embudo colector Y
 Aplique vació para realizar la filtración
 Al finalizar la filtración apague la bomba de vació, desenrosque el embudo colector del recipiente base.
 Retire la membrana con ayuda de las pinzas estériles y colóquelas sobre las Cajas de petri que contienen
el medio EMB.
 Incube las cajas de petri a una temperatura de 35 a 35ºC por un tiempo de 22- 24 para determinar
coliformes totales
 Incube las cajas petri a una temperatura de 44.5ºC por un tiempo de 22 -24 horas para determinar
coliformes fecales
 Para coliformes totales realice el conteo y escoja las cajas que presenten entre 20 y 80 colonias, Las
colonias de interés son violeta oscuro o púrpura con o sin brillo metálico.
 Para coliformes fecales: Realice el conteo y escoja las cajas que presenten entre 20 y 60 colonias. Las
colonias de interés son violeta oscuro, verde o negras con superficie brillante metálica. El cálculo del
número de coliformes se hace aplicando la siguiente formula:

Coliformes en 100 ml = nº de colonias típicas * 100

ml de muestra filtrada.

7. EVALUACIÓN

 Elaboración y entrega de un informe de laboratorio

 Preguntas:
 Investigue la normativa que regula los lineamientos y parámetros fisicoquímicos y microbiológicos de agua
para consumo humano a nivel nacional
 Que otros métodos nos permite evaluar la calidad microbiológica del agua potable según lo establecido en
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la norma.

8. BIBLIOGRAFÍA

 HOLGUIN, M. (1998). Manual de técnicas de análisis para el control de calidad microbiológico para consumo
humano. División de laboratorios de alimentos y bebidas alcohólicas INVIMA 1998,2002, 2006.

 LUNA, G. (1998). Manual Operativo de análisis microbiológico para alimentos universidad de Pamplona 1998.

 Análisis microbiológico de alimentos por International Commission on Microbiological Specifications for Foods
(ICMSF)" ICMSF – 2000.

 DA SILVA, N. HIROMI,M. Microbiological Examination Methods Of Food And Water. Institute of Food
Technology – ITAL, Campinas, SP, Brazil. 2019

9. ANEXOS

10. CONTROL DE CAMBIOS

VERSION FECHA DE APROBACIÓN DESCRIPCION DE LOS CAMBIOS REALIZADOS

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

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