Ferguson 2018

Machine Translated by Google
Hóa học phân tích xanh

Paul Ferguson1 và Douglas Raynie2
1 Phát triển Sản phẩm Toàn cầu, AstraZeneca, Macclesfield, Vương quốc Anh
2
Khoa Hóa học & Hóa sinh, Đại học Bang Nam Dakota, Trung tâm Khoa học và Sức khỏe Avera, Brookings, Nam Dakota, Hoa Kỳ
. Giới thiệu
Hóa học phân tích xanh (GAC) đã được mô tả là "việc sử dụng các kỹ thuật và phương pháp hóa học phân tích làm
giảm hoặc loại bỏ dung môi, thuốc thử, chất bảo quản và các hóa chất khác gây nguy hiểm cho sức khỏe con người
hoặc môi trường và điều đó cũng có thể cho phép nhanh hơn và nhiều hơn phân tích hiệu quả năng lượng mà không
ảnh hưởng đến tiêu chí hiệu suất' [1].
Năm 1994, một nghiên cứu đã được công bố cho thấy rằng trong số các ngành công nghiệp hóa chất chính (lọc dầu,
hóa chất số lượng lớn, hóa chất tốt và dược phẩm), dược phẩm tạo ra nhiều chất thải nhất trên một đơn vị sản phẩm
(hoặc nhiều chất thải hơn trên mỗi kg hoạt chất dược phẩm) [2 ]. Mặc dù việc công nhận điều này đã thúc đẩy nhiều
tiến bộ trong hóa học tổng hợp/dược phẩm xanh kể từ thời điểm đó để giải quyết vấn đề này, nhưng hóa học phân tích
xanh phần lớn vẫn ở trạng thái tĩnh. Nghiên cứu và đầu tư vào hóa học xanh và hóa học phân tích xanh là rất quan
trọng vì những tiến bộ trong các lĩnh vực này tác động đến 'ba điểm mấu chốt' – thước đo hiệu quả kinh tế, môi
trường và xã hội của công ty [3].
12 nguyên tắc của hóa học phân tích xanh do Anastas và Warner đề xuất năm 1998 [4] đã được thảo luận rộng rãi
trong ngữ cảnh của GAC (ví dụ: tài liệu tham khảo [1] và [5] và trong các chương khác của tài liệu này). Nhận
thấy rằng 12 nguyên tắc này đã được phát triển cho hóa học tổng hợp và quy trình, và không phải tất cả đều có thể
áp dụng cho hóa học phân tích, gần đây những nguyên tắc này đã được Galuszka và cộng sự diễn giải lại. [6]. Những
nguyên tắc 'đúc lại' này là:
1. Nên áp dụng kỹ thuật phân tích trực tiếp để tránh xử lý mẫu.

2. Cỡ mẫu tối thiểu và số lượng mẫu tối thiểu là mục tiêu.
3. Nên thực hiện các phép đo tại chỗ.
4. Tích hợp các quy trình và thao tác phân tích giúp tiết kiệm năng lượng và giảm sử dụng thuốc thử.
5. Nên chọn các phương pháp tự động hóa và thu nhỏ.
6. Nên tránh tạo dẫn xuất.
7. Cần tránh tạo ra khối lượng lớn chất thải phân tích và quản lý chất thải phân tích hợp lý
cung cấp.
8. Các phương pháp đa chất phân tích hoặc đa thông số được ưu tiên hơn so với các phương pháp sử dụng một chất phân tích tại một thời điểm.
9. Nên giảm thiểu việc sử dụng năng lượng.

10. Thuốc thử thu được từ các nguồn tái tạo nên được ưu tiên.
11. Thuốc thử độc hại nên được loại bỏ hoặc thay thế.
12. Cần tăng cường sự an toàn của người vận hành.
Hình . 12 nguyên tắc của GAC theo đề xuất của A. Galuszka et al. [6]. Sao chép với sự cho phép của Elsevier.
Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược, Phiên bản thứ hai. Wei Zhang và Berkeley W. Cue biên tập. © 2018 John
Wiley & Sons Ltd. Xuất bản năm 2018 bởi John Wiley & Sons Ltd.
Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược
HÓA CHẤT XANH

HÓA HỌC XANH KỸ THUẬT HÓA XANH
CÔNG NGHỆ
Hóa phân tích xanh - GAC
Kỹ thuật chuẩn bị mẫu xanh Các kỹ thuật phân tích và đo lường

xanh
Kỹ thuật chuẩn bị mẫu không Kỹ thuật phân tích trực tiếp

dung môi hoặc không dung môi đo đạc
Ứng dụng của môi trường xanh

Kỹ thuật quang phổ xanh
và/hoặc thuốc thử
Ứng dụng thêm các tác nhân nâng cao

Kỹ thuật điện phân xanh
hiệu quả hoạt động phân tích
Giảm quy mô của

Sắc ký xanh
hoạt động phân tích
Giảm thiểu sự tiếp xúc của các

Xử lý tín hiệu đa biến
nhà hóa học phân tích với hóa chất
Hình . Các tùy chọn đo phân tích và chuẩn bị mẫu xanh và mối quan hệ của chúng với các ngành khoa học 'xanh' khác [7].
Sao chép với sự cho phép của Elsevier.
Hóa học phân tích xanh thường được coi là một tập hợp con của hóa học xanh. Lô đất và cộng sự. đề xuất rằng các phương
pháp phân tích xanh nên được phát triển để hỗ trợ các quy trình công nghệ hóa học xanh, hóa học xanh và kỹ thuật hóa học
xanh như trong Hình 3.2 [7].
Koel trong bài đánh giá quan trọng của mình về GAC vào năm 2015 đã đề xuất rằng hóa học phân tích nên nhắm mục tiêu thông
tin theo yêu cầu của người dùng cuối 'theo cách tiết kiệm nhất kéo theo việc tiêu tốn ít nguyên liệu và năng lượng nhất có
thể cũng như tạo ra chất thải' [8].
Lĩnh vực hóa học phân tích xanh đang mở rộng và không thể thảo luận chi tiết tất cả các khía cạnh của lĩnh vực này trong
một chương sách. Thay vào đó, mục đích của công việc này là cung cấp cho người đọc cái nhìn tổng quan về nghiên cứu hiện
tại đang hoạt động dưới 'biểu ngữ' hóa học phân tích xanh, nhưng quan trọng hơn là những kỹ thuật và phương pháp nào cung
cấp các lộ trình có thể tiếp cận để làm cho hóa học phân tích của họ trở nên bền vững hơn với môi trường, an toàn hơn và
có khả năng rẻ hơn.
. . Đánh giá phương pháp phân tích Để
hiểu liệu một phương pháp phân tích có thể được coi là 'xanh' hay không, cần có hướng dẫn và phương pháp chấm điểm 'hiệu
chuẩn' để so sánh các phương pháp. Các phương pháp này thường tập trung vào dung môi hữu cơ và các thuốc thử khác được
sử dụng trong quy trình phân tích và sự an toàn của người vận hành phân tích. Một số cách tiếp cận hướng tới điều này được
trình bày chi tiết trong ấn bản trước của chúng tôi về chương này [5] và các bài báo khác [9].
3 Hóa học phân tích xanh
Bảng . Tổng giá trị nguy cơ (tHV) và tổng giá trị nguy cơ phân tích (taHV) đối với một số dung môi phổ biến được sử dụng
trong quy trình phân tích. Các dung môi hữu cơ này tương thích với các chế độ sắc ký lỏng khác nhau và các kỹ thuật
phân tích khác. Những mẫu được biểu thị bằng dấu hoa thị ( ) không thể trộn lẫn với nước và do đó có thể được sử dụng như
một phần của quy trình chuẩn bị mẫu chiết lỏng-lỏng (xem sau). Chuyển thể từ ref. [15] với sự cho phép của Elsevier.
Tên hợp chất tHV taHV
hiđrocacbon Pentan 23,4 36,4

Hexan 53,8 81,4
Xyclohexan 57,9 79,8
Heptan 15.2 20.9
rượu metanol 8,8 15.7

etanol 4.1 7.2
isopropanol 3.9 6,8
Ether dietyl ete 8,7 16
Metyl tert-butyl ete 2.7 3,8
Tetrahydrofuran 9.1 14,9
xeton axeton 1,5 2.6
A-xít hữu cơ Axit formic 25,8 43,0

A-xít a-xê-tíc 1.3 2.1
Este etyl axetat 5.0 7.3
Hydrocarbonclo hoá Dichloromethane 39.3 59,8

Clorofom 70,7 103,8
1,1,1-Trichloroethane 34,7 49,0
Người khác axetonitril 18,8 26,9
Mô hình NEMI được đề xuất năm 2007 cung cấp một cách tiếp cận trực quan đơn giản và phổ biến để đánh giá quá trình
[10], trong 5 năm qua, một số cách tiếp cận phức tạp hơn đối với đánh giá phương pháp đã được phát triển. Galuszka và
cộng sự. đã phát triển một 'công cụ sinh thái' giúp xác định và có khả năng cải thiện khía cạnh yếu nhất hoặc ít xanh
nhất của một phương pháp phân tích và giúp thiết lập các ưu tiên [11]. Một số mô hình mới nhất được sử dụng để đánh giá
'độ xanh' của phương pháp phân tích cũng bao gồm đánh giá vòng đời (LCA) của dung môi được sử dụng [12] và/hoặc thuật ngữ
nhu cầu năng lượng tích lũy (CED). Điều này đo lường sự khác biệt giữa năng lượng cần thiết để tạo ra dung môi trừ đi năng
lượng thu hồi được trong quá trình xử lý sau phân tích (ví dụ: chưng cất hoặc đốt) [13]. Tập trung nhiều hơn vào các
phương thức tiếp xúc khác nhau với dung môi được sử dụng trong quy trình phân tích, ví dụ: qua đường miệng, hấp thụ, hít
phải và các yếu tố khác như độc tính thủy sinh và khả năng phân hủy sinh học đã được đề xuất để cung cấp giá trị tổng
nguy cơ (tHV) (dựa trên CHEMS -1 quy trình chấm điểm [14]) hoặc tổng giá trị nguy cơ phân tích (taHV) – bao gồm thuật
ngữ liên quan đến độ bay hơi của dung môi [15]. Các giá trị này có thể được sử dụng ở giai đoạn đầu của quy trình khi
dung môi được chọn hoặc để giúp đánh giá 'độ xanh' của phương pháp phân tích. Giá trị tHV và taHV của một số dung môi
thông dụng được trình bày trong Bảng 3.1.
Koel lưu ý rằng 'thiết bị phân tích là phần tốn kém nhất, sử dụng nhiều năng lượng và vật liệu nhất trong hóa học phân
tích và cũng lãng phí nhất từ góc độ hóa học xanh, đặc biệt là khi xem xét dấu vết từ quá trình sản xuất thiết bị' [8].
Tuy nhiên, có rất ít tài liệu về LCA của thiết bị phân tích để cho phép thực hiện khía cạnh này của đánh giá phương pháp.
Cần lưu ý rằng tất cả các cách tiếp cận đối với các phương pháp mô tả đặc điểm theo cách này đều có những hạn chế bao
gồm các quy trình đánh giá tẻ nhạt, thiếu dữ liệu hoặc thiếu thông tin về mối nguy hiểm có thể dẫn đến cách giải thích
không thống nhất giữa những người dùng [15].
. . Nghiên cứu điển hình
. . . Phương pháp phân tích Cường độ

thể tích Tìm cách phát triển các phương pháp sắc ký thân thiện với môi trường hơn, các nhà nghiên cứu của Merck
[16] đã phát triển cái mà họ gọi là cường độ thể tích của phương pháp phân tích (AMVI), là tổng lượng dung môi tiêu
thụ của một phương pháp phân tích chia cho số của các pic trong phân tích sắc ký. Tổng mức tiêu thụ dung môi là
tổng của lượng dung môi được sử dụng để chuẩn bị mẫu và lượng dung môi từ các phép phân tích HPLC, tất cả nhân với
số lần lặp lại. Để chứng minh tiện ích, họ đã trình bày một phép phân tích với chín đỉnh quan tâm sử dụng 1190 mL
dung môi để tách HPLC và 500 mL trong quá trình chuẩn bị mẫu, cho AMVI là 141. HPLC đã sử dụng cột id 250 × 4,6 mm
với 5 μm hạt. Trong phương pháp này, 70% dung môi sử dụng là do HPLC. Chuyển sang cột id 150 mm × 3,0 mm có nhồi
3,5 μm, việc sử dụng dung môi trong sắc ký giảm xuống còn 266 mL hoặc AMVI là 59. Tại thời điểm này, 65% dung môi sử
dụng là thông qua quá trình chuẩn bị mẫu, do đó đã được tập trung của cải tiến phương pháp. Quá trình lặp đi lặp
lại này được tiếp tục cho đến khi họ hiển thị phương pháp LC dựa trên chip với AMVI là 0,6.
AMVI có thể là một thước đo không hoàn hảo ở chỗ nó không xem xét bản chất của dung môi được sử dụng và chỉ tập
trung vào chất thải. Nó cho thấy rõ ràng một phương tiện để cải thiện sự phát triển của phương pháp và, trong khi
số đỉnh biểu đồ sắc ký có thể không phải là một giá trị phân tích quan trọng, nó là phép đo đầu tiên liên kết độ
xanh với một số phép đo hiệu suất phân tích.
. . . So sánh Hồ sơ Xanh Chỉ số

xanh được liên kết với cơ sở dữ liệu NEMI xem xét nguy cơ môi trường (các chất phản ứng được Cơ quan Bảo vệ Môi
trường Hoa Kỳ (EPA) xác định là dai dẳng, tích lũy sinh học hoặc độc hại), độc tính (như được liệt kê trong EPA
Toxic Release Inventory (TRI) hoặc Đạo luật bảo tồn và phục hồi tài nguyên), ăn mòn (ở hai đầu của thang đo pH tại
bất kỳ thời điểm nào trong phương pháp) và chất thải (>50 gam chất thải được tạo ra)
[10]. Đồng thời, Raynie và Driver [17] đã phát triển một phương pháp tương tự có tính phân biệt cao hơn. Phương
pháp của họ xem xét sự an toàn (dựa trên những cân nhắc đã được thiết lập bởi Hiệp hội Phòng cháy chữa cháy Quốc
gia Hoa Kỳ (NFPA)), sức khỏe (cũng dựa trên phân loại của NFPA), nguy cơ môi trường (dựa trên mức độ nguy hiểm được
sử dụng, với các mối nguy được xác định bởi EPA TRI hoặc Đạo luật Nước sạch và Không khí sạch của Hoa Kỳ), năng
lượng (dựa trên tổng kilowatt giờ để phân tích một mẫu), chất thải (>50 gam hoặc >250 gam chất thải được tạo ra).
Như đã lưu ý trước đó, một số biện pháp đo lường độ xanh khác sau đó đã được phát triển với các mức độ phức tạp khác
nhau được thêm vào.
Một tính năng của các cấu hình như vậy với cơ sở dữ liệu NEMI là một bức tranh đơn giản có thể hiển thị các cân
nhắc về màu xanh lá cây tương đối. Trong các biểu đồ NEMI, góc phần tư phía trên bên trái là độc tính, sau đó di
chuyển theo chiều kim đồng hồ – PBT (độ bền, tích lũy sinh học, độc tính), chất thải và khả năng ăn mòn. Hình 3.3
cho thấy sự so sánh của hai chỉ số được đề cập với các phương pháp phân tích để xác định hydrocacbon thơm đa vòng
trong nước. Hình ngũ giác ở phía trên bên trái là sức khỏe, sau đó di chuyển theo chiều kim đồng hồ – cân nhắc về
an toàn, lãng phí, năng lượng và môi trường. Lưu ý 'F' trong phần an toàn có nghĩa là phương pháp này không an toàn
do sử dụng dung môi dễ cháy. Các số nhận dạng khác cũng có thể được thêm vào, ví dụ: có thể thêm chữ 'C' nếu vấn đề an toàn
Hình . So sánh các phương pháp phân tích để xác

định hydrocacbon thơm đa vòng trong nước thông qua các
phương pháp quy định của Hoa Kỳ [17]. Nguồn: Sao chép
với sự cho phép của Ferguson, 2011.
do ăn mòn, và như vậy. Phương pháp EPA 550 là phương pháp HPLC sử dụng chiết xuất diclometan và pha động axetonitril;
Phương pháp EPA 610 là một phương pháp chiết xuất hữu cơ khác, sau đó là GC; Phương pháp EPA 525.2 sử dụng thể tích dung
môi nhỏ hơn trong quá trình chiết xuất và GC-MS; và các phương pháp khác là xét nghiệm miễn dịch sử dụng một lượng nhỏ
metanol và axit khoáng (chlorhydric và lưu huỳnh). Hình 3.3 cho thấy xét nghiệm miễn dịch thuận lợi từ quan điểm màu xanh
lá cây và cũng hiển thị đánh giá riêng biệt hơn về các phương pháp sắc ký.
Mặc dù các phương pháp này là để phân tích môi trường, nhưng chúng tôi nghi ngờ rằng ứng dụng của chúng đối với các
phương pháp dược điển cũng sẽ chứng minh các lĩnh vực mà các phương pháp dược phẩm có thể được cải thiện bằng cách chú ý
đến từng chi tiết từ góc độ xanh.
. Chuẩn bị mẫu
Nhiều quy trình phân tích yêu cầu thao tác mẫu thô thành dạng phù hợp với kỹ thuật phân tích mong muốn. Đây thường là quá
trình hòa tan (các) chất phân tích mong muốn vào dung dịch, cô đặc trước mẫu và/hoặc loại bỏ các thành phần nền gây nhiễu.
Nó cũng có thể bao gồm nhiều quy trình khác như đồng nhất hóa, lọc, ly tâm, chiết xuất, cô đặc sơ bộ và tạo dẫn xuất –
nhiều thông số trong số này có liên quan đến độ phức tạp của nền mẫu [18]. Từ góc độ xanh, việc chuẩn bị mẫu có thể là khía
cạnh khó khăn nhất của quy trình phân tích và cũng được coi là gây ô nhiễm nhất [19]. Việc chiết xuất và hòa tan chất phân
tích có thể yêu cầu nhiều loại thuốc thử bao gồm dung môi hữu cơ và bất kỳ phương pháp tiếp cận dụng cụ nào (ngay cả
những dụng cụ đơn giản như máy lắc quỹ đạo) đều cần năng lượng. Do đó, chuẩn bị mẫu là một bước quan trọng để nhắm mục
tiêu trong GAC.
Theo 12 nguyên tắc GAC soạn thảo lại được thảo luận trong Phần 3.1, nguyên tắc 2 nói rằng số lượng mẫu và kích thước
của chúng nên được giảm thiểu [6]. Để giảm số lượng mẫu, có thể sử dụng phương pháp công cụ sử dụng phương pháp tiếp cận
không xâm lấn hoặc trong dây chuyền, chẳng hạn như phương pháp được sử dụng trong phương pháp tiếp cận công nghệ phân
tích quy trình (PAT) (xem Phần 3.4 sau để thảo luận thêm). Một cách tiếp cận khác là sử dụng thiết kế thống kê để chọn
mẫu đại diện [20, 21]. Việc giảm cỡ mẫu có thể được thực hiện thông qua việc sử dụng các phương pháp tiếp cận công cụ thu
nhỏ (thậm chí đơn giản như chuyển từ kỹ thuật HPLC sang UHPLC).
Bất kỳ cách tiếp cận nào được thực hiện để giảm số lượng hoặc kích thước mẫu đều phải nhận thức được khả năng mất tính
đại diện của mẫu, đặc biệt là những phương pháp trong các hệ thống không đồng nhất như môi trường phản ứng hai pha [6].
Điều quan trọng cần lưu ý là bước chuẩn bị mẫu có ảnh hưởng đáng kể đến kết quả phân tích và là nguyên nhân chính gây ra
lỗi hệ thống và độ chính xác kém khi thực hiện kém [18].
Mỗi phương pháp chuẩn bị mẫu đều có giá trị riêng và phụ thuộc vào nhiều yếu tố bao gồm chi phí (dụng cụ và mỗi mẫu),
môi trường chiết (thể tích, dung môi và thuốc thử được sử dụng) và tính khả thi (dễ sử dụng và an toàn). Một số hướng dẫn
đã được đề xuất trong phiên bản trước của chương này [5] và thông tin thêm có sẵn ở nơi khác [22]. Trong bản sửa đổi này,
chúng tôi sẽ thảo luận ngắn gọn về một số phương pháp tương thích với khung GAC. Tuy nhiên, xin lưu ý rằng có nhiều dẫn
xuất của các kỹ thuật dưới đây, cũng như nhiều phương pháp tự động hóa khác như chiết xuất có sự hỗ trợ của vi sóng (MAE)
hoặc vi chiết xuất pha lỏng có hỗ trợ màng (LPME) không được thảo luận ở đây. Người đọc được hướng tới các văn bản chuyên
ngành khác nếu cần thêm thông tin về các phương pháp chuẩn bị mẫu khác, ví dụ, tài liệu tham khảo [23].
. . Chuẩn bị mẫu tập trung vào phương pháp tiếp cận chất lỏng
. . . Chiết rắn-lỏng Đây là
phương pháp phổ biến nhất và thường đơn giản nhất để chuẩn bị mẫu lỏng. Nó chỉ đơn giản liên quan đến việc hòa tan một
mẫu rắn trong chất pha loãng thích hợp, trong đó tốc độ hòa tan có thể tăng lên thông qua việc sử dụng các quy trình dụng
cụ như siêu âm [24] hoặc đun nóng trong bể nước. Khía cạnh quan trọng nhất của phương pháp này từ góc độ xanh là lựa chọn
dung môi thích hợp
và các thuốc thử khác. Ngoài ra, cần xem xét các khía cạnh của thiết bị và tối ưu hóa một cách thích hợp, ví dụ,
chỉ định định mức công suất bể siêu âm và thời gian siêu âm để giảm thiểu mức tiêu thụ năng lượng (và khả năng phân
hủy chất phân tích).
. . . Chiết xuất chất lỏng-

lỏng Chiết xuất chất lỏng-lỏng (LLE) là một phương pháp chuẩn bị mẫu rất phổ biến nhưng rất tốn kém và 'không thân
thiện với môi trường'. Phương pháp này liên quan đến việc hòa tan (các) chất phân tích vào môi trường lỏng, kết
hợp chất này với chất lỏng không thể trộn lẫn, (thường) lắc cơ học để phân chia các chất phân tích và khả năng gây
nhiễu giữa hai pha, tách pha mong muốn chứa chất phân tích và xử lý tiếp để trình bày mẫu ở định dạng tương thích
với kỹ thuật phân tích. LLE thường yêu cầu xử lý nhiều lần dung môi ban đầu mà chất phân tích được hòa tan (có thể
tốn thời gian) và có thể cần một lượng lớn dung môi hữu cơ. LLE là một trong những phương pháp không an toàn nhất
trong tất cả các phương pháp chuẩn bị mẫu do thể tích dung môi hữu cơ được sử dụng, độc tính của chúng và tính
chất vật lý và lặp đi lặp lại của hoạt động. Do đó, nên tránh sử dụng LLE trừ khi thực sự cần thiết. Trong những
trường hợp hiếm hoi khi không có phương pháp nào khác khả thi, nên tính đến việc xem xét các dung môi hữu cơ. Các
nhà hóa học tổng hợp có thể đã quen thuộc với các ấn phẩm và hướng dẫn về các dung môi ưu tiên để sử dụng trong
công việc tổng hợp của họ, và các dung môi thân thiện với môi trường hơn được sử dụng trong các quy trình của họ
và kiến thức của họ nên được sử dụng khi lựa chọn các lỗ thoát dung môi thích hợp cho quy trình chiết xuất. Bảng
3.1 cung cấp danh sách các dung môi thường được sử dụng tương thích với sắc ký lỏng và do đó phù hợp để chuẩn bị
mẫu cho kỹ thuật này (và các kỹ thuật khác).
. . . Chất lỏng
ion Chất lỏng ion (IL) là muối có nhiệt độ nóng chảy gần hoặc thấp hơn nhiệt độ phòng tạo thành chất lỏng bao gồm
các ion và ngày càng trở nên phổ biến trong tài liệu [23, 25, 26]. Chúng có nhiều tính chất thú vị như áp suất hơi
không đáng kể (nghĩa là không bay hơi), độ nhớt cao, ổn định nhiệt tốt, khả năng trộn lẫn với dung môi nước và
hữu cơ, không bắt lửa, có thể có phổ trong suốt rộng và có đặc tính chiết xuất tốt cho một phạm vi của các chất
phân tích hữu cơ và vô cơ [27]. Các IL phổ biến nhất dựa trên muối 1-alkyl pyridinium và 1-alkyl-3-methyl
imidazolium và các phản ứng anion khác nhau mang lại khả năng điều chỉnh thuốc thử cho ứng dụng. Tuy nhiên, cần
phải cẩn thận với IL. Vì ứng dụng phân tích của các dung môi này là một cách tiếp cận hợp lý mới, độc tính của một
số IL này chưa được hiểu đầy đủ.
Ngoài ra, IL có thể có tác động môi trường đáng kể do quá trình tổng hợp nhiều bước của chúng [8]. Độ nhớt cao của
IL ngăn cản việc sử dụng chúng trong hầu hết các quá trình chiết xuất thông thường, nhưng họ đang tìm thấy tiện ích
gia tăng như các pha hấp thụ trong các kỹ thuật như vi chiết pha rắn (SPME) [28].
. . . Chất lỏng đông tụ

Chất đông tụ là chất lỏng không thể trộn lẫn với nước, giàu chất hoạt động bề mặt được tạo ra trong dung dịch keo
nhờ tác dụng của chất làm khô [29]. Trong chiết xuất đông tụ (CAE), chất đông tụ thu được từ các chất lưỡng tính
ion (không bay hơi và không độc hại) bằng cách thay đổi độ pH trong dung dịch, thêm chất điện phân hoặc thêm dung
môi hữu cơ trong đó chất phân tích có độ hòa tan thấp. Nếu một chất đông tụ được điều chế từ các chất hoạt động bề
mặt tích điện trung tính bằng cách thay đổi nhiệt độ thì điều này thường được gọi là chiết xuất điểm mây (CPE). Một
chất lỏng đông tụ điển hình có thể đơn giản như hỗn hợp THF/axit decanoic/nước hoặc natri dodecyl sulphate (SDS)/
HCl/nước [29]. Các giải pháp này thường tương thích với cả LC và một số kỹ thuật GC (ví dụ: phân tích khoảng trống).
Cần lưu ý rằng quy trình này thường được sử dụng khi có chất nền 'bẩn', chẳng hạn như chất lỏng sinh học hoặc mẫu
môi trường. Tuy nhiên, nó có thể khả thi, ví dụ như trong việc chiết các chất phân tích từ, ví dụ, các mẫu sản phẩm
tự nhiên.
. . . Khai thác nước dưới hoặc siêu tới

hạn Trên nhiệt độ tới hạn 374 C và ở áp suất 218 atm trở lên, nước trở nên siêu tới hạn và phát triển các đặc
tính hòa tan cực kỳ mạnh giống như carbon dioxide siêu tới hạn
(xem thêm Phần 3.2.1.6 và 3.3.3). Tuy nhiên, nước siêu tới hạn có thể bị oxy hóa, vì vậy nước thường được sử dụng ở
trạng thái dưới tới hạn, ở nhiệt độ trong khoảng 100–150 C. Rõ ràng, nước không độc hại, không bắt lửa và có thể được
cung cấp với khối lượng lớn có độ tinh khiết cao với giá rất rẻ – khiến nó trở thành một dung môi xanh lý tưởng. Hằng
số điện môi của nước có ảnh hưởng trực tiếp đến khả năng hòa tan của nó, năng lượng này phụ thuộc rất nhiều vào nhiệt
độ (xem Phần 3.3.1.2 sau). Ở 25 C, nước có hằng số điện môi xấp xỉ 80 và có thể hòa tan các hợp chất ion và phân cực
[27, 30]. Khoảng 250 C, giá trị này giảm xuống 30 và khi đó cũng có thể hòa tan các chất phân tích không phân cực.
Thiết bị để thực hiện chiết xuất chất lỏng dưới tới hạn hoặc siêu tới hạn có thể hoàn toàn tự động để điều chỉnh
nhiệt độ và/hoặc áp suất để chiết xuất các chất phân tích cụ thể. Rõ ràng, một số thí nghiệm sẽ yêu cầu thực hiện để
tối ưu hóa quá trình chiết xuất chất phân tích cụ thể và phụ thuộc vào chất nền. Một vấn đề tiềm ẩn khi sử dụng phương
pháp này là khả năng phân hủy nhiệt của chất phân tích ở nhiệt độ cao, nhưng điều này sẽ được xác định nhanh chóng
trong quá trình phát triển phương pháp thông qua các thí nghiệm khảo nghiệm và phục hồi.
. . . Chiết xuất chất lỏng siêu
tới hạn Chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn (SFE) sử dụng carbon dioxide làm tác nhân hòa tan. Giống như nước đã thảo
luận ở trên nhưng trong các điều kiện nhẹ hơn nhiều, carbon dioxide (CO2) trên 32 C và áp suất 72 atm trở nên siêu
tới hạn và thể hiện các đặc tính hòa tan tuyệt vời. Carbon dioxide có độ tinh khiết cao, không bắt lửa và cực kỳ rẻ
so với nhiều dung môi hữu cơ. Carbon dioxide được trích dẫn là có tính phân cực tương tự như hexan hoặc heptan [31]
và do đó cực kỳ tốt cho việc chiết xuất các chất phân tích kỵ nước từ các chất nền. Thông qua việc bổ sung một lượng
nhỏ dung môi phân cực như metanol (5–30% v/v), độ phân cực của dung môi có thể được điều chỉnh để cho phép chiết xuất
các phân tử phân cực tốt hơn.
Carbon dioxide mặc dù một loại khí nhà kính đáng kể có thể được tạo ra bằng cách thu hồi khí quyển hoặc phổ biến hơn
là sản phẩm phụ công nghiệp của quá trình crackinh khí tự nhiên để sản xuất khí hydro. Trên cơ sở này, SFE thường được
xếp vào loại kỹ thuật chuẩn bị mẫu 'xanh'.
. . Chuẩn bị mẫu sử dụng giá đỡ vững chắc
. . . Chiết xuất pha rắn
Chiết xuất pha rắn (SPE) là một giải pháp thay thế thân thiện với môi trường hơn nhiều so với LLE. Nó dựa trên các
nguyên tắc phân tách đồ họa sắc ký trong đó môi trường tách rắn (chất hấp thụ) được đóng gói vào hộp mực có kích thước
phù hợp (phụ thuộc vào kích thước của mẫu được xử lý), chất hấp phụ được xử lý trước bằng chất lỏng phù hợp, mẫu được
thêm vào trên cùng của lớp chất hấp thụ và các chất phân tích quan tâm (hoặc các chất cản trở không mong muốn) được
rửa giải bằng cách sử dụng (các) hệ dung môi phù hợp. Các nguyên tắc rửa giải dựa trên loại chất hấp thụ được sử dụng.
Nếu chất hấp thụ được tạo dẫn xuất với chất hỗ trợ kỵ nước như hợp chất C8 hoặc C18, thì hệ dung môi hữu cơ/nước thường
được sử dụng (độ pH được điều chỉnh nếu cần để giữ lại hoặc rửa giải các thành phần mẫu mong muốn hoặc không mong
muốn). Nếu chất hấp thụ có bản chất phân cực, chẳng hạn như silica trần, thì các dung môi hữu cơ như heptan/IPA có thể
được sử dụng hoặc nếu chất hấp thụ có bản chất ion, ví dụ, nhựa trao đổi anion hoặc cation, thì các dung dịch nước có
cường độ ion tăng hoặc khác nhau Các dung dịch pH (phổ biến hơn) có thể được sử dụng cho các chất phân tích tạo ion.
Lợi ích chính của phương pháp này là khối lượng dung môi được sử dụng nhỏ hơn nhiều so với LLE. Ngoài ra, các hộp
mực sử dụng trong SPE thường rẻ (cao hơn nhiều so với chi phí mua/xử lý dung môi liên quan đến LLE) và chất thải tạo
ra cũng rất nhỏ. Một lợi ích bổ sung là nhiều thể tích dung dịch mẫu có thể được nạp lên giường hấp phụ theo cách mà
chất phân tích mong muốn có thể được cô đặc trước cho công việc phát hiện mức vết. Cuối cùng, có nhiều loại công cụ
có thể tự động hóa quy trình SPE, do đó làm cho quy trình có thể tái sản xuất nhiều hơn và giảm sự tiếp xúc của nhà
phân tích với bất kỳ lỗ thoát dung môi hữu cơ nào hoặc các chất độc tiềm ẩn khác trong quy trình [32]. Theo nguyên
tắc chung, việc tự động hóa bất kỳ bước chuẩn bị mẫu xử lý chất lỏng nào có thể sẽ nhanh hơn, mang lại kết quả có thể
lặp lại nhiều hơn, giảm mức sử dụng dung môi và tăng độ an toàn cho người vận hành.
. . . Vi chiết pha rắn Kỹ thuật
chuẩn bị mẫu này thường sử dụng sợi silica nung chảy đã được tạo dẫn xuất bằng polyme lỏng [27]. Trong SPME, sợi
được đặt trong mẫu chất lỏng hoặc trong môi trường có chứa chất phân tích mong muốn và để trong một thời gian
thích hợp để hấp thụ (các) chất phân tích quan tâm. Sau đó, sợi được lấy ra khỏi mẫu và được giải hấp trực tiếp
vào thiết bị, ví dụ, GC – nếu chất phân tích dễ bay hơi và có sẵn giao diện giải hấp nhiệt thích hợp, hoặc được
đặt trong chất lỏng tương thích với việc đưa vào sắc ký lỏng. Phương pháp này không sử dụng hoặc sử dụng lượng
dung môi thấp và thường hữu ích cho phân tích vết của chất phân tích có nồng độ thấp trong lượng mẫu nhỏ. Nó
thường được sử dụng để chiết xuất các chất phân tích trong các nền phức tạp, nhưng có nhiều biến thể của phương
pháp này mang lại nhiều khả năng chiết xuất [23].
. . . Chiết hấp thụ bằng thanh

khuấy Chiết xuất hấp thụ bằng thanh khuấy sử dụng các thanh khuấy từ nhỏ được phủ một lớp phủ polydimethylsiloxane
(PDMS). Thanh được đặt trong ma trận mẫu lỏng có chứa chất cần phân tích và được khuấy. Thông qua quá trình phân
vùng, các chất phân tích được tập trung vào lớp phủ PDMS và thanh được loại bỏ sau một thời gian mong muốn. Giống
như với SPME, thanh sau đó được chuyển vào giao diện giải hấp nhiệt GC (nếu chất ly giải phân tích dễ bay hơi
hoặc bán bay hơi) hoặc thanh được đặt vào dung môi lỏng thích hợp và chất phân tích được hòa tan vào mẫu tương
thích với dung môi thích hợp chế độ LC. Vì khả năng chứa mẫu của thanh khuấy cao hơn đáng kể so với khả năng chứa
của sợi, nên có thể quan sát thấy các giới hạn phát hiện thấp hơn nhiều. Ngoài ra, về lý thuyết, các thanh khuấy
có thể tái chế nếu tất cả các chất phân tích và chất cản trở được giải hấp hiệu quả [27].
. Kỹ thuật và phương pháp
. . Sắc ký lỏng
Sắc ký lỏng là một trong những kỹ thuật phân tích được sử dụng rộng rãi nhất (nếu không muốn nói là rộng rãi nhất)
trên thế giới trong nhiều ngành công nghiệp. Việc sử dụng rộng rãi dung môi hữu cơ và việc tạo ra chất thải sau
đó làm cho phương pháp phân tách này trở thành một kỹ thuật quan trọng để can thiệp vào khuôn khổ hóa học phân
tích xanh [33–37].
Châm ngôn 'giảm thiểu, thay thế, tái chế' [38] (và loại bỏ thêm [5]) cực kỳ phù hợp với sắc ký lỏng và là trọng
tâm của một số bài viết về GAC. Điều này là do quá trình phân tách sắc ký lỏng đóng góp đáng kể chất thải lỏng có
thể gây ô nhiễm môi trường, có thể gây lo ngại về sức khỏe và an toàn cho người phân tích và có thể khó xử lý bằng
phương thức xử lý phổ biến nhất – thiêu hủy.
. . . Giảm tiêu thụ pha động Giảm thể

tích pha động cần thiết có thể là lựa chọn dễ dàng nhất để cải thiện khả năng duy trì của các phương pháp sắc
ký lỏng. Tốc độ dòng dung môi có thể giảm nếu đường kính trong cột LC (id) giảm. Để tạo sắc ký có thể so sánh
được với sự phân tách ban đầu trên cột id giảm, tốc độ dòng chảy có thể được chia tỷ lệ theo hệ số bình phương
của tỷ lệ đường kính trong của cột, nghĩa là
GIẢM GIÁ = GỐC × GIẢM

GỐC
(id )2
(3.1)
nhận dạng
trong đó F là tốc độ dòng chảy và id là đường kính trong.
Ví dụ: một chuyển đổi đơn giản từ cột id 4,6 mm sang 3,0 mm chạy ở tốc độ 1,0 ml/phút trên cột id 4,6 mm và tốc
độ dòng được chia tỷ lệ là 0,43 mL/phút trên cột id 3,0 mm sẽ giúp giảm 60% tiêu thụ pha động trong khi vẫn
tương thích với thiết bị HPLC tiêu chuẩn. Giảm trong cột
id thường có thể dẫn đến tăng chiều cao pic và do đó độ nhạy đối với nhiều máy dò phổ biến (ví dụ: UV, huỳnh quang –
giả sử việc mở rộng dải ngoài cột là không đáng kể) do độ pha loãng của mẫu trong pha động giảm và do đó chất phân tích
đậm đặc hơn dải tại máy dò [7].
Việc giảm thể tích pha động cũng có thể đạt được bằng cách giảm kích thước hạt và chiều dài cột. Sử dụng tỷ lệ L/dp
không đổi (trong đó L là chiều dài cột và dp là đường kính hạt), có thể duy trì quá trình phân tách sắc ký với giả định
rằng tốc độ dòng chảy, id cột và diện tích bề mặt/tải trọng carbon giống nhau (thường nhất quán trên tất cả thương hiệu
nhà sản xuất lớn). Ví dụ: quá trình tách trên cột 150 mm chứa các hạt 5 micron (L/dp = 30.000) sẽ có hiệu suất sắc ký
tương tự (và do đó có độ phân giải dung dịch) tương tự với cột 100 mm chứa các hạt 3 micron (L/dp = 33.000) hoặc cột
50 mm chứa đầy các hạt 1,7 micron (L/dp = 29.000), nhưng trong khung thời gian nhanh hơn nhiều. Tuy nhiên, cần thận
trọng trên các hệ thống LC không được tối ưu hóa cho các cột có kích thước hạt nhỏ hơn vì sự phân tán dải cột bổ sung
(ví dụ: từ ống, tế bào dòng của máy dò) có thể có tác động đáng kể đến việc giảm hiệu quả sắc ký dự kiến. Việc giảm kích
thước hạt và kích thước cột kết hợp sẽ mang lại mức giảm tốt nhất trong việc sử dụng pha động và thường sẽ yêu cầu sử
dụng thiết bị UHPLC [32].
Microfluidics là một lựa chọn để giảm đáng kể mức tiêu thụ dung môi trong phân tách phân tích [8].
Tuy nhiên, từ quan điểm của nhà hóa học tổng hợp, đây là một công nghệ quá non nớt để sử dụng trong môi trường như vậy
do tính phức tạp của việc sử dụng và khả năng bị hỏng hoặc tắc nghẽn trong quá trình sử dụng thông thường.
. . . Tận dụng nhiệt độ để giảm tiêu thụ pha động Nhiệt độ là một
biến số quan trọng trong sắc ký lỏng vì một số lý do. Về cơ bản, đối với các chất phân tích có thể kích hoạt ion, nó
là một biến số chính ảnh hưởng đến độ chọn lọc và độ phân giải sắc ký. Tăng nhiệt độ cũng làm tăng tốc độ truyền khối
trong quá trình sắc ký dẫn đến tăng hiệu quả sắc ký và cải thiện hình dạng pic. Vì độ nhớt của pha động cũng giảm khi
nhiệt độ tăng, tốc độ dòng chảy của thiết bị LC có thể tăng lên để giảm thời gian phân tích hoặc hiệu quả sắc ký tăng
lên có thể đạt được bằng cách ghép các cột lên đến giới hạn áp suất của bơm LC.
Từ góc độ GAC, việc tăng nhiệt độ có ảnh hưởng entanpic làm giảm khả năng lưu giữ chất phân tích đối với một phần dung
môi hữu cơ hữu cơ không đổi trong pha động. Ngoài ra, hằng số điện môi của pha động (đơn vị đo cường độ rửa giải của
pha động) giảm khi tăng nhiệt độ (xem Hình 3.4). Một trong hai hiệu ứng này có thể được khai thác để giảm thể tích dung
môi hữu cơ trong pha động cần thiết để rửa giải chất phân tích. Thật vậy, Hình 3.4 (a) minh họa rằng trên 50 C (ở áp
suất 50 bar), nước có cường độ rửa giải tương tự như hỗn hợp metanol hoặc axetonitril-nước có thể tích hữu cơ thấp ở
nhiệt độ môi trường xung quanh [30]. Ở nhiệt độ cao hơn, nước tăng khả năng rửa giải nhiều chất phân tích kỵ nước theo
cách tương tự như tăng phần hữu cơ trong pha động. Bắt buộc phải sử dụng thiết bị lò cột chuyên dụng bao gồm bộ gia
nhiệt sơ bộ pha động và lý tưởng nhất là bộ làm mát sau cột.
Nếu không có những thứ này, có thể quan sát thấy sự mất mát đáng kể về hiệu quả sắc ký. Rõ ràng, các cột ổn định nhiệt
nên được sử dụng ở nhiệt độ cao hơn (nếu không thì có thể quan sát thấy sự phân hủy silica hoặc pha tĩnh – biểu hiện
là khả năng lưu giữ chất phân tích giảm và hình dạng pic kém) và nhiệt độ vận hành tối đa cho cột sẽ được tìm thấy
trong tài liệu của nhà sản xuất cột. Cuối cùng, độ ổn định nhiệt của chất phân tích cũng cần được đánh giá để đảm bảo
không có sự phân hủy nhiệt của chất phân tích ở nhiệt độ cao.
Khi vận hành ở nhiệt độ cao, bắt buộc phải sử dụng bộ điều chỉnh áp suất ngược ở đầu ra của cột. Nhiệt độ tăng dẫn
đến tăng áp suất hơi, do đó có thể dẫn đến thoát khí và hình thành bong bóng trong pha động. Điều này thường được quan
sát thấy dưới dạng các gai nhọn hoặc nhiễu loạn đường cơ sở khác trong đường cơ sở của máy dò UV.
Thật thú vị, Funari et al. [13] đã điều tra mức tiêu thụ năng lượng của thiết bị HPLC được sử dụng trong quá trình
phân tách sắc ký các chất chiết xuất từ thực vật. Họ xác định rằng ở 30 và 80 C, lò cột chịu trách nhiệm cho khoảng
38% và 65% tổng năng lượng mà thiết bị sử dụng trong quá trình phân tích.
Họ đề xuất rằng cần phải xem xét nhiều hơn đến ý nghĩa công cụ của sự tách biệt và
% Methanol hoặc Acetonitril trong nước Hình . Ảnh hưởng của việc thay đổi nhiệt độ đối với nước
0 20 40 60 80 100 (ở 50 bar) so với hỗn hợp metanol/nước hoặc axetonitril/
90 nước (25 C, áp suất xung quanh) đối với hằng số điện môi
(tương đương với cường độ rửa giải sắc ký của pha động).
Sao chép với sự cho phép của Elsevier [30].
80
Methanol/Nước
70
60 Axetonitril/Nước
môi,
điện
Hằng
ɛ
số
50
40
Nước tinh khiết
30
20
50 100 200 150 250
Nhiệt độ nước tinh khiết, °C
nhu cầu cải thiện thiết kế phần cứng để giảm bớt gánh nặng năng lượng khi hoạt động ở nhiệt độ cao hơn.
Mặc dù điều này sẽ không được xem xét chi tiết hơn trong văn bản này, nhưng các phép đo được thực hiện tại Pfizer
(dữ liệu chưa được công bố) cho thấy rằng mặc dù thiết bị UHPLC yêu cầu mức tiêu thụ năng lượng cao hơn HPLC cho
cùng một quá trình phân tách sắc ký, nhưng mức tiêu thụ năng lượng trên một đơn vị thời gian cho quá trình phân
tách UHPLC ít hơn nhiều so với HPLC, nghĩa là có thể thực hiện nhiều quá trình phân tách bằng cách sử dụng UHPLC
hơn so với HPLC với cùng một lượng năng lượng tổng cộng, cũng như tạo ra công suất đỉnh cao hơn (và do đó mức
thông tin cao hơn) so với HPLC. Do đó, cùng với việc giảm mức tiêu thụ dung môi của pha động khi chuyển sang các
kích thước cột nhỏ hơn được sử dụng trong UHPLC và các lợi ích xanh mang lại, tổng mức tiêu thụ năng lượng của
phương pháp này cũng được cải thiện so với các phương pháp HPLC tiêu chuẩn. Vì những lý do này, các phương pháp
tách UHPLC thay vì HPLC được các tác giả ủng hộ trong khuôn khổ hóa học phân tích xanh.
Một phương pháp sắc ký lỏng khác tương thích với các nguyên tắc GAC là sử dụng các polyme cố định phản ứng
nhiệt làm pha tĩnh. Các polyme này được liên kết với một chất nền như silica sắc ký thông thường và bản chất kỵ
nước của pha tĩnh được kiểm soát bởi sự thay đổi của nhiệt độ. Trái ngược với các tác động điển hình của việc
tăng nhiệt độ, việc tăng nhiệt độ đối với các pha tĩnh này dẫn đến tăng khả năng lưu giữ, tạo cơ hội sử dụng các
pha động chỉ chứa nước và sử dụng nhiệt độ như một biến số để rửa giải hoặc giữ lại các chất phân tích. Một ví
dụ về điều này đã được chứng minh bởi Satti et al. người đã tổng hợp pha tĩnh thiolactone cố định (N-
isopropylacrylamide) liên kết với aminopropyl silica để tách paraben, steroid (xem Hình 3.5) và axit amin chuỗi
ngắn sử dụng pha động hoàn toàn là nước [39].
. . . Lựa chọn dung môi trong sắc ký lỏng Hầu

hết các phương pháp hoặc quy trình sắc ký ở quy mô phân tích đều có bản chất là pha đảo, nghĩa là pha động chủ
yếu có bản chất là nước. Tuy nhiên, để chuẩn bị phân lập các hợp chất (ví dụ: mục đích làm sáng tỏ cấu trúc hoặc
phân lập hợp chất đồng phân đối quang), sắc ký lỏng siêu tới hạn (SFC) ngày càng trở nên phổ biến vì nhiều lý do
(sẽ được thảo luận trong Phần 3.3.3), nhưng thông thường- giai đoạn
(Một) 35 0 5 10 15 20 25 30 40 45 50 (b) 35 0 5 10 15 20 25 30 40 45 50
35
200 5°C 5°C
100 30
0
35
200 15°C 15°C
100 30
0
35
200 25°C 25°C
(mAU)
Tôi (mAU)
Tôi
100
30
0
35
200 35°C 35°C
100 30
0
1 35 5 số 8
200 45°C 7 45°C

2 3 6
100 4 30 9
0 0 5 10 15 20 25 30 4035
45 50 tấn 35 0 5 10 15 20 25 30 40 45 50 tấn
(phút) (phút)
(c) 0 5 10 15 20 25 (d) 0 5 10 15 20 25
5°C 40 5°C
200
35
100
30
0
40 15°C
200 15°C
35
100
30
0
40
200 25°C 25°C
35
(mAU)
Tôi (mAU)
Tôi
100
30
0
40
200 35°C 35°C
35
100
30
0
1 40 5
200 45°C số 8
45°C
2 3 35 6 7
100
4 9
30
0 0 5 10 15 20 25 tấn (phút) 0 5 10 15 20 25 tấn (phút)
Hình . Phân tích qua trung gian nhiệt độ được thực hiện ở các nhiệt độ khác nhau của hỗn hợp paraben và steroid sử
dụng 100% pha động là nước trên benzyl acrylate (a,b) và trên cột PNIPAAm có đầu cuối PEG-acrylate (c,d), tương ứng. Xác định
đỉnh: (1) methyl-paraben (20 μg/ml), (2) ethyl-paraben (20 μg/ml), (3) propyl-paraben (20 μg/ml), (4) butyl-paraben (20
μg/ml), (5) hydrocortisone (2 μg/ml), (6) prednisolone (14 μg/ml), (7) methyl-prednisolone (13 μg/ml), (8) cortexolone
(8 μg/ml) và (9) testosteron (14 μg/ml). Sao chép với sự cho phép của Elsevier [39].
sắc ký sử dụng chủ yếu là dung môi hữu cơ trong pha động vẫn được sử dụng rộng rãi. Việc phân lập chuẩn bị có thể
được thực hiện thông qua thiết bị phân tích tự động hoặc đơn giản là do các nhà hóa học tổng hợp thực hiện bằng
cách sử dụng các cột 'flash'. Sắc ký pha thường cũng được sử dụng trong lịch sử để phân tích các chất phân tích
phân cực vì chúng được giữ lại tốt trên các chất hấp thụ phân cực như silica. Tuy nhiên, do sự xuất hiện gần đây
của thiết bị SFC mạnh mẽ và đáng tin cậy ở quy mô phân tích, cũng như sự phát triển của sắc ký tương tác ưa nước
(HILIC) [40] sử dụng các dung môi ít độc hơn để phân tích các hợp chất phân cực, các phương pháp sắc ký pha thông
thường tại quy mô phân tích đang trở nên khan hiếm. Có thể cho rằng, một ngoại lệ có thể là việc phân tích các hợp
chất bất đối trong đó sắc ký pha bình thường vẫn còn phổ biến, nhưng chế độ phân tách này đang dần được thay thế
khi các phương pháp SFC bất đối trở nên phổ biến hơn.
Như đã đề cập trước đó, HILIC đang trở thành một phương pháp ngày càng phổ biến để phân tích các chất phân cực.
Trong điều kiện pha đảo ngược, các chất phân tích có độ phân cực cao được giữ lại kém, nhưng trong HILIC, pha tĩnh
có cực được sử dụng kết hợp với pha động có cực với một phần nhỏ nước trong đó (thường là 1–
5% v/v). Nước trong pha
động tạo ra một lớp trên pha tĩnh, trong đó các chất phân tích có thể tương tác thông qua một số cơ chế, ví dụ,
hấp phụ, tương tác tĩnh điện với các nhóm silanol dư, v.v.
Trong khi acetonitril và metanol là những dung môi phổ biến nhất được sử dụng trong HILIC, thì dung môi etanol xanh
hơn cũng có thể được sử dụng [41]. Thông thường, có một yêu cầu đối với các chất phụ gia pha động trong HILIC
nhưng chúng thường là amoni axetat hoặc amoni formate phân hủy thành các sản phẩm phụ lành tính theo thời gian hoặc
trong quá trình xử lý chất thải.
Ethanol tiếp tục được báo cáo là dung môi thay thế xanh nhất trong sắc ký pha đảo ngược (RPLC), ví dụ, như một
chất thay thế cho acetonitril [13]. Acetonitril là dung môi được lựa chọn cho máy sắc ký lỏng do khả năng trộn lẫn
với nước, độ nhớt thấp, độ phân cực hợp lý để rửa giải chất phân tích trong điều kiện pha đảo ngược và bước sóng
UV thấp 190 nm. Tuy nhiên, nó độc đối với động vật có vú, có thời gian bán hủy dài trong nước trước khi phân hủy
và độc đối với đời sống thủy sinh [13]. Xử lý chất thải acetonitril bằng cách đốt có thể dẫn đến sự hình thành các
oxit nitơ khác nhau bao gồm axit nitric gây ra các vấn đề môi trường của chính chúng. Ngoài ra, sự biến động về
chi phí của acetonitril dựa trên cung và cầu đối với dung môi này (bao gồm các vấn đề liên tục trong năm 2008 và
2016) có thể khiến việc lựa chọn dung môi thay thế trở nên mong muốn [42].
Cũng như con đường hydrat hóa ethylene công nghiệp truyền thống hơn, ethanol có thể được sản xuất bằng quy
trình lên men sinh học từ các nguồn tái tạo. Nó có khả năng phân hủy sinh học, phân hủy thành nước và carbon
dioxide và ít độc hơn đối với động vật có vú so với các dung môi hữu cơ phổ biến khác được sử dụng trong sắc ký.
Ngoài ra, etanol có cường độ rửa giải cao hơn metanol và độ chọn lọc sắc ký khác với axetonitril (độ phân cực
Snyder đối với metanol, etanol và axetonitril lần lượt là 5,1, 4,3 và 5,8 (dung môi protic và aprotic) [43]), và
do đó cần có thể tích thấp hơn trong pha động hơn metanol cho cùng cường độ rửa giải. Vì ethanol có nhiều ở nhiều
dạng trên toàn cầu nên Welch et al. nhấn mạnh tiềm năng của việc sử dụng rượu ngũ cốc và rượu vodka (trong số các
loại đồ uống có cồn phổ biến khác) làm pha động sắc ký để phân tích các hợp chất trung tính đơn giản [42] minh họa
cách thức này có thể được sử dụng làm môi trường sắc ký bền vững ở các nước đang phát triển. Mặc dù kết quả không
tốt bằng kết quả với etanol cấp độ phân tích (đặc biệt khi được sử dụng dưới 220 nm), nhưng việc phân tách sắc ký
chắc chắn có thể chấp nhận được. Nghiên cứu trước đây tại Pfizer đã chỉ ra rằng etanol sinh học tương đối không
tinh khiết có thể được tinh chế thành tiêu chuẩn cao có thể sử dụng cho các ứng dụng sắc ký sử dụng các loại nhựa
rẻ tiền như silica gel, nhôm hoạt tính, Amberlite và than hoạt tính hoặc bằng phương pháp chưng cất (kết quả chưa
được công bố). Nhược điểm sắc ký duy nhất của việc sử dụng etanol là độ nhớt của dung môi này cao hơn đáng kể so
với metanol hoặc axetonitril (độ nhớt của nước, metanol, etanol và axetonitril ở 25 C lần lượt là 0,89, 0,54,
1,08 và 0,34 mPa s), điều này có thể ảnh hưởng phạm vi tốc độ dòng chảy LC có thể sử dụng và do đó tốc độ phân
tích. Tuy nhiên, các phương pháp đã được kiểm chứng sử dụng pha động dựa trên etanol đã được phát triển để phân
tích statin (pha động nước/ethanol/axit formic isocrates) [44] và dextromethorphan và các tạp chất liên quan
(gradien formate nước/etanol/ammonium formate) [45] Ví dụ.
Tache và đồng nghiệp cũng đề xuất sử dụng hỗn hợp propylene carbonate-ethanol để thay thế cho acetonitril trong
sắc ký lỏng vì chúng đều không proton, phân cực và có nhiều đặc tính chung [46].
Họ đề xuất propylene cacbonat vì nó có thể được tổng hợp bởi một số quy trình, nhiều trong số đó sử dụng
3 Hóa Phân Tích Xanh
thuốc thử lành tính hoặc điều kiện phản ứng hiệu quả và trước đây đã được sử dụng trong các phương pháp phân
tích khác [47]. Nhược điểm của việc sử dụng propylene cacbonat bao gồm nó không thể trộn lẫn hoàn toàn trong
nước mà không cần thêm dung môi bổ sung như rượu và tạo ra áp suất hệ thống cao hơn so với acetonitril. Tuy
nhiên, sắc ký tương tự đã được chứng minh giữa các pha động acetonitril/nước và propylene cacbonat/etanol/nước
đối với nhiều chất phân tích.
Liên quan đến nhiệt độ sử dụng đã nêu ở trên, Welch et al. [42] đã minh họa rằng mặc dù vị trí thành phần
của hàm lượng etanol trong đồ uống có cồn là cố định, các hợp chất ít phân cực hơn có thể được rửa giải bằng
cách tăng nhiệt độ cột từ 30 lên 60 C . Không có lý do tại sao việc sử dụng nhiệt độ kết hợp với pha động
nước/đồ uống có cồn không thể được sử dụng để rửa giải gradient của nhiều chất phân tích dược phẩm có độ phân
cực thấp đến trung bình ở những khu vực khó thu được etanol phân tích chất lượng cao.
Acetone cũng đã được thảo luận như một chất thay thế tiềm năng cho acetonitril trong quá trình phân tách sắc
ký do nó là dung môi không proton và có độ phân cực tương tự như acetonitril cho mục đích rửa giải (giá trị
phân cực Snyder là 5,4) [48]. Mặc dù độ hấp thụ tia cực tím của nó cao và trải dài trên 300 nm (xem Hình 3.6)
[5], nhưng nó có cực tiểu UV khoảng 210 nm có thể được sử dụng với các phân tử thích hợp cho các phép đo cụ thể,
chẳng hạn như xét nghiệm định lượng thành phần chính.
Methanol cũng là một dung môi phổ biến cho sắc ký lỏng pha đảo nhưng dễ dàng hấp thụ qua đường hô hấp hoặc
qua da và được chuyển hóa in vivo thành formaldehyde và axit formic độc hại và tích tụ [13]. Tuy nhiên, người
ta thường chấp nhận rằng metanol là dung môi 'xanh' cho LC pha đảo ngược (xem Bảng 3.1) với nhiều đặc điểm hữu
ích và tích cực như độ nhớt thấp, độ mờ UV hợp lý và độ tinh khiết cao.
Hỗn hợp dichloromethane là một pha động LC thường được sử dụng khác cho sắc ký pha thông thường có đặc tính
gây hại cho môi trường. Một số nỗ lực để tìm chất thay thế phù hợp đã dẫn đến các công cụ ghi nhớ và thiết bị
thay thế dung môi. Taygerly và cộng sự. [49] trình bày đồ thị trong Hình 3.7 để xác định các chất thay thế xanh
hơn cho dichloromethane.
Các chất phụ gia pha động cũng có thể được xem xét tập trung vào GAC. Nhiều công ty dược phẩm lớn có hướng
dẫn hóa học xanh nêu rõ loại axit và bazơ nào nên được sử dụng trong các phản ứng tổng hợp. Chúng thường được
xếp hạng theo độc tính sinh thái, phân hủy sinh học, tích lũy sinh học và khả năng bay hơi. một số
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
etanol
0,05
metanol
axeton
0,00
axetonitril
–0,05
bước sóng
200 250 300
Hình . So sánh phổ UV của acetonitril (tinh khiết), metanol (pha loãng 1/2 với nước tinh khiết), ethanol (pha loãng 1/2)
và acetone (pha loãng 1/500) [5]. Sao chép với sự cho phép của John Wiley & Sons.
Cường độ rửa giải tương đối của hỗn hợp dung môi sắc ký xanh
hợp chất trung tính
% 3:1 EtOAc : EtOH

10 30 50 70 90 100
% EtOAc
heptan
10 30 50 70 90 100
% i-PrOH
0 5 10 20 30 40 50
% 3:1 EtOAc : EtOH

MTBE
10 25 50 70
%MeOH
0 10 20 30 40 50 60
ĐCM
%MeOH
0 1 2,5 5 10 15
hợp chất cơ bản
% 3:1 EtOAc : EtOH (với 2% NH4OH)

heptan
0 10 30 50 70 90 100
% 10:1 MeOH : NH4OH

0 2,5 5 10 15 20 25
EtOAc
MTBE
% 10:1 MeOH : NH4OH
ĐCM
0 2,5 5 10 15 20
% 10:1 MeOH : NH4OH

0 2,5 5 10 15
hợp chất axit
% 3:1 EtOAc : EtOH (với 2% AcOH)

heptan
0 10 30 50 70 90
EtOAc
% 10:1 MeOH : AcOH

52.50 10 15 20
MTBE
% 10:1 MeOH : AcOH
ĐCM
52.50 10 15 20
% 10:1 MeOH : AcOH

0 2,5 5 10 15
Tăng độ phân cực của dung môi
Hình . Cường độ rửa giải của các chất thay thế pha động dichloromethane cho các chất phân tích bazơ, trung tính và axit [49].
Sao chép với sự cho phép của Hiệp hội Hóa học Hoàng gia.
Bảng . Axit 'xanh' (trên) và bazơ (dưới) để điều chỉnh pH của pha động
trong các ứng dụng sắc ký lỏng. Được sao chép với sự cho phép của Springer
Science and Business Media [22].
ưa thích có thể sử dụng không mong muốn
A-xít a-xê-tíc Axit formic Axit trifluoroacetic
Axit photphoric Axit hydrochloric Axit metan sulfonic
axit sunfuric
Natri Hidroxit trietylamin Ammonium hydroxide
kali hydroxit Đietylamin
Triethanolamine
thông tin này hữu ích trong việc chuẩn bị mẫu [22], nhưng cũng phù hợp với pha động sắc ký – xem Bảng 3.2. Ví dụ, đối với
pha động có độ pH thấp, tốt hơn là sử dụng axit formic (độc tính thấp và phân hủy thành nước và carbon dioxide) thay cho
axit trifluoroacetic (là chất gây ô nhiễm tế bào và dai dẳng trong môi trường). Tuy nhiên, việc sử dụng các chất phụ gia
axit hữu cơ và bazơ thường được ưu tiên hơn so với các chất thay thế vô cơ vì chúng thường tương thích với máy quang
phổ khối, tuy nhiên.
Nhà hóa học nên nhận thức được khi sử dụng các axit hoặc bazơ được liệt kê trong Bảng 3.2 về các vấn đề tiềm ẩn về khả
năng hòa tan và một chất điều chỉnh thích hợp được sử dụng. Ví dụ: muối phốt phát thường chỉ tương thích với dung môi hữu
cơ 80–
85% (v/v) (một lần nữa phụ thuộc vào loại chất điều chỉnh và nồng độ chất điều chỉnh) có khả năng dẫn đến các vấn
đề về phương pháp nếu sử dụng không đúng cách.
. . . Sắc ký lớp mỏng và sắc ký nhanh Sắc ký
lớp mỏng vẫn phổ biến trong hộp công cụ phân tích của nhà hóa học, mặc dù nó thường được dùng như một công cụ học thuật
hơn là công cụ công nghiệp. Nó thường cung cấp một phương pháp nhanh chóng và tương đối rẻ để theo dõi phản ứng và các
nhiệm vụ định tính khác. Thông thường, TLC được thực hiện trong điều kiện pha bình thường, tức là pha động chủ yếu là dung
môi hữu cơ (nếu không phải là độc quyền). Như đã thảo luận, việc sử dụng dung môi hữu cơ nên được giảm thiểu từ chi phí
dung môi, chi phí xử lý và quan điểm an toàn tiềm ẩn. Trong nhiều công ty lớn hơn, phần lớn TLC đã được thay thế bằng
các hệ thống sắc ký truy cập mở kết hợp với phát hiện MS có thể cung cấp thông tin nhanh không kém nhưng thường có chất
lượng cao hơn (chẳng hạn như dữ liệu định lượng) so với TLC.
Sắc ký nhanh vẫn được các nhà hóa học sử dụng rộng rãi như một cách tinh chế nhanh một lượng nhỏ vật liệu phản ứng,
điển hình cho mục đích làm sáng tỏ cấu trúc hoặc làm sạch mẫu. Một lần nữa, sắc ký nhanh thường dựa trên sắc ký pha thường
và một lượng lớn dung môi hữu cơ có thể được tiêu thụ như một phần của quy trình. Nếu yêu cầu sắc ký TLC hoặc sắc ký
nhanh, thì người đọc có thể tham khảo Phần 3.3.1.3 để lựa chọn các chất phụ gia có dung môi xanh nhất.
. . Sắc ký khí
Sắc ký khí thường được coi là một kỹ thuật phân tích xanh vì (ngoài việc chuẩn bị mẫu), nó tạo ra rất ít hoặc không tạo
ra chất thải lỏng so với sắc ký lỏng. Khí mang chính được sử dụng trong GC là heli. Điều này là do nó mang lại sự thỏa
hiệp tuyệt vời giữa hiệu quả sắc ký và độ an toàn (không độc hại, không bắt lửa và trơ). Helium được hình thành thông qua
sự phân rã phóng xạ của khí trong đá và mất hàng nghìn năm để hình thành. Nó cũng là một trong số ít khí có thể thoát ra
khỏi quả cầu atmo và do đó không dễ bị thu giữ hoặc tái chế. Cho đến rất gần đây, người ta ước tính rằng chỉ có 25 đến
30 năm nữa helium mới có sẵn để sử dụng dưới mức nhu cầu hiện tại [50] trên tất cả các mục đích sử dụng (bao gồm GC, chụp
cộng hưởng từ và bóng bay trẻ em). Tuy nhiên, một lĩnh vực helium được tìm thấy gần đây ở Tanzania đã giảm bớt
những lo ngại ngắn hạn đối với nguồn tài nguyên quan trọng này [51]. Tuy nhiên, helium vẫn là một nguồn tài nguyên giảm dần với
thời gian tồn tại hữu hạn và nếu có thể thì không nên được sử dụng trong các ứng dụng GC.
Hydro là khí mang phổ biến thứ hai được sử dụng trong GC. Nó cung cấp sắc ký trên mỗi hình thức cao nhất với vận tốc
tuyến tính tối ưu nhanh nhất (uopt) nhưng gặp phải các vấn đề an toàn tiềm ẩn (cháy nổ) rõ ràng. Đường cong van Deemter
đối với hydro rất bằng phẳng và có thể chạy ở tốc độ dòng chảy cao mà ít làm giảm hiệu suất chụp ảnh thời gian. Hydro
thường được sử dụng với khả năng phát hiện ion hóa ngọn lửa mà không gặp vấn đề gì và các máy tạo hydro hiện đại chỉ
cung cấp hydro theo yêu cầu. Miễn là các kết nối không bị rò rỉ từ máy tạo hydro đến GC, thì không có lý do gì hydro
không thể được sử dụng một cách an toàn. Với chi phí helium ngày càng tăng (ít nhất là trước khi phát hiện ra trữ lượng
helium của Tanzania), nhiều nhà lập bản đồ chro đang chuyển sang sử dụng khí mang hydro. Trong trường hợp này, các cột
hẹp hơn một chút (ví dụ: id 200 μm thay vì 250 μm) được sử dụng để duy trì hiệu quả sắc ký. Khi dịch các phương pháp
từ helium sang hydro, tốc độ chương trình nhiệt độ mới có thể được xác định bằng
Vận tốc tuyến tính trung bình mới Độ dài cột cũ Độ dài
Tỷ lệ chương trình nhiệt độ mới = Tỷ lệ cũ × ×
Vận tốc tuyến tính trung bình cũ cột mới (3.2)
Cuối cùng, nitơ cũng có thể được sử dụng làm khí mang. Nó thường bị xa lánh vì nó mang lại kết quả thấp nhất (có nghĩa
là thời gian phân tích lâu hơn [52]), nhưng mang lại nhiều lợi ích xanh. Nó rẻ và có sẵn ở dạng tinh khiết cao, nó có
thể được lấy từ quá trình chưng cất phân đoạn không khí lỏng (trong đó oxy là sản phẩm mong muốn) và không gây nổ. Để
phân tích một số lượng nhỏ chất phân tích dễ bay hơi, có thể không cần thiết phải có hiệu suất sắc ký cao nhất được tạo
ra bởi hydro và heli và do đó nitơ có thể cung cấp một cách đơn giản và dễ dàng để làm xanh phương pháp sắc ký khí.
Một khía cạnh khác để làm cho các phương pháp GC thân thiện với môi trường hơn là giảm thời gian phân tích và tăng
số lần lấy mẫu. Điều này có thể đạt được bằng cách sử dụng các cột ngắn hơn với đường kính trong nhỏ hơn mà vẫn mang
lại độ phân giải tốt cho các thành phần nhưng trong khung thời gian nhanh hơn. Nhược điểm duy nhất của việc sử dụng các
cột này là dung lượng mẫu bị giảm, điều này có khả năng dẫn đến quá tải mẫu [7].
Sắc ký khối lượng nhiệt thấp (LTM), được phát triển vào cuối những năm 1990 [53] vẫn cung cấp một phương pháp xanh
để tạo ra gradient nhiệt nhanh (>1000 C/phút) để gia nhiệt và làm mát theo cách tiết kiệm năng lượng. Tuy nhiên, LTM
dường như vẫn là một cách tiếp cận thích hợp trong GC [54], và một vài tiến bộ mà thông lượng tăng lên này có thể thực
sự được thực hiện đã được báo cáo kể từ cuộc thảo luận trong lần lặp lại trước của chúng ta về chương sách này [5].
. . Sắc ký lỏng siêu tới hạn
Sắc ký lỏng siêu tới hạn (SFC) trong bối cảnh GAC luôn được coi là một trong những kỹ thuật phân tích thuận lợi hơn.
Pha động chủ yếu là carbon dioxide được thu thập dưới dạng sản phẩm phụ từ một số phản ứng hóa học (chẳng hạn như quá
trình cracking xúc tác metan để tạo hydro), từ quá trình lên men hoặc trực tiếp từ khí quyển. Do đó, nó không đóng góp
hóa chất mới cho môi trường và có ít chất thải lỏng được tạo ra để xử lý hơn. Các chất biến tính hữu cơ thường được
yêu cầu để rửa giải các chất phân tích phân cực và dung môi được sử dụng thường là metanol. Thể tích tương đối được sử
dụng thường ít hơn thể tích được sử dụng trong chuyển màu LC và SFC hiếm khi yêu cầu công cụ sửa đổi nhiều như 50% (v/
v), đây là một lợi ích xanh bổ sung. Mặt khác, đánh giá vòng đời (LCA) để so sánh SFC quy mô chuẩn bị với HPLC quy mô
chuẩn bị cung cấp kết quả thú vị [55]. Ở cấp độ quy trình hoặc nhà máy, LC tiêu thụ nhiều tài nguyên hơn từ 26% đến
29%, nhưng xét về tổng dị ứng, SFC tiêu thụ 34% tài nguyên. Những kết quả hơi khó hiểu này chứng minh tầm quan trọng
của việc xác định ranh giới và giả định khi thực hiện LCA.
Việc sử dụng sắc ký lỏng siêu tới hạn để chuẩn bị phân lập các chất phân tích trong hỗn hợp đã phổ biến trong nhiều
năm trong công nghiệp. Tuy nhiên, thiết bị phân tích thường có sai sót, độ tin cậy kém và độ nhạy kém cho đến khi các
thiết bị SFC thương mại gần đây nhất ra đời.
Thiết bị ngày nay đã được chứng minh là tạo ra các phương pháp hợp lệ [56] và cho phép chúng được chuyển giao giữa
các phòng thí nghiệm và các thiết bị của nhà cung cấp khác nhau [57].
SFC là một kỹ thuật rất linh hoạt ở chỗ nó tương thích với bất kỳ loại pha tĩnh nào và hầu hết các dung môi hữu cơ
phổ biến và các chất phụ gia pha động được sử dụng trong sắc ký lỏng [58, 59]. Có thể tìm thấy đánh giá toàn diện về
SFC và ý nghĩa thực tế trong ấn phẩm của Desfontaine et al. [31].
SFC có thể được sử dụng để phân tích các hợp chất trong phạm vi phân cực rộng. Do cơ chế lưu giữ tương tự như cơ
chế sắc ký pha thường, các hợp chất phân cực được giữ lại tốt trong điều kiện SFC và việc bổ sung dung môi phân cực
hơn như rượu mạch ngắn là cần thiết để rửa giải các chất phân tích phân cực. Điều này làm cho SFC trở thành một phương
pháp phân tách trực giao đối với LC pha đảo ngược và hai kỹ thuật này kết hợp với nhau có thể hữu ích cho việc định
hình tạp chất của các mẫu mới. Như đã đề cập trước đó, HILIC là một phương pháp thân thiện với môi trường hơn để phân
tích các hợp chất phân cực so với sắc ký pha thông thường. Tuy nhiên, HILIC vẫn yêu cầu sử dụng một lượng rất lớn dung
môi hữu cơ trong pha động (thường ≥90 %v/v acetonitril) và do đó SFC là phương pháp thích hợp hơn để phân tích các
hợp chất phân cực [60]. Trong khi acetonitril đã được sử dụng trong SFC, metanol thường được tìm thấy để cung cấp
cường độ rửa giải và độ chọn lọc cao hơn [60].
SFC có thể mang lại lợi ích xanh đáng kể trong việc giảm khối lượng dung môi hữu cơ được sử dụng, sử dụng các dung
môi lành tính hơn và có khả năng loại bỏ dung môi hữu cơ (xem phần thảo luận về SFE trong Phần 3.2.1.6 trước đó)
trong quá trình chuẩn bị mẫu và pha động hoàn toàn cho một số ứng dụng. Cũng có thể tái chế pha động, nhưng trong thực
tế điều này có thể khó khăn.
Như với SFE, thành phần chính của pha động là carbon dioxide, như đã lưu ý trước đây có một số lợi ích xanh liên
quan đến nó. Ngoài những điều đã lưu ý ở trên, nó có độ nhớt thấp và độ khuếch tán cao cho phép thực hiện quá trình
phân tách sắc ký nhanh chóng và hiệu quả. Carbon dioxide khi hoạt động xung quanh điểm tới hạn của nó có thể được điều
chỉnh thông qua việc thay đổi nhiệt độ hoặc áp suất của hệ thống để thay đổi mật độ của nó và do đó cường độ rửa giải
của pha động.
Phân tích SFC nên là một trong những kỹ thuật chính mà các nhà hóa học tổng hợp xem xét khi phân tích các hỗn hợp
phản ứng. Phần lớn các phản ứng được thực hiện trong dung môi hữu cơ và SFC tương thích trực tiếp với các dung môi
này (mặc dù có thể cần pha loãng mẫu bằng cách sử dụng bất kỳ dung môi hữu cơ tương thích với phản ứng nào), và do
đó cần chuẩn bị ít mẫu. Thật vậy, không giống như phân tích LC pha đảo ngược, việc chuẩn bị mẫu liên quan đến pha loãng
với dung dịch pha loãng có nước có thể dẫn đến sự kết tủa của chất phân tích từ nền dung môi hữu cơ mà có thể không
quan sát được trong các điều kiện của phương pháp sắc ký pha đảo ngược, trong khi điều này ít xảy ra với SFC. Ngoài
ra, SFC có nhiều khả năng tuân theo các hợp chất không bền với nước, nơi mà sự thoái hóa ít có khả năng quan sát được.
SFC cũng đang trở thành kỹ thuật được lựa chọn để phân tách chuẩn bị do tốc độ xử lý mẫu và giảm thể tích pha động
dung môi hữu cơ mà các mẫu được phân lập và sau đó được đưa vào khi so sánh với các phương pháp sắc ký chuẩn bị pha
thông thường truyền thống. Một khó khăn phát sinh trong việc lựa chọn các điều kiện chuẩn bị SFC thích hợp dựa trên
việc xác định tạp chất trong phân tích LC pha đảo ngược có thể có cấu hình lưu giữ chất phân tích rất khác nhau. Ở một
mức độ nào đó, điều này có thể được khắc phục thông qua việc sử dụng các hệ thống chuẩn bị định hướng theo khối lượng
với giả định rằng ion được proton hóa (trong điều kiện MS phun điện) nhất quán trong cả hai phương pháp. Thậm chí có
thể khó mở rộng quy mô từ thang SFC phân tích sang các điều kiện SFC chuẩn bị vì những thay đổi về kích thước cột và
tỷ lệ dòng chảy sẽ dẫn đến áp suất ngược khác nhau, do đó sẽ thay đổi mật độ của pha động carbon dioxide, cường độ rửa
giải của nó và do đó hồ sơ tách. Một số công việc đã được báo cáo là điều tra quy mô phương pháp SFC [61], nhưng cần
nhiều công việc hơn trong lĩnh vực này.
SFC cũng nên được coi là kỹ thuật được lựa chọn đầu tiên để phân tích các hợp chất bất đối kháng. Về mặt lịch sử,
sắc ký pha thường với các cột bất đối thích hợp, chẳng hạn như cột dựa trên amylose và cellulose, được sử dụng để phân
tích bất đối. Tuy nhiên, SFC đã chỉ ra rằng nó cũng phù hợp với phân tích bất đối kháng, điển hình là trong khung thời
gian nhanh hơn nhiều, ít phát triển phương pháp hơn và giảm đáng kể việc sử dụng dung môi hữu cơ [62]. Một ví dụ
gần đây về điều này đã được báo cáo bởi Landagaray et al. người đã sử dụng một phương pháp thiết kế thử nghiệm để phát
triển một phương pháp chọn lọc đối quang (và xác nhận sau đó) đối với các dẫn xuất mela tonin, agomelatine và
napthalene sử dụng etanol làm chất điều chỉnh hữu cơ [63].
. . Quang phổ
Các phương pháp quang phổ chiếm ưu thế trong lĩnh vực GAC [27]. Các phương pháp quang phổ phản xạ cực kỳ
thân thiện với môi trường vì chúng thường sử dụng các mẫu rắn và không cần hoặc không cần chuẩn bị mẫu. Có một
số ít kỹ thuật quang phổ được sử dụng trong môi trường hóa học tổng hợp hoặc quy trình và những kỹ thuật này
sẽ được thảo luận ngắn gọn và mở rộng khi thảo luận về những kỹ thuật này trong bối cảnh công nghệ phân tích
quy trình (PAT – Phần 3.4).
. . . Huỳnh quang
tia X Huỳnh quang tia X (XRF) là một phương pháp không phá hủy để phân tích thành phần nguyên tố của các mẫu
khí, lỏng hoặc rắn. Kỹ thuật này hoạt động bằng cách chiếu tia X vào mẫu và phân tích quang phổ huỳnh quang
phát xạ – có thể dành cho nhiều nguyên tố cùng một lúc. Kỹ thuật này có dải động rộng và có thể phát hiện đến
mức ppm.
. . . Quang phổ hồng

ngoại Quang phổ hồng ngoại thường được vận hành trong dải sóng số gần (NIR) hoặc giữa (MIR) (xấp xỉ 12.500 đến
4000 cm 1 đối với NIR và 4000–400 cm 1 đối với MIR tương ứng ). Nó có thể là kỹ thuật quang phổ được sử dụng
nhiều nhất để phân tích chất phân tích hữu cơ. Phép đo phổ NIR dựa trên sứ mệnh truyền hoặc khuếch tán khi
chiếu xạ một mẫu (có thể là mẫu rắn hoặc lỏng). Kỹ thuật này không phá hủy và thường yêu cầu ít hoặc không cần
chuẩn bị mẫu. Mặc dù NIR không nhạy và quang phổ tạo ra phức tạp, nhưng nó đã được ứng dụng ngày càng rộng rãi
như một công cụ cầm tay, ví dụ, để xác định và xác định vật liệu khối hoặc cho các ứng dụng trực tuyến (xem
Phần 3.4).
. . . Quang phổ Raman

Vì Raman là một kỹ thuật quang phổ dựa trên laser, kỹ thuật này được đặc trưng bởi độ nhạy cao và độ phân giải
phổ cao [27]. Tán xạ Raman có thể tạo ra thông tin về thành phần, liên kết, môi trường hóa học và cấu trúc
tinh thể. Vì quang phổ có thể được tạo ra nhanh chóng nên nó cũng có thể được sử dụng trong các ứng dụng PAT
trực tuyến (xem Phần 3.4). Nó có thể là định tính hoặc định lượng cho các chất phân tích cụ thể nếu một mô
hình phù hợp được xây dựng và hiệu chuẩn. Giống như XRF, các mẫu có thể ở dạng khí, lỏng hoặc rắn và yêu cầu
chuẩn bị mẫu ít và đủ nhạy để cho phép thực hiện phân tích vết.
. Công nghệ phân tích quy trình
Công nghệ phân tích quy trình (PAT) là một thuật ngữ bao gồm một số phương pháp thử nghiệm được sử dụng để
hiểu các quá trình và phản ứng hóa học tổng hợp. Lĩnh vực PAT đang mở rộng nhanh chóng với sự gia tăng gần
như tuyến tính trong các ấn phẩm trong giai đoạn 2003 đến 2013 (tăng thêm mười bài báo hàng năm) [64]. Một bài
báo thông tin đã được xuất bản bởi Cue et al. thảo luận về cách PAT hỗ trợ các phương pháp tiếp cận chất lượng
theo thiết kế (QbD) của FDA Hoa Kỳ đối với hóa học xanh [65] và phù hợp với các khái niệm 'lành tính theo
thiết kế' [3].
Theo truyền thống, tiến độ phản ứng được đo bằng cách lấy mẫu qua nhiều thời điểm và phân tích các mẫu ngoại
tuyến này bằng cách sử dụng, ví dụ, HPLC hoặc TLC. PAT mang đến cơ hội thực hiện các phép đo thường xuyên
hơn, nhanh hơn và tự động cho phép nghiên cứu các quá trình động học (sự hiện diện của các loài tạm thời, mối
quan hệ giữa các biến) để hỗ trợ hiểu biết về quá trình cũng như khả năng kiểm soát quá trình theo thời gian
thực. Đây là tất cả với ít hoặc không cần chuẩn bị mẫu. Ngoài ra, công nghệ này có thể cung cấp các phép đo
khó hoặc nguy hiểm khi đo ngoại tuyến, ví dụ như phép đo sử dụng thuốc thử độc hại, hệ thống áp suất cao hoặc
nhiệt độ cao.
Có thể viết sâu rộng về các cách tiếp cận và ứng dụng khác nhau của PAT đối với hóa học y tế, nhưng điều này nằm ngoài
phạm vi của chương này. Để xem xét chuyên sâu về PAT, người đọc được tham khảo một bài báo gần đây của các học viện liên
ngành về lĩnh vực này [64].
Với các quy trình PAT, các mẫu có thể được phân tích [66]:
At-line: Hệ thống đo lường được đưa đến mẫu và phép đo được thực hiện tại đó. Có thể cần chuẩn bị một số mẫu trước khi
phân tích.
Trực tuyến: Hệ thống đo lường được đặt gần phản ứng và các mẫu được thu thập và phân tích tự động trong nhiều thời
điểm. Điều này thường được sử dụng với các quy trình sắc ký trực tuyến.
Nội tuyến: Phép đo được thực hiện trong thời gian thực bằng cách sử dụng đầu dò hoặc cảm biến đặt trong bình phản ứng.
Cách tiếp cận này được sử dụng phổ biến nhất với các kỹ thuật quang phổ như mid-IR, NIR hoặc Raman.
Ngoài các kỹ thuật nêu trên, các công cụ phân tích khác bao gồm cặp nhiệt điện, cảm biến áp suất, đầu dò pH, hệ số phản
xạ chùm tia hội tụ, khối phổ và NMR có thể được sử dụng để đo các thay đổi hóa học hoặc vật lý [67]. Tuy nhiên, không có
cách tiếp cận PAT đơn lẻ nào có thể cung cấp sự hiểu biết hoặc hiểu biết sâu sắc về quy trình đầy đủ để đưa ra chiến
lược kiểm soát. Ví dụ:
Với các phương pháp đo quang phổ, không phải lúc nào cũng có thể xác định được sự hình thành tạp chất ở mức độ thấp
do các vấn đề về độ nhạy. Mặc dù các phương pháp quang phổ được hưởng lợi từ thời gian phân tích nhanh, nhưng chúng
có thể tạo ra các phổ phức tạp thường yêu cầu giải chập, có thể tốn thời gian để xây dựng các mô hình định lượng đặc
biệt cho các hệ thống đa thành phần. De Bleye et al. [68] mà người đọc có thể thấy hữu ích.
NMR cho phân tích trực tuyến thường có độ nhạy kém, điều này có thể dẫn đến việc bỏ sót các tạp chất ở mức độ thấp hoặc
khó định lượng trong các khung thời gian theo dõi phản ứng. Một đánh giá hữu ích về việc sử dụng NMR trường thấp để
theo dõi phản ứng đã được xuất bản bởi Dalitz et al. [69] cũng bao gồm các hướng dẫn thực tế trong ứng dụng của nó.
Sắc ký có thể cung cấp (tương đối) các bộ dữ liệu đơn giản, cung cấp định lượng nhanh nhưng thời gian phân tích
tương đối dài. Có thể sử dụng cả sắc ký lỏng (LC) và sắc ký khí (GC), nhưng LC điển hình hơn do tính chất lỏng của
môi trường phản ứng, mặc dù các hạt có thể gây ra sự cố trong quá trình lấy mẫu sử dụng công nghệ hiện có.
Trong giám sát MS, nồng độ phản ứng cao có thể gây ra hiệu ứng ức chế dẫn đến giảm phản ứng của chất phân tích, đây có
thể là vấn đề đối với việc theo dõi tạp chất ở mức độ thấp. APCI (ion hóa hóa học ở áp suất khí quyển) nên được coi là
một kỹ thuật ion hóa, cũng như ion hóa phun điện (ESI) vì nó có thể chịu được tốc độ dòng pha động cao hơn [70].
Phương pháp PAT có thể được sử dụng để xác định số phận của nguyên liệu ban đầu và thuốc thử, xác nhận sự có mặt của sản
phẩm mong muốn, xác định chất trung gian và tạp chất hoặc xác định trạng thái ổn định và điểm kết thúc phản ứng. PAT có
thể được sử dụng để theo dõi các phản ứng không đồng nhất trong đó phân tích ngoại tuyến có thể dẫn đến sự không nhất
quán trong lấy mẫu và biến đổi theo lô. Điều này cuối cùng dẫn đến việc giảm loại bỏ hàng loạt hoặc xử lý lại và do đó
tạo ra chất thải. Công nghệ này cũng hữu ích khi mở rộng quy mô các phản ứng từ phòng thí nghiệm sang khối lượng nhà máy
thí điểm để xác minh quy trình và kiểm soát quy trình [66], điều này có thể cực kỳ hữu ích vì các quy trình được xác định
và hiểu rõ ở quy mô phòng thí nghiệm có thể tạo ra các kết quả rất khác nhau ở quy mô lớn hơn do để, ví dụ, hiệu ứng
trộn hoặc làm nóng.
Ngoài ra còn có một số phương pháp PAT có thể được sử dụng để theo dõi và kiểm soát các quá trình kết tinh dược phẩm,
đặc trưng cho các vật liệu kết tinh (bao gồm cả dạng đa hình) và để hiểu rõ hơn về sản phẩm và quy trình nhằm mục đích
đảm bảo chất lượng và an toàn của sản phẩm. Mặc dù đây là một lĩnh vực rất quan trọng, nhưng bản thân nó lại là một chủ
đề và người đọc được tham khảo tài liệu đánh giá [66].
Việc giám sát có thể được thực hiện trên các phản ứng theo đợt hoặc liên tục và những phản ứng sử dụng các quy trình
dựa trên dòng chảy. Việc sử dụng các phản ứng dòng chảy có một số lợi ích xanh bao gồm tiêu thụ thuốc thử thấp hơn và
tạo ra chất thải. Theo nguyên tắc thứ mười một của Anastas [4], có thể phân tích thời gian thực và nguyên tắc thứ mười hai
nguyên tắc được tuân thủ bằng cách giảm thiểu rủi ro cho người vận hành vì phản ứng và phân tích được thực hiện trong các hệ
thống khép kín.
Phương pháp tiếp cận PAT để giám sát quy trình trực tuyến đã được báo cáo cho một số ứng dụng bao gồm:
NIR
Kiểm soát hàm lượng nước trong phản ứng quy trình liên tục [67]
Giám sát hàm lượng nước để kiểm soát dạng tinh thể [67] Giám
sát mức metanol của metanol để kiểm soát quá trình kết tinh API phù hợp với nhiều calibre
các mô hình [71]
Raman
Kiểm soát phản hồi phản ứng oxy hóa [72] Giám
sát định lượng phản ứng ete hóa không đồng nhất [73]
UV/Vis
Theo dõi thời gian thực các tạp chất của quy trình để cung cấp điểm kết thúc phản ứng xác định chính xác [74]
LC trực
tuyến Theo dõi tạp chất của quy trình và điểm kết thúc phản ứng [67, 75]
Khối phổ Giám sát
quá trình làm khô API (nước) [67] Giám sát phản
ứng sắp xếp lại Hofmann cho các sản phẩm trung gian và sản phẩm cuối cùng [76] Giám sát phản ứng
thời gian thực bằng phép đo khối phổ di động ion [77] Định lượng MS cho dòng chảy
-theo dõi phản ứng [70] Theo dõi lộ trình tổng hợp
Anagliptin bao gồm theo dõi các tạp chất đẳng áp thông qua đĩa đồng vị của chúng
cống nạp [78]
NMR
Sử dụng thiết bị NMR để bàn để theo dõi phản ứng hydro hóa chuyển [79] Theo dõi sự hình
thành thuốc thử Grignard trong điều kiện dòng chảy liên tục [80] Sử dụng NMR ống chảy kết
hợp với theo dõi MS để theo dõi định tính và định lượng
của phản ứng thế nucleophin [81]
Việc áp dụng các phương pháp tiếp cận hóa học đối với dữ liệu giải mã toán học và thống kê cũng như thông tin imise
tối đa được tạo ra từ các thí nghiệm rất phổ biến trong lĩnh vực PAT, có thể giúp giảm kích thước mẫu và tăng thêm chứng
chỉ xanh của PAT.
. Phân tích Dược phẩm Sinh học
Dược phẩm sinh học là loại phát triển nhanh nhất cho nghiên cứu và phát triển phân tử dược phẩm mới.
Chúng ngày càng trở nên quan trọng với tư cách là ứng cử viên thuốc do khả năng tác động đến nhiều quá trình sinh lý.
Những phân tử này bao gồm các loại như peptide, oligonucleotide, protein và kháng thể đơn dòng (mAbs) – trong số
nhiều loại phân tử lớn khác. Trong trường hợp peptide, có ít nhất 100 liệu pháp trên thị trường ở ba khu vực tiếp thị
chính – Hoa Kỳ, Châu Âu và Nhật Bản [82].
Các nguyên tắc hóa học phân tích xanh có thể được áp dụng cho dược phẩm sinh học theo cách tương tự như áp dụng cho các
liệu pháp phân tử nhỏ.
Sự phát triển của các phương pháp nhạy cảm và chọn lọc đối với dược phẩm sinh học là rất quan trọng [83]. Xét nghiệm
liên kết phối tử và xét nghiệm miễn dịch có thể được coi là kỹ thuật xanh vì chúng được thực hiện trong dung dịch nước,
yêu cầu chuẩn bị mẫu ít và sử dụng thể tích mẫu nhỏ, nhưng có thể gặp phải các vấn đề về chọn lọc [84]. Các phương pháp
phân tách (chẳng hạn như điện di mao quản và sắc ký lỏng) có thể cải thiện tính chọn lọc so với các phương pháp này,
đặc biệt khi kết hợp với phát hiện khối phổ. Để phản ánh điều này, nghiên cứu đang nổi lên về việc áp dụng các nguyên
tắc GAC để phân tích phân tử lớn bao gồm phân tích phân tử thô và các chất chuyển hóa trong phân tích sinh học.
Vì kích thước mẫu thường có thể bị hạn chế trong quá trình tổng hợp dược phẩm sinh học hoặc khi thu hồi từ chất
lỏng sinh học nên các phương pháp phân tích sử dụng thể tích mẫu nhỏ được ưu tiên hơn (và khi phân tích nền sinh
học, thường cần phải chuẩn bị mẫu như SPE).
Tất cả các phương tiện tăng trưởng này đặt ra những thách thức phân tích cố hữu đối với phân tích trực tuyến.
Các hỗn hợp này không đồng nhất và do sự đa dạng của các sinh vật ký chủ không phù hợp với phương pháp PAT phổ quát.
Tuy nhiên, một số cách tiếp cận hạn chế đã được sử dụng, bao gồm:
Đầu dò nhiệt độ, pH và thành phần khí thải FBRM (đo

hệ số phản xạ chùm tia Fourier) để mô tả NIR sinh khối đã được sử dụng nhưng
không rộng rãi. Điều này có thể là do các hạt và bong bóng khí can thiệp vào phương pháp quang phổ này [85]
. . Chuẩn bị mẫu dược phẩm sinh học
Do sự phức tạp của quá trình tổng hợp, nghĩa là các mẻ thường được thực hiện ở quy mô nhỏ và được tổng hợp trong môi
trường phức hợp giống như môi trường lên men giống như môi trường, nên các quy trình chuẩn bị và làm sạch mẫu với
khối lượng nhỏ như vi chiết [86] thường được sử dụng. Tự động hóa và thu nhỏ cũng là xu hướng trong lĩnh vực này
[32, 84]. Một thách thức phân tích liên quan đến các phân tử sinh học là liên kết không đặc hiệu của các chất phân
tích dẫn đến thiếu độ nhạy hoặc chuyển sang kỹ thuật phân tách [84]. Điều này có thể được nghiên cứu và tối ưu hóa
trong quá trình phát triển phương pháp xem xét các yếu tố như dung môi hòa tan, loại lọ mẫu và vật liệu và nhiệt độ
pha loãng [87].
. . Phân tách sắc ký và điện di
Sắc ký lỏng, trong nhiều ngành hóa học và sinh học, là kỹ thuật phân tích chính.
Điều này luôn ở pha đảo ngược do tính ưa nước của các phân tử (hoặc điều kiện trao đổi ion dựa trên nước) và thường
ở nhiệt độ cao để nâng cao hiệu suất sắc ký. Tác động của các thông số phân tích khác nhau đối với phân tích phân tử
sinh học thường rõ rệt hơn so với phân tách phân tử nhỏ. Việc sử dụng gradient dung môi, loại dung dịch đệm và nồng
độ, việc bổ sung các chất phụ gia pha động như thuốc thử tạo cặp ion, nhiệt độ và độ pH đều có thể có tác động đáng
kể đến cấu tạo của các phân tử, điều này có thể dẫn đến những thay đổi lớn hơn nhiều về khả năng lưu giữ và chọn
lọc. trên phạm vi nhỏ so với các phân tử nhỏ.
Mặc dù các cột hạt xốp bề ngoài (các hạt silica lõi rắn có lớp xốp mỏng bên ngoài) đang ngày càng trở nên phổ biến
vì chúng cho phép thực hiện quá trình phân tách giống như UHPLC trên thiết bị HPLC, nhưng không có thêm lợi ích
xanh nào khi sử dụng các cột này. Có thể cho rằng, họ sử dụng thể tích pha động cao hơn trong các định dạng cột lớn
hơn so với các hạt xốp hoàn toàn dưới 2 micron với UHPLC. Do tính phức tạp của các mẫu, người ta thường sử dụng
phương pháp phát hiện khối phổ, cho phép xem xét một số cải tiến quy trình xanh giống như đối với các phân tử nhỏ
khi sử dụng các chất phụ gia pha động ít gây ô nhiễm hơn. Do sự phức tạp của mẫu, cần có sự phân tách hiệu quả cao
nên việc sử dụng UHPLC và sắc ký kích thước nhỏ hơn là phổ biến trong lĩnh vực này.
Điều này có thể đạt được thông qua việc sử dụng các cột có đường kính trong micro hoặc nano (ví dụ: 1 mm hoặc 75–
150
μm tương ứng). Ngoài việc yêu cầu thể tích mẫu nhỏ hơn nhiều, độ phân tán đỉnh thấp hơn (cung cấp độ nhạy phát
hiện cao hơn) và việc sử dụng dung môi giảm nhiều được quan sát thấy trên các thiết bị LC được tối ưu hóa phù hợp
(các thiết bị LC tiêu chuẩn sử dụng bộ tách dòng không mang lại những lợi ích này).
Một phần mở rộng hơn nữa của các phương pháp phân tách thu nhỏ là sử dụng các hệ thống dựa trên chip tích hợp
nhiều bộ phận của hệ thống sắc ký [88] có thể cung cấp khả năng phân tách và phát hiện tuyệt vời, đặc biệt là khi
kết hợp với phát hiện MS [89]. Những thứ này giảm thiểu đáng kể khối lượng mẫu và pha động và có sẵn trên thị trường
từ các nhà sản xuất thiết bị lớn. Công nghệ chip sẽ không được thảo luận chi tiết
tuy nhiên, ở đây, vì không chắc là các nhà hóa dược sẽ thường xuyên sử dụng phương pháp công cụ này do tính chất
chuyên môn của nó.
. . . Sắc ký đa chiều Các kỹ thuật sắc

ký đơn chiều không thể phân giải tất cả các thành phần mẫu trong các hỗn hợp phức tạp như những hỗn hợp thường
gặp trong phân tích sinh học hoặc dược phẩm sinh học. Việc phân tích các mẫu phức tạp như thế này bằng cách sử
dụng các kỹ thuật đơn chiều là không mong muốn theo nguyên tắc GAC, điều này sẽ tạo ra khối lượng chất thải lớn
do thời gian phân tích cần thiết rất dài. Sự kết hợp của các phương pháp sắc ký (thường được gọi là hai phương
pháp) theo cách tiếp cận đa chiều là một giải pháp tiềm năng cho vấn đề này. Điều này thường được gọi là '2D-LC'
và có thể được thực hiện theo hai cách [90]:
Chế độ cắt tim trong đó chỉ các phần được chọn mới được chuyển (hoặc giữ nguyên sau đó được chuyển) sang chiều
sắc ký thứ hai thông qua van chuyển mạch và có thể áp dụng cho các mẫu chỉ có một số pic cần mô tả thêm đặc
tính. Điều này cũng được sử dụng trong phân tích phân tử nhỏ, ví dụ, để đánh giá độ tinh khiết cực đại.
Chế độ toàn diện là nơi mà tất cả pha động và các thành phần của nó trong các chiều thứ nhất được chuyển sang
chiều thứ hai, một lần nữa thông qua một van chuyển mạch. Pha động của chiều thứ hai phải tương thích với pha
động thứ nhất và chiều thứ hai thường cung cấp tính chọn lọc sắc ký thay thế (hoặc được cho là 'trực giao').
Chiều thứ hai cần phải cực kỳ nhanh chóng để phân tích trực tuyến, nhưng cũng có thể được thực hiện ngoại tuyến.
Tất cả các nguyên tắc xanh áp dụng cho sắc ký đơn chiều cũng có thể được áp dụng trong sắc ký đa chiều, ví dụ:
sử dụng dung môi xanh và phụ gia, nhiệt độ cao hơn, sử dụng UHPLC, v.v.
Các phương pháp tiếp cận đa chiều cũng có thể được thực hiện trong GC, nhưng rõ ràng các mẫu phải ở dạng dễ
bay hơi hoặc bán bay hơi. Do đó, phương pháp này chủ yếu được sử dụng trong, ví dụ, ngành công nghiệp hóa dầu
và nước hoa và rất hiếm khi được sử dụng trong hóa dược.
. . . Sắc ký loại trừ kích thước

Một kỹ thuật bổ sung chưa được thảo luận cho đến thời điểm này là sắc ký loại trừ kích thước (SEC). SEC là một
kỹ thuật phổ biến được sử dụng trong đặc tính tá dược và phân tử sinh học để hiểu các tính chất vật lý chính như
MW trung bình, độ nhớt nội tại, v.v. Điều rất quan trọng trong phân tích hậu môn dược phẩm sinh học là xác định
sự hiện diện của các tập hợp phân tử sinh học có thể có tác dụng độc tính in vivo rất khác so với phân tử mong
muốn.
SEC có thể được thực hiện trong điều kiện pha bình thường hoặc pha đảo ngược, nhưng đối với phân tích phân tử
sinh học, điều này luôn được thực hiện trong điều kiện nước, chủ yếu vì lý do độ hòa tan của chất phân tích. Theo
truyền thống, xu hướng là sử dụng các cột dài, nhồi hạt polyme có đường kính trong lớn, điển hình là 7,8 mm với
các hạt lớn. Mặc dù các phân tích này thường ở tốc độ dòng chảy tương đương với HPLC, thời gian phân tích (do
chiều dài cột và khớp nối để thu được phân bố kích thước lỗ chính xác cho phân tử quan tâm) thường dài (theo thứ
tự một giờ). Gần đây, đã có những phát triển phối hợp để chuyển SEC sang kích thước hạt nhỏ hơn và kích thước
bên trong cột như với UHPLC đã nêu ở trên. Việc giảm kích thước hạt giúp cải thiện hiệu quả sắc ký của quá trình
phân tách, nhưng quan trọng là tốc độ dòng chảy cũng giảm (so với các phương pháp HPLC tiêu chuẩn) có thể làm
giảm đáng kể chất thải pha động.
. . . Sắc ký lỏng siêu tới hạn SFC

cũng đã được báo cáo để phân tích các liệu pháp peptide chuỗi ngắn [91, 92]. Tuy nhiên, SFC có những hạn chế lớn
trong lĩnh vực ứng dụng này. Hạn chế đầu tiên là khả năng hòa tan của chất phân tích trong chất pha loãng thích
hợp tương thích với pha động không phân cực. Peptide yêu cầu tỷ lệ nước cao trong chất pha loãng mẫu để hòa tan,
điều này không tương thích với kỹ thuật này (mặc dù theo kinh nghiệm của chúng tôi, SFC sẽ chịu được lượng nước
từ 5% đến 10% (v/v) mà không ảnh hưởng đáng kể đến hình dạng pic của chất phân tích). Ngoài ra, do
đối với bản chất phân cực cao của peptide, chúng có thể rất khó rửa giải do hiệu ứng hấp phụ chất phân tích pha tĩnh cực mạnh.
Một lần nữa, lượng nước nhỏ (<5% (v/v)) trong pha động có thể được dung nạp và trong một số trường hợp có thể đủ để rửa giải
peptit, mặc dù điều này thường chỉ giới hạn ở các biến thể chuỗi ngắn kỵ nước và chất lượng kém. hình dạng đỉnh thường được quan
sát thấy [93].
. . . Điện di mao quản Trong khi
điện di mao quản (CE) thường được sử dụng trong một số ứng dụng thích hợp để phân tích phân tử nhỏ, ví dụ, phân tách đồng phân
đối quang, xác định tham số hóa lý (ví dụ: pKa, Log P, Log D ) và xác định định lượng ngược ion, ứng dụng mới nổi cho kỹ thuật
này chắc chắn là trong lĩnh vực dược phẩm sinh học [94]. Các lợi ích phân tích và xanh của kỹ thuật này trong lĩnh vực này bao
gồm:
Nhiều chế độ tách bao gồm CE dung dịch tự do (còn được gọi là điện di vùng mao quản, CZE [94]), sắc ký điện động micellar
(MEKC) [95], điện di gel mao quản (CGE) [96] và hội tụ đẳng điện (IEF) [97 ].
Hiệu quả phân tách cao do cơ chế điện di thay vì cơ chế tách cơ học được sử dụng trong sắc ký lỏng truyền thống tạo ra các
đỉnh chất phân tích thường hiệu quả hơn từ 10 đến 100 lần cho phép đạt được độ phân giải cao hơn nhiều.
Thời gian chạy phân tích có thể ngắn hơn nhiều so với thời gian được sử dụng trong phân tách LC so sánh.
Nhiều phương pháp phát hiện bao gồm UV, huỳnh quang (bao gồm cả huỳnh quang cảm ứng bằng laser, LIF) và giao diện khối phổ
[83] (thế hệ thiết bị CE mới nhất bao gồm giao diện MS không vỏ bọc không còn yêu cầu chất lỏng trang điểm làm loãng mẫu và
giảm độ nhạy của MS ). Tuy nhiên, chúng có độ nhạy thấp hơn đáng kể so với phân tách sắc ký vì đối với phần lớn các kỹ thuật
phát hiện, chiều dài đường phát hiện là đường kính trong của mao quản.
Cần có một lượng nhỏ thuốc thử như dung dịch đệm (thường là 100 mL dung dịch đệm chạy sẽ dùng được trong một tuần sử dụng
thiết bị liên tục) và yêu cầu về mẫu là mL mỗi lần tiêm. Hầu hết các phương pháp phân tách đều sử dụng dung dịch đệm chạy
bằng nước và do đó việc sử dụng dung môi hữu cơ là tối thiểu và lượng chất thải phát sinh là rất nhỏ.
. . PAT cho Dược phẩm sinh học
Phương pháp tiếp cận PAT đã được sử dụng trong giám sát lò phản ứng sinh học. Thuốc kháng sinh thường được sản xuất bằng quy
trình lên men, nhưng chỉ chiếm một phần nhỏ trong thị trường dược phẩm sinh học mới nổi đang ngày càng nhắm đến các kháng thể
đơn dòng (mAbs) và liệu pháp protein. Các kháng thể đơn dòng chủ yếu được sản xuất bằng cách sử dụng các dòng tế bào và protein
của động vật có vú bằng nhiều phương tiện khác nhau bao gồm men, nấm, tế bào động vật có vú, thực vật hoặc côn trùng có thể tạo
ra những thách thức phức tạp cho phân tích trực tuyến [64]. Gần đây hơn, các phương pháp PAT đã được áp dụng để phân tích các
oligonucleotide được tổng hợp thông qua hóa học pha rắn [98]. Quang phổ Raman và hồng ngoại trung bình là những kỹ thuật chính
được sử dụng để giám sát quy trình tổng hợp tự động trong thời gian thực và các phương pháp hóa học được sử dụng để hiểu các
chế độ lỗi tiềm ẩn liên quan đến quy trình. Nghiên cứu cho thấy rằng các giai đoạn, chu kỳ hoặc tổng hợp hoàn chỉnh của quy
trình cụ thể có thể được theo dõi cho phép kiểm soát quy trình theo thời gian thực.
. Kết luận
Không có lý do khoa học hoặc thực tế nào giải thích tại sao GAC nên được coi là một nhánh riêng của hóa học phân tích. Nếu một
phương pháp phân tích phù hợp với mục đích và thể hiện đủ độ nhạy, độ chọn lọc, độ mạnh, độ chính xác và độ chính xác bằng cách
sử dụng bất kỳ hoặc nhiều phương pháp được thảo luận trong chương này, thì không có lý do gì để không đưa vào các phương pháp
đó để cải thiện các khía cạnh môi trường và an toàn của quy trình . Tuy nhiên, việc triển khai các cách tiếp cận này có thể sẽ
đòi hỏi một sự thay đổi trong tư duy, đặc biệt là trong các ngành mà phương pháp phân tích
các phương pháp tiếp cận thường được ghi trong các hướng dẫn và quy trình vận hành tiêu chuẩn. Điều này đòi hỏi một cách tiếp
cận do ban quản lý chỉ đạo, trong đó hiệu suất của từng nhà phân tích được đo lường dựa trên các số liệu xanh như một phần quan
trọng trong chiến lược môi trường của công ty.
Sự nhìn nhận
Các tác giả xin cảm ơn các đồng nghiệp của AstraZeneca, Tiến sĩ Barry Dillion đã thảo luận về độc tính dung môi, Tiến sĩ Tony
Bristow và Steven Coombes đã thảo luận về MS và NMR trực tuyến và Richard Hart vì những hiểu biết sâu sắc về PAT quang phổ trực
tuyến.
Người giới thiệu
Vanhoenacker, G., Sandra, P., David, F., Sandra, K., Pereira, A. (2010) Sắc ký xanh (Phần 1):
Giới thiệu và sắc ký lỏng. LC-GC Châu Âu, 23, 242–

259. Sheldon, RA (1994)
Số liệu hiệu suất hóa học xanh: Yếu tố điện tử. hóa học. Tech., 24, 38–47. Cue, BW, Berridge, J.,
Manley, JB (2009) PAT và hóa học xanh: Sự giao thoa giữa lành tính theo thiết kế
và chất lượng theo thiết kế. dược phẩm. Anh, Tháng Ba/Tháng Tư, 8–
20.
Anastas, PT, Warner, JC (1998) Green Chemistry: Theory and Practice. Nhà xuất bản Đại học Oxford, Oxford,
Vương quốc Anh.
Ferguson, P., Harding, M., Young, J. (2012) Green Analytical Chemistry in Green Techniques for Organic Synthesis and
Medicinal Chemistry. W. Zhang và BW Cue Jr (Biên tập), 659–

683, Wiley, Chichester. Galuszka, A., Migaszewski, Z.,
´
Namiesnik, J. (2013) 12 nguyên tắc của hóa học phân tích xanh và
Ghi nhớ Ý nghĩa của các thực hành phân tích xanh. Xu hướng Hậu môn. Chem., 50, 78–84. esnik, J.
´ ´
Tobiszewski, M., Sulej, A.-M., Kupska, M., Gorecki, T., Nami J. Chromatogr. A., (2013) Sắc ký xanh. Plotka, J.,
1307, 1–
20.
Koel, M. (2016) Chúng ta có cần hóa học phân tích xanh không? Green Chem., 18, 923–931.
´ ´
Tobiszewski, M., Marc, M., Galuszka, A., Nami esnik, J. (2015) Số liệu hóa học xanh có tài liệu tham khảo đặc biệt
hóa học phân tích xanh. Phân tử, 20, 10928–

10926.
Keith, LH, Gron, LU, Young, JL (2007) Các phương pháp phân tích xanh. hóa học. Rev., 107, 2695–2708. Galuszka,
´
A., Konieczka, P., Migaszewski, Z., Namiesnik, J. (2012) Thang sinh thái phân tích để đánh giá tính xanh của quy
trình phân tích. Xu hướng Hậu môn. Chem., 37, 61–72.
Capello, C., Fischer, U., Hungerbuhler, K. (2007) Dung môi xanh là gì? Một khuôn khổ toàn diện cho
đánh giá môi trường của dung môi. Green Chem., 9, 927–
934.
Funari, CS, Carneiro, RL, Cavalheiro, AJ, Hilder, EF (2014) Sự đánh đổi giữa quá trình phân tách, phát hiện và tính
bền vững trong dấu vân tay sắc ký lỏng. J. Sắc ký đồ. A., 1354, 34–42.
Swanson, MB, Davis, GA, Kincaid, LE, Schultz, TW, Bartmess, JE, Jones, SL, George, EL (1997) Một phương pháp sàng lọc để xếp hạng
và chấm điểm các hóa chất theo tác động tiềm ẩn đối với sức khỏe con người và môi trường.
môi trường. chất độc. Chem., 16, 372–

383.
´
Tobiszewski, M., Namiesnik, J. (2015) Chấm điểm các dung môi được sử dụng trong phòng thí nghiệm phân tích theo độc tính của chúng
và nguy cơ phơi nhiễm. Ecotox. môi trường. An toàn, 120, 169–

173.
Helmy, R., Hartman, R., Al-Sayah, M., Welch, CJ (2011) Phương pháp phân tích cường độ âm lượng (AMVI): A
thước đo hóa học xanh cho phương pháp HPLC trong ngành dược phẩm. Green Chem., 13, 934–
939. Raynie, DE, Driver,
JL (2009) Đánh giá xanh về phương pháp hóa học, Hội nghị kỹ thuật và hóa học xanh thường niên lần thứ 13, College Park,
MD, Hoa Kỳ. Armenta, S., Garrigues, S., de la Guardia,
M. (2015) Vai trò của kỹ thuật chiết xuất xanh trong hóa học phân tích xanh. Xu hướng Hậu môn. Chem., 71, 2-8 (2015).

´ ´
Tobiszeweski, M., Mechlinska, A., Zygmunt, B., Nami esnik, J. (2009) Hóa học phân tích xanh trong chuẩn bị mẫu để xác
định vết ô nhiễm hữu cơ. Xu hướng Hậu môn. Chem., 28, 943–
961. Devore, JL, Farnum, NR (1999) Thống
kê ứng dụng cho các kỹ sư và nhà khoa học, Duxbury Press tại
Brooks/Cole Publishing Co., Pacific Grove, CA, USA.
Miller, JC, Miller, JN (2000) Statistics and chemometrics for analysis chemistry – 4th Ed., Prentice-Hall,
Thượng nguồn sông Saddle, NJ, Hoa
Kỳ. Ferguson, PD, Harding, M. (2011) Các cân nhắc về hóa học xanh đối với việc chuẩn bị mẫu trong quá trình chuẩn
bị mẫu cho các dạng bào chế dược phẩm. B. Nickerson (Biên tập), Springer, New York, 333–354. Spietelun,
´
A., Marcinkowski, L., de la Guardia, M., Namiesnik, J. (2013) Những phát triển gần đây và xu hướng tương lai trong vi
chiết pha rắn hướng tới hóa học phân tích xanh. J. Sắc ký đồ. A., 1321, 1–
13.
Bendicho, C., De La Calle, I., Pena, F., Costas, M., Cabaleiro, N., Lavilla, I. (2012) Siêu âm hỗ trợ
tiền xử lý mẫu rắn trong bối cảnh hóa học phân tích xanh. Xu hướng Hậu môn. Chem., 31, 50–60. Vidal, L., Riekkola, M.-
L., Canals, A. (2012) Vật liệu biến đổi chất lỏng ion để chiết và tách pha rắn: Đánh giá. hậu môn. Chim. Acta., 715, 19–41.
Ho, T. Zhang, D., Hantao, LW, Anderson, JL (2014) Chất
lỏng ion trong Hóa phân tích: Nguyên tắc cơ bản,
Những tiến bộ và triển vọng. hậu môn. Chem., 86, 262–

285.
Patil, VP, Gaikwad, AD, Kulkarni, VS, Kawade, RV, Kale, SH (2012) Hóa học phân tích xanh: Tổng quan. dược phẩm. hậu môn.
& Chất lượng. Assur., 2, 58–65. Ho, TD, Canestraro,
JJ, Anderson, JL (2011) Chất lỏng ion trong quá trình vi chiết pha rắn: Đánh giá. hậu môn.
Chim. Acta, 695, 18–
43.
´
Melnyk, A., Wolska, L., Namiesnik, J. (2014) Chiết xuất đông tụ như một kỹ thuật xanh cho mẫu
chuẩn bị cho việc phân tích các hợp chất hữu cơ. J. Sắc ký đồ. A., 1339, 1–
12.
Yang, Y., Belghazi, M., Lagadec, A., Miller, DJ, Hawthorne, SB (1998) Rửa giải các chất hòa tan hữu cơ từ
chất hấp thụ phân cực khác nhau sử dụng nước cận tới hạn. J. Sắc ký đồ. A., 810, 149–159.
´
Desfontaine, V., Guillarme, D., Francotte, E., Novakov ´ a, L. (2015) Sắc ký lỏng siêu tới hạn trong
phân tích dược phẩm. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 113, 56–
71.
Ghosh, C. (2012) Phân tích sinh học xanh: một số ý tưởng đổi mới hướng tới các kỹ thuật phân tích xanh. Phân tích sinh học, 4,
1377–1391.
Kaljurand, M., Koel, M. (2011) Những tiến bộ gần đây về phân tách phân tích làm xanh. chí mạng. Mục sư Hậu môn. hóa học.,
41, 2–
20.
Peterson, EA, Dillon, B., Raheem, I., Richardson, P. Richter, D., Schmidt, R., Sneddon, HF (2014)
Sắc ký bền vững (một oxymoron?). Green Chem., 16 (9), 4060–4075.
Raymond, MJ, Slater, CS, Savelski, MM (2014) Phương pháp tiếp cận LCA để phân tích các vấn đề lãng phí dung môi trong
ngành công nghiệp dược phẩm. Green Chem., 12 (10), 1826–

1834.
Giaquinto, JR, Samide, MJ (2013) Làm sạch và tái chế pha động để phân tách sắc ký.
Hóa học bền vững ACS. Tiếng Anh, 1 (10), 1225–1230.

´
Tobiszewski, M., Namiesnik, J. (2012) Các phương pháp sắc ký trực tiếp trong bối cảnh phân tích xanh
hoá học. Xu hướng Hậu môn. Chem., 35, 67–

73.
Welch, CJ, Wu, N., Biba, M., Hartman, R., Brkovic, T., Gong, X., Helmy, R., Schafer, W., Cuff, J., Pirzada, Z. ,
Zhou, L. (2010) Sắc ký phân tích hóa xanh. Xu hướng Hậu môn. Chem, 29, 667–
680.
Satti, AJ, Espeel, P., Martens, S., Van Hoeylandt, T., Du Prez, FE, Lynen, F. (2015) Nhiệt độ có thể điều chỉnh
sắc ký lỏng đáp ứng thông qua quá trình cố định poly(N-isopropylacrylamide) dựa trên thiolactone.
J. Sắc ký đồ. A, 1426, 126–132.
Alpert, AJ (1990) Sắc ký tương tác ưa nước để tách peptit, axit nucleic và
các hợp chất phân cực khác. J. Chromatogr., 499, 177–

196.
Pereira, AS, Giron, AJ, Admasu, E., Sandra, P. (2010) Sắc ký tương tác ưa nước màu lục sử dụng
hỗn hợp ethanol-nước-carbon dioxide. J. Khoa học tháng 9, 33, 834–

837.
Welch, CJ, Nowak, T., Joyce, LA, Regalado, EL (2015) Sắc ký cocktail: Cho phép di chuyển
của HPLC sang môi trường phi phòng thí nghiệm. Hóa học bền vững ACS. Tiếng Anh, 3, 1000–1009.
Snyder, LR (1978) Phân loại tính chất dung môi của chất lỏng thông thường. J. Sắc ký đồ. khoa học., 16,
223–234.
Asssassi, AL, Roy, C.-E., Perovitch, P., Auzerie, J., Hamon, T., Gaudin, K. (2015) Phương pháp phân tích xanh
phát triển để phân tích statin. J. Sắc ký đồ. A, 1380, 104–111.

`
Bousses, C., Ferey, L., Vedrines, E., Gaudin, K. (2015) Sử dụng sự kết hợp sáng tạo giữa chất lượng theo thiết kế và phương
pháp tiếp cận hóa học phân tích xanh để phát triển phương pháp UHPLC chỉ thị độ ổn định trong dược phẩm các sản phẩm.
J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 115, 114–122.

˘
Tache, T., Udrescu, S., Albu, F., Micale, F., Medvedovici, A. (2013) Xanh hóa các ứng dụng dược phẩm của
sắc ký lỏng thông qua việc sử dụng hỗn hợp propylene carbonate-ethanol thay vì acetonitril làm chất điều chỉnh hữu cơ trong
pha động. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 75, 230–238.
Vaher, M., Koel, M. (2005) Các chất điện phân nền cụ thể cho điện di mao quản không chứa nước.
J. Sắc ký đồ. A., 1068, 83–88.
Snyder, LR (1974) Phân loại tính chất dung môi của chất lỏng thông thường. J. Chromatogr., 92, 223–230. Taygerly, JP, Miller,
LM, Yee, A., Peterson, EA (2012) Hướng dẫn thuận tiện để giúp lựa chọn thay thế
dung môi cho dichloromethane trong sắc ký. Green Chem., 14, 3020–
3025.
Nuttall, WJ, Clarke, RH, Glowacki, BA (2012) Tài nguyên: Ngừng lãng phí helium. Thiên nhiên, 485, 573–575. I. Sample, I.
(2016) “Khí helium khổng lồ được tìm thấy ở phía đông châu Phi giúp ngăn chặn tình trạng thiếu hụt y tế.” The Guardian, ngày
28 tháng 6. Klee, MS, Blumberg, LM (2002) Các khía cạnh lý thuyết và thực tiễn của phương pháp và sắc ký khí nhanh
dịch. J. Sắc ký đồ. Khoa học, 40, 234–247.
Macdonald, SJ, Wheeler, D. (1998) Lập trình nhiệt độ nhanh bằng cách gia nhiệt bằng điện trở với các GC thông thường. Là.
Lab., 30 (22), 27–

40.
Sloan, KM, Mustacich, RV, Eckenrode, BA (2001) Phát triển và đánh giá khí khối lượng nhiệt thấp
sắc ký để phân tích GC-MS pháp y nhanh chóng. lĩnh vực hậu môn. hóa học. Technol., 5, 288–301.
Van der Vorst, G., van Langenhove, H., De Paep, F., Aeltermann, W., Dingenen, J., De Wulf, J. (2009) Phân tích vòng đời
exergetic để lựa chọn quy trình tách sắc ký trong ngành dược phẩm: HPLC điều chế so với SFC điều chế. Chè Xanh. 11, 1007–
1012. Hicks, MB, Regalado, EL, Tan, F., Gong, X., Welch, CJ (2016) Sắc ký lỏng
siêu tới hạn để phân tích GMP nhằm hỗ trợ các hoạt động sản xuất và phát triển dược phẩm. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 117, 316–324.
Dispas, P., Lebrun, B., Andri, E., Rozet, A., Hubert, P. (2014) Chiến lược tối ưu hóa phương pháp mạnh mẽ – Một công cụ hữu
ích để chuyển giao phương pháp: Trường hợp của SFC. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 88, 519–
524.
West, C., Lesellier, E. (2013) Ảnh hưởng của thành phần pha động đến khả năng lưu giữ và chọn lọc trong achirus
sắc ký lỏng siêu tới hạn. J. Sắc ký đồ. A., 1302, 152–162. West, C.,
´
Khalikova, MA, Lesellier, E., Heberger, K. (2015) Tổng các khác biệt về xếp hạng để xếp hạng các pha tĩnh được sử dụng trong
sắc ký lỏng siêu tới hạn cột nén. J. Sắc ký đồ. A., 1409, 241–250. Dispas, A., Lebrun, P., Sassiat, P., Ziemons,
´
E., Thiebaut, D., Vial, J., Hubert, P. (2012) Sáng tạo xanh
phát triển sắc ký lỏng siêu tới hạn để xác định các hợp chất phân cực. J. Sắc ký đồ. A., 1256, 253–260.
Tarafder, A., Hudalla, C., Iraneta, P., Fountain, KJ (2014) Quy tắc chia tỷ lệ trong sắc ký lỏng siêu tới hạn.
1. Lý thuyết cho các hệ thống độc quyền. J. Sắc ký đồ. A, 1362, 278–293.
De Klerck, K., Mangelings, D., Vander Heyden, Y. (2012) Sắc ký lỏng siêu tới hạn để phân tách dược phẩm. J.Pharm.
sinh học. Hậu môn., 69, 77–92.
Landagaray, C., Vaccher, S., Yous, A., Lipka, E. (2016) Thiết kế các thí nghiệm để phân tách đồng phân đối quang trong
sắc ký lỏng siêu tới hạn. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 120, 297–
305.
Simon, LL, Pataki, H., Marosi, MG, Meemken, F., Hungerbuhler, K., Baiker, A., Tummala, S., Glennon, B., Kuentz, M.,
Steele, G., Kramer, HJM, Rydzak, JW, Chen, Z., Morris, J., Kjell, F., Singh, R., Gani, R., Gernaey, KV, Louhi-
Kultanen, A., O'Reilly, MJ, Sandler, N., Antikainen, O., Yliruusi, J., Frohberg, P., Ulrich, J., Braatz, RD, Leyssens,
T., von Stosch, M., Oliveira, R., Tan, RBH, Wu , H., Khan, M., O'Grady, D., Pandey, A., Westra, R., Delle-Case, E., Pape,
D., Angelosante, D., Maret, Y., Steiger, O., Lenner, M., Abbou-Oucherif,
K., Nagy, ZK, Lister, JD, Krishna Kamaraju, V., Chiu, M.-S. (2015) Đánh giá các xu hướng công nghệ phân tích quy trình (PAT) gần đây:
Đánh giá của nhiều tác giả. tổ chức Quá trình. độ phân giải Dev., 19, 3–
62.
FDA. (2004) Hướng dẫn PAT cho ngành công nghiệp – khuôn khổ phát triển dược phẩm sáng tạo,
sản xuất và đảm bảo chất lượng. 16.

´
Tobiszewski, M., Mechlinska, A., Namiesnik, J. (2010) Hóa học phân tích xanh—lý thuyết và thực hành. hóa học.
Sóc. Rev., 39, 2869–

2878.
Chanda, AM, Daly, DA, Foley, MA, LaPack, S., Mukherjee, JD, Orr, GL, Reid, DR Thompson, A., Ward, HM (2015) Quan điểm của ngành
công nghệ phân tích quy trình: Công cụ và các ứng dụng trong phát triển API. tổ chức Quá trình. độ phân giải Dev., 19, 63–83.
De Bleye, C., Chavez, P.-F., Mantanus, J., Marini, R.,
Hubert, Ph., Rozet, E., Ziemons, E. (2012) Đánh giá phê bình về quang phổ cận hồng ngoại xác nhận phương pháp trong các ứng dụng dược
phẩm. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 69, 125–

132.
Dalitz, F., Cudaj, M., Maiwald, M., Guthausen, G. (2012) Giám sát quá trình và phản ứng bằng NMR trường thấp
quang phổ. Ăn xin. hạt nhân. Magn. cộng hưởng. Spectrosc., 60, 52–70.
Holmes, N., Akien, GR, Savage, RJD, Stanetty, C., Baxendale, IR, Blacker, AJ, Taylor, BA, Woodward, RL, Meadows, RE, Bourne, RA (2016)
Khối phổ định lượng trực tuyến để tối ưu hóa thích ứng nhanh chóng của các lò phản ứng dòng chảy tự động. Phản ứng. hóa học.
Tiếng Anh, 1, 96–

100.
Schaefer, C., Lecomte, C., Clicq, D., Merschaert, A., Norrant, E., Fotiadu, F. (2013) Cận hồng ngoại trực tuyến
quang phổ như một công cụ công nghệ phân tích quy trình (PAT) để kiểm soát quá trình kết tinh API hạt giống công nghiệp.
J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 83 194–

201.
Csontos, I., Pataki, H., Frakas, A., Bata, H., Vajna, B., Nagy, ZK, Keglevich, G., Marosi, GJ (2015) Kiểm soát phản hồi phản ứng oxy
hóa bằng Raman nội tuyến quang phổ. tổ chức Quá trình. độ phân giải Dev., 19, 189–
915. Hart, RJ, Pedge, NI, Steven,
AR, Sutcliffe, K. (2015) Theo dõi tại chỗ quá trình ether hóa không đồng nhất
phản ứng bằng quang phổ Raman định lượng. tổ chức Quá trình. độ phân giải Dev., 19, 196–
202.
Hart, R. Herring, A. Howell, GP, McKeever-Abbas, B., Pedge, N., Woodward, R. (2015) Giám sát và kiểm soát thời gian thực các tạp chất
quan trọng của quy trình trong quá trình sản xuất Fostamatinib Disodium. tổ chức Quy trình Res.
Dev., 19, 537–542.
Welch, CJ, Gong, X., Cuff, J., Dolman, S., Nyrop, J., Lin, F., Rogers, H. (2009) Phân tích trực tuyến về dòng chảy
dòng sử dụng HPLC microflow. Quy trình hữu cơ độ phân giải Dev., 13, 1022–1025.
Bristow, TWT, Ray, AD, O'Kearney-McMullan, A., Lim, L., McCullogh, B., Zammataro, A. (2014) Giám sát trực tuyến quá trình tổng hợp hóa
học dòng chảy liên tục bằng cách sử dụng một thiết bị di động, nhỏ khối phổ kế dấu chân. Mứt.
Sóc. Khối lượng. Quang phổ. doi: 10.1007/s13361-014-0957-1
Harry, EL, Bristow, AWT, Wilson, ID, Creaser, CS (2011) Theo dõi phản ứng thời gian thực bằng cách sử dụng
ion-độ linh động-khối phổ. Nhà phân tích, 136, 1728–1732.
Yan, X., Bain, RM, Li, Y., Qiu, R., Flick, TG, Cooks, RG (2016) Phép đo khối phổ ion hóa phun điện cảm trực tuyến như một công cụ
công nghệ phân tích quy trình để theo dõi lộ trình tổng hợp đến anagliptin .
Quy trình hữu cơ độ phân giải Dev., 20, 940– 947.

¨
Danieli, E., Perlo, J., Duchateau, ALL, Verzijl, GKM, Litvinov, VM, Blumich, B., Casanova, F. (2014)
Giám sát trực tuyến các phản ứng hóa học bằng cách sử dụng quang phổ cộng hưởng từ hạt nhân để bàn.
hóa học. vật lý. Chem., 15, 3060–3066.

¨
Goldbach, M., Danieli, E., Perlo, J., Kaptein, B., Litvinov, VM, Blumich, B., Casanova, F., Duchateau, ALL
(2016) Chuẩn bị thuốc thử Grignard từ kim loại magiê trong điều kiện dòng chảy liên tục và theo dõi trực tuyến bằng quang phổ NMR.
Tetrahedron Lett., 57, 122–

125.
Blanazs, A., Bristow, TWT, Coombes, SR, Corry, T., Nunn, M., Ray, AD (2016) Khớp nối và
tối ưu hóa quang phổ cộng hưởng từ hạt nhân trực tuyến và quang phổ khối để giám sát quy trình nhằm bao quát phạm vi nồng độ
quy trình rộng. Magn. cộng hưởng. hóa học. doi: 10.1002/mrc.4484 Uhlig, T., Kyprianou, T., Martinelli, FG, Oppici, CA,
Heiligers, D., Hills, D., Calvo, XR, Verhaert, P. (2014)
Sự xuất hiện của peptide trong kinh doanh dược phẩm: từ thăm dò đến khai thác. EuPA Open Proteomics, 4, 58–69.
Haselberg, R., de Jong, GJ, Somsen, GW (2013) CE-MS để phân tích các protein nguyên vẹn. điện di,
34, 99–112.
Van Eeckhaut, A., Mangelings, D. (2015) Hướng tới các kỹ thuật phân tích thân thiện với môi trường hơn để định lượng
tuyệt đối peptit trong các mẫu dược phẩm và sinh học. J.Pharm. sinh học. Hậu môn., 113, 181–188.
Cervera, AE, Petersen, N., Lantz, AE, Larsen, A., Gernaey, KV (2009) Ứng dụng của cận hồng ngoại
quang phổ để theo dõi và kiểm soát nuôi cấy tế bào và lên men. công nghệ sinh học. Prog., 25, 1561–
1581.
Pena-Pereira, F., Lavilla, I., Bendicho, C. (2010) Kỹ thuật vi chiết pha lỏng trong
khuôn khổ của hóa học xanh. Xu hướng Hậu môn. Chem., 29, 617-628 (2010).
Maes, K., Van Liefferinge, J., Viaene, J., Van Schoors, J., Van Wanseele, Y., Bechade, G., Chambers, EE,
Morren, H., Michotte, Y., Vander Heyden, Y., Claereboudt, J., Smoulders, I., Van Eeckhaut, A. (2014) Cải thiện độ nhạy của
phép phân tích khối phổ song song sắc ký lỏng hiệu năng cực cao nano của neuropeptide nồng độ thấp bằng cách giảm sự hấp
phụ không đặc hiệu và tối ưu hóa dung môi tiêm.
J. Sắc ký đồ. A., 1360, 217-228.
Yin, H., Killeen, K. (2007) Các khía cạnh cơ bản và ứng dụng của Agilent HPLC-Chip. J. Khoa học tháng 9, 30,
1427–
1434.
Houbart, V., Cobraiville, G., Lecomte, F., Debrus, B., Hubert, P., Fillet, M. (2011) Phát triển một
phương pháp sắc ký lỏng nanao trên phương pháp khối phổ song song chip để định lượng hepcidin có độ nhạy cao. J.
Sắc ký đồ. A., 1218, 9046–9054. Groskreutz, SR,
Swenson, MM, Secor, LB, Stoll, DR (2012) Phân tách đa chiều toàn diện có chọn lọc để nâng cao độ phân giải trong sắc ký lỏng
hiệu năng cao. Phần I: Nguyên lý và thiết bị. J. Sắc ký đồ. A., 1228, 31–
40. Lesellier, E., West, C. (2015) Nhiều
khía cạnh của sắc ký lỏng siêu tới hạn cột đóng gói –
một khía cạnh quan trọng
ôn tập. J. Sắc ký đồ. A., 1382, 2–46.
Zheng, J., Pinkston, JD, Zoutendam, PH, Taylor, LT (2006) Tính khả thi của chất lỏng siêu tới hạn
sắc ký/khối phổ của polypeptit lên đến 40-mer. hậu môn. Chem., 78, 1535–
1545. Tognarelli, A., Tsukamoto, J.,
Caldwell, A., Caldwell, W. (2010) Tách peptide nhanh bằng chất lỏng siêu tới hạn
sắc ký. Phân tích sinh học, 2, 5–7.
Tamizi, E., Jouyban, J. (2014) Độ ổn định đơn giản chỉ ra phương pháp CZE để phân tích actreotide axetat.
Sắc ký, 77, 1347–1357. Lamalle,
C., Servais, AC, Radermecker, RP, Crommen, J., Fillet, M. (2015) Xác định đồng thời insulin và các chất tương tự của nó trong
công thức dược phẩm bằng sắc ký điện động micellar. J.Pharm.
sinh học. Hậu môn., 111, 344–
350.
Zhu, Z., Lu, JJ, Liu, S. (2012) Phân tách protein bằng điện di gel mao quản: Đánh giá. hậu môn. Chim. Hành động.,
709, 21–31.
Gahoual, R., Beck, A., Leize-Wagner, E., Franc¸ois, Y.-N. (2016) Đặc tính điện di mao quản tiên tiến của kháng
thể đơn dòng và các sản phẩm liên quan. J. Sắc ký đồ. B., 1032, 61–
78. Rydzak, JW, White, DE, Airiau,
CY, Sterrbenz, JT, York, BD, Clancy, DJ, Dai, Q. (2015) Đảm bảo công nghệ phân tích quy trình thời gian thực để tổng hợp
dòng oligonucleotide. tổ chức Quá trình. độ phân giải Dev., 19, 203–214.

Ferguson 2018

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

You might also like

Ferguson 2018

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Ferguson 2018

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Machine Translated by Google

Hóa học phân tích xanh

1. Nên áp dụng kỹ thuật phân tích trực tiếp để tránh xử lý mẫu.

9. Nên giảm thiểu việc sử dụng năng lượng.

Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược

HÓA CHẤT XANH

Hóa phân tích xanh - GAC

Kỹ thuật chuẩn bị mẫu xanh Các kỹ thuật phân tích và đo lường

Kỹ thuật chuẩn bị mẫu không Kỹ thuật phân tích trực tiếp

Ứng dụng của môi trường xanh

Ứng dụng thêm các tác nhân nâng cao

Giảm quy mô của

Giảm thiểu sự tiếp xúc của các

. . Đánh giá phương pháp phân tích Để

3 Hóa học phân tích xanh

Tên hợp chất tHV taHV

hiđrocacbon Pentan 23,4 36,4

Xyclohexan 57,9 79,8

Heptan 15.2 20.9

rượu metanol 8,8 15.7

isopropanol 3.9 6,8

Ether dietyl ete 8,7 16

Metyl tert-butyl ete 2.7 3,8

Tetrahydrofuran 9.1 14,9

xeton axeton 1,5 2.6

A-xít hữu cơ Axit formic 25,8 43,0

Este etyl axetat 5.0 7.3

Hydrocarbonclo hoá Dichloromethane 39.3 59,8

1,1,1-Trichloroethane 34,7 49,0

Người khác axetonitril 18,8 26,9

Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược

. . Nghiên cứu điển hình

. . . Phương pháp phân tích Cường độ

. . . So sánh Hồ sơ Xanh Chỉ số

Hình . So sánh các phương pháp phân tích để xác

3 Hóa học phân tích xanh

. . . Chiết rắn-lỏng Đây là

Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược

. . . Chiết xuất chất lỏng-

. . . Chất lỏng đông tụ

. . . Khai thác nước dưới hoặc siêu tới

3 Hóa học phân tích xanh

. . . Chiết xuất chất lỏng siêu

. . Chuẩn bị mẫu sử dụng giá đỡ vững chắc

. . . Chiết xuất pha rắn

Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược

. . . Vi chiết pha rắn Kỹ thuật

. . . Chiết hấp thụ bằng thanh

. Kỹ thuật và phương pháp

. . . Giảm tiêu thụ pha động Giảm thể

GIẢM GIÁ = GỐC × GIẢM

trong đó F là tốc độ dòng chảy và id là đường kính trong.

3 Hóa học phân tích xanh

Kỹ thuật xanh cho tổng hợp hữu cơ và hóa dược

Nhiệt độ nước tinh khiết, °C

. . . Lựa chọn dung môi trong sắc ký lỏng Hầu

3 Hóa học phân tích xanh

200 45°C 7 45°C