НАРОДНА РЕПУБЛИКА БЪЛГАРИЯ

ДЪРЖАВЕН КОМИТЕТ ЗА СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРИ

МИНИСТЕРСКИЯ СЪВЕТ

БДС 14593-78
МЕСО ОТ ПТИЦИ
ВЗЕМАНЕ НА ПРОБИ
НОРМИ И МЕТОДИ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ

Официално издание

София – 1979

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
1. ИЗРАБОТЕН ОТ Главната дирекция за перспексивно развитие и Научноизследователския
институт по контрол на качеството, стандартизацията и метрологията към ДКС
Гл. директор: инж. Л. Димитров
Изпълнители: ст.н.с. к.в.м.н. Ц. Цанов, доц. Л. Георгиев, проф. Ц. Захариев, д-р К.
Герганова

2. ПРЕДСТАВЕН ЗА УТВЪРЖДАВАНЕ ОТ Главна дирекция за перспективно развитие и НИИККСМ

към ДКС

3. ОДОБРЕН 0T Научно-техническия съвет на Главна дирекция за перспективно развитие и

НИИККСМ към ДКС
Председател: доц. Е. Горанова
Членове: ст.н.с. к.в.м.н. д-р Ц. Цанов, инж. М. Стаев, Хр. Христов, к.и.н. В. Демченко,
инж. Д. Терпешев, инж. М. ЦанеВа, к.т.н. Хр. Буров, М. Анадолски, Л. Миланов

4. УТВЪРДЕН ОТ Държавния комитет за стандартизация

Зам. председател: инж. Д. Пенчев

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
УДК 637.54+637.4 Официално издание

БЪЛГАРСКИ ДЪРЖАВЕН СТАНДАРТ БДС 14593-78

НАРОДНА
РЕПУБЛИКА БЪЛГАРИЯ
МЕСО ОТ ПТИЦИ

Препечатването е забранено
---
ДЪРЖАВЕН КОМИТЕТ ЗА ВЗЕМАНЕ НА ПРОБИ
СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРИ Норми и методи за изследване Н 16
МИНИСТЕРСКИЯ СЪВЕТ

Мясо птицы. Отбор образцов и методы Poultry meat. Sampling. Norms and methods for
исследования examination

Стандартът определя начините за вземане на проби, нормите и методите за изследване на

закланите птици.
1. ОБЩИ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. Проби от заклани птици се вземат в следните случаи:
- при извършване на органолептично изследване за определяне на качеството им;
- във всички случаи на съмнение за качеството и годността на птиците.
1.2. За определяне хигиенното състояние на добива, преработката и съхраняването на птичето
месо, доказване наличието на патогенни и други микроорганизми и при съмнение за причинено
хранително отравяне закланите птици се подлагат на микробиологично изследване.
1.3. Вземането на проби се извършва от еднородна партида.
1.3.1. Под еднородна партида в предприятието-производител се разбира птици от една порода
/бройлери, кокошки, пуйки, патици, гъски/ и заготовка /грил или братфертиг/ и качество, добити в един
ден и от една смяна.
1.3.2. В търговската мрежа еднородна партида представляват птиците, получени с един документ

Неспазването на стандарта се преследва по закона

/свидетелство за годност или експертен лист/, разделени по вид и качество.
1.4. Пробите се вземат, след като се провери външното състояние на опаковките и се установи
еднородността на партидата. В случай че партидата е смесена, тя се пресортира от собственика.
1.5. Месо от птици, преценено органолептично като месо със съмнителна преснота, се подлага на
бактериоскопически и химически анализ
2. ПРАВИЛА ЗА ВЗЕМАНЕ НА ПРОБИ
2.1. Проби за извършване на органолептично, химическо, бактериоскопско или микроскопическо
изследване се вземат, като се отварят най-малко 2 % от касите /дървени или велпапени/ в партидата и
от всяка от тях се вземат по 2 птици.
2.2. При партиди, където броят на касите е от 1 до 50, се отваря най-малко една каса.
2.3. Всяка взета проба се обвива поотделно в пергаментова хартия или найлонов плик.
2.4. Когато пробите се изпращат за изследване в лаборатория извън мястото или предприятието,
откъдето се вземат, се опаковат в сандъче или пакет.
2.5. Проби, предназначени за микробиологично изследване, се поставят в сандъче или кутия с
памук, лигнин или дървени трици, за да се изключи разнасяне на инфекцията.
2.6. Проби, които се изпращат за изследване в друга лаборатория, се запечатват или пломбират.
2.1. Всички проби се придружават от пробен акт или писмо със следните данни:

Внесен от Държавния комитет за Утвърден на Влиза в сила от

стандартизация 1978-08-2 1979-06-01

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.2, БДС 14593-78

- номер на пробата;
- дата и час на вземане на пробата;
- вид и качество на продукта;
- кога и къде е произведен или получен продуктът;
- общо количество на партидата;
- къде се изпраща пробата;
- цел на изследването;
- длъжност и подпис на лицето, взело пробата;
- печат.
2.8. При постъпване на пробите в лабораторията за изследване се отбелязват:
- датата и времето на постъпването;
- състоянието на пробата;
- температурата в дълбочина на гръдния мускул.
2.9. От момента на вземането до започване на изследването пробите се съхраняват при
температура от 0 до 4 °С. Изследването за преснота и годност на охладеното птиче месо трябва да
приключи до 12 h от момента на вземането на пробата.
2.10. Изследването на замразени птици се извършва след тяхното пълно дефростиране при
стайна температура.
3. ОРГАНОЛЕПТИЧНО ИЗСЛЕДВАНЕ
3.1. Органолептичното изследване на закланите птици се извършва на дневна светлина, като се
определят:
3.1.1. Външен вид и цвят.
Извършва се оглед на външната повърхност на птичия труп, състоянието на подкожната и
вътрешната тлъстина и гръдно-коремната серозна обвивка. Лепкавостта се установява чрез опипване, а
влажността - чрез залепване на късче филтърна хартия.
3.1.2. Консистенция
Определя се, като повърхностно птичият труп се притиска с палец в областта на гръдния и
тазобедрените мускули и се следи за изравняването на получената вдлъбнатина.
3.1.3. Състояние на мускулатурата при разрез
Определя се, като се правят разрези на гръдната и тазобедрена мускулатура напречно на
мускулните влакна.
3.1.4. Миризма
Миризмата на повърхностните тъкани и гръдно-коремната празнина се определя органолептично.
За определяне на миризмата в дълбочина се прави разрез в мускулатурата, като особено внимание се
обръща на тъканите в близост до костите.
Определя се миризмата и на вътрешните тлъстини. Това става, като се вземат около 20 g
вътрешни мазнини, нарязват се ситно с ножица, стопяват се в чашка на водна баня, след което се
охлаждат до 20 °С.
3.1.5. Прозрачност и аромат на бульона
Месният бульон се получава, като от всички слоеве на мускулите се изрязват от 70 до 80 g .
Смила се двукратно на машина на кайма или се нарязва с ножица на съвсем ситни парченца. От

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.3, БДС 14593-78

полученото кълцано месо се претеглят 20 g, поставят се в колба с вместимост 100 cm3 и се заливат с
60 сm3 дестилирана вода. Колбата със съдържанието се разбърква, покрива се с часовниково стъкло и се
оставя на кипяща водна баня за 10 min.
Ароматът на месния бульон се определя по време на загряването до температура 80 – 85 °С чрез
парите, които се отделят при откриване на колбата.
Прозрачността на бульона се определя визуално след наливане на 20 cm3 бульон в епруветка или
цилиндър с диаметър 2 cm3.
3.2. Резултатите от органолептичното изследване се съпоставят с характерните признаци,
отразени в табл. 1.
Таблица 1

Характерни признаци на птичето месо

Показатели
Прясно Съмнително В процес на развала
1 2 3 4
1. Външен вид и цвят
а. Външна Суха, има бледо-жълт Влажна на места, лепка- Ослизяване, лепнене, бледо-
повърхност на цвят с розов оттенък вост в отделни части жълт цвят със сив оттенък, на
трупа /под крилата и кожните места с тъмни или зеленикави
гънки/, бледожълт цвят петна
със сив оттенък
б. Подкожни и Бледожълт или жълт цвят Бледожълт или жълт Бледожълт цвят с наличие на
вътрешни тлъстини цвят сив оттенък във вътрешната
тлъстина
2. Серозна обвивка Влажна, блестяща, без Без блясък, лепнеща, Покрита със слуз, възможно
на гръднокорем- ослизяване и плесени възможно е наличие на наличие на плесени
ната празнина ослизяване и плесени
3. Мускулатура при Сочна, не оставя влажно Влажна, оставя влажно Влажна, оставя влажно петно
разрез петно на филтърна хар- петно на филтърна на филтърна хартия, лепне,
тия, бледорозов цвят при хартия, леко лепнене, потъмняване на цвета
кокошки и пуйки и черве- по-тъмен цвят отколкото
никав - при патици и при свежите птици
гъски
4. Консистенция Плътна, еластична, Намалени плътност и Мускулите са отпуснати, при
вдлъбнатината, образува- еластичност, вдлъбнати- натискане с палец се образува
на при натискане с палец, ната, образувана при трайна вдлъбнатина
се изразява бързо натискане с палец, се
изразява до 1 min
5. Миризма Приятна, специфична за На спарено, особено в Изразена гнилостна миризма
свежо месо от птици гръдно-коремната както по повърхността, така и
празнина в дълбочина на мускулатура-
та. Най-силно изразена в
гръдно-коремната празнина
6. Аромат и Прозрачен или леко Мътен с наличие на
Прозрачен и приятен
прозрачност на замътен, със слаба множество парцалчета и
аромат
бульона неприятна миризма силно неприятна миризма

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.4, БДС 14593-78

4. МИКРОСКОПИЧЕСКО /БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКО/ ИЗСЛЕДВАНЕ

4.1. Същност на метода
Основава се на определяне количеството на бактериите и степента на разграждане на мускулната
тъкан.
4.2. Изготвяне на отпечатъчен препарат
Повърхността на тазобедрената мускулатура се обгаря с нажежена шпатула. Със стерилни
ножици се изрязва парче с размери 1 - 1,5 cm. След това една от страничните и дълбоката страна на
парчето се притискат поотделно върху предметно стъкло /получават се два отпечатъчни препарата/.
Препаратите се подсушават и фиксират трикратно на пламък, след което се оцветяват по Грам. Най-
малко на пет зрителни полета се броят бактериите и се взема средният резултат
4.3. Отчитането на резултата става по показателите, залегнали в табл. 2.
Таблица 2

Състояние на
Показатели
месото
Прясно На отпечатъчните препарати не се намират микроби или има единични коки и
пръчици. На стъклото липсва натрупване на разпаднала се мускулна тъкан.
Съмнително В едно зрително поле се откриват не повече от 30 коки или пръчици и следи от
прясно разпадната мускулна тъкан.
В процес на В едно зрително поле се откриват над 30 микроби с преобладаване на пръчиците
развала и голямо количество разпаднала се мускулна тъкан

5. МЕТОДИ ЗА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКО ИЗСЛЕДВАНЕ

5.1. Доказване наличие на амоняк и амониеви соли
Реакцията се основава на способността на амоняка и амониевите соли да образуват с реактива на
Неслер живачно-амониев йодид - вещество, което има тъмножълт цвят.
5.1.1. Получаване на обща смивка
Предназначената за изследване птица се поставя в чист полиетиленов плик и се претегля с
точност до 1 g. След това в плика се прибавя толкова милилитра дестилирана вода, колкото грама тежи
птицата. Разклаща се ръчно 50 пъти. В колба се филтрират около 50 cm3 от смивката.
5.1.2. Получаване на месен извлек
Взема се свободна от тлъстини и сухожилия мускулатура от областта на бута. Нарязва се ситно е
ножица. Премерват се 5 g и се поставят в колба. Прибавят се 20 cm3 преварена дестилирана вода и се
оставя за 15 min , през което време се разбърква трикратно. Полученият месен извлек се филтрира.
5.1.3. Получаване реактива на Неслер
Претеглят се 10 g калиев йодид и се разтварят в 10 сm3 гореща дестилирана вода. Към разтвора
се прибавя горещ наситен воден разтвор на сублимат, докато се получи червена утайка. Течността се
филтрира и към филтрата се прибавят 30 g калиева основа, разтворена в 80 cm3 дестилирана вода и след
това няколко /2 - 3/ сm3 наситен разтвор на сублимат. След охлаждане разтворът се долива до 200 cm3 с
дестилирана вода. Реактивът се съхранява в тъмно стъкло със стъклени запушалки на хладно място.
Използва се горният бистър слой на реактива.
5.1.4. Извършване на реакцията
В две епруветки се поставя поотделно по 1 сm3 от общата смивка и от месния извлек. Прибавя се
на капки /от 1 до 10/ от реактива на Неслер.
5.1.5. Отчитане на резултата

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.5, БДС 14593-78

Прясно месо - смивката и извлекът са без промени.

Съмнително прясно - получава се жълто-зелено оцветяване и потъмняване на смивката и извлека.
Месо в процес на развала - смивката и извлекът добиват жълто-оранжево оцветяване. Наблюдава
се силно помътняване, образуване на парцалчета или утайка.
5.2. Определяне количеството на свободния амоняк
5.2.1. Принцип на метода
С помощта на наситен разтвор от калиев карбонат от проба птиче месо се изтласква амонякът,
който се абсорбира в разтвор от борна киселина. Чрез титриране на разтвора от борна киселина с 0,01 n
сярна киселина се определя количеството на свободния амоняк.
5.2.2. Необходими пособия и химикали
Микродифузионен уред по Конвей /паничка/.
1 %-ен разтвор на борна киселина: 10 g борна киселина се разтварят в 100 сm3 мерителна колба
c 200 cm3 етилов алкохол и 700 сm3 дестилирана вода. След разтварянето се прибавят 10 сm3 индикатор.
Полученият разтвор трябва да има слабочервен цвят. Обемът на мерителната колба след темпериране на
разтвора се допълва с дестилирана вода до 1000 cm3.
Разтвор от индикатор: приготвя се, като 0,033 g бромкрезолово зелено и 0,0066 g метилрот се
разтварят в 100 сm3 етилов алкохол.
Наситен разтвор на калиев карбонат: 52,8 g безводен калиев карбонат се разтварят в 47,2 cm3
дестилирана вода.
0,01 n разтвор на сярна киселина.
Вазелинова паста.
5.2.3. План изпълнение
Шлифованият край на микродифузионния уред на Конвей се намазва леко с вазелинова паста.
След това в централния кръг на уреда се отпипетирва 1 сm3 1 %-ен разтвор на борова киселина. На
единия край на външния кръг се поставя 1 g проба смляно птиче месо. На обратната страна на външния
кръг се отпипетирва 1 сm3 наситен разтвор на калиев карбонат, без да се смесва с пробата. След това
уредът се закрива със стъклена плоча /или часовниково стъкло/, като се притиска, за да прилепне с
намазания с вазелин ръб на уреда. Пробата се смесва с наситения разтвор от калиев карбонат и уредът
се оставя за 3 h при стайна температура /20 – 25 °С/. След тричасова инкубация стъклената плоча /или
часовниковото стъкло/ се отстранява, към разтвора от борна киселина /в централния кръг/ се прибавя
1 капка от индикатора и се титрира от микробюрета с 0,01 n сярна киселина. След всяка капка от
киселина разтворът се размесва добре със стъклена пръчка. Титрира се до слабочервено оцветяване на
разтвора.
5.2.4. Изчисление
Съдържанието на свободен амоняк, в mg на 100 g птиче месо, се изчислява по формулата
X = а. 17,0324,
където ''а'' е употребеното количество 0,01 n сярна киселина за титриране, в сm3.
5.3. Определяне киселинното число на тлъстините
Киселинното число изразява количеството калиева основа, в милилитри, необходимо за
неутрализиране на свободните мастни киселини, съдържащи се в 1 g мазнина.
5.3.1. Подготовка на тлъстината
Вземат се 20 g вътрешна тлъстина, нарязват се ситно с ножица, разтопяват се в чашка на водна
баня, филтрират се през четири слоя марля и се охлаждат до 20 °С.

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.6, БДС 14593-78

5.3.2. Получаване на неутрален спиртно-етерен разтвор

Към две части етилов етер и една част 96° етилов алкохол се прибавят няколко капки 1 %-ен
спиртен разтвор на фенолфталеин. Титрира се с 0,1 n калиева ИЛИ натриева основа до получаване на
слаборозово оцветяване, неизчезващо в продължение на 1 min.
5.3.3. Извършване на определянето
В ерленмайерова колба се претеглят на аналитична везна 1 - 2 g стопена и филтрирана тлъстина.
Прибавят се 50 cm3 от неутралната спиртно-етерна смес. Колбата се разклаща до пълно разтваряне на
тлъстината. Ако пълно разтваряне не се получи, колбата се нагрява леко на водна баня при постоянно
бъркане. След охлаждане до 20 °С се извършва бързо титриране с 0,1 n разтвор на калиева или натриева
основа до появяване на слаборозово оцветяване, неизчезващо в продължение на 1 min.
Киселинното число се изчислява по формулата
V. K. 0,56
Х= ,
m
където:
V - количеството 0,1 n разтвор КОН, в cm3, изразходвано при титрирането;
К - поправката за разтвора на КОН, ако не е точно 0,1 n;
0,56 - количеството КОН, което се съдържа в 1 cm3 0,1 n разтвор КОН;
m - масата на мазнините, в g.
Разликата между две успоредни определяния не трябва да превишава 0,1 n.
5.3.4. Преценка
Пресни тлъстини - имат киселинно число до 1 mg КОН. Тлъстини в процес на развала - имат
киселинно число над 1 mg КОН.
5.4. По метода на ЛИ /арбитражен/ - извършва се по БДС 1328-72.
5.5. Определяне прекисното число на тлъстините
Прекисното число изразява количеството йод, отделено от прекисите, съдържащи се в 100 g
мазнина.
5.5.1. Извършване на определянето
На аналитична везна се претеглят в ерленмайерова колба 1 - 2 g тлъстина, приготвена съгласно
5.2.1. Прибавят се 10 сm3 хлороформи и 10 cm3 ледена оцетна киселина и сместа се разбърква
внимателно. Бързо се прибавя 1 сm3 прясно приготвен наситен разтвор на калиев йодид, разбърква се
колбата и се оставя на тъмно място. След 3 min се прибавят 100 cm3 дестилирана вода, в която
предварително е добавен 1 cm3 от 1 %-ен разтвор на скорбяла. Отделеният йод се титрира с 0,01 n
разтвор на натриев тиосулфат до изчезване на синьото оцветяване.
Успоредно при същите условия се прави контролна проба, в която се използват същите
количества реактиви, но без прибавяне на тлъстина.
Прекисното число се определя по формулата

/V₁ − V₂/.0,00127. 100

Х= ,
m
където:
X - грамовете йод за 100 g тлъстини;
V - количеството 0,01 n разтвор на натриев тиосулфат, в cm3, изразходвано за титрирането на
изследваната проба;

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.7, БДС 14593-78

12 - количеството 0,01 n разтвор на натриев тиосулфат, в cm3, изразходвано за титрирането на

контролната проба;
m - масата на тлъстината, в g.
0,00127 - количеството йод, в g, еквивалентно на 1 сm3 от 0,001 n разтвор на натриев тиосулфат.
5.5.2. Преценка
Пресни тлъстини - имат прекисно число до 0,01.
Тлъстини в процес на развала - имат прекисно число над 0,01.
6. МИКРОБИОЛОГИЧНО ИЗСЛЕДВАНЕ
6.1. За определяне общата бактерийна обсемененост и преценка на хигиената на добива, за
преработката и съхраняването на закланите птици се взема обща смивка.
6.2. При изследване на птици заготовка "Грил" за патогенни и други микроорганизми освен обща
смивка се изследват още бедрената мускулатура и изменените части от трупа, ако има такива.
6.3. При изследване за патогенни и други микроорганизми на птици с вътрешни органи се
изследват още черен дроб, далак и яйчници /тестиси/.
6.4. Използваните при микробиологичното изследване съдове трябва да бъде стерилна.
6.4.1. Измитите и изсушените съдове се стерилизират в сух стерилизатор при 160 °С в
продължение най-малко на 1,5 h или на автоклав под налягане 1 атм 30 min.
6.4.2. Петриевите панички, пипетите и др. се стерилизират, обвити в плътна гладка хартия.
6.4.3. Краят на пипетите, който се поставя в устата, предварително се запушва с памук.
6.5. Определяне на общата бактерийна обсемененост
Броят на микроорганизмите се изчислява за 1 сm3 обща смивка.
6.5.1. Вземане на обща смивка.
Предназначеният за изследване птичи труп се поставя в свободен от микроорганизми
полиетиленов плик и се претегля с точност до 1 g. В плика се прибавят толкова милилитри 1 %-на
стерилна пептонова вода, колкото грама тежи птицата, и се разклаща интензивно 50 пъти. Около 20 cm3
от получената смивка се пресилват в стерилна колба.
6.5.2. Изготвяне на степенни разреждания
Със стерилна пипета се взема 1 cm3 от общата смивка и се пренася в епруветка с 9 сm3
физиологичен разтвор, без последният да се докосва от върха на пипетата. С друга стерилна пипета се
извършва 10 – 15-кратно издърпване и издухване на разтвора. Получава се разреждане 1:10. От него
1 сm3 се прехвърля във втора епруветка с 9 cm3 физиологичен разтвор. Хомогенизира се със стерилна
пипета, за да се получи разреждане 1:100. Тази последователност се смазва и за получаване на по-
големи /1:1000, 1:10000 и т.н./ разреждания.
6.5.3. Посяване
Извършва се, като се започва от последното /най-голямото/ разреждане. В този случай може да
се работи само с една пипета. Когато от една проба се използват няколко разреждания, от всяко от тях
се поставя по една петриева паничка. При посявка само от едно разреждане от проба се използват две
паралелни петриеви панички. Посевките се правят, като по 1 cm3 от съответното разреждане се поставя
на дъното на петриевата паничка и се залива с около 10 - 13 cm3 разтопен и охладен до 45 – 47 °С агар.
Чрез въртеливи движения материалът се разпределя равномерно в цялата петра.
Посяване може да се извърши и в петри с предварително разлят и застинал агар. В този случай
върху повърхността на агара се поставя 0,1 cm3 от съответното разреждане и се разтрива със стерилно

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.8, БДС 14593-78

стъклено бастунче до пълно поемане на течността. При втриването капакът на петрата е леко отворен от
противната страна на лицето, което прави посявката.
6.5.4. Култивиране
Засетите петри се поставят с капаците надолу в термостат при 30 °С за 48 h.
6.5.5. Отчитане на резултата
Броенето се извършва в петри с колонии от 20 до 300 броя. Разлетите и слетите колонии се броят
за една. За улеснение петрите могат да се разделят на сектори или да се използва апаратът на
Волфюгел.
При посевки от няколко разреждания се използват петриевите панички, на които е отчетен най-
голям брой микроорганизми. При посевки само от едно разреждане броят на колониите се получава от
средноаритметичното от броя на колониите от двете паралелни петри. Ако броят на колониите във
всички петриеви панички е по-малък от 20 или по-голям от 300, за меродавен се приема броят от
разреждането, при което са преброени най-много колонии. Окончателният брой на микроорганизмите се
намира, като отчетеният брой колонии върху петриевата паничка се умножи по разреждането.
6.6. Изследване за патогенни и други микроорганизми
6.6.1. Подготовка на пробите
От мускулатурата, изменените части или вътрешните органи след обагряне с шпатула се вземат
по стерилен начин от 10 до 30 g. Материалът се надробява ситно със стерилна ножица в хаванче със
стерилен пясък. Стрива се с пестик. В зависимост от количеството на взетия материал се прибавя на
порции десетократно повече милилитри стерилен физиологичен разтвор или стерилна вода. Стриването
продължава, докато се получи хомогенна маса.
6.6.2. Извършване директно на посявка върху твърди среди
По 0,2 cm3 от получения съгласно 6.6.1 хомогенат се поставят в петри с обикновен агар и
съответна селективна хранителна среда. От стерилно стъклено бастунче се разстила равномерно по
цялата повърхност на средата.
6.6.3. Посяване в среди за набогатяване
Минималното посевно количество за патогенни микроорганизми да е от 10 g.
В колба се вземат 5 cm3 от хомогената, получен съгласно т. 6.6.1, и се заливат с 45 cm3 от
съответната течна обогатителна среда.
6.6.4. Препосяване
При някои микроорганизми е необходимо правенето на препосявка. Тя се извършва с платинено
ухо /йозе/ или чрез разтриване с бастунче на 0,1 сm3 от обогатената култура върху специфична за вида
индикаторна среда.
6.6.5. Култивиране
Температурата и времето на култивиране зависят от микробния вид, на който се провежда
изследването.
6.7. Изследване за салмонелни бактерии
6.7.1. Твърди индикаторни /селективни/ среди
Директните посевки и препосевки се извършват върху една от следните среди:
- брилянтгрюн-фенолрот-агар по Кауфман. Върху средата салмонелните бактерии растат във вид
на малиненочервени колонии;
- SS - агар - на средата салмонелите растат като безцветни колонии с черен център;
- агар на Гаснер - колониите на салмонелите са жълти;

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.9, БДС 14593-78

- агар на Дригалски - колониите на салмонелите имат сиво-гълъбов цвят;

- среда на Левин - салмонелните бактерии растат като прозрачни розови или розово-виолетови
колонии.
6.7.2. Течни обогатителни среди:
- тетратионат бульон;
- селенитов бульон.
6.7.3. Култивиране
Директните посевки и обогатителните среди се култивират, като се спазват изискванията на
БДС 1670-73.
6.7.4. При липса на растеж на салмонелни бактерии върху селективните среди от директната
посявка се прави препосявка от обогатителната среда съгласно т. 6.6.4. Резултатът от препосявката се
отчита след 24-часово термостатиране при 37 °С.
6.7.5. Схема за доказване на салмонели
Съмнителните за салмонелни бактерии колонии се изследват по следния начин:
6.7.5.1. Изготвяне на препарат по Грам
Бактериите от род Salmonella са малки, необразуващи спори пръчици със закръглени краища,
оцветяващи се отрицателно по Грам.
6.7.5.2. Изследване за подвижност
Определяне на подвижността се извършва на препарат - висяща капка. За целта около жлебчето
на чисто вдлъбнато предметно стъкло се нанася тънка ивица с вазелин. С платинено ухо се взема
капчица материал от 24-часова бульонна култура или суспензия от изпитвания щам и се слага в средата
на хоризонтално поставено покривно стъкло. След това предметното стъкло се притиска леко с
вдлъбнатината към покривното стъкло, докато последното прилепне към вазелина и с енергично
движение се обръща. При това положение капката остава във висящо положение във вдлъбнатината. Със
слабо увеличение и почти затворена диафрагма се намира ръбът на капката и се нагласява в средата на
зрителното поле. Отчитането става със средното увеличение. Очертават се две ясно разграничени зони:
едната хомогенна, в която се намират бактериите, а в другата се виждат пръснати мехурчета,
произхождащи от кондензирани водни капки. Най-добре подвижността на бактериите се наблюдава до
ръба на капката. Всички салмонели с изключение на Sal. gallinarum-pullorum са подвижни.
6.7.5.3. Извършване пробна аглутинация с поливалентни ОА-ОЕ и OF-OZ серуми
Върху предметно стъкло се поставя капка физиологичен разтвор и капка поливалентен ОА-ОЕ или
OF-OZ салмонелен серум. С платинено ухо се взема част от съмнителната колония, поставя се в капката
серум и се разтрива до получаване на хомогенна суспензия; след това до хомогенизиране в капка
физиологичен разтвор /контрола/.
Размивката във физиологичния разтвор трябва да остане хомогенна, мътна. Ако се получи
аглутинация, колонията е в R- форма.
При положителна аглутинация до 1 min в капката с поливалентния серум се получават зърнести
образувания /флокулчета/ и избистряне на серума. В случаите, когато се налага точно определяне и
диференциране на ентеротоксина, трябва да се изпращат в централните научноизследователски
лаборатории.
6.7.5.4. Извършване на пробна аглутинация с групови О-серуми
При положителна аглутинация с поливалентния серум се провежда пробна аглутинация за
определяне на групата, към която принадлежи салмонелният вид. За целта са необходими най-често
следните групови серуми:

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.10, БДС 14593-78

група В - серум O 1, 4, 5, 12

" С- " О 6, 7, 8
" Д- " О 9, 12
" Е- " О 3, 10, 15
6.7.5.5. Отнасяне към фаг О-1
Извършва се, като върху обикновен агар или брилянтгран фенолрот агар се прави с платинено
ухо гъста поставка от съмнителната колония. Върху посявката се поставя една капка от фага, след което
се термостатира при 37 °С. Отчитането на резултата се извършва се по-рано от 6 h. При
фагочувствителни щамове на мястото до накапания фаг не се наблюдава растеж. В случаи на по-слаба
чувствителност в тази зона могат да поникнат повече или по-малко колонии, като се очертават малки
/1 mm/ кръгли стерилни петна.
6.7.5.6. При характерен растеж на колониите върху индикаторните среди, установени типични
морфологични особености /грамотрицателни, необразуващи спори, подвижни пръчици/ и положителна
пробна аглутинация с поливалентен и групов серум и лизиране с фага се дава отговор, че се изолират
салмонелни бактерии.
6.7.5.7. При характерен растеж върху индикаторните среди, установени типични морфологични
особености, но пробната аглутинация е отрицателна, се изпитва биохимическата активност на
съмнителната колония.
Изследването се извършва в малки епруветки с по 1 cm3 среди, съдържащи различни субстрати
/захари, висши алкохоли/. Взема се част от съмнителната колония и се разтрива до хомогенизиране 1 cm3
физиологичен разтвор. От получената суспензия с платинено се извършва посявка в отделните
хранителни среди, след което cе поставят в термостат при 37 °С за инкубиране. Отчитането става след
16 - 24 h, а при отрицателен резултат - до 15 дни /табл. 3/.
6.7.5.8. Ако по биохимическите свойства културата принадлежи към салмонелните бактерии, дава
се отговор, че се касае за салмонела, а щамът се изпраща в централния ветеринарен институт - София,
за пълно типизиране и идентифициране.
6.8. Доказване на патогенни cтафилококи
6.8.1. Твърди индикаторни хранителни среди
Солен агар
Счита се, че след култивиране и престояване за 1 - 2 дни на стайна температура патогенните
стафилококи дават жълт до жьлто-оранжев цвят.
Солен кръвен агар
Средата стимулира растежа на стафилококите. Като ориентировъчен признак за патогенност се
използва наличието на хемолиза около колониите.
Среда на Чапман
Като указание, че стафилококът е патогенен, се използва наличието на жълта зона /разлагане на
манит/ около колонията.
Яйчножълтъчен солен агар на Чистович
Патогенните стафилококи образуват мътна зона с опалесценция около колониите.
6.8.2. Течни обогатителни среди
Солен бульон
Средата съдържа 10 % сол, която подтиска развитието на другите микроорганизми.
6.8.3. Култивиране

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.11, БДС 14593-78

Посевките за стафилококи се култивират при 37°С за 24 h, а средата на Чапман и до 48 h.

6.8.4. Доказване принадлежността към род Staphilococcus
б.8.4.1. Изготвяне препарат по Грам
Наблюдават се Грам-положителни коки във вид на гроздовидни образувания.
6.8.4.2. Изпитване за каталаза
Реакцията се използва за диференциране на микрококите от стрептококите. Върху чисто
предметно стъкло се поставя капка 2 - 3 %-ен прясно приготвен водороден прекис, в платинено ухо се
взема част от изпитваната колония /но не от кръвен агар/ и се потапя в капката водороден прекис.
Образуването на мехурчета е указание за наличие на каталаза и че изпитваният щам е микрокок.
6.8.4.3. Определяне типа на дишане
Извършва се на среда, посочена в т. 8.2.12, която е разлята в епруветки с височина на стълба
10 - 12 cm3. Преди работа средата се разтапя на кипяща водна баня и охлажда до 45 – 50 °C. С
пастьорова пипетка се взема от бульонната култура или размивка от изпитвания щам и се посява с
въртеливи движения от дъното към повърхността на средата в епруветката. Охлажда се и се инкубира
при 37 °С до 4 дни. При разлагане на гликозата средата пожълтява. При строги анаероби /микрококи/
промяната настъпва само в горните слоеве, при факултативни анаероби /стафилококи/ - по цялата
височина.
Таблица 3
Трехалоза

d-тартарат

b-тартарат
Арабиноза
Група

i-тартарат
Желатин
Глицерин

Тип
Рамноза

Ксилоза
Дулцит

Инозит

Цитрат

Мукат
H2S

В S. paratyphi В + d d d + + d + - - +1-2 d d +
S. typhimurium + + d d d d d + - d +1-2 d d +1-2
S. heidelberg + + + + + + ++ + - + + +2 + +
1-3
S. brandenburg + + - + + + d + - + х + d
S. bredeney + + d + + + ++ + - + х - + +
2
S. haifa + + + + + + ++ + - + + + + +
С S. choleraesuis - х - + - + - d - + - х +1-3 х
2
S. mission + + - + + + ++ + + + + - + +
S. isangi + + + + + + ++ + - + + d + +
1-4
S. braenderup + + + + + + ++ + - + + + + +
S. tennessee + + + + + + ++ + - + + - + +
D S. enteritidis d d - + + + d + - d d d d d
S. dublin d d - d + d d + - +1-2 +1-2 - +1-3 d
1-2 1-5 1-3 1-2 2-3
S. gallinarum + + - + + - - + + x x d
1-2
S. pullorum + - - + + + - + - - x - - -

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.12, БДС 14593-78

Продължение

Трехалоза

d-тартарат

b-тартарат
Арабиноза
Група

i-тартарат
Желатин
Глицерин
Тип

Рамноза

Ксилоза
Дулцит

Инозит

Цитрат

Мукат
H2S
E S. muenster + + + + + + ++ + - + x - + +
1-4
S. anatum + + - + + +- ++ + - + + + + +
S. meleagridis + + + + + + ++ + - + + +2-4 + +

6.8.4.4. Реакция за оксидаза

Използва се за разграничаване на стафилококите от някои диплококи /стафилококите са
оксилазо-отрицателни/. Извършва се като към култура на полегат агар се поставя 1 - 2 капки 1 %-ен
разтвор на тетраметилпарафенилендиамин. При положителна реакция културата става червена до черна.
6.8.5. Тестове за доказване на патогенни стафилококи
6.8.5.1. Доказване на плазмокоагулаза
Счита се за най-меродавен. Извършва се, като в малки епруветки се поставя по 0,5 сm3 разредена
с физиологичен разтвор 1:5 цитратна заешка плазма 1 и с платинено ухо се прибавя материал от
24-часова бульонна култура на изпитвания щам. Оставя се на термостат при 37 °С. Резултатът се отчита
през 2 h до 6-ия час и след това на 24-ия час. При положителна реакция плазмата губи прозрачността си
и се превръща в плътна пихтиеста маса.
6.8.5.2. Доказване на хемолизини
Културата се посява във вид на петно или щриха върху агар, съдържащ 7 % дефибринирана овча
кръв, и се инкубира 24 h на 37 °С.
При наличие на хемолизини около колониите се образува светла зона.
6.8.5.3. Доказване на стафилококов ентеротоксин
Най-често за тази цел се извършва захранване на малки /до 2 месеца/ котета. Преди опита
котките се държат на 3 - 4-часова гладна диета. След това 20 - 25 cm3 от 2 - 3-дневна стафилококова
бульонна култура се дават на котето с малко храна или мляко. Наличието на ентеротоксин се проявява
чрез повръщане и диария или само диария, появяващи се от 2 до 5 h след поемането на храната.
6.9. Доказване наличие на патогенни стрептококи
За установяване на патогенни стрептококи се правят посевки в обикновен бульон и на обикновен
агар, съдържащ 5 % дефибринирана овча кръв. Посевните се поставят в термостат при 37 °С за 24 h.
Ако върху кръвния агар има растеж от ситни колонии, заобиколени от бистра хемолитична зона
/β-хемолиза/, от бульона се прави натривка и се оцветява по Грам. Грам-положителни стрептококи,
даващи β /бета/-хемолиза, се считат за патогенни.
6.10. Изследване за колиформни бактерии

1
Цитратната плазма се получава, като 1 сm3 от 3,8 %-ен натриев цитрат се смесва с 5 сm3 стерилно взета
кръв от заек чрез пункция на сърцето или при заколване. Плазмата се отделя след центрофугиране при 3000 оборота
за 10 min.

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.13, БДС 14593-78

6.10.1. Индикаторни хранителни среди

За изолиране на колиформните бактерии се използват:
Среда на Ендо
Върху средата растат като розово-червени колонии с метален блясък.
Брилянтгрюн-фенолрот-агар
Колиформните бактерии образуват жълти колонии.
6.10.2. Диференциране на колиформните бактерии
От индикаторната среда се изолират и посяват на полегат агар и бульон 5-10 единични колонии.
Същите по-нататък се изследват биохимически и серологично.
6.10.2.1. Определяне на родовата принадлежност
Извършва се на основата на IMVIC -теста или на способността им да образуват индол, реакцията
за метилрот /MR/, образуване на ацетон и разпадане на цитрат /табл. 4/.
Таблица 4

Родове Индол MR Ацетон Цитрат

Escherichia + или - + - -
Citrobacter Klebsiella - или + + +
P. Enterobacter (Aerobacter) - или + + +

6.10.2.2. Определяне на видовата принадлежност

Извършва се на базата на по-пълно проучване на биохимическите отнасяния на изпитваните
култури.
6.10.2.3. Серологично изследване на Е. coli.
Методът има важно значение за доказване на патогенни за човека и за животните E. coli.
Извършва се, като изолираните от полегатия агар щамове се подлагат на пробна аглутинация със
смесени или отделни ОВ серуми. Начинът за извършване на аглутинацията е описан в т. 6.7.5.3.
Пробната аглутинация се приема за положителна, когато е добре изразена и се явява най-късно след
1 min. Във всички случаи тя има обаче само ориентировъчно значение. Окончателно заключение се
прави след извършване на степенна аглутинация. Последната се извършва с жива и варена култура при
контрола с физиологичен разтвор. Степенната аглутинация се отчита за положителна, когато е проявена
при 0-аглутинация с варена култура в минимален титър 1:1600, а при В-аглутинацията с жива култура -
1:1200.
6.11. Изолиране и диференциране на ентерококи
6.11.1. Твърди индикаторни среди:
- среда на Hajna и Perry /8.2-13/;
- среда на Haenel и Norton /8.2-14/;
- среда на Mossel.
6.11.2. Течни обогатителни среди
Среда на Hajna и Perry
Средата има същия състав както твърдата /т. 8.2.13/, но без прибавка на агар-агар.
6.11.3. Култивиране
Извършва се при 37 °С за 24 - 48 h.

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.14, БДС 14593-78

6.11.4. Серологично изследване

Представлява много прецизен метод за точно определяне на груповата принадлежност. За
извършването му се използва специфичен преципитиращ серум за стрептококи от Д-серологична група.
6.11.4.1. Получаване екстракт по Lancefield
Изпитваният щам се засява в 50 cm3 1 %-ен гликозен бульон и се инкубира при 37 °С за 48 h.
След тариране се центрофугира при 3000 оборота за 10 min . Течността се излива, а в епруветката с
центрофугата се прибавя 1,5 cm3 n /10 НСl. Разбърква се и се поставя във зряща водна баня за
10 - 12 min. След това се прибавят 2 - 3 капки бромтимолблау /0,1 %-ен спиртен разтвор/. Средата е
жълта /кисела/. Неутрализира се чрез накапване на 1 n /NaOH до получаване на синьо-зеленикав цвят.
Понеже основата е много концентрирана,от една капка средата може да стане синя /алкална/. Тогава с
20 n /НСl се коригира до синьо-зелен цвят. Центрофугира се. Наслоената течност представлява антигена
по Lancefield, който се изтегля с микропипета.
6.11.4.1. Извършване на реакцията
В епруветка с диаметър 3 - 4 mm се поставя серум и с пастьорова пипетка се подслойва екстракт.
При положителна реакция до 1 min на мястото на допирането се получава преципитационен пръстен.
6.11.5. Видово определяне на ентерококите
Въз основа на биохимическите свойства ентерококите могат да бъдат определени по вид и
вариетет /табл. 6/.
Таблица 6

Растеж при

Преживяемост
при 60° С за
метален блау
Разпадане на

40 % жлъчка

Вид
Рафиноза
Захароза

30 min
Сорбит
Ескулин

рН 9,6
6,5 %

10° С

45° С

50° С
Манит

Str. faecalis + + ± ± + + + + + + + - +
Str. liquefaciens + + + ± + + + + + + + - +
Str. zymogenes + + ± + + + + + + + + - +
Str. durans - - - - - - + + + + + - +
Str. faecium + + - - - + - - - + + - -

6.12. Изследване за микроорганизми от род Proteus

Ако върху хранителните среди съществува воалообразен растеж /Н-форма/ 2, при микроскопското
изследване на който се откриват Грам-отрицателни пръчици, притежаващи способността да се движат,
това е указание, че се касае за бактерии от род Proteus.
6.12.1. Изпитване пълзящата способност на бактерии от род Proteus
С реакцията се потвърждава наличността на Proteus.
Извършва се чрез правене на посявка по Шукевич. За целта с платинено ухо се пресява част от
колонията в кондезната вода на полегат агар.

2
При закланите птици подобрен растеж се установява най-често при препосявката след набогатяване на
салмонелни бактерии.

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.15, БДС 14593-78

След култивиране на термостат при 37 °С, ако бактериите са от род Proteus, след 12 - 24 h ще
изпълзят до най-горния край на агара.
6.12.2. Подтискане пълзящия растеж на бактерии от род Proteus
От щам с изразен пълзящ растеж се извършва посявка върху модифицираната среда на
Плоскирев /по Георгиев/. Резултатът се отчита след 24-часово култивиране при 37 °С. В зависимост от
начина на посяване се наблюдава растеж във вид на отделни щрихи или единични, кръгли, розови
колонии с жълтеникав оттенък. При посяване на отделна колония по метода на Шукович пълзящият
растеж се възстановява.
6.12.3. Изпитване хемолитичната активност на бактериите от род Proteus
Посяването се извършва на модифицираната среда на Плоскирев след прибавяне на 7 %
дефибринирана овча кръв. На една петриева паничка могат да бъдат посети няколко щама. Отчитането
на резултата става след 24-часово култивиране при 37 °С.
6.12.4. Видово определяне на бактерии от род Proteus
Извършва се на базата на различия в биохимическите им отнасяния /табл. 7/.
Таблица 7

Вид Малтоза Индол

Pr. vulgaris + + +
Рг. mirabilis - х -

6.13. Изследване за спорообразуващи анаероби /клостридни/

6.13.1. Хранителни среди
- бульон на Кит-Тароци;
- среда на Уилсон-Блер.
Преди посяване хранителните среди се загряват на кипяща водна баня за 20 - 30 min, след което
се охлаждат до 55 °С.
6.13.2. Засяване
Преди започване на посяването част от предназначения за изследване материал /обща смивка,
хомогенат/ се загрява, а другата част остава незагрята. По 2 - 3 cm3 от тези части се поставят в
съответната епруветка, като след посяването в бульона на Кит-Тароци се залива с парафин.
Изследването протича по следната схема:

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.16, БДС 14593-78

6.13.3. Култивиране
Посевките се оставят в термостат при температура 30 °С в продължение на 8 - 10 дни.
Отделянето на мехурчета газ или изтласкването на парафина /когато е твърд/ в бульона е указание за
наличието на анаероби.
6.13.4. Изолиране на чисти култури
От епруветките с бульона на Кит-Тароци, показали растеж на анаероби, се прави препарат по
Грам. При наличие на типични клостридии епруветките се загряват на 85 °С за 15 min, след което с
платинено ухо се прави посявка върху кръвен агар за получаване на единични колонии. Култивирането
на кръвния агар се извършва в анаеростат с изтеглен въздух при 37 °С за 2 дни. При наличие на
единични колонии тяхната чистота се контролира чрез препарат по Грам. Ако културата не е чиста,
извършва се посявка от единична колония в бульон на Кит-Тароци и след култивиране се прави нова
посявка на кръвен агар по описания по-горен начин. Така се продължава, докато чрез препарат по Грам
се установи, че културата е чиста. Получената чиста култура се посява с бульон на Кит-Тароци и се
използва за по-нататъшно проучване.
6.13.5. Определяне вида на клостридиите
Извършва се по схема на базата на способността им да образуват или не газ, пигмент,
ПОДВИЖНОСТ, разлагане на желатина, образуване на сероводород, пресичане на лакмусово мляко,
редукция на 0,5 % сулфит и отношение към захари и алкохоли.
При изпитване на клостридиите средите, съдържащи захари и алкохоли, са без индикатор.
Последният се поставя на капки в края на отчитането за установяване на киселинообразуването. Тези
среди се посяват обилно /от 0,1 до 1 cm3/ с чиста култура от бульона на Кит-Тароци, инкубират се при
37 °С от 24 до 48 h.
6.14. Изследване за психрофилни микроорганизми
6.14.1. Подготовка и извършване на посяването
Вземането на пробите, изготвянето на степенните разреждания и посяването се извършват
съгласно т.т. 6.5.1, 6.5.2 и 6.5.3.
6.14.2. Култивиране
Посетите петри се доставят при 0 °С в продължение на 14 дни.
6.14.3. Определяне броя на психрофилите и изолиране на чисти култури
Количеството на психрофилите се определя съгласно т. 6.5.5.
От определена повърхност /4 - 5 cm3 / на агара в петрата, показала най-разнообразен растеж, се
вземат всички колонии, посяват се в обикновен бульон и се култивират 3 дни при 20 °С. Бульонните
култури се препосяват с платинено ухо на обикновен агар за единични колонии и петриевите панички се
култивират 4 - 5 дни при 20 °С. Това се повтаря, докато се получи чиста култура, което се контролира
чрез препарат по Грам.
6.15. Диференциране на психрофилите
Видовото определяне на психрофилите е трудно и в практиката за тях е достатъчно само
причисляването им до съответния род.
Най-често се изследват следните родове:

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.17, БДС 14593-78

Род Pseudomonas - Микроорганизмите от този род са най-активни в процесите на развала на

продуктите. Те са Грам-отрицателни, подвижни. Въз основа на начина на
разпадане на гликозата в средата нa Hugh-Leifscn се делят на субспециеси.
Pseudomona I ssp - Разлага гликозата оксидативно и дава флуоресциращ зелен пигмент.
Pseudomonas II ssp - Разлага гликозата оксидативно без образуване на пигмент.
Pseudamonas III ssp - Алкализира средата.
Pseudomonas IV ssp - Не променя средата.
Род Aeromonas - Грам-отрицателни, подвижни, разлагат гликозата ферментативно.
Род Achromobacter - Грам-отрицателни, неподвижни, не образуват пигмент.
Род Flavobacter - Грам-отрицателни, неподвижни, образуват жълт или оранжев пигмент.

7. РАЗТВОРИ, ИНДИКАТОРИ, РЕАКТИВИ, БОЯДИСВАНЕ

7.1. Физиологичен разтвор
Разтварят се 8,5 g чист NaCl в 1000 cm3 дестилирана вода, филтрира се, разпределя се в стъкла и
се стерилизира на 120 °С за 15 min.
7.2. Луголов разтвор /за боядисване по Грам/
Два грама калиев йодид се стриват с 1 g кристален йод и се разтварят в 300 cm3 дестилирана
вода.
7.3. Индикатор за определяне на pH
бромтимолблау - 0,1 g бромтимолблау, 3,5 cm3 от 0,05 n 6,0 - 7,6 NaOH и 250 cm3 дестилирана
вода;
хлорфенилрот - 0,1 g хлорфенилрот, 23,6 cm3 от 0,1 n от 5,2 - 6 NaOH и 250 cm3 дестилирана
вода.
7.4. Приготвяне на разтвори за оцветяване
7.4.1. Водни разтвори
В 100 сm3 дестилирана вода се разтварят 1 - 2 g боя. Разтворът се филтрира след 10 h.
По-удобни са алкохолно-водните разтвори. Те се получават, като се разреди наситен алкохолен
разтвор с дестилирана вода 1:5.
7.4.2. Наситен алкохолен разтвор
Към 100 сm3 96 %-ен алкохол се прибавят 6 - 8 g фуксин или генцианвиолет, 10 - 15 g
метиленблау /метилвиолет, везувин, малахитгрюн/. В деня на приготвянето разтворите се разклащат
неколкократно. Те са трайни. Държат се на тъмно в стъкла с шлифовани запушалки.
7.4.3. Карболгенцианвиолет по Френкел /за оцветяване по Грам/
10 cm3 от наситения алкохолен разтвор на генцианвиолет 90 cm3 2,5 %-ен пресен воден фенолов
разтвор /получен от 5 g карболова киселина/ и 100 сm3 дестилирана вода.
7.4.4. Карболфуксин по Цил-Нилсен
10 cm3 наситен алкохолен разтвор от фуксин, 90 cm3 фенолов разтвор и 100 сm3 дестилирана
вода.
7.4.5. Разреден карболфуксин по Пфайфер /универсален оцветител/
10 cm3 карболфуксин по Цил-Нилсен и 90 сm3 дестилирана вода.

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.18, БДС 14593-78

7.5. Оцветяване по Грам

Натривка, фиксирана на пламък, се залива с прясно филтриран карболгенцианвиолет за 3 - 5 min.
Боята се отлива и, без да се мие, се залива с луголов разтвор за 1 - 2 min. След отстраняване на
луголовия разтвор се залива с 96 %-ен алкохол, докато боята започне да се свлича на талази. Промива
се с вода. Залива се с карболфуксин по Пфайфер за 10 - 15 s. Промива се с вода. Подсушава се и се
наблюдава под имардия на микроскоп. Грам-положителните микроорганизми са тъмновиолетови, а Грам-
отрицателните - червени.
8. ХРАНИТЕЛНИ СРЕДИ
8.1. Течни хранителни среди
8.1.1. Месна вода
Очистено от мазнини и сухожилия говеждо месо се смила и накисва с двойно количество чешмяна
вода. Екстрахирането става за 12 h при стайна температура. Вари се 30 min от момента на кипването на
пряк огън или на пара. Кашата се пресува през марля или кърпа и се филтрира през книжен филтър. Ако
има мастни капки, филтрира се повторно. Допълва се до първоначално поставеното количество вода.
Стерилизира се 10 - 15 min при 11,5 °С в автоклав.
8.1.2. Обикновен месопептонен бульон
Смесват се 1000 сm3 месна вода, 10 g пептон и 5 g NaCl и се варят на пара 30 min до разтваряне
на пептона, който може предварително да се направи на кашица с месна вода. Оставя се да изстине,
филтрира се, долива се с вода до първоначалния му обем. Течността се неутрализира или се алкализира
с 10 %-ен разтвор на натриев карбонат, стерилизира се в автоклава при 115 °С за 30 min или 3 дни по
30 min на текуща пара. рН е от 7,4 до 7,6.
8.1.3. Пептонова вода
10 g пептон, свободен от индол, и 5 g натриев хлорид се разтварят в 1000 сm3 дестилирана вода
при бавно загряване, като се разклаща. Оставя се разтворът да изстине при около 40 °С, коригира се рН
на 7 - 7,2 и се стерилизира 25 min при 115 °С.
8.1.4. Тетратионат бульон на Мюлер по Кауфман
Обикновен стерилен бульон /с pH 7,2/ 90 cm3, стерилен калциев карбонат на прах 5 g, стерилен
50 %-ен разтвор на натриев тиосулфат /Na 2 S 2 О 3 / 10 сm3, разтвор на йод-калиев иодид /J 2 .KJ/
2 cm3, 0,1 %-ен разтвор на брилянтовозелено 1 cm3 и стерилна говежда жлъчка 5 cm3. Разтворът
на натриев тиосулфат се приготвя по следния начин: 50 cm3 дестилирана вода се смесват с 50 g натриев
тиосулфат, разтваря се на пламък, допълва се до 100 сm3 с вода и се стерилизира на пара 30 min, а
разтворът на йод-калиев йодид се приготвя, като 20 g йод и 25 g калиев йодид се разтварят в 100 сm3
дестилирана вода. Говеждата жлъчка се стерилизира на пара 3 дни по 30 min. След всяка прибавка
сместа се разклаща. Приготвената среда заедно с карбоната се разлива в колби и епруветки, без да се
стерилизира. Трайност - до 14 дни. Цветът на средата е зелен със син оттенък.
8.1.5. Селенитов бульон
Полипептон 5 g, лактоза 4 g, натриев фосфат /Na 2 HPО 4 .12Н 2 О/ 10 g кисел натриев селенит
/NaHSe0 3 / 4 g, дестилирана вода 1000 сm3. Съставните части след много внимателно загряване се
разтварят в 1000 сm3 дестилирана вода. Проверява се pH и, ако е нужно, се коригира на 7,0. Стерилизира
се на текуща пара 30 min. Не се автоклавира, нито се загрява повече от 30 min за да не се преципитира
селенитът.
8.1.6. Бульон на Кит-Тароци
Добре почистен от жлъчни канали и съединителна тъкан черен дроб се нарязва на дребно
/колкото бобени зърна/. Залива се с две до трикратно по обем количество месопептонен бульон с рН 7,2.
Сместа се вари 30 min на пара. Филтрира се. Късчетата черен дроб се промиват с вода. Филтратът се

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.19, БДС 14593-78

разлива в епруветки по 8 сm3 , в които се поставят по няколко късчета черен дреб. Стерилизира се на
пара 3 дни по 30 min.
8.1.7. Среда за установяване ферментацията на захари и висши алкохоли
Месен екстракт 5 g, пептон 10 g, NaCl 3 g, Na 2 HPО 3 .12Н 2 О 2 g, дестилирана вода 1000 cm3 и
разтвор на бромтимелблау 12 сm3. Съставките се разтварят чрез загряване. pH е 7,4. Разливат се по
6 cm3 в епруветки, в които има дурхамови епруветки за газ. Стерилизацията се провежда 15 min при
120 °С. Понеже захарите не винаги издържат стерилизацията, хранителната среда се приготвя и
стерилизира без захари. Отделно се приготвят концентрирани разтвори от захарите в дестилирана вода
/30 % за лактоза, гликоза и захароза и 20 % за манит/. Стерилизира се чрез филтриране през
Шамберландов или Зайц - филтър и се прибавят асептично към хранителната среда до крайна
концентрация за захарта в средата 5 %. Култивирането се извършва при 37 °С за 48 h за проверяване на
стерилността. Разтворът на бромтимолблау се състои от бромтимолблау 1 g, 0,1 n NaOH 25 cm3 и
дестилирана вода 475 сm3.
8.2. Твърди хранителни среди
8.2.1. Обикновен месопептонен агар
Към 1000 cm3 месна вода се прибавят 10 g пептон, 5 g натриев хлорид и 20 g агар-агар. Сместа се
разтопява чрез загряване на кохово гърне за 80 min. Охлажда се и се нагласява рН на 7,2. Разпределя се
по колби и се стерилизира на 105 Ра за 15 min.
8.2.2. Солен агар
Към обикновен агар се прибавя 7,5 %-ен натриев хлорид. Сместа се стерилизира 30 min при
110 °С.
8.2.3. Кръвен агар
Към разтопен и охладен на 44 - 45°С обикновен месопептонен агар се прибавя на порции при
разбъркване 5 - 7 % дефибринирана стерилна овча кръв. Разлива се в петриеви панички и се проверява
при 37 °С за 24 h за стерилност.
8.2.4. Брилянтгрюн-фенолрот-агар по Кауфман
Обикновен бульон 1000 cm3, лактоза 15 g , агар-агар 26 g ; 0,5 %-ен разтвор на брилянтгрюн
2 cm , разтвор на фенолрот 40 cm3. Разтворът на фенолрот се състои от фенолрот 1 g, 0,1 n натриева
3

основа 40 cm3 и дестилирана вода 460 cm3. рН на средата е от 7,0 до 7,2. Стерилизира се трикратно в
кохово гърне. Средата има зехтиненозелен цвят.
8.2.5. Среда на Ендо
Към 100 cm3 месопептонен агар /рН от 7,6 до 7,8/ асептично се прибавя: 1 g млечна захар,
разтворена в 5 cm3 стерилна вода и загрята на водна баня при 100 °С за 5 min . В отделна епруветка се
поставя 0,5 cm3 филтриран 10 %-ен алкохолен разтвор на основен фуксин и към него се прибавя прясно
приготвен и стерилизиран на 100 °С за 5 min воден разтвор на натриев сулфит /Na 2 SО 3 .7H 2 О/ до
получаване на бледорозов цвят. Получената смес се прибавя към разтопения млечнозахарен агар преди
употреба на средата, като се избягва разпенването. Разлива се в петриеви панички. При приготвянето на
средата се спазва строга стерилност.
8.2.6. Среда на Гаснер
Към 1000 cm3 слабо алкализиран 3 %-ен обикновен агар се поставя предварително стерилизиран
62,5 cm3 12-%-ен воден разтвор на метахромгелб, сварен 2 min на водна пара, прибавят се 87,5 cm3
1 %-ен васерблау и воден разтвор на млечна захар 10 g, варен заедно с васерблау. Разтворите се пазят
на тъмно, като при работа се взема от повърхността. Сместа се стерилизира за 30 min 3 дни подред.
Средата се пази на тъмно. Има тревистозелен цвят.
8.2.7. Девин агар

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Стр.20, БДС 14593-78

Приготвя се предварително 0,5 %-ен разтвор от метиленблау и 2 %-ен воден разтвор от тозин
/жълт, кисел/. Стерилизират се поотделно в автоклава. Към 100 cm3 разтопен стерилизиран 2 - 2,5 %
агар се прибавят 2 g двуосновен калиев фосфат /К 2 НРО 4 /, предварително разтворен в стерилна вода, и
2 cm3 разтвор от еозин /Eosin J pH се нагласява 7,2 - 7,6.
8.2.8. Среда на Дригалски
Обикновен месопептоиен агар 1000 cm3, лактоза 15 g , натриев тиосулфат /Na 2 S 2 О 3 / 1 g, лакмус -
разтвор /по Кубел-Тиман/ 150 cm3 1 %-ен воден разтвор от кристалвиолет 5 cm3. pH е от 7,4 до 7,6.
8.2.9. SS - агар
Месен екстракт 5 g, пептон 5 g, лактоза 10 g , жлъчни соли 8,5 g, натриев цитрат /Na 3 C 6 H 5 О 7 /
8,5 g, натриев тиосулфат /Na 2 S 2 О 3 / 8,5 g, ферицитрат 1 g, агар-агар 13,5 g, брилянтгрюн 0,00033 g и
дестилирана вода 1000 cm3. pH е 7,0.
8.2.10. Среда на Chapman /за стафилококи/
Пептон 2 g, протеозо-пептон 9 g, натриев хлорид 75 g, манит 10 g, агар-агар 15 g, фенолрот
0,025 g и месна вода 1000 cm3, pH е от 7,4 до 7,5. Стерилизирането се извършва при 120 °С за 20 min.
8.2.11. Яйчно-жълтъчен солен агар на Чистович /за стафилококи/
Един жълтък от кокоше яйце се емулгира в 200 сm3 стерилен физиологичен разтвор. Към
обикновен агар с 10 % натриев хлорид се прибавят 20 % /обемно/ от яйчната емулсия, като агарът
предварително се разтопява и охлажда до около 50 °С. След добро размесване средата се разлива в
петриеви панички. Посявката се прави плътна. Инкубацията се извършва при 37 °С за 2 дни. Растат
главно стафилококи.
8.2.12. Агар за определяне типа на дишане на стафилококи и микрококи
Месопептонен агар с 1 % гликоза и 0,115 g бромкрезолпурпур за 1 dm3 среда се разлива в
епруветки в стълб с височина 12 cm.
Преди употреба се разтапят, охлаждат се до 50 °С и се посяват с пастьорова пипета чрез
въртеливи движения по повърхността до дъното и обратно.
8.2.13. Среда на Hajna и Perry /за ентерококи/
Пептон /трипсинов/ 20 g, гликоза 5 g, 4 g КН 2 РО 4 , 1,5 g КН 2 РО, NaNO 3 0,5 g, NaCl 5 g,
бромкрезолпурпур 0,064 g /1,6 % спиртен разтвор - 2 cm3/, дестилирана вода 1000 cm3 и агар-агар 20 g.
рН е от 6,9 до 7. Стерилизацията се извършва при 120 °С в продължение на 20 min.
8.2.14. Среда на Haenel и Norton
Пептон 10 g, дрожден екстракт 3 g, К 2 НРО 3 5 g, КН 2 РО 4 2 g, гликоза 5 g, натриев хлорид 5 g,
натриев азид /NaN 3 / 0,25 агар-агар 20 g и бромкрезолпурпур - 2 cm3 от 1,6 алкохолен разтвор.
8.2.15. Среда на Mossel
Триптоза /Difco/ 18 g, натриев хлорид 6 g, агар-агар 20 g и месна вода 1000 cm3. pH е 6,8.
Разлива се в епруветки по 17 cm3 и се стерилизира при 120 °С за 20 min. При употреба средата се
разтопява на водна баня, охлажда се на 45 – 50 °С и на всяка епруветка се прибавят по 1 cm3 кръв, 1 cm3
разтвор на натриев азид /0,25 g от него се поставят в 25 cm3 дестилирана вода и се стерилизират
трикратно на кохово гърне/ и 1 cm3 разтвор на кристалвиолет. Кристалвиолетът се приготвя, като 0,1 g
от него се разтрива в хаван е 25 cm3 дестилирана вода, оставя се 24 h, филтрира се и се разрежда 1:10.
8.2.16. Модифицирана среда на Плоскирев /по Георгиев/
6 g от сухия бактоагар на Плоскирев се разтварят в 100 cm3 дестилирана вода и се загряват при
постоянно бъркане до възвиране за 2 - 3 min, при което се получава едромехурчеста пяна. След това се
прибавят 100 cm3 предварително разтопен брилянтгрюн-фенолрот-агар по Кауфман. Така приготвената
среда има портокалов цвят.

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
 Стр.21, БДС 14593-78

8.2.17. Среда на Wilson - Bleer

Агар 2 % в обикновен бульон с 1 % гликоза 1000 cm3, 3 % воден разтвор на ферихлорид /FeCl 3 /
3
10 cm , 10 %-ен воден разтвор на натриева основа 6 cm и 20 %-ен воден разтвор на натриев сулфит
/Na 2 SO 3 / 100 cm3. Агар с 1 % гликоза се разлива по 100 cm3 и се стерилизира 30 min при 117 °С.
Останалите разтвори се стерилизират отделно и се прибавят към агара. Разтворът се разбърква много
добре и се разлива в петриеви панички. След посяване средата се залива с обикновен агар.
8.2.18. Среда и a Hugh - Leifson
Пептон 2 g, натриев хлорид 5 g, КН 2 РО 4 0,3 g, гликоза 10 g, агар-агар 3 g, бромтимолблау /0,4 %
спиртен разтвор/ 7,5 cm3, дестилирана вода 1000 cm3. Средата се приготвя по следния начин: пептонът
се разтваря във водата, прибавят се натриевият хлорид, КН 2 РО 4 и агарът, разтопяват се в кохово гърне,
след което РН се коригира на 7,2, филтрира се през памук и се прибавя лидикаторът. След това
разтворът се разлива в епруветки по 10 cm3 загрява се в кохово гърне за 20 min и се прибавя
стерилизиран също на пара 10 %-ен разтвор на гликоза в количество 1 cm3 на 10 cm3 среда.
Изпитваната култура се посява в две епруветки, като едната от тях се залива със смес от твърд
парафин-вазелин. Резултатите се отчитат след 10 дни при 20 °С. Оксидативното разлагане се
манифестира с промяна в цвета на средата от зелен в жълт само в незалятата епруветка. При
ферментативното разлагане цветът се променя и в двете епруветки. Алкализирането на средата се
проявява в синьо оцветяване, а неактивните култури не променят цвета и в двете епруветки

Издателство “Стандартизация”

Пор. № 516 Тираж 1000

Предназначен за: Юрофинс ХОС Тестинг България ЕООД Поръчка: 55453 Дата: 13.12.2019 издадена от БИС
Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)