第 39 卷 分析化学 （ FENXI HUAXUE） 研究报告 第1 期

2011 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 67 ～ 71

DOI： 10． 3724 / SP． J． 1096． 2011． 00067

加速溶剂萃取凝胶渗透色谱 / 固相萃取净化气相色谱质谱法
测定咸鱼中有机磷农药残留
1，
2 1，
2 1，
2 1，
2 * 1，
2
王耀 刘少彬 谢翠美 张汉霞 卢伟华
1 2
（ 东莞市海洋与渔业环境监测站，东莞 523079） （ 东莞市渔业质量监督检验站，东莞 523079）

摘 要 建立了咸鱼中有机磷农药残留的分析方法。乙腈为溶剂，样品经 ASE 萃取，提取液用凝胶渗透色谱

除去脂类、蛋白质和大部分的色素，再经 Carb / PSA 小柱净化。采用 GC-MS 定性分析，GC-FPD 定量分析。加
标水平为 0． 05 ～ 0． 20 mg / kg 时，农药的回收率为 64． 5% ～ 98． 6% ，相对标准偏差 2． 7% ～ 14． 7% 。方法的检
出限为 0． 6 ～ 9． 0 ! g / kg（ 以 3 倍性噪比计） 。本方法具有提取效率高，净化效果好，回收率高，准确灵敏等优
点，适用于咸鱼中农药残留检测实际工作的需要。

关键词 加速溶剂萃取； 凝胶渗透色谱； 固相萃取； 气相色谱-质谱； 有机磷； 咸鱼

1 引 言
食品中的农药残留严重影响人们的健康与安全 。咸鱼加工销售过程中，不法商贩常向咸鱼喷淋、浸
泡有机磷农药来防治蚊蝇和蛆虫 ，严重威胁人们的健康。因此，准确、快速测定此类食品中的有机磷残
［1］ ［2］ ［3，4］
留具有重要意义。目前，检测有机磷农药方法主要有分光光度法 、荧光法 、流动注射法 、电化学
［5，
6］ ［7］ ［8］ ［9］ ［10，
11］ ［12］
法 、胶束电动色 谱 、电 流 动 分 析 法 、传 感 器 法 、气 相 色 谱 法 、液 相 色 谱 法 、气 质 联
［13，
14］ ［15］
用 等。文献研究集中于蔬菜、净洁水体和土壤样品，采用 GC-MS 法测定咸鱼中
法和液质联用法
有机磷农药的残留尚未见报道。本研究基于咸鱼样品农药残留萃取难的特点，采用加速溶剂萃取法提取
样品，
相比于传统提取方法，显著提高萃取效率、减少分析时间并降低了环境污染； 采用凝胶渗透色谱 /
固相萃取联用净化模式，能完全除去样品中脂类、色素等杂质，实现了咸鱼中农药残留的 CG-MS 分析。

2 实验部分
2． 1 仪器与试剂
Trace-DSQⅡ气质联用仪（ 美国 Thermo 公司 ） ； 7890A 气相色谱仪 （ 配 FPD 检测器，美国 Agilent 公
TM
司） ； 350 型加速溶剂萃取仪 （ 美国 Dione 公司 ） ； AccuPrep / AccuVap 凝 胶 渗 透 色 谱 仪 （ 配 450 mm ×
15 mm 净化柱， Bio-Beads S-X3 填料，美国 J2 Scientific 公司） ； GX-274 全自动固相萃取仪 （ 法国 Gilson 公
司） ； Syncore 多样品定量浓缩仪（ 瑞士 BCHI 公司） ； MS1 涡旋振荡器（ 德国 IKA 公司） ； N7 / H 马弗炉 （ 德
国 Nabertherm 公司） ； 色谱柱： DB-1701 石英毛细管柱 （ 30 m × 0． 25 mm，0． 25 ! m，美国 Agilent 公司 ） ；
Carb / PSA 固相萃取小柱（ 500 mg /6 mL，美国 Supelco 公司） ； 敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、治螟
磷、氧乐果、久效磷、磷胺?、乐果、毒死蜱、磷胺?、甲基对硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、甲基异柳磷、水胺硫
磷及三唑磷的标准混合液 （ 1． 00 g / L，国家标准物质研究中心） ； 所用试剂均为色谱纯或分析纯。
2． 2 实验方法
2． 2． 1 样品提取 在 34 mL 萃取池依次装入滤膜、 4． 00 g 切碎混匀的咸鱼样品及硅藻土混合物 。系统
压力为 10000 kPa，以 80 ℃ 加热 5 min，静态萃取 5 min，提取剂为乙腈。用池体积 60% 的乙腈冲洗萃取
池，并用氮气吹扫萃取池 120 s，循环萃取 1 次。萃取液脱水后，于多样品浓缩仪中 35 ℃ 真空蒸发近干，
以环己烷-乙酸乙酯（ 1∶ 1，
V / V ） 溶解并定容至 10． 0 mL，过 0． 45 ! m 滤膜后，供 GPC 净化用。
2． 2． 2 样品净化 凝胶色谱净化： 流动相为环己烷-乙酸乙酯 （ 1∶ 1， V / V ） ，流速为 5． 0 mL / min，样品
2010-02-03 收稿； 2010-07-06 接受
本文系东莞市科技计划重点项目（ No． K10017） 资助
* E-mail ： wyhf1@ 163． com
 68 分析化学 第 39 卷

定量环为 5． 0 mL，检测波长为 254 nm。收集 9 ～ 15 min 组分，

35 ℃ 真空浓缩近干，用 2 mL 丙酮-正己烷
（ 1∶ 1，
V / V ） 溶解，待 SPE 净化。固相萃取净化： 以 5 mL 丙酮-正己烷 （ 1 ∶ 1，
V / V ） 淋洗 Carb / PSA 柱，
2 mL 样品全部上样。待净化液通过该柱后，用 20 mL 丙酮-正己烷（ 1∶ 1， V / V ） 洗脱，收集全部流出液，
在 35 ℃ 真空浓缩近干，以丙酮定容至 1． 0mL，供 GC-MS 和 GC-FPD 分析。
2． 2． 3 仪器条件 （ 1） 气相色谱-质谱条件 初始温度 80 ℃ ，保持 1 min； 以 20 ℃ / min 升至 200 ℃ ，保
持 5 min； 以 20 ℃ / min 升至 260 ℃ ，保持 10 min。进样口温度 230 ℃ ，离子源温度为 250 ℃ ，接口温度为
250 ℃ ，离子选择监测（ SIM） 方式。载气为高纯氦气，流速为 0． 5 mL / min，进样量为 1 ! L。 脉冲不分流
进样，脉冲压力为 200 kPa，脉冲时间为 0． 75 min。（ 2） 气相色谱条件 初始温度 100 ℃ ，保持 1 min； 以
20 ℃ / min 升至 230 ℃ ，保持 8 min； 以 20 ℃ / min 升至 260 ℃ ，保持 10 min。进样口温度 230 ℃ ，检测器
温度 230 ℃ 。以氢气为燃气，流速 75 mL / min； 以空气为助燃气，流速 100 mL / min； 载气为高纯氮气，流
速为0． 5 mL / min，进样量为 1 ! L。脉冲不分流进样，脉冲压力为 200 kPa，脉冲时间为 0． 75 min。

3 结果与讨论
提取方式的优化
3． 1
加速溶剂萃取（ ASE） 采用高温高压模式，增加物质溶解度和溶质扩散效率，具有萃取效率高、用时
［16］ ［17］
短、选择性好、溶剂用量少及自动化程度高等优点 ，得到广泛的应用 。 相比于丙酮和二氯甲烷等
溶剂，乙腈萃取出的杂质较少，便于净化处理，且咸鱼中农药残留集中在鱼体内外表面 ，乙腈与丙酮等溶
剂提取效率相当。本研究选用乙腈作为提取溶剂。实验发现，萃取温度高于 80 ℃ 、萃取时间超过 5 min
时，
部分有机磷农药会发生分解，导致回收率下降。按 2． 2． 1 节的条件对加标样品提取后的残渣重复提
取一次，未检出有机磷农药，说明本 ASE 样品提取条件下能完全提取咸鱼中的有机磷农药残留 。
3． 2 净化方式选择
3． 2． 1 凝胶渗透色谱净化（ GPC） GPC 净化可有效去除样品中的脂类、色素、蛋白等大分子干扰物，常
［18］
用于脂肪含量较高的动物源性食品的净化 。本研究采用 GPC 净化提取液，咸鱼样品和 17 种有机磷混
合标准溶液的 GPC 紫外色谱图见图 1。结果表明： 脂类、
蛋白及绝大多数色素干扰物在 9 min 内流出 GPC
柱（ 如图 1a） ； 而 17 种有机磷目标物在 9 ～ 15 min 流出（ 如图 1b） 。收集 9 ～ 15 min 样品可去除样品中脂
类、 蛋白及绝大多数色素干扰物， 而不损失目标物。残余少量小分子杂质可用 SPE 净化除去。

图1 咸鱼样品（ a） 和 17 种有机磷混合标准溶液的 GPC 色谱图（ b）

Fig． 1 Gel permeation chromatogram of salt fish （ a） and standard of 17 organophosphrous （ b）
固相萃取净化 石墨化碳黑小柱对色素的吸附效果良好，N-丙基乙二胺柱 （ PSA 柱 ） 能有效地
3． 2． 2
吸附有机酸和糖分等，Carb / PSA 柱处理咸鱼样品，净化效果较好。 比较了丙酮-正己烷 （ 1 ∶ 1，
V /V ） 和
乙腈-甲苯（ 3∶ 1，
V / V ） 两种洗脱剂发现，20 mL 两种溶剂均能将目标物洗脱下来，但丙酮-正己烷毒性
较小且沸点较低，后续浓缩较方便，故本研究选用丙酮-正己烷为洗脱剂。 净化液过 Carb / PSA 小柱后，
35 ℃ 真空浓缩近干，以丙酮定容至 2． 0 mL，供 GC-MS 及 GC-FPD 分析。
3． 3 线性范围及检出限
用咸鱼基质配制标准溶液，按上述色谱条件进样测试。 结果表明，在 10． 0 ～ 1000． 0 ! g / L 范围内，
 第1 期 王 耀等： 加速溶剂萃取凝胶渗透色谱 / 固相萃取净化气相色谱质谱法测定咸鱼中有机磷农药残留 69

峰面积值与有机磷农药浓度呈良好的线性关系 。，按 3 倍性噪比测得检出限，结果如表 1 所示。

表 1 标准曲线参数
Table 1 Parameters of calibration
定性离子 保留时间 检出限 相关系数
序号 化合物名称 Qualitative ions LOD 线性回归方程 Correlation
Number Compound name t R （ min） Regression equation
（m / z ） （ mg / kg） coefficient
1 敌敌畏 Dichlorvos 109，185，79 7． 11 0． 0020 y = 12118x + 197． 34 0． 9997
2 甲胺磷 Methamidophos 94，95，141 7． 87 0． 0012 y = 18667x + 154． 38 0． 9993
y = 3264． 8x － 14．
3 乙酰甲胺磷 Acephate 136，94，95 10． 37 0． 0090
71
0． 9987
4 甲拌磷 Phorate 75，97，121 11． 80 0． 0006 y = 26846x + 154． 81 0． 9995
y = 21124x － 131．
5 治螟磷 Sulfotepp 97，121，322 11． 82 0． 0008
29
0． 9996
y = 7720． 1x － 104．
6 氧乐果 Omethoate 156，110，79 12． 98 0． 0036
31
0． 9995
y = 6534． 4x + 100．
7 久效磷 Monocrotophos 127，97，192 14． 20 0． 0032
85
0． 9997
y = 3564． 8x – 23．
8 磷胺? Phosphamidon 87，93，125 14． 48 0． 0074
74
0． 9983
9 乐果 Dimethoate 127，264，109 14． 53 0． 0016 y = 13379x + 371． 53 0． 9999
10 毒死蜱 Chlorpyrifos 197，199，97 15． 25 0． 0022 y = 10054x + 276． 19 0． 9998
y = 7060． 4x + 65．
11 磷胺? Phosphamidon 125，109，263 15． 40 0． 0042
29
0． 9993
12 甲基对硫磷 127，
264，
109 15． 41 0． 0022 y = 10283x + 121． 41 0． 9991
Methyl parathion
13 杀螟硫磷 Fenitrothion 125，127，109 15． 77 0． 0026 y = 9619． 4x + 68． 65 0． 9997
14 对硫磷 Parathion 97，109，291 16． 16 0． 0018 y = 12447x + 262． 54 0． 9998
15 甲基异柳磷 199，
121，
58 16． 23 0． 0022 y = 11236x + 257． 5 0． 9982
Isofenphos-methyl
16 水胺硫磷 Isocarbophos 136，
121，
109 16． 53 0． 0048 y = 9310． 7x + 21． 78 0． 9992
y = 6634． 3x + 376．
17 三唑磷 Triazophos 161，
171，
97 20． 80 0． 0030
98
0． 9998

3． 4 方法的回收率和精密度
将未检出有机磷农药的咸鱼（ 草鱼 ） 样品切碎混均，与硅藻土混匀后，装入萃取池中。 向萃取池分
别添加水平为 0． 05，0． 10 和 0． 20 mg / kg 的目标物，按 2． 2 节所述的提取、净化和检测条件进行添加回
收实验，如图 2 所示。由图 2 可知，有机磷混标在 GC-FPD 图谱上可完全分开； 在 GC-MS 图谱上则有
15 个峰。保留时间相近的化合物可根据不同的定性定量离子 ，通过提取离子色谱图分开，如磷胺?和
乐果、磷胺?和甲基对硫磷在总离子图中为一个色谱峰 ，通过采用不同的定量离子（m / z 87 和 127 及m /
z 109 和 127） 辨别。结合 GC-FPD 和 GC-MS 图，可以准确分析此 17 种有机磷农药。

图2 加标（ 0． 20 mg / kg） 咸鱼样品的 GC-flame photometry detector（ FPD） （ a） 和 GC-MSD

（ SIM） （ b） 色谱图
Fig． 2 GC-flame photometry detector（ FPD） （ a） and GC-MSD（ b） chromatograms of spiked
salt fish sample （ 0． 20 mg / kg）
峰号同表 1（ Peak nubers are the same as in Table 1） 。
向咸鱼（ 草鱼） 样品加标混合标准溶液，每组加标水平平行测定 7 次，计算加标回收率和相对标准
偏差（ RSD） ，结果见表 2。由表 2 可见，17 种有机磷 3 个添加水平的回收率在 64． 5% ～ 98． 6% 之间；
RSD 在 2. 7% ～ 14. 7% 之间。其中，敌敌畏回收率偏低，是由于其具有挥发性，在提取及浓缩过程造成
［19］
了部分损失。生物体中有机磷多残留，由于高温易分解且基质复杂，检测结果的重现性较差 。 本实
 70 分析化学 第 39 卷

验由于提取和净化条件温和，且净化效果良好，故所有组分回收率和精密度均满足日常检测要求 。
表 2 方法添加回收率和精密度
Table 2 Recovery and precision of method
添加水平 回收率 添加水平 回收率
化合物名称 Spiked Recovery
RSD 化合物名称 Spiked Recovery
RSD
Compound name （ % ，n = 7 ） Compound name （ % ，n = 7 ）
level （ mg / kg） （ %） level （ mg / kg） （ %）
0． 05 64． 5 14． 7 0． 05 82． 6 6． 7
敌敌畏 0． 10 72． 1 8． 5 毒死蜱 0． 10 97． 5 4． 9
Dichlorvos Chlorpyrifos
0． 20 77． 9 6． 3 0． 20 95． 3 4． 2
0． 05 74． 6 8． 4 0． 05 80． 1 8． 3
甲胺磷 0． 10 82． 3 4． 7 磷胺? 0． 10 86． 4 5． 7
Methamidophos Phosphamidon
0． 20 85． 6 4． 1 0． 20 87． 2 4． 6
0． 05 78． 3 13． 3 0． 05 80． 3 7． 5
乙酰甲胺磷 0． 10 86． 7 9． 2 甲基对硫磷 0． 10 86． 7 4． 6
Acephate Methyl parathion
0． 20 88． 1 7． 2 0． 20 94． 2 3． 3
0． 05 76． 5 8． 8 0． 05 75． 3 10． 5
甲拌磷 0． 10 82． 7 6． 3 杀螟硫磷 0． 10 81． 5 6． 4
Phorate Fenitrothion
0． 20 84． 6 4． 4 0． 20 88． 2 3． 7
0． 05 77． 5 5． 7 0． 05 83． 5 7． 6
治螟磷 0． 10 83． 6 4． 2 对硫磷 0． 10 92． 6 4． 7
Sulfotepp Parathion
0． 20 86． 7 4． 0 0． 20 95． 4 3． 8
0． 05 75． 3 9． 8 0． 05 77． 5 9． 3
氧乐果 0． 10 81． 3 7． 4 甲基异柳磷 0． 10 83． 1 5． 8
Omethoate Isofenphos-methyl
0． 20 85． 6 3． 5 0． 20 88． 2 3． 4
0． 05 80． 2 9． 5 0． 05 86． 3 5． 7
久效磷 0． 10 87． 6 4． 7 水胺硫磷 0． 10 94． 1 3． 1
Monocrotophos Isocarbophos
0． 20 90． 4 3． 6 0． 20 98． 6 2． 7
0． 05 74． 3 9． 8 0． 05 82． 3 8． 5
磷胺（ Ⅰ） 0． 10 83． 7 5． 3 三唑磷 0． 10 92． 7 5． 7
Phosphamidon Triazophos
0． 20 85． 6 4． 9 0． 20 96． 5 4． 1
0． 05 73． 6 9． 4
乐果 0． 10 79． 2 5． 1
Dimethoate
0． 20 83． 4 4． 3

3． 5 样品测定
利用本方法对市场上采集的 15 份咸鱼样品进行检测，发现阳性样品 2 个，检出敌敌畏，含量分别为
0． 082 和 0． 216 mg / kg，见图 3。实验结果表明，本方法可用于咸鱼中有机磷残留的定性与定量检测 ，具
有提取效率高，净化效果好，回收率高，定量准确，灵敏度高等优点。

图3 某阳性样品的 GC-FPD 和 GC-MSD（ SIM） 谱图

Fig． 3 GC-FPD / MSD（ SIM） chromatograms of a salt fish sample

References
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Determination of Organophosphate Pesticide Residues in Salt Fish

Using Accelerated Solvent Extraction and Gel Permeation
Chromatography / Solid Phase Extraction with Gas
Chromatography-Mass Spectrometry
WANG Yao1，2 ，LIU Shao-Bin1，2 ，XIE Cui-Mei1，2 ，ZHANG Han-Xia1，2 ，LU Wei-Hua * 1，2
1
（ Dongguan Ocean and Fishery Environment Monitoring Station，Dongguan 523079）
2
（ Dongguan Aquatic Product Quality Supervision And Inspection Station，Dongguan 523079）

Abstract A novel method for the determination organophosphrous pesticides residues in salt fish was estab-
lished． The target anslytes were extracted by accelerated solvent extraction （ ASE） using acetonitrile as the
extraction solvent． The gel permeation chromatography was used to remove the grease，protein and pigment and
then，the small molecule compounds in the extracted solution were purified by the Carb / PSA solid phase ex-
traction． The qualitative analysis were performed by using mass spectrometric detection GC-MSD（ SIM） and
quantitative analysis by GC-flame photometry detector（ FPD） method． The average recoveries of organophos-
phrous pesticides were 64． 5% － 98． 6% ，spiked at 0． 05 － 0． 20mg / kg levels． The relative standard devia-
tions for all the compounds were 2． 7% － 14． 7% ． The detection limit of the method varied between 0． 0006 －
0． 0090 mg / kg． The method is rapid，precise，sensitive，high efficient． It can be applied to the routine analy-
sis for organophosphrous pesicide resdues in salt fish．
Keywords Accelerated solvent extraction； Gel permeation chromatography； Solid phase extraction； Gas chro-
matogrpahy-mass spectrometry； Organophosphrous pesticid； Salt fish
（ Recived 3 February 2010； accepted 6 July 2010）