UNIVERSIDAD NACIONAL

MICAELA BASTIDAS DE APURÍMAC

INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

CURSO: CURSO: BIOTECNOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

PRÁCTICA 02 DE LABORATORIO: “Autoclavado y efecto de esterilización de material de

laboratorio”

DOCENTE: ING. Maria Rosa Ccorahua Sequeiros

ALUMNA: Luisa Llacchua Molina

CÓDIGO: 102078

FECHA: 17/05/23

ABANCAY – 2023
I. RESUMEN.

En el laboratorio de Biotecnología de la Universidad Nacional Micaela Bastidas de Apurímac, se

realizó la práctica de Autoclavado y efecto de esterilización de material de laboratorio y
desinfección de mesones y espacios para el trabajo.
Para desarrollar correctamente cualquier trabajo en el laboratorio es necesario mantener siempre limpio
el material y la mesa de trabajo. El material debe estar limpio, esterilizado y seco antes de empezar el
experimento. La limpieza del material se debe realizar inmediatamente después de cada operación ya
que es mucho más fácil y además se conoce la naturaleza de los residuos que contiene.

II. INTRODUCCION

La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo que asegura la ausencia
absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilización deficiente o manipulación incorrecta de
materiales y medios de cultivo conlleva a contaminaciones, resultados erróneos o pérdida del material
biológico. Por ello, se requieren buenas prácticas de laboratorio para su adecuado manejo. La
esterilización por calor seco o húmedo son los métodos que se utilizan con mayor frecuencia en el
Laboratorio de biotecnología.
El calor seco destruye a los microorganismos por oxidación, por ejemplo, al exponerlos directamente a
la flama de un mechero o en horno a 150-180°C durante 2 horas. Estos métodos se aplican en la
esterilización de todo tipo de material de vidrio. Los procesos con calor húmedo afectan la estabilidad
de estructuras celulares y proteínas; se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones
termoestables, materiales de vidrio y cultivos bacterianos que se desechan. El equipo de uso común es
la autoclave, que utiliza vapor de agua a presión (15 lb/in2); con esta presión el material alcanza una
temperatura de 121 °C y si se mantiene durante 15 minutos se asegurará la inactivación de Endosporas,
que son las estructuras bacterianas más resistentes al calor. El objetivo del autoclavado y efecto de
esterilización de material de laboratorio es tener limpios, estériles todos los materiales a utilizar en la
practica

III. OBJETIVO

III.1. Objetivo general.

 El alumno debe conocer y aplicar los principios de esterilización utilizando la autoclave.

III.2. Objetivo especifico

 El alumno debe conocer los parámetros de esterilización de materiales.

 Realizar el autoclavado de manera óptima en cuanto se requiera la práctica.

IV. MARCO TEÓRICO.

IV.1. AUTOCLAVE:

Una autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas con cierre hermético que permite
trabajar con vapor de agua a alta presión y alta temperatura que sirve para esterilizar
instrumental (material médico, de laboratorio, etc.) o alimentos, eliminando toda forma de
vida celular o microbiana. Manual de Bioseguridad en el Laboratorio (2005)
PARTES DEL EQUIPO

Las partes más importantes del equipo están indicadas en los siguientes
cuadros.

Canasto o caja de
Resistencia esterilización Manómetro
Figura : Principales partes de un Autoclave, con diferentes modelos

IV.2. ESTERILIZACIÓN

Se denomina esterilización al proceso por el cual se obtiene un producto libre de

microorganismos. El proceso de esterilización puede y debe ser diseñado, validado y llevado a
cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del producto o un
microorganismo más resistente. Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003)

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

Los métodos mediante los cuales se realiza la esterilización pueden ser clasificados de dos tipos: Físicos
y Químicos, en dependencia de que el agente utilizado para ello sea físico o químico. 
 
ESTERILIZACIÓN POR MÉTODOS FÍSICOS:

MÉTODOS FÍSICOS
1. Calor seco (estufa u horno)
2. Calor Húmedo (autoclave)
3. Radiaciones ionizantes (gamma, beta y ultravioleta)
4. Ondas supersónicas (microondas odontológico)
5. Filtración
6. Ebullición
7. Flameo
8. Microesferas de Vidrio
Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003)
 
1. Calor seco (estufa u horno): 
 
 Características: La esterilidad se consigue por las altas temperaturas del aire
 Cuidados: En estos equipos se prohíbe esterilizar: materiales plásticos, guantes y artículos de
goma, frascos con líquidos acuosos, etc.
 Tiempo de esterilización es de 15 min a 120 °C ya que las bacterias son más resistentes al calor
seco que al calor húmedo. Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000).
 
Ventajas del método: Es un método efectivo y seguro para esterilizar metales y vidrio, pues no oxida o
corroe y los bordes cortantes no pierden filo.
 
Desventajas del método: Necesita de un ciclo largo, de tener una penetración pobre y de destruir los
elementos termolábiles.
 
    2. Calor húmedo (Autoclave): 
 Características: Es el medio más práctico y eficaz para la esterilización en el laboratorio se logra
por el vapor de agua supercalentado y mantenido a presión, que provee una autoclave de paredes
resistentes y tapa de cierre hermético. 
  En su interior se coloca el material a esterilizar. En su parte inferior hay un recipiente que se
llena de agua, la que al recibir el calor de un serpentín de gas o eléctrico, entra en ebullición y
produce el vapor de agua necesario para la esterilización.
 La parte superior de este equipo presenta 3 aberturas; en una de ellas hay una válvula de
seguridad que funciona con un contrapeso que sirve para comunicarse con el exterior; al frente
tiene dos relojes, una que indica la presión y otro la temperatura respectivamente.
Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000).
ESTERILIZACIÓN POR MÉTODOS QUÍMICOS:
 
AGENTES QUÍMICOS 
1. Óxido de etileno
2. Plasma de peróxido de hidrógeno
3. Pastillas de formol
4. Soluciones químicas
Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000).

INSTRUCCIONES:
El estudiante realizará en la autoclave la esterilización del material suministrado. Para esto
contará con un equipo que esquemáticamente es así:

METODOS.
:
1. Poner 2.5 lts. de agua destilada en la autoclave o hasta que recubra la resistencia y antes
de salir de la rejilla.
2. Disponer el material a esterilizar sobre una plataforma evitando amontonamiento. Los
frascos deben estar con la tapa floja y las cajas metálicas con la tapa entreabierta.
3. Cerrar y atornillar la tapa de la autoclave.
4. Verificar que la llave de salida se encuentre abierta.
5. Encender la fuente térmica para hervir el agua dentro del autoclave.
6. Purgar hasta 5' después que se vea salir por la llave de escape solo vapor.
7. Cerrar la llave.
8. Controlar el aparato de registro que puede ser un manómetro calibrado en grs./cm2 o
lbs/sq.in (libras por pulgada cuadrada), o un termómetro en ºC o F. Cuando el aparato
registre
1.054 grs./cm2, 15 lbs/sq.in, 121ºC o 249.8F, se empezará a contar el tiempo.
9. Mantener el registro constante durante 15-20 minutos.
10. Apagar la fuente térmica y dejar enfriar sin abrir.
11. Cuando la temperatura o presión haya descendido, abrir la llave de escape de vapor.
12. Abrir la autoclave.

Los materiales salen húmedos por el contacto con el vapor. Aquellos que estén envueltos en
papel deberán secarse en la estufa, ya que el papel mojado es muy fácil de romper y el
material se contaminaría nuevamente
 BIBLIOGRAFÍA
1. Colectivo de autores. Introducción a la Salud Pública. Editorial Ciencias Médicas. Ciudad de la
Habana 2004.
2. Colectivo de Autores. Manual de Bioseguridad Estomatológica. Editorial Ciencias Médicas. Ciudad
de la Habana 2008.
3. Dirección Provincial de Salud. Centro Provincial de Higiene y Epidemiología. La Habana.
Recomendaciones para la Desinfección y Esterilización en Clínicas y Servicios de Estomatología. 2000

Cuestionario:

1. Esquematice una autoclave, indicando cuales son las partes que la conforman, así
como la función de cada una de ellas.

La puerta

La puerta del Autoclave es el punto más débil del equipo, y, por lo tanto, el más peligroso para
el operador. Esta pieza de metal es la que soporta toda la presión de vapor tratando de escapar
del interior de la cámara. Por esta razón la puerta debe tener uno o más “pernos bloqueantes",
lo suficientemente resistentes para soportar tal presión. De extraviarse esta(s) pieza(s), será
necesario solicitar otra(s) igual(es) al fabricante, y que reúnan las características necesarias
para cumplir su función. Nunca se debe reemplazar esta pieza por alambres, clavos o cualquier
otro objeto, ya que podrían provocar graves accidentes.

En la puerta existe una pieza llamada “empaquetadura”, ésta por lo general es de goma o de
silicona, que presenta una forma de anillo. Tiene la función de permitir el sellado hermético de
la cámara. Esta pieza solo tiene importancia para el proceso de esterilización, si este anillo
falla, no ocurrirán accidentes producidos por la acumulación de presión de vapor de agua, sino
todo lo contrario, pues el vapor se escapará y no se acumulará dentro de la cámara. No
obstante, al tener esta fuga, el equipo podría quedase sin agua más rápido, lo que conllevaría a
que la resistencia - eventualmente - se queme. Por esta razón es necesario que constantemente
se esté observando el manómetro para verificar que la presión esté aumentando dentro de la
cámara. La empaquetadura debe renovarse siempre que presente fallas o, cuando el fabricante
o los protocolos del laboratorio así lo indiquen, la nueva empaquetadura debe tener las mismas
características a la original, por lo que se sugiere solicitarla directamente al fabricante, y
NUNCA una adquirida en el comercio local, aunque está presente características similares o
sea más económica.

La válvula de seguridad

La válvula de seguridad en un dispositivo con el que disponen todos los Autoclaves. Este
dispositivo es el responsable de liberar el exceso de presión de vapor desde el interior de la
cámara. La liberación puede ser manual o automática.

La apertura de la válvula, de forma manual se efectúa tirando de una palanca o argolla que esta
presenta, en algunas ocasiones la argolla entregada por el fabricante es delgada y poco
resistente, por lo que se sugiere reemplazarla por una argolla para las llaves de la cerradura de
cualquier casa, ya que esta es más resistente, y permite la entrada cómoda del dedo para su
activación. La liberación automática del vapor ocurre cuando la presión supera en un 6 % la
presión máxima de trabajo.

Presóstato

Una pieza importante para la regulación y mantención de la presión interna de la cámara, es el

presóstato. Este dispositivo se encuentra en todos los Autoclaves, desde el más simple y
básico, hasta el más automatizado.

El presóstato bloquea o activa el circuito eléctrico del Autoclave, dependiendo de la presión

que ejerza el vapor de agua sobre una membrana o diafragma, la que está conectada a un
pistón y un resorte. El resorte presenta un contacto en su extremo, que, al ser presionado, se
une a otro contacto, lo que provoca una interrupción de la entrada de energía eléctrica hacia el
el generador de calor o resistencia. Por el contrario, cuando baja la presión, estos contactos se
separan permitiendo que se vuelva a generar calor y por. Este encender y apagar del circuito
eléctrico se repite varias veces durante una carga del Autoclave, siendo imperceptible para el
operador. Con esto se logra mantener al Autoclave dentro de unos parámetros de temperatura
que fluctúan alrededor de los 2ºC, y poder dar cumplimiento a los protocolos de
temperatura/presión que se necesitan para esterilizar un material en particular

2. ¿Qué es y cómo se lleva a cabo la esterilización por calor húmedo?

El calor húmedo es un método térmico de esterilización para eliminar microorganismos por la

coagulación de proteínas (desnaturalización), lo que es causado por la rotura de los puentes de hidrógeno
que son los que mantienen a las proteínas en su forma tridimensional; 1 las proteínas por lo tanto regresan
a su estructura secundaria, se coagulan y se convierten en proteínas no funcionales. El calor húmedo
puede penetrar más rápidamente que el calor seco porque las moléculas de agua conducen mejor el calor
que las moléculas de aire. Por ello el calor húmedo puede ser usado a temperaturas más bajas y menor
tiempo de exposición que el calor seco.

Se lleva a cabp de la siguiente manera:

El calor húmedo destruye los microorganismos por coagulación de sus proteínas celulares. La
esterilización por vapor a presión se lleva a cabo en una autoclave. Estos equipos emplean vapor de
agua saturado, a una presión de 15 libras lo que permite que la cámara alcance una temperatura de
121ºC.
3. ¿Qué es y cómo se lleva a cabo la esterilización por calor seco?

Este método se emplea para la esterilización de material de vidrio, instrumentos quirúrgicos,

agujas de metal, materiales no miscibles con el agua, etc. Consiste en colocar el material
directamente al fuego hasta que éste se ponga al rojo vivo. De esta forma se queman los
contaminantes hasta reducirlos a cenizas.
4. Describe los siguientes métodos de esterilización: tindalización,
pasteurización, filtración, radiaciones, gases. Menciona las sustancias/materiales en
los que se emplean.