免疫中 心

天坛神 经
神经环路示踪技术
贾梦
2022-06-09

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 疫中 心
• 脑是人体最神秘、最复杂的器官，由近1011个神经元组成，形成约1014-15

免
经
个突触，这种复杂的神经环路网络为认知、情感、记忆、感觉和运动等大

天坛神
脑高级功能建立了稳固的结构基础。
• 如何认识神经元的连接方式，描绘神经环路的精细结构并认知其功能对于
了解大脑的复杂功能至关重要。
• 科学家们一直致力于找到可以特异性标记细胞种类、传导方向可控、可视
化的示踪工具，以期实现对神经环路网络的精确认识和研究。

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神经环路

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全脑功能连接-MRI成像

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可视化示踪工具的发展-沃勒变性

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1850年，沃勒首先描述了“沃勒变性”，又称继发性变性，是指神经轴突因外伤断裂后，

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神 经
其远端的神经纤维发生的顺序性变化，表现为在切断部位远端的神经纤维有所谓“凝固”

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的现象，接着，断裂而形成排列很整齐的碎颗粒，这些碎片由神经膜细胞和巨噬细胞吞噬。
断端近侧的轴突和髓鞘也发生同样的变化，但通常只向近端继续一二个郎飞结即不再进展。
除了外伤性切断，任何影响胞体与神经纤维联系的病理过程均可产生这种变化。因此也有
学者将由非机械性损伤所引起的类似病变称为“Wailer/Wallerian样变性”。如大脑皮层
梗死，神经元变性坏死后，可引起相应白质内神经纤维的Wallerian变性。

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可视化示踪工具的发展-沃勒变性

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可视化示踪工具的发展-银染法

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1940年，Walle Nauta发明了

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银染法，将切片浸于银盐（如

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硝酸银）染料中，使银盐沉淀
在这些结构的表面而显出黑褐
色，其余结构不着色。

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可视化示踪工具的发展-化学示踪剂1960年

种类 名称 特点

辣根过氧化物酶

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辣根过氧化物酶(HRP)

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逆行示踪剂，染色局限于细胞体和初生树突

蛋白

荧光染料
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霍乱毒素B亚基(CTb)

荧光金(Fluoro Gold)
逆行示踪剂，无毒

逆行示踪剂，显示树突分支，易观察，不易扩散

逆行示踪剂，显示轴突，荧光强而稳定，无毒，不
羰化青 羰化青（Dil）
易扩散
顺行示踪剂，保存时间长，可与多种荧光示踪剂及
生物素 生物素化葡聚糖胺（BDA）
免疫组化技术相结合
麦芽凝集素（WGA）、菜 顺行示踪剂，注射后需要较长的存留时间才能实现
凝集素
豆凝集素(PHA) 转运
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可视化示踪工具的发展-化学示踪剂

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化学示踪剂的优缺点

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非病毒的常规示踪剂是可视化大量神经连接的有效工具，这些示踪剂通常采用注射的方式，可

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以在任何感兴趣的动物身上进行实验，且无需特定遗传背景的基因小鼠。但是这些方案具有明

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显的局限性：

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① 无法特异性标记细胞类型；
② 几乎没有跨突触能力；
③ 不能用于传递外源基因；
④ 难以用于多个脑区、多种类型神经元通过突触连接形成的复杂神经网络研究。

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病毒示踪技术

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一个完整的具有传染性的病毒颗粒，由被病毒衣壳蛋白质保护层包围的核酸组成，衣

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壳是由病毒基因组编码的蛋白质，衣壳的不同形态是区分病毒的基础。一些病毒还有
一层覆盖层，被称为包膜。病毒衣壳和包膜调节病毒的附着和与宿主细胞表面的受体
相互作用，这决定了病毒的趋向性。假病毒策略就是用另一种病毒包膜或衣壳蛋白替
换原病毒的包膜或衣壳蛋白，可创造出有新的趋向性和运输特性的病毒载体。

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用于细胞标记和基因传递的常用病毒载体

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病毒的顺行示踪和逆行示踪

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常用跨神经元/跨突触病毒示踪剂的特性

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荧光金+AAV+化学遗传

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Na Wang et al. Neuropsychopharmacology
(2018)

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Na Wang et al. Neuropsychopharmacology
(2018)

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Na Wang et al. Neuropsychopharmacology
(2018)

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顺行跨多级突触示踪病毒-HSV-1-H129

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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Zeng et al. Molecular Neurodegeneration
(2017)

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顺行跨多级突触病毒+逆行跨单级突触病毒+化
学遗传

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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Sun YJ et al. Nature Neuroscience (2019)

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单个神经元投射

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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Wang M et al. Nature Communications (2022)

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 免疫中 心
理论上讲，只要病毒能感染神经系统，就具备开发成工具病毒的潜力，但是每种神经示踪

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病毒都有其特异的跨突触标记特性和局限性，虽然病毒示踪工具在神经环路研究中的应用

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最为广泛,对神经示踪病毒改造也已取得了显著的进展，但仍有许多问题亟待解决，例如
病毒跨突触机制、跨突触的过程及其对各类型突触结构的选择性、跨多级突触标记的神经
网络如何区分连接级数等等。针对上述问题，科学家们一直努力研究改造病毒，以期获得
毒性更低，感染、传播、跨突触机制更加明确的神经示踪工具病毒，为脑科学研究提供更
强大的工具。

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Thanks

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顺行非跨突触示踪病毒-AAV9

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